目的:探讨五味子合剂(SM)对糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)大鼠肾脏的保护作用,及其对自噬及Akt/mTOR通路的影响。方法:SPF级SD大鼠60只,随机分为对照组、模型组、达格列净(Dapagliflozin,0.9 g·kg^(-1)·d^(-1),DA)组、SM高剂量(6 g·kg^(-1)·d^(-1),SM-H)组、SM中剂量(3 g·kg^(-1)·d^(-1),SM-M)组及SM低剂量(1.5 g·kg^(-1)·d^(-1),SM-L)组,每组10只。除对照组外,其余各组均采用高糖高脂饮食联合STZ单次腹腔注射构建DN模型。造模成功后,干预12周。连续观测大鼠血糖(Glu)及24 h尿蛋白定量(24 h UTP)变化。干预结束后,检测肾功能,肾脏指数(KI),与肾组织病理变化。Western Blotting检测肾组织中自噬泡标记蛋白(LC3)、自噬底物(P62)、蛋白激酶B(Akt)、磷酸化Akt(p-Akt)、雷帕霉素靶蛋白(mTOR)以及磷酸化mTOR(p-mTOR)的蛋白表达量;免疫荧光染色检测肾组织中LC3、P62的表达情况。结果:与对照组相比,模型组Glu、24 h UTP、Scr、BUN及KI均显著升高(P<0.05或P<0.01),肾组织病理损伤明显加重;LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白表达量比值降低,P62蛋白表达量以及p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR表达量比值(P<0.05或P<0.01)升高。与模型组相比,SM各剂量组及DA组Glu、24 h UTP、Scr、BUN及KI均显著降低(P<0.05或P<0.01),肾组织病理损伤明显改善,SM-H组上述变化最为明显;并且SM-H组LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白表达量比值升高,P62蛋白表达量以及p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR表达量比值(P<0.05或P<0.01)降低。结论:SM可激活DN大鼠肾脏自噬,促进自噬降解,从而发挥肾保护作用,其机制可能与抑制Akt/mTOR通路有关。
目的 应用网络药理学的研究方法筛选人参—黄连—三七药串治疗糖尿病肾病的作用靶点及相关信号通路,通过动物实验明确其疗效与作用机制。方法 运用Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology Database and Analysis Platform(T...
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目的 应用网络药理学的研究方法筛选人参—黄连—三七药串治疗糖尿病肾病的作用靶点及相关信号通路,通过动物实验明确其疗效与作用机制。方法 运用Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology Database and Analysis Platform(TCMSP)数据库检索获取人参—黄连—三七的主要化学成分以及相关作用靶点;使用DisGeNET筛选胰岛素抵抗与糖尿病肾病的相关靶标基因;通过Venn软件筛选出药物与疾病的共同作用靶点;构建出疾病—靶点—成分—药物网络;使用STRING数据库完成蛋白质—蛋白质相互作用网络(protein-protein interaction networks, PPI)的构建;通过基因本体(gene ontology, GO)富集分析和京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes, KEGG)通路富集分析对有效作用靶点进行分析。以db/db小鼠作为动物模型,于给药第4、第8周后留取各组小鼠8小时尿液,检测各组小鼠尿微量白蛋白排泄水平;采用蛋白免疫印迹法法对网络药理学的研究预测的关键通路及靶点进行进一步的实验验证。结果 本研究共筛选得到人参—黄连—三七药串的人参皂苷Rh2、人参皂苷F2、槲皮素、小檗碱等39种有效成分;获得人参—黄连—三七药串治疗糖尿病肾病潜在靶点18个,其中PTEN、CCL2、IL6、TNF、HIF1A等11个与其他靶点相互作用较强,可能在网络中起到关键作用;通过GO分析和KEGG分析分别获得2595个条目和107条信号通路,其中包括磷脂酰肌醇-3-激酶丝氨酸/苏氨酸特异性蛋白激酶(phosphatidylinositol-3-kinase/protein kinase B,PI3K/Akt)信号通路、晚期糖基化终末产物—晚期糖基化终末产物受体信号通路、低氧诱导因子-1信号通路、细胞迁移的正调控、细胞因子活性、细胞因子受体结合、血小板α颗粒等。动物实验显示,在给药第4周及第8周后,中药组小鼠尿微量白蛋白排泄水平均较模型组下降(P<0.05)。对于PI3K/Akt信号通路的相关蛋白检测结果表明,中药组小鼠肾脏PI3K、p-Akt表达水平较模型组明显下降(P<0.05),磷酸酶张力蛋白同源物(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten, PTEN)水平较模型组升高(P<0.05)。结论 人参—黄连—三七药串能够有效改善db/db小鼠糖尿病肾病引起的蛋白尿,其作用机制可能与激活PTEN抑制PI3K/Akt信号通路有关。
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