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结直肠癌中K-ras基因突变与TAK1、MAP4K2蛋白表达的相关性研究

四川大学学报（医学版） 2019年第1期50卷 61-65页

作者：马其钊杨以文马岩林廖诗平郑焱江张姝曹悦岩张霁王玉芳四川大学华西基础医学与法医学院病理生理学教研室成都610041 四川大学华西基础医学与法医学院法医物证学教研室成都610041 四川大学华西基础医学与法医学院机能学实验室成都610041

目的分析K-ras基因突变、转化生长因子激酶1(TAK1)蛋白和MAP4K2蛋白的表达与结直肠癌临床病理特征的关系,并分析K-ras基因突变与TAK1、MAP4K2蛋白表达的相关性。方法应用DNA测序法检测76例结直肠癌样本中K-ras基因突变情况,应用免疫组... 详细信息

目的分析K-ras基因突变、转化生长因子激酶1(TAK1)蛋白和MAP4K2蛋白的表达与结直肠癌临床病理特征的关系,并分析K-ras基因突变与TAK1、MAP4K2蛋白表达的相关性。方法应用DNA测序法检测76例结直肠癌样本中K-ras基因突变情况,应用免疫组化法检测样本中TAK1和MAP4K2蛋白表达情况。结果76例结直肠癌中,K-ras基因突变率为32.89%(25例),K-ras基因突变与肿瘤分化程度有关(P<0.05),与浸润深度、是否有淋巴结转移无关;TAK1阳性率为48.68%,MAP4K2阳性率为46.05%,TAK1蛋白表达和MAP4K2蛋白表达均与肿瘤分化程度、是否有淋巴结转移有关(P<0.05),与浸润深度无关。在76例结直肠癌中,K-ras基因突变与TAK1蛋白表达、MAP4K2蛋白表达均无相关性(P>0.05),TAK1蛋白表达与MAP4K2蛋白表达之间无相关性;在25例K-ras基因突变的结直肠癌中,TAK1蛋白表达与MAP4K2蛋白表达之间呈正相关(r=0.402,P<0.028)。结论 K-ras基因突变、TAK1和MAP4K2蛋白表达均与结直肠癌的肿瘤分化程度有关,与浸润深度无关;在K-ras基因突变的结直肠癌中,TAK1蛋白表达与MAP4K2蛋白表达之间呈正相关。

关键词：结直肠癌 K-ras TAK1 MAP4K2

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同型半胱氨酸、半胱氨酸在动脉粥样硬化发病机制中作用的对照研究

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卫生研究 2009年第1期38卷 43-46页

作者：苏娟王生兰黄玉珊姜怡邓王树人四川大学华西基础医学和法医学院病理生理学教研室成都610041

目的以动脉粥样硬化(As)病灶中的主要细胞类型—血管平滑肌细胞为模型,对比研究同型半胱氨酸(Hcy)和半胱氨酸(Cys)在致As发病效应上的异同,以期为Hcy作为As独立危验因子的分子机制提供有比较的证据。方法体外培养人脐静脉血管平滑肌细胞... 详细信息

目的以动脉粥样硬化(As)病灶中的主要细胞类型—血管平滑肌细胞为模型,对比研究同型半胱氨酸(Hcy)和半胱氨酸(Cys)在致As发病效应上的异同,以期为Hcy作为As独立危验因子的分子机制提供有比较的证据。方法体外培养人脐静脉血管平滑肌细胞(VSMCs),用不同浓度的Hcy和Cys作用于细胞24h后:(1)用分光光度比色法测定细胞中SOD和MDA的含量;(2)流式细胞术检测细胞凋亡率,半定量RT-PCR方法检测caspases-3 mRNA的表达;(3)MTT法测定细胞的增殖率;(4)用1000μmol/LHcy和Cys分别作用VSMCs24、48和72h后,MS-PCR法检测ERα启动子区甲基化的状态,半定量RT-PCR法检测ERα mRNA的表达。结果(1)Hcy可导致细胞内MDA、SOD呈剂量依赖性增加,Cys使MDA、SOD增加的效应远弱于Hcy(P<0.01)。(2)流式细胞术、caspases-3 mRNA的表达和MTT试验的结果显示,Hcy、Cys对血管平滑肌细胞凋亡率和增殖率的影响差异不太明显。(3)Hcy显著增加ERα基因启动区的甲基化修饰,并使ERα mRNA的表达进行性减少。Cys不影响ERα启动子区的甲基化状态,对ERα mRNA表达的影响也远小于Hcy。结论氧化应激对DNA甲基化修饰的影响可能在Hcy致As发病的机制中占据着重要的地位,这也可能是Hcy和Cys在As发病机制中作用不同的重要原因。

