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四川大学学报（医学版） 2003年第3期34卷 435-438页

作者：吴瑜易成王树人张敏张静四川大学华西基础医学与法医学院病理生理学教研室成都610041 四川大学华西医院肿瘤中心四川大学华西基础医学与法医学院同位素室

目的　探讨婴儿双歧杆菌对黑色素瘤组织是否具有靶向特性。方法　采用荷瘤鼠尾静脉推注 3H-Td R标记婴儿双歧杆菌示踪分析、组织培养和组织切片革兰氏染色观察婴儿双歧杆菌的瘤组织靶向性。结果　瘤组织内放射性强度持续增强 ,正常组织... 详细信息

目的　探讨婴儿双歧杆菌对黑色素瘤组织是否具有靶向特性。方法　采用荷瘤鼠尾静脉推注 3H-Td R标记婴儿双歧杆菌示踪分析、组织培养和组织切片革兰氏染色观察婴儿双歧杆菌的瘤组织靶向性。结果　瘤组织内放射性强度持续增强 ,正常组织放射性强度则持续减弱。组织培养显示婴儿双歧杆菌在瘤组织内富集增殖。组织切片显示瘤组织内大量革兰氏染色阳性条杆状紫蓝色深染区 ,而正常组织中却无。

关键词：婴儿双歧杆菌小鼠黑色素瘤模型肿瘤组织靶向性

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婴儿双歧杆菌介导的CD/5-FC自杀基因系统对黑色素瘤的抑瘤实验

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四川大学学报（医学版） 2005年第2期36卷 165-168页

作者：易成郭志英黄英王浩毅王树人四川大学华西医院肿瘤中心成都610041 四川大学华西基础医学与法医学院病理生理学教研室

目的　观察婴儿双歧杆菌介导的胞嘧啶脱氨酶 / 5 -氟胞嘧啶 (CD/ 5 - FC)自杀基因系统对黑色素瘤的体内、外抑瘤效果。方法　含重组 CD基因的婴儿双歧杆菌中加入 5 - FC,厌氧条件下培养 2 4 h后取其上清液 ,加到黑色素瘤 B16 - F10细胞... 详细信息

目的　观察婴儿双歧杆菌介导的胞嘧啶脱氨酶 / 5 -氟胞嘧啶 (CD/ 5 - FC)自杀基因系统对黑色素瘤的体内、外抑瘤效果。方法　含重组 CD基因的婴儿双歧杆菌中加入 5 - FC,厌氧条件下培养 2 4 h后取其上清液 ,加到黑色素瘤 B16 - F10细胞上 ,观察其对细胞形态及细胞生长抑制率的影响 ;建立小鼠黑色素瘤动物模型 ,尾静脉注入含重组 CD基因的婴儿双歧杆菌 ,腹腔注入 5 - FC,观察携带重组 CD基因的婴儿双歧杆菌联合 5 - FC对黑色素瘤肿瘤体积及肿瘤体积倍增时间的影响。结果　 1体外实验 :实验组肿瘤细胞形态显示出显著的损伤性改变 ,细胞生长受到明显抑制 ,而对照组肿瘤细胞影响不大。 2小鼠黑色素瘤动物模型实验结果显示 ,经重组婴儿双歧杆菌联合 5 -FC治疗 2 1d,实验组肿瘤倍增时间明显长于对照组 ,其肿瘤体积明显小于对照组 ,且随着观察时间的延长 ,这种差异越显著。结论　婴儿双歧杆菌介导的 CD/ 5 - FC自杀基因系统对黑色素瘤具有明显的抑瘤效果。

关键词：婴儿双歧杆菌胞嘧啶脱氨酶 5-氟胞嘧啶基因治疗

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L-精氨酸诱导急性胰腺炎小鼠肺损伤的实验研究

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四川大学学报（医学版） 2004年第6期35卷 839-842页

作者：赵秋玲黄承钰黄英王俊芳刘静四川大学华西公共卫生学院营养与食品卫生学教研室四川大学基础医学与法医学院病理生理学教研室

目的　建立大剂量 L-精氨酸诱导急性胰腺炎并发肺损伤的小鼠模型 ,并探讨 TNF- α和 ICAM- 1对该模型小鼠肺损伤的作用。方法　给胰腺炎组小鼠腹腔注射 L-精氨酸 (2 g/ kg) ,间隔 1h后同量再注射 1次 ,末次注射后 12 h采用比色法检测小... 详细信息

