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毒热平注射液对流感病毒性肺炎小鼠肺组织MMP-9及TIMP-1含量的影响

中国中西医结合杂志 2011年第11期31卷 1510-1513页

作者：祁广见顾立刚彭桂英殷胜骏范新生北京中医药大学中医药抗病毒教育部重点实验室北京100029

目的观察毒热平注射液对流感病毒性肺炎小鼠肺组织中基质金属蛋白酶9(matrix metallopro-teinase-9,MMP-9)及基质金属蛋白酶抑制物1(tissue inhibitor of matrix metalloproteinase-1,TIMP-1)的影响。方法 66只ICR小鼠随机分为正常组、模型组、毒热平低剂量组(0.435mg/d)、中剂量组(0.870mg/d)、高剂量组(1.740mg/d)和利巴韦林对照组(对照组,2.500mg/d),每组11只。以经鼻吸入流感病毒亚洲甲型鼠肺适应株(FM1)复制小鼠流感病毒性肺炎模型。感染后当日开始腹腔注射给药,0.3mL/次,1次/天。5天后处死小鼠,计算肺指数;制作切片,光镜观察肺组织病理形态变化;采用ELISA双抗体夹心法测定肺组织匀浆液中MMP-9及TIMP-1含量。结果与正常组比较,模型组小鼠肺组织出现明显炎性病变,其肺指数、肺组织MMP-9及MMP-9/TIMP-1显著升高(P<0.01),而TIMP-1含量变化不明显(P>0.05);与模型组比较,毒热平低、中剂量组和对照组MMP-9降低(P<0.01),各剂量组和对照组TIMP-1升高(P<0.01),MMP-9/TIMP-1降低(P<0.01)。结论毒热平注射液可通过降低流感病毒性肺炎小鼠肺组织中MMP-9含量,提高TIMP-1含量,调节两者比值,从而减轻肺组织炎性损伤。

关键词：毒热平注射液流感病毒基质金属蛋白酶-2,9 基质金属蛋白酶抑制物

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清热解毒中药对流感病毒感染细胞NF-κB转录活性及TNF-α mRNA水平的影响

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北京中医药大学学报 2009年第12期32卷 822-825,829,I0008页

作者：牛旭艳顾立刚张春晶王甫北京中医药大学中医药抗病毒教育部重点实验室北京100029

目的观察清热解毒中药毒热平、痰热清注射液对流感病毒亚甲型鼠肺适应株(FM1)感染人胚肾上皮细胞株HEK-293T细胞中报告基因NF-κB相对转录活性以及靶基因肿瘤坏死因子(TNF-α)mRNA的影响,探讨清热解毒中药抗流感病毒FM1的作用机制。方... 详细信息

目的观察清热解毒中药毒热平、痰热清注射液对流感病毒亚甲型鼠肺适应株(FM1)感染人胚肾上皮细胞株HEK-293T细胞中报告基因NF-κB相对转录活性以及靶基因肿瘤坏死因子(TNF-α)mRNA的影响,探讨清热解毒中药抗流感病毒FM1的作用机制。方法采用四唑盐(MTT)比色法体外检测毒热平、痰热清及利巴韦林注射液对HEK-293T细胞增殖的影响。FM1感染HEK-293T细胞后,利用双荧光素酶顺式报告系统,以利巴韦林对照,检测不同药物组中报告基因NF-κB-Luc相对荧光素酶活性;RT-PCR方法检测各组细胞中TNF-αmRNA水平。结果MTT结果显示,毒热平、痰热清、利巴韦林各药物组不影响细胞正常增殖(P>0.05)。报告基因结果显示,与细胞对照组相比,流感病毒FM1组细胞NF-κB转录活性显著增高(P<0.01),与FM1病毒组相比,毒热平1、10、100 mg/L,痰热清1/300、1/200、1/100倍稀释药液,利巴韦林50 mg/L均可不同程度下调NF-κB的转录活性(P<0.01)。RT-PCR结果显示,与细胞对照组比较,FM1病毒组的TNF-αmRNA表达明显增高(P<0.05),各药物组与FM1病毒组相比,TNF-αmRNA表达量明显降低(P<0.01)。结论毒热平、痰热清治疗流感病毒的作用机制之一,可能是通过下调转录因子NF-κB的转录活性,从而影响下游靶基因TNF-α的表达,减少肺损伤和相应炎症反应。

关键词：流感病毒清热解毒中药转录因子NF-κB 肿瘤坏死因子双荧光素酶顺式报告系统

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毒热平注射液抗甲型流感病毒的作用研究

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北京中医药大学学报 2007年第10期30卷 684-687页

