检索结果-内蒙古大学图书馆

中国生物化学与分子生物学报 2014年第1期30卷 52-59页

作者：刘超肖建英任丽莉于秉治中国医科大学生物化学与分子生物学教研室沈阳110001 辽宁医学院发育生物学教研室锦州121001 辽宁医学院生物化学与分子生物学教研室锦州121001

为研究小鼠Wee1B蛋白S15位点磷酸化状态对小鼠1-细胞期受精卵发育的影响,构建pcDNA3.1/V5-His-TOPO-Wee1B-S15A(Ser突变成Ala)/D(Ser突变成Asp)突变体,体外转录成mRNAs.对小鼠进行超排卵后当晚与雄鼠1∶1合笼,第2 d早取受精卵后培养至S... 详细信息

为研究小鼠Wee1B蛋白S15位点磷酸化状态对小鼠1-细胞期受精卵发育的影响,构建pcDNA3.1/V5-His-TOPO-Wee1B-S15A(Ser突变成Ala)/D(Ser突变成Asp)突变体,体外转录成mRNAs.对小鼠进行超排卵后当晚与雄鼠1∶1合笼,第2 d早取受精卵后培养至S期,显微注射Wee1B-WT(野生型)/KD(激酶失活型)-mRNAs和突变体Wee1B-S15A/D-mRNAs,观察其对受精卵发育、有丝分裂促进因子(MPF)活性及CDC2-pTyr15磷酸化状态的影响.结果表明,过表达Wee1B-WT和Wee1B-S15A/D可有效抑制受精卵有丝分裂进程,明显降低卵裂率.过表达模拟磷酸化的突变明显抑制MPF的活性,CDC2-pTyr15磷酸化状态和MPF活性变化相一致.因此,在小鼠1-细胞期受精卵有丝分裂过程中,PKA对小鼠Wee1B蛋白S15位点的磷酸化修饰是控制受精卵G2/M转换的重要方式.

关键词： Wee1B 蛋白激酶A 有丝分裂促进因子小鼠受精卵

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建立高效液相色谱-串联质谱检测细胞内腺苷酸浓度的方法及其应用

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生物化学与生物物理进展 2013年第3期40卷 273-280页

作者：李宁张海涛罗辉张良滔熊勇贾振斌广东医学院化学教研室湛江524023 广东医学院生物化学与分子生物学研究所湛江524023 广东医学院分析中心湛江524023

细胞内腺苷酸浓度变化是细胞能量代谢改变的感应器,建立高效液相色谱-串联质谱法检测细胞内腺苷酸浓度的方法有助于监测药物对细胞能量代谢的影响.用含有Na-EDTA的高氯酸溶液超声裂解细胞.采用超高效HSS T3色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.... 详细信息

细胞内腺苷酸浓度变化是细胞能量代谢改变的感应器,建立高效液相色谱-串联质谱法检测细胞内腺苷酸浓度的方法有助于监测药物对细胞能量代谢的影响.用含有Na-EDTA的高氯酸溶液超声裂解细胞.采用超高效HSS T3色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.8μm),以8 mmol/L N,N-二甲基己胺(DMHA)水溶液和乙腈为流动相进行梯度洗脱,采用正离子模式质谱检测,在多反应监测(MRM)模式下进行定性定量分析.结果表明,AMP、ADP和ATP分别在(0.1814～14.5164)μmol/L、(0.2342～18.7354)μmol/L和(0.2003～16.0260)μmol/L线性范围内具有良好的线性关系,其相关系数分别为0.9984、0.9964和***、ADP和ATP的检出限(LOD,S/N>3)分别为1.9291、1.8794和166.5 nmol/L,定量限(LOQ,S/N>10)为1.9632、1.9672和185.6 nmol/L,且加标回收率为81.8%～107.8%,相对标准偏差小于7.55%.AMP、ADP和ATP的日内偏差(RSD)分别为6.16%、5.13%和7.66%,日间偏差(RSD)分别为6.36%、2.74%和6.77%.该方法快速、简单、灵敏,能满足细胞内AMP、ADP和ATP含量的检测要求.通过检测分析在不同浓度高良姜挥发油作用下人肺癌A549细胞内AMP、ADP和ATP含量变化,结果显示细胞总的腺苷酸水平和能荷呈浓度依赖性下降,且当浓度达到500 mg/L时ATP/TAN明显下降,而A549细胞中AMP/ATP比例水平呈浓度依赖性增加.这提示高良姜挥发油可通过影响细胞能量代谢抑制细胞增殖.