目的　建立大剂量 L-精氨酸诱导急性胰腺炎并发肺损伤的小鼠模型 ,并探讨 TNF- α和 ICAM- 1对该模型小鼠肺损伤的作用。方法　给胰腺炎组小鼠腹腔注射 L-精氨酸 (2 g/ kg) ,间隔 1h后同量再注射 1次 ,末次注射后 12 h采用比色法检测小鼠血清淀粉酶活性、放射免疫法测定肺组织 TNF- α的含量 ;2 4 h观察胰腺和肺组织病理变化并采用免疫组织化学染色法检测肺组织 ICAM- 1的蛋白表达。结果　胰腺炎组小鼠血清淀粉酶活性、肺组织 TNF- α的含量、ICAM- 1的表达均高于对照组 ,且差异有显著性 (P<0 .0 5 ) ;胰腺组织和肺组织 HE染色可见典型的炎性改变。结论　大剂量 L-精氨酸可成功诱导急性胰腺炎并发肺损伤的小鼠模型 ,TNF- α和 ICAM- 1可能参与了 L-精氨酸诱导的 AP小鼠的肺损伤机制。

关键词： L-精氨酸急性胰腺炎肺损伤细胞因子动物模型肿瘤坏死因子细胞间粘附分子1

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同型半胱氨酸对体外培养人单核细胞株细胞TNFSF4基因及白细胞介素10因子表达的影响

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中国组织工程研究与临床康复 2008年第15期12卷 2887-2890页

作者：黄丹丹王树人四川大学华西基础医学与法医学院病理生理学教研室四川省成都市610041

背景:炎症反应是高同型半胱氨酸血症加速动脉粥样硬化潜在的分子机制之一,但其具体机制还有待阐明,TNFSF4基因及白细胞介素10因子是动脉粥样硬化的炎症相关因子,两者与高同型半胱氨酸血症的关系报道较少。目的:实验拟验证同型半胱氨酸... 详细信息

背景:炎症反应是高同型半胱氨酸血症加速动脉粥样硬化潜在的分子机制之一,但其具体机制还有待阐明,TNFSF4基因及白细胞介素10因子是动脉粥样硬化的炎症相关因子,两者与高同型半胱氨酸血症的关系报道较少。目的:实验拟验证同型半胱氨酸对体外培养人单核细胞株细胞TNFSF4基因及白细胞介素10因子表达的影响。设计、时间及地点:随机对照体外细胞实验于2007-07/12在四川大学华西基础医学与法医学院病理生理学实验室完成。材料:THP-1单核细胞株由本室提供;高同型半胱氨酸、地塞米松和维生素D3由Sigma公司提供。方法:在由0.1μmol/L佛波脂诱导分化的THP-1单核细胞中加入200μmol/L的高同型半胱氨酸培养24,48,72h,将各时间点细胞上清液及裂解液作为条件培养基,加入经地塞米松及维生素D3作用6d后的培养瓶中继续培养24h。分为空白对照组;200μmol/L高同型半胱氨酸组;地塞米松+维生素D3组;24h高同型半胱氨酸条件培养基+地塞米松+维生素D3组;48h高同型半胱氨酸条件培养基+地塞米松+维生素D3组;72h高同型半胱氨酸条件培养基+地塞米松+维生素D3组。主要观察指标:应用反转录-聚合酶链反应检测TNFSF4基因mRNA表达水平差异;应用ELISA法检测其白细胞介素10蛋白表达的改变。结果:与空白对照组相比,高同型半胱氨酸处理24hTNFSF4基因mRNA表达变化不明显;48,72hTNFSF4基因mRNA表达显著增加;与地塞米松+维生素D3组相比,200μmol/L高同型半胱氨酸组各时间点白细胞介素10蛋白表达水平显著降低。结论:同型半胱氨酸可致THP-1巨噬细胞TNFSF4基因mRNA表达水平增加,同时致其白细胞介素10蛋白表达水平降低。