作者：张艳丽顾立刚范新生李澎涛北京中医药大学中医药抗病毒教育部重点实验室北京100029

目的观察毒热平注射液体内、外抗病毒作用。方法采用结晶紫染色法观察毒热平注射液不同加药方式对流感病毒亚甲型鼠肺适应株(FM1)的体外抑制作用及其时效关系;观察毒热平注射液对小鼠流感病毒性肺炎的抑制作用。结果毒热平注射液能明显... 详细信息

目的观察毒热平注射液体内、外抗病毒作用。方法采用结晶紫染色法观察毒热平注射液不同加药方式对流感病毒亚甲型鼠肺适应株(FM1)的体外抑制作用及其时效关系;观察毒热平注射液对小鼠流感病毒性肺炎的抑制作用。结果毒热平注射液能明显阻止病毒吸附于细胞,并抑制细胞内病毒的复制增殖,在浓度≥0.18 g/L时有直接杀病毒作用。抗病毒效率在48 h达高峰,且随时间延长在浓度≥0.27 g/L时基本不变,而在低浓度时有下降趋势。毒热平注射液对小鼠流感病毒性肺炎有抑制作用。结论毒热平注射液具有明显的体外和体内抗流感病毒作用。

关键词：毒热平注射液流感病毒抗病毒体内体外

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毒热平注射液体外对小鼠T细胞功能及杀伤FM1感染靶细胞功能的影响

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中国中西医结合杂志 2010年第7期30卷 729-732页

作者：景姗顾立刚周芸李澎涛北京东直门医院消化内科北京100700 北京中医药大学中医药抗病毒教育部重点实验室

目的观察毒热平注射液体外对小鼠T细胞功能及杀伤流感病毒亚甲型鼠肺适应株(FM1)感染靶细胞的影响。方法用MTT法及双抗体夹心ELISA法检测毒热平注射液低、中、高(2.1、8.5、17.0μg/mL)剂量对正常小鼠、感染流感病毒亚甲型鼠肺适应株(F... 详细信息

目的观察毒热平注射液体外对小鼠T细胞功能及杀伤流感病毒亚甲型鼠肺适应株(FM1)感染靶细胞的影响。方法用MTT法及双抗体夹心ELISA法检测毒热平注射液低、中、高(2.1、8.5、17.0μg/mL)剂量对正常小鼠、感染流感病毒亚甲型鼠肺适应株(FM1)的脾细胞数目、产生干扰素-γ(IFN-γ)、白介素-10(IL-10)、及T细胞杀伤FM1感染巨噬细胞Ana-1功能的影响。结果毒热平注射液体外能抑制刀豆蛋白A(Con A)诱导的正常小鼠脾细胞的增殖,抑制Th2型细胞因子IL-10的产生,促进Th1型细胞因子IFN-γ的产生;能保护FM1感染的小鼠脾细胞,并抑制其产生Th2型细胞因子IL-10,而使Th1型细胞因子IFN-γ水平保持在一定的范围内;还能直接增强T细胞对FM1感染的靶细胞(Ana-1)的杀伤能力(P<0.05,P<0.01)。结论毒热平注射液体外作用于小鼠T细胞,可增强有利于抗FM1感染的免疫应答。

关键词：毒热平注射液流感病毒亚甲型鼠肺适应株(FM1) T细胞体外实验

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黄芩苷对FM1肺炎小鼠肺组织细胞凋亡FAS/FAS-L系统的影响

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中国药理学通报 2011年第11期27卷 1555-1559页

作者：万巧凤顾立刚殷胜骏葛东宇李根茂北京中医药大学中医药抗病毒教育部重点实验室北京100029 宁夏医科大学宁夏银川750004

目的研究黄芩苷对FM1肺炎小鼠肺组织细胞凋亡FAS/FAS-L系统的影响,探索黄芩苷抗流感病毒感染机制。方法制备小鼠甲型流感病毒性肺炎模型,通过死亡保护实验确定黄芩苷的最小有效浓度,TUNEL法观察小鼠肺组织细胞凋亡情况,RT-PCR技术检测... 详细信息