关键词：高效液相色谱-串联质谱腺苷酸能量代谢高良姜

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蓖麻毒素A链与绿色荧光蛋白基因的融合表达和活性测定

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浙江大学学报（医学版） 2005年第3期34卷 201-206页

作者：陈欣虹刘琼詹金彪浙江大学医学院生物化学与分子生物学教研室

　目的:表达蓖麻毒素A链(RTA)与绿色荧光蛋白(GFP)的融合蛋白(GFP-RTA),用于蓖麻毒素A链在细胞内的转运机理研究。方法:采用PCR法从重组质粒pKK233.2-RTA中扩增出蓖麻毒素A链基因,然而将其插入真核表达质粒pEGFPC1,构成GFP-RTA融合基因;... 详细信息

　目的:表达蓖麻毒素A链(RTA)与绿色荧光蛋白(GFP)的融合蛋白(GFP-RTA),用于蓖麻毒素A链在细胞内的转运机理研究。方法:采用PCR法从重组质粒pKK233.2-RTA中扩增出蓖麻毒素A链基因,然而将其插入真核表达质粒pEGFPC1,构成GFP-RTA融合基因;GFP-RTA经PCR扩增,与T载体连接,用内切酶从T-GFP-RTA中切下GFP-RTA片段,插入原核表达质粒pET-28a(+);在BL21(DE3)中表达GFP-RTA融合蛋白,通过金属螯合和层析纯化,MTT法检测融合蛋白的细胞毒性。结果:测序发现插入的融合基因全长序列完全正确,SDS-PAGE鉴定表达产物分子量正确;经诱导表达后,菌体产生绿色荧光,MTT法表明该融合蛋白呈现与RTA相似的细胞毒性。结论:从大肠杆菌表达的蓖麻毒素A链与绿色荧光蛋白的融合蛋白,具有蓖麻毒素A链和绿色荧光蛋白的生物学活性,可用于蓖麻毒素A链在细胞内的转运途径研究。

关键词：蓖麻蛋白蓖麻毒素A链发光蛋白质类重组融合蛋白质类/生物合成基因表达大肠杆菌/代谢聚合酶链反应

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重组盐藻14-3-3蛋白基因的原核表达及分离纯化

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四川大学学报（自然科学版） 2008年第6期45卷 1533-1536页

作者：王天云昝玉玺张俊河张煜王俐郭丽新乡医学院生物化学与分子生物学教研室新乡453003

根据克隆的杜氏盐藻14-3-3蛋白的基因序列设计引物,采用RT-PCR方法扩增杜氏盐藻14-3-3蛋白的基因.经原核表达、Ni2+亲和层析法纯化,免疫动物制备抗体.抗体蛋白质印迹分析检测结果表明抗体能特异结合盐藻细胞分子量为29 kD的多肽.

关键词：杜氏盐藻 14—3—3蛋白原核表达

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浙江畲族DYS287、DYS440位点的多态性研究

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中华医学遗传学杂志 2004年第4期21卷 410-411页

作者：闫春兰詹金彪邵靖宇浙江大学医学院生物化学与分子生物学教研室杭州310031

目的　研究浙江畲族人群中DYS2 87和DYS44 0位点的多态性。方法　采用聚合酶链反应扩增DYS2 87和DYS44 0 ,PCR产物用 2 %的琼脂糖电泳分析 10 0名畲族个体的基因型。结果　 10 0名个体DYS2 87位点全部是YAP-;没有发现YAP+ ;10名为DYS44 ... 详细信息

目的　研究浙江畲族人群中DYS2 87和DYS44 0位点的多态性。方法　采用聚合酶链反应扩增DYS2 87和DYS44 0 ,PCR产物用 2 %的琼脂糖电泳分析 10 0名畲族个体的基因型。结果　 10 0名个体DYS2 87位点全部是YAP-;没有发现YAP+ ;10名为DYS44 0 3 ,占总人群数的 10 % ,其余 90名是DYS44 0 4。结论　浙江畲族人群DYS2 87和DYS44 0多态性与属于汉藏语系的其它民族之间存在着明显的不同 ,因此这两个基因位点对研究人类的进化是一种稳定的、重要的遗传标记。