关键词：同型半胱氨酸 TNFSF4基因白细胞介素10 组织构建

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用荧光分光光度法测量冠心病患者血浆谷胱甘肽

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光谱学与光谱分析 2006年第5期26卷 936-940页

作者：黄彦生智艳芳孔沈燕王秋林许波实王树人四川大学华西基础医学与法医学院病理生理学教研室四川成都610041 成都中医药大学河南省人民医院中心实验室河南郑州450003

利用荧光分光光度计对还原型谷胱甘肽(GSH)及氧化型谷胱甘肽(GSSG)标准品进行全波长扫描,确定激发(λex)波长为334·4nm,发射(λem)波长为424nm以及5nm的谱带宽度,以pH8·3的磷酸盐缓冲液(PBS)作为缓冲液,用100μL10mmol·... 详细信息

利用荧光分光光度计对还原型谷胱甘肽(GSH)及氧化型谷胱甘肽(GSSG)标准品进行全波长扫描,确定激发(λex)波长为334·4nm,发射(λem)波长为424nm以及5nm的谱带宽度,以pH8·3的磷酸盐缓冲液(PBS)作为缓冲液,用100μL10mmol·L-1邻苯二甲醛(OPA)甲醇溶液对GSH进行衍生化30min后测量荧光值(FU)。以标准品浓度为自变量,FU为应变量,求直线方程,YGSH=6·9+8·6X(r2=0·994),YGSSG=6·2+17·2X(r2=0·999),并制作标准曲线。据此测定三组研究对象血浆GSH及GSSG,并计算GSH/GSSG的氧化还原电位。研究发现,从正常对照组到冠心病前期组,再到冠心病组,GSSG逐渐升高,GSH和GSH/GSSG逐渐减少,氧化还原电位逐渐升高,向氧化方向偏移(P均<0·05)。该方法操作简单,精密度好,准确度高。

关键词：荧光分光光度法冠心病还原型谷胱甘肽氧化型谷胱甘肽氧化还原电位

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人血浆高密度脂蛋白对大鼠内毒素血症的治疗作用初探

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华西医科大学学报 2002年第1期33卷 65-67页

作者：黄英顾玲王树人康焰吴淑红崔巍四川大学华西基础医学与法医学院病理生理学教研室成都610041 四川大学华西医院加强医疗科

目的　观察人血浆高密度脂蛋白 (HDL)对大鼠内毒素血症的治疗效果。方法　采用鲎试剂法和放射免疫分析法测定对照组〔仅静脉输注内毒素 (5 0 0 EU/kg)〕和治疗组〔血压下降后给予 HDL(75 mg/kg)治疗〕大鼠血压、存活时间、血浆内毒素水... 详细信息

目的　观察人血浆高密度脂蛋白 (HDL)对大鼠内毒素血症的治疗效果。方法　采用鲎试剂法和放射免疫分析法测定对照组〔仅静脉输注内毒素 (5 0 0 EU/kg)〕和治疗组〔血压下降后给予 HDL(75 mg/kg)治疗〕大鼠血压、存活时间、血浆内毒素水平和肿瘤坏死因子 (TNF)浓度。结果　与对照组比较 ,输注 HDL 后治疗组大鼠血浆 TNF浓度明显降低 (P<0 .0 5 ) ,血压下降程度明显减弱 (P<0 .0 1) ,存活时间明显延长 (P<0 .0 1)。但两组大鼠血浆内毒素水平在各时点均无明显变化 (P>0 .0 5 )。结论　人血浆 HDL 不但可以抑制 TNF的释放 ,而且还能提高机体对抗内毒素损伤的能力 ,对内毒素血症具有较理想的治疗作用。其机理可能与 HDL 能抑制

关键词：高密度脂蛋白内毒素血症大鼠治疗 HDL

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婴儿双歧杆菌介导的sKDR原核克隆表达及其对血管内皮细胞增殖的影响

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四川大学学报（医学版） 2009年第5期40卷 784-786,802页

作者：毛淑华姬玲玲刘洪徐一洲黄煌黄英易成四川大学华西基础医学与法医学院病理生理学教研室成都610041 四川大学华西医院腹部肿瘤科

目的构建婴儿双歧杆菌介导的sKDR基因肿瘤靶向性转运系统并观察其对血管内皮细胞增殖的影响。方法PCR扩增sKDR基因,提取与纯化pET32a质粒。EcoRⅠ和XhoⅠ对sKDR基因和pET32a质粒分别进行双酶切,用T4DNA连接酶将目的基因片段和载体连接... 详细信息