关键词：同型半胱氨酸半胱氨酸动脉粥样硬化血管平滑肌细胞

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臂旁内侧核区微量注射羟基马桑毒素二小时的神经组织学研究

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华西医科大学学报 2002年第1期33卷 54-57页

作者：王健徐美丽李光荣陈新民四川大学华西基础医学与法医学院生理学教研室华西基础医学与法医学院电子显微镜室中国科学院成都生物研究所

目的　观察臂旁内侧核区微量注射羟基马桑毒素后的神经组织有无毁损。方法　在注药后 2小时 ,动物出现了非常明显的呼吸效应且机能状态良好时灌注固定 ,分别取材做光镜 (Nissl法染色 )和透射电镜标本切片 ,观察拍照。结果　在光镜和电... 详细信息

目的　观察臂旁内侧核区微量注射羟基马桑毒素后的神经组织有无毁损。方法　在注药后 2小时 ,动物出现了非常明显的呼吸效应且机能状态良好时灌注固定 ,分别取材做光镜 (Nissl法染色 )和透射电镜标本切片 ,观察拍照。结果　在光镜和电镜下观察 ,未见 NPBM区注射羟基马桑毒素后神经组织有明显的毁损表现 ,与对侧等量注射生理盐水比较也未发现明显差异。结论　在本实验条件下。

关键词：羟基马桑毒素臂旁内侧核神经组织膈肌放电呼吸效应

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白藜芦醇通过上调SIRT1/RUNX2表达促进多发性骨髓瘤病人骨髓间充质干细胞成骨分化

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中国生物化学与分子生物学报 2021年第3期37卷 354-362页

作者：潘杰陶叠宏任莉苏传勇陈志炉蒋慧芳王珏钱令波杭州医学院基础医学与法医学院生理学教研室杭州310053 浙江省立同德医院血液科杭州310012

骨髓瘤骨病(myeloma bone disease,MBD)是多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)最主要的并发症之一。骨髓瘤骨病骨损伤发生的病因是肿瘤细胞浸润以及骨髓微环境改变等因素导致的破骨细胞活化和成骨细胞抑制。骨髓间充质干细胞(bone marrow... 详细信息

骨髓瘤骨病(myeloma bone disease,MBD)是多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)最主要的并发症之一。骨髓瘤骨病骨损伤发生的病因是肿瘤细胞浸润以及骨髓微环境改变等因素导致的破骨细胞活化和成骨细胞抑制。骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cell,BMSC)是成骨细胞的主要来源,促进BMSC的成骨分化可能是治疗骨髓瘤骨病的可行方法之一。白藜芦醇(resveratrol,RES)是一种天然多酚类植物激素。已有研究发现,白藜芦醇具有调节骨质代谢的功能。但白藜芦醇对多发性骨髓瘤病人骨髓间充质干细胞(MM-BMSC)成骨分化的作用和机制尚不明确。本研究成功分离、培养并鉴定了10例MM-BMSC。通过检测碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性和骨钙素(osteocalcin,OCN)水平,以及茜素红染色发现,白藜芦醇具有促进多发性骨髓瘤病人骨髓间充质干细胞成骨分化的作用。生物信息学分析提示,沉默信息调节因子1(silent information regulator 1,SIRT1)可能是白藜芦醇调控多发性骨髓瘤病人骨髓间充质干细胞成骨分化的靶基因。体外细胞研究发现,白藜芦醇可增加SIRT1表达(P<0.001),且用siRNA干扰SIRT1表达后多发性骨髓瘤病人骨髓间充质干细胞碱性磷酸酶活性下降(P<0.05),骨钙素表达减少(P<0.01),茜素红染色矿化结节减少。多发性骨髓瘤病人骨髓间充质干细胞经白藜芦醇处理后,Runt相关转录因子2(runt related transcription factor 2,RUNX2)mRNA(P<0.001)和蛋白质(P<0.01)表达水平上升。应用siRNA干扰多发性骨髓瘤病人骨髓间充质干细胞SIRT1表达后,细胞RUNX2 mRNA(P<0.01)和蛋白质(P<0.05)表达均下降。综上所述,本研究发现,白藜芦醇通过上调SIRT1/RUNX2表达促进多发性骨髓瘤病人骨髓间充质干细胞成骨分化。白藜芦醇有可能成为骨髓瘤骨病治疗的潜在有效药物。