关键词：人群多态性研究畲族琼脂糖电泳聚合酶链反应位点扩增 DYS287 PCR产物进化

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具有NGF活性通过二硫键连接的 2个小分子多肽的制备及鉴定(英文)

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中国生物化学与分子生物学报 2002年第2期18卷 129-133页

作者：李贤慧陈桂英窦贺荣张庆鹏赵国发牛云彤李积胜武警医学院生物化学与分子生物学教研室天津300162

神经生长因子 (NGF)作用广泛 ,β NGF是神经生长因子的活性部分 .由于 3对二硫键的影响 ,体外表达NGF很难形成正确折叠的肽链 .由于神经系统血脑屏障的存在 ,大分子肽链的给药途径是一个不可忽视的难题 .根据NGF的氨基酸序列及其晶体构... 详细信息

神经生长因子 (NGF)作用广泛 ,β NGF是神经生长因子的活性部分 .由于 3对二硫键的影响 ,体外表达NGF很难形成正确折叠的肽链 .由于神经系统血脑屏障的存在 ,大分子肽链的给药途径是一个不可忽视的难题 .根据NGF的氨基酸序列及其晶体构象资料 ,选择CNBr在 9位Met处 ,胰蛋白酶在Arg或Lys处裂解 β NGF .经过SephadexG 5 0层析、DE 5 2纤维素离子交换层析和反相高压液相层析分离纯化后获得NGF活性片段 .氨基酸组成分析及氨基酸序列分析结果表明 ,此片段由 16肽GEFSVCDSVSVWVGDK与 14肽HWNSYCTTTHTFVK通过 1对二硫键连接而成 .8日龄鸡胚背根神经节生物活性分析表明 ,其最佳作用浓度为 0 0 0 1～ 0 1μg L .它的成功分离和鉴定为合成或表达高活性小分子神经营养物质奠定了关键而重要的基础 .

关键词：二硫键连接小分子多肽制备鉴定神经生长因子寡肽生物活性神经营养作用

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细胞凋亡相关的组合生物标志物的分子基础及其在环境毒理学中的意义

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水生生物学报 2005年第3期29卷 329-335页

作者：徐立红浙江大学医学院生物化学与分子生物学教研室杭州310031

摘要: 生物标志物(Biomarker)可以反映机体接触外来化学物后出现的细胞、生物化学或分子生物学改变,或个体对外来因素产生反应的易感性,因此,生物标志物作为指标具有早期预警作用,在生态毒理学、环境毒理学及流行病学研究中都受到极大... 详细信息

摘要: 生物标志物(Biomarker)可以反映机体接触外来化学物后出现的细胞、生物化学或分子生物学改变,或个体对外来因素产生反应的易感性,因此,生物标志物作为指标具有早期预警作用,在生态毒理学、环境毒理学及流行病学研究中都受到极大的重视。生物标志物被用于污染物影响的早期检测时具有极大优势,它们的建立依赖于对污染物致毒机理的揭示,随着对污染物作用机理研究的深入,建立并采用的生物标志物越来越多,污染物的多样性及生物结构的复杂性也决定了生物标志物种类繁多、性质各异。虽然生物标志物的应用已经受到广泛关注并且显示出极大的优越性,然而仍有很大的局限性,当生物标志物用于污染物的危害性预测时,如何将污染物引起生物标志物的改变与具有的危害相关联是尤为受到关注的问题。

关键词：污染物细胞凋亡生物标志物环境毒理学组合生物标志物微囊藻毒素分子调节机制

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白英水提物诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡的实验研究

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中药材 2009年第2期32卷 245-249页

作者：万福生吴剑李华涂硕余乐涵南昌大学医学院生物化学与分子生物学教研室江西南昌330006

目的:观察白英水提物(ESL)对胃癌SGC-7901细胞凋亡及相关基因表达的影响。方法:常规法制备ESL;实验分正常对照组、白英处理组和顺铂处理组。白英处理组加入ESL终浓度分别为12.5、25、50 mg/mL。MTT法检测细胞增殖抑制率,荧光显微镜观察S... 详细信息