目的构建婴儿双歧杆菌介导的sKDR基因肿瘤靶向性转运系统并观察其对血管内皮细胞增殖的影响。方法PCR扩增sKDR基因,提取与纯化pET32a质粒。EcoRⅠ和XhoⅠ对sKDR基因和pET32a质粒分别进行双酶切,用T4DNA连接酶将目的基因片段和载体连接。电穿孔法将连接反应物转染婴儿双歧杆菌。厌氧培养重组质粒转化菌,并将其处理液加入由VEGF诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)培养基中培养24h,MTT比色法测定细胞存活率。结果PCR、酶切鉴定及核酸测序结果表明,获得了含pET32a-sKDR重组质粒的婴儿双歧杆菌;RT-PCR及SDS-PAGE电泳结果证实sKDR在基因及蛋白水平成功表达。与空质粒对照组相比,重组质粒转化菌处理液可明显抑制HUVECs增殖(P<0.01)。结论成功构建了婴儿双歧杆菌介导的sKDR基因转运系统,体外实验证实其可明显抑制血管内皮细胞的增殖。

关键词：婴儿双歧杆菌抗血管生成血管内皮生长因子(VEGF) 可溶性血管内皮生长因子受体 (sKDR) 血管内皮细胞

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利用同源重组构建人肺鳞状细胞癌旁组织的酵母双杂交cDNA文库

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中国组织工程研究与临床康复 2008年第28期12卷 5490-5493页

作者：彭媛媛邓璐霞石艳娥赵媛陈军利王薇冯云吴琦王伯瑶黄宁四川大学华西基础医学与法医学院病理生理学感染免疫教研室四川省成都市610041

背景:酵母双杂交技术是目前应用最成功的研究蛋白质相互作用的技术平台。目的:运用SMART(switching mechanism at5′end of RNA transc-ript)技术构建人肺鳞状细胞癌旁组织的酵母双杂交cDNA文库。设计、时间及地点:单一样本观察,于2006-... 详细信息

背景:酵母双杂交技术是目前应用最成功的研究蛋白质相互作用的技术平台。目的:运用SMART(switching mechanism at5′end of RNA transc-ript)技术构建人肺鳞状细胞癌旁组织的酵母双杂交cDNA文库。设计、时间及地点:单一样本观察,于2006-07/2007-01在四川大学华西基础医学与法医学院病理生理学感染免疫实验室完成。材料:人肺鳞状细胞癌旁组织由四川大学华西医学中心附属第一医院胸外科提供。方法:运用SMART技术,以纯化的Poly(A)+RNA为模板,用Powerscript逆转录酶进行转录,并在mRNA的5’末端添加一段5’-oligo作为延伸后的模板,从而富集全长cDNA。纯化的双链cDNA与线性化pGADT7-Rec质粒载体共同转化酵母菌株感受态AH109,经胞内同源重组形成环状文库质粒。应用营养缺陷的方法在SD/-Leu平板上筛选并收集所有克隆从而获得酵母双杂交的人肺鳞状细胞癌旁组织cDNA文库。主要观察指标:采用琼脂糖凝胶电泳观察人肺鳞状细胞癌旁组织的cDNA文库构建结果,并进行文库容量及多态性鉴定。结果:①总RNA和mRNA纯度较好,比较完整。②双链cDNA文库大小介于0.5～3kb之间。③共获得1.2×106转化子,重组子不同插入片断大小在0.3～2kb之间,文库具有较好的多样性。结论:在酵母菌株AH109成功构建了用于酵母双杂交的人肺鳞状细胞癌旁组织cDNA文库。

关键词： SMART技术 cDNA文库同源重组酵母双杂交

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人血红蛋白及其片段体内外抗菌活性研究

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四川大学学报（医学版） 2008年第3期39卷 355-359页