关键词：白藜芦醇多发性骨髓瘤骨髓间充质干细胞成骨分化沉默信息调节因子1

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氧化应激状态的评价

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中国病理生理杂志 2005年第10期21卷 2069-2074页

作者：王秋林王浩毅王树人四川大学华西基础医学与法医学院病理生理学教研室

机体代谢过程中活性氧不断地通过非酶促反应和酶促反应产生,每日约有1%-3%的摄入氧转变为超氧阴离子(superoxide anion,O2)及其活性衍生物,但在抗氧化酶以及外源性和内源性抗氧化剂的协同作用下被不断清除,在生理情况下, ROS的生成与... 详细信息

机体代谢过程中活性氧不断地通过非酶促反应和酶促反应产生,每日约有1%-3%的摄入氧转变为超氧阴离子(superoxide anion,O2)及其活性衍生物,但在抗氧化酶以及外源性和内源性抗氧化剂的协同作用下被不断清除,在生理情况下, ROS的生成与清除处于动态平衡, 活性氧可维持于有利无害的极低水平.由于内源性和(或)外源性刺激使机体代谢异常而骤然产生大量活性氧自由基,或机体抗氧化物质不足,使促氧化剂/抗氧化剂间平衡失常,则使机体处于氧化应激状态,可氧化损伤生物分子,并进一步引起细胞死亡和组织损伤,与很多病理过程相关.

关键词：应激氧化还原

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人源性神经营养素-6成熟肽基因融合表达载体的构建及表达产物的纯化

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生物医学工程学杂志 2005年第6期22卷 1241-1244页

作者：张承武蔡青松李自成翟朝阳郑煜四川大学华西基础医学与法医学院生理学教研室成都610041 四川大学华西基础医学与法医学院生物化学与分子生物学教研室成都610041

为了得到人源性神经营养素-6(N eurotroph in-6,NT-6)成熟肽片段,本研究以经测序鉴定的人源性NT-6 cDNA为模板,通过聚合酶链式反应(Po lym erase cha in reaction,PCR)扩增得到NT-6蛋白成熟肽编码区基因片段;将该基因克隆到融合表达载体... 详细信息

为了得到人源性神经营养素-6(N eurotroph in-6,NT-6)成熟肽片段,本研究以经测序鉴定的人源性NT-6 cDNA为模板,通过聚合酶链式反应(Po lym erase cha in reaction,PCR)扩增得到NT-6蛋白成熟肽编码区基因片段;将该基因克隆到融合表达载体pGEX 1-λT,构建重组原核融合表达质粒pGEX-NT-6;在异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(Isopropy l-βD-th ioga lactos ide,IPTG)诱导的条件下,观察融合蛋白在大肠杆菌JM 109中的表达情况;利用蛋白回收试剂盒对表达产物进行纯化。结果表明经PCR扩增后,得到一分子量为460 bp左右的片段;含有该片段的重组质粒经电泳及双酶切鉴定表明,所得到的重组质粒即为含有目的片段的pGEX 1-NT-6;与带有pGEX 1-λT质粒的细菌相对照,pGEX 1-NT-6质粒转化的大肠杆菌JM 109,在IPTG诱导下表达了特异性的融合蛋白,该蛋白分子量为41 KD。获得的融合蛋白经凝血酶酶切后,得到了分子量大约为15 KD的NT-6成熟肽。本研究成功构建了人源性NT-6成熟肽编码区基因融合表达载体,并纯化了其表达产物,为研究人源性NT-6的生物学功能奠定了基础。

关键词：神经营养素-6 成熟肽融合表达

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硫化氢对脂多糖诱导大鼠肺动脉反应性和损伤的影响

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中国危重病急救医学 2010年第8期22卷 465-468页

作者：张晓静黄新莉孟祥艳丛斌戴鸿雁韦鹏凌亦凌河北医科大学基础医学院法医学系石家庄050017 河北医科大学基础医学院基础医学院病理生理学教研室石家庄050017 武警医学院病理生理学教研室