目的:观察白英水提物(ESL)对胃癌SGC-7901细胞凋亡及相关基因表达的影响。方法:常规法制备ESL;实验分正常对照组、白英处理组和顺铂处理组。白英处理组加入ESL终浓度分别为12.5、25、50 mg/mL。MTT法检测细胞增殖抑制率,荧光显微镜观察SGC-7901细胞凋亡及形态变化,半定量RT-PCR分析基因bcl-xl、bid、Caspase-9 mRNA表达,荧光分析法测定Caspase-3活性。结果:与正常对照组比较,三个剂量白英处理组SGC-7901细胞增殖抑制均有显著性增加,且呈明显的时效和量效关系,细胞凋亡显著增多(P<0.05),表现细胞核固缩、染色质凝集、边聚等;bcl-xl mRNA表达显著下降(P<0.05),bid、Caspase-9 mRNA表达显著性升高(P<0.05),并随ESL浓度增加而加强,Caspaes-3活性亦显著性增高(P<0.01)。结论:ESL能剂量依赖性诱导SGC-7901细胞凋亡和抑制增殖,其作用与调控bcl-xl、bid、Caspase-9 mRNA表达和增强Caspase-3活性相关。

关键词：白英凋亡基因表达 SGC-7901细胞

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CDC28蛋白激酶调节亚基2对卵巢癌A2780细胞丝足形成的影响及其机制研究

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解放军医学杂志 2016年第8期41卷 618-623页

作者：孙倩玲董梦梦易祎胡锦辉张米妮朱琳黄石榴孙贤青袁成福三峡大学医学院生物化学与分子生物学教研室湖北宜昌443002

目的探讨CDC28蛋白激酶调节亚基2(CKS2)对A2780细胞丝足形成的影响及其可能机制。方法采用慢病毒介导的sh RNA敲除A2780细胞的CKS2基因,显微镜下观察细胞丝足的变化;采用细胞划痕实验检测A2780细胞迁移能力的变化;采用real time PCR检测... 详细信息

目的探讨CDC28蛋白激酶调节亚基2(CKS2)对A2780细胞丝足形成的影响及其可能机制。方法采用慢病毒介导的sh RNA敲除A2780细胞的CKS2基因,显微镜下观察细胞丝足的变化;采用细胞划痕实验检测A2780细胞迁移能力的变化;采用real time PCR检测CKS2敲除对CDC42两种剪接变异体(CDC42-V1和CDC42-V2)表达的影响,以及不同卵巢癌标本中CKS2、CDC42-V1和CDC42-V2剪接变异体的表达情况。结果 CKS2表达抑制后,A2780细胞丝足明显减少,细胞迁移能力明显减弱(P<0.05),CDC42-V1 m RNA表达降低,而CDC42-V2 m RNA表达升高(P<0.05)。Real time PCR结果显示,卵巢癌组织标本中CKS2及CDC42-V1的表达高于对应的正常卵巢组织,而CDC42-V2的表达低于对应的正常卵巢组织(P<0.05)。结论 CKS2通过调控CDC42的选择性剪接而影响细胞丝足的形成,进而影响卵巢癌细胞A2780的迁移能力。

关键词： CDC28蛋白激酶调节亚基2 CDC42 GTP结合蛋白质卵巢肿瘤伪足选择性剪接

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长链非编码RNA与肿瘤的关系及其临床价值

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中国细胞生物学学报 2012年第7期34卷 704-712页

作者：宋皓军俞秀冲夏天郭俊明肖丙秀宁波大学医学院生物化学与分子生物学教研室宁波315211

长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncDNA)是指长度超过200个核苷酸、具有调控基因表达作用的非编码RNA。近年来研究表明,长链非编码RNA在肿瘤的发生、发展过程中发挥着促癌或抑癌作用,它们参与了细胞凋亡调控、肿瘤浸润与转移等过程... 详细信息

长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncDNA)是指长度超过200个核苷酸、具有调控基因表达作用的非编码RNA。近年来研究表明,长链非编码RNA在肿瘤的发生、发展过程中发挥着促癌或抑癌作用,它们参与了细胞凋亡调控、肿瘤浸润与转移等过程;另外,它们还通过表观遗传调控的方式影响肿瘤细胞的生长。它们有希望成为新型肿瘤标志物和肿瘤治疗的靶点,在肿瘤诊断和治疗方面显示出良好的临床应用前景。

关键词：长链非编码RNA 肿瘤基因表达调控肿瘤标志物

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