作者：周新娥欧阳运薇潘小玲何跃东李恒邓璐霞石艳娥彭媛媛赵媛黄宁四川大学华西基础医学与法医学院病理生理学教研室感染免疫研究室四川大学华西第二医院妇产科

目的分离人血红蛋白及其片段,进行体外抗菌活性分析和比较,并对血红蛋白体内抗菌活性进行初步探讨。方法利用阳离子交换及分子筛分离人血红蛋白α、β链;溴化氰法裂解α/β链,反相高效液相色谱技术纯化其片段;琼脂糖弥散法抑菌实验检测... 详细信息

目的分离人血红蛋白及其片段,进行体外抗菌活性分析和比较,并对血红蛋白体内抗菌活性进行初步探讨。方法利用阳离子交换及分子筛分离人血红蛋白α、β链;溴化氰法裂解α/β链,反相高效液相色谱技术纯化其片段;琼脂糖弥散法抑菌实验检测抗菌活性;构建大鼠大肠埃希菌阴道感染模型,设立实验组（血红蛋白组）和对照组,观察各组大鼠阴道组织形态学变化。结果体外抑菌实验示：血红蛋白、α/β链及其片段有抑菌作用,但其主要针对的是革兰阴性菌大肠埃希菌;而且除α1~32的抑菌作用较弱外,血红蛋白、α/β链及其片段三者抑菌活性比较,其效能基本相似。大鼠体内抗菌实验示：与基质对照组（感染后不治疗）比,血红蛋白组阴道复层扁平上皮表层较平滑,固有层内炎细胞浸润明显减少,且组织内充血明显减轻。结论人血红蛋白及其片段具有体外抑菌活性,而且血红蛋白在大鼠体内能减轻大肠埃希菌阴道感染炎症程度。

关键词：人血红蛋白片段抑菌大鼠大肠埃希菌性阴道感染

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肿瘤厌氧靶向双自杀基因治疗系统pTRKH2-PsT/CD、pTRKH2-PsT/UPRT的构建

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肿瘤防治研究 2009年第2期36卷 86-90页

作者：叶鹏李华杨彦彪王树人四川大学华西基础医学与法医学院病理生理学教研室成都610041 泸州医学院病理生理学教研室兰州第一人民医院

目的利用婴儿双歧杆菌对实体瘤低氧区的靶向效应,构建肿瘤厌氧靶向双自杀基因治疗系统pTRKH2-PsT/CD和pTRKH2-PsT/UPRT。方法用PCR的方法从质粒pGEX/CD和pGEX/UP-RT中扩增出CD基因和UPRT基因,双酶切CD基因、UPRT基因和质粒pTRKH2-PsT,... 详细信息

目的利用婴儿双歧杆菌对实体瘤低氧区的靶向效应,构建肿瘤厌氧靶向双自杀基因治疗系统pTRKH2-PsT/CD和pTRKH2-PsT/UPRT。方法用PCR的方法从质粒pGEX/CD和pGEX/UP-RT中扩增出CD基因和UPRT基因,双酶切CD基因、UPRT基因和质粒pTRKH2-PsT,分别连接后重组于大肠杆菌中。之后用电转化的方法将重组质粒转入婴儿双歧杆菌中。用RT-PCR检测该系统mR-NA水平的表达,SDS-PAGE检测该系统在蛋白质水平的表达。在黑色素瘤B16-F10细胞上检测该系统的体外肿瘤细胞杀伤效果。结果成功地将CD基因和UPRT基因转入了质粒pTRKH2-PsT,CD基因和UPRT基因的测序结果表明序列与Genebank公布的序列一致。RT-PCR检测到CD和UPRTmRNA水平的明显表达。在含有CD基因的婴儿双歧杆菌细胞全蛋白中发现了CD蛋白质的表达,在含有UPRT基因的婴儿双歧杆菌上清液中发现了UPRT蛋白质的表达。黑色素瘤细胞的低存活率证明了pTRKH2-PsT/CD、pTRKH2-PsT/UPRT自杀基因治疗系统对黑色素瘤的显著杀伤作用。结论肿瘤厌氧靶向双自杀基因治疗系统pTRKH2-PsT/CD、pTRKH2-PsT/UPRT构建成功并显示出杀伤肿瘤细胞的作用。

关键词：婴儿双歧杆菌自杀基因 CD基因 UPRT基因肿瘤靶向性

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