目的观察硫化氢（H2S）对脂多糖（LPS）所致肺动脉反应性紊乱和肺动脉损伤的影响.方法 72只SD大鼠按随机数字表法分为对照组、LPS组、H2S供体硫氢化钠（NaHS）＋LPS组和NaHS＋生理盐水（NS）组,每组18只.采用气管内滴注0.8 ml/kg LPS（... 详细信息

目的观察硫化氢（H2S）对脂多糖（LPS）所致肺动脉反应性紊乱和肺动脉损伤的影响.方法 72只SD大鼠按随机数字表法分为对照组、LPS组、H2S供体硫氢化钠（NaHS）＋LPS组和NaHS＋生理盐水（NS）组,每组18只.采用气管内滴注0.8 ml/kg LPS（200 μg/200 μl）染毒.滴注LPS之前10 min和之后2 h分别经腹腔注射0.5 ml NaHS（28 μmol/kg）.实验12 h处死大鼠,取颈动脉血,检测血清H2S含量;制备肺动脉环（PARs）,采用离体血管环张力测定技术检测血管反应性变化;检测肺动脉丙二醛（MDA）含量,并观察肺动脉形态学改变.结果与对照组相比,滴注LPS后,PARs对苯肾上腺素（PE,10^-6 mol/L）的收缩反应（g/mg）明显升高（0.86±0.20比0.56±0.13）,对乙酰胆碱（ACh,10^-6 mol/L）的舒张反应明显降低[（65.18±7.05）%比（84.13±8.84）%],肺动脉组织MDA含量（mmol/L）升高（32.03±7.81比5.82±0.92）,血清中H2S含量（μmol/L）降低（175.23±27.36比238.12±16.38）,差异均有统计学意义（P〈0.05或P〈0.01）;组织形态学观察显示,肺动脉内皮细胞和组织结构严重受损.给予NaHS后可明显改善LPS引起的上述变化,血管收缩反应下降[（0.61±0.17） g/mg],血管舒张反应升高[（82.92±9.71）%],肺动脉组织MDA含量下降[（16.88±3.54） mmol/L],血清H2S含量升高[（242.70±38.80） μmol/L],差异有统计学意义（P〈0.05或P〈0.01）;肺动脉内皮细胞和组织结构损伤也得到明显改善.NaHS＋NS组除H2S含量显著高于对照组外,余指标与对照组比较差异无统计学意义.结论外源性应用H2S不仅可逆转LPS引起的肺动脉反应性紊乱,还可减轻LPS引起的肺动脉组织损伤.

关键词：硫化氢肺动脉脂多糖急性肺损伤肺动脉高压血管反应性

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周期素cyclin G1在小鼠睾丸生精上皮中的表达特点

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四川大学学报（医学版） 2011年第4期42卷 567-569页

作者：袁东智于海礼丁小玲张金虎何亚平岳利民四川大学华西基础医学与法医学院生理学教研室成都610041

目的观察细胞周期素cyclin G1在不同年龄小鼠睾丸生精上皮中的表达与分布,初步探讨其在精子发生过程中的生理意义。方法分别选用3周龄、7~8周龄及11~12月龄的雄性昆明小鼠,运用免疫组化方法观察分析cyclin G1在睾丸生精上皮中的表达。结... 详细信息

目的观察细胞周期素cyclin G1在不同年龄小鼠睾丸生精上皮中的表达与分布,初步探讨其在精子发生过程中的生理意义。方法分别选用3周龄、7~8周龄及11~12月龄的雄性昆明小鼠,运用免疫组化方法观察分析cyclin G1在睾丸生精上皮中的表达。结果 cyclin G1在3周龄小鼠睾丸生精上皮中无明显表达;在7~8周龄与11~12月龄的小鼠睾丸生精上皮中,cyclin G1主要表达在精原细胞、精母细胞以及精子细胞,且定位于胞核。7~8周龄与11~12月龄的小鼠睾丸生精上皮中cyclin G1的表达均高于3周龄组（P〈0.05）。结论 cyclinG1在小鼠睾丸生精上皮中的表达特点提示其与精子发生相关,且可能参与了生精启动以及减数分裂过程的调控。

关键词： cyclin G1 睾丸精子发生

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前包钦格复合体:产生呼吸节律的关键部位

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生理科学进展 2002年第2期33卷 179-181页

作者：张承武郑煜四川大学华西基础医学与法医学院生理学教研室成都610041

呼吸节律的产生部位和原理一直是神经生物学研究领域中的热门课题。近年来的研究表明 ,延髓中一个被称为前包钦格复合体 (pre Botzingercomplex ,PBC)的区域在哺乳动物呼吸节律的产生中起着关键作用。本文主要介绍PBC的定位 ;PBC内呼吸... 详细信息

呼吸节律的产生部位和原理一直是神经生物学研究领域中的热门课题。近年来的研究表明 ,延髓中一个被称为前包钦格复合体 (pre Botzingercomplex ,PBC)的区域在哺乳动物呼吸节律的产生中起着关键作用。本文主要介绍PBC的定位 ;PBC内呼吸神经元的类型及轴突投射 ;调节PBC呼吸神经元活动的神经递质 ;

关键词：前包钦格复合体呼吸节律呼吸中枢延髓

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硫化氢逆转脂多糖诱导大鼠肺动脉低反应性以及与一氧化碳的关系

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中国危重病急救医学 2011年第4期23卷 200-203页

作者：张晓静孟祥艳黄新莉戴鸿雁韦鹏凌亦凌河北医科大学基础医学院法医学系石家庄050017 武警医学院病理生理学教研室河北医科大学基础医学院病理生理学教研室

目的观察整体水平应用硫化氢（H2S）后脂多糖（LPS）诱导的离体肺动脉对H2S舒张反应的变化及其与一氧化碳（CO）的关系.方法将48只大鼠按照随机数字表法分为对照组[给予生理盐水（NS）]、LPS组、H2S供体硫氢化钠（NaHS）＋LPS组和NaHS... 详细信息

目的观察整体水平应用硫化氢（H2S）后脂多糖（LPS）诱导的离体肺动脉对H2S舒张反应的变化及其与一氧化碳（CO）的关系.方法将48只大鼠按照随机数字表法分为对照组[给予生理盐水（NS）]、LPS组、H2S供体硫氢化钠（NaHS）＋LPS组和NaHS＋NS组4组,每组12只.采用经大鼠气管内滴注LPS（0.8 ml/kg）染毒;NaHS±＋LPS组和NaHS±NS组滴注LPS或NS之前10 min和之后2 h腹腔注射NaHS各0.5 ml（28 μmol/kg）.各组取6只大鼠于染毒后12 h制备肺动脉环（PARs）,采用离体血管环张力测定技术检测用血红素氧合酶-1（HO-1）抑制剂锌原卟啉Ⅸ（ZnPPⅨ）孵育前后PARs对累积浓度NaHS的舒张反应变化;各组另取6只大鼠于染毒后12 h检测出肺血（EPB）和入肺血（APB）中碳氧血红蛋白（COHb）含量,以其差值反映肺循环CO生成的水平.结果与对照组相比,滴注LPS后PARs对NaHS的最大舒张反应百分比明显降低[（75.72±7.22）%比（96.40±4.40）%,P＜0.01＝;用ZnPPⅨ孵育PARs后,LPS诱导的PARs对NaHS舒张反应进一步降低[（62.91±8.22）%比（75.72±7.22）%,P＜0.01＝.腹腔注射NaHS可明显逆转LPS诱导的PARs对NaHS的低反应性,PARs对NaHS的最大舒张反应百分比明显升高[（94.65±8.45）%比（75.72±7.22）%,P＜0.01＝;但用ZnPPⅨ孵育PARs后,PARs对NaHS的舒张反应较孵育前显著下降[（83.75±9.76）%比（94.65±8.45）%,P＜0.01＝.NaHS＋NS组中PARs对NaHS的舒张反应与对照组相比无明显差异,且在ZnPPⅨ孵育前后也无明显变化.COHb检测结果显示,与对照组相比,滴注LPS后APB和EPB中COHb水平的差值明显增高[（3.12±0.48）%比（2.12±0.32）%,P＜0.05＝;腹腔注射NaHS后,COHb水平的差值[（4.03±0.56）%]较LPS组进一步升高（P＜0.01＝.结论腹腔注射H2S可以改善LPS诱导的离体肺动脉对H2S的低反应性,其机制可能与增强肺动脉HO-1/CO体系有关.

关键词：硫化氢一氧化碳肺动脉脂多糖肺动脉高压

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