目的研究黄芩苷对FM1肺炎小鼠肺组织细胞凋亡FAS/FAS-L系统的影响,探索黄芩苷抗流感病毒感染机制。方法制备小鼠甲型流感病毒性肺炎模型,通过死亡保护实验确定黄芩苷的最小有效浓度,TUNEL法观察小鼠肺组织细胞凋亡情况,RT-PCR技术检测肺组织FAS(CD95)、FAS-L(CD178)、Caspase-3 mRNA表达,Western blot方法测定肺组织FAS、FAS-L、Caspase-3蛋白表达。结果与模型组相比,黄芩苷187.5、375 ***-1剂量均能明显降低肺组织细胞凋亡率,明显降低肺组织FAS、FAS-L及Caspase-3 mRNA和蛋白的表达(P<0.05)。结论黄芩苷能够明显抑制FM1肺炎小鼠肺组织细胞的凋亡,其可能通过影响细胞凋亡受体途径FAS/FAS-L系统而发挥抗流感病毒感染作用。

关键词：黄芩苷甲型流感病毒FM1 凋亡 TUNEL FAS FAS-L Caspase-3

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黄芩苷对FM1肺炎小鼠肺损伤的作用机制研究

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中国药理学通报 2012年第2期28卷 208-212页

作者：万巧凤顾立刚殷胜骏吴珺邱泽计北京中医药大学中医药抗病毒教育部重点实验室北京100029 宁夏医科大学宁夏银川750004

目的研究黄芩苷对甲型流感病毒性肺炎小鼠肺组织炎性损伤的作用机制。方法将96只ICR鼠随机分为正常对照组、模型组、利巴韦林组(100 ***-1),黄芩苷组(1 500、750、375 ***-1)[5],每组16只。用流感病毒亚甲型鼠肺适应株A/FM/1/47(H1N1)... 详细信息

目的研究黄芩苷对甲型流感病毒性肺炎小鼠肺组织炎性损伤的作用机制。方法将96只ICR鼠随机分为正常对照组、模型组、利巴韦林组(100 ***-1),黄芩苷组(1 500、750、375 ***-1)[5],每组16只。用流感病毒亚甲型鼠肺适应株A/FM/1/47(H1N1)感染小鼠,制备小鼠流感病毒性肺炎模型,用不同剂量黄芩苷溶液灌胃治疗后,观察肺组织H-E染色切片病理变化,采用RT-PCR测定肺组织c-jun、c-fos mRNA表达,采用Western blot测定肺组织c-jun、磷酸化c-jun蛋白表达,应用ELISA检测肺匀浆炎性细胞因子TNF-α、IL-1β的含量。结果黄芩苷750、375 ***-1剂量均能明显减轻肺组织炎性损伤;明显降低c-jun、c-fosmRNA的表达(P<0.05,P<0.01),明显降低c-jun、磷酸化c-jun蛋白表达(P<0.01);明显抑制TNF-α、IL-1β的分泌(P<0.01)。结论黄芩苷能够缓解甲型流感病毒诱导的炎性病理损伤,其可能通过抑制流感病毒感染引起的转录因子AP-1高表达而降低炎性细胞因子的分泌水平,从而发挥抗流感病毒感染的作用。

关键词：黄芩苷甲型流感病毒FM1 肺炎 c-jun c-fos RT-PCR Western blot

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毒热平注射液对甲型流感病毒H3N2体外感染细胞中TLR7信号通路的影响

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中华中医药杂志 2010年第2期25卷 194-197页

作者：牛旭艳张春晶顾立刚北京中医药大学中医药抗病毒教育部重点实验室北京100029

目的:观察甲型流感病毒H3N2感染人胚肾上皮细胞(HEK-293T)细胞及人肺腺癌上皮细胞(A549)细胞后,对NF-κB转录活性以及TLR7、TNF-α、IL-8、IFN-βmRNA的影响,探讨H3N2对体外感染细胞中TLR7信号通路的影响及清热解毒中药毒热平注射液的... 详细信息

目的:观察甲型流感病毒H3N2感染人胚肾上皮细胞(HEK-293T)细胞及人肺腺癌上皮细胞(A549)细胞后,对NF-κB转录活性以及TLR7、TNF-α、IL-8、IFN-βmRNA的影响,探讨H3N2对体外感染细胞中TLR7信号通路的影响及清热解毒中药毒热平注射液的干预作用。方法:采用MTT法体外检测各组药物对293T、A549细胞增殖的影响;H3N2感染293T细胞后,利用双荧光素酶报告系统,以利巴韦林、清开灵注射液为药物对照,检测毒热平注射液各浓度组细胞中NF-κB相对荧光素酶活性;H3N2感染A549细胞后,RT-PCR方法检测各组细胞中TLR7、TNF-α、IL-8、IFN-βmRNA水平。结果:MTT结果显示,毒热平、利巴韦林、清开灵注射液各浓度不影响细胞正常增殖(P>0.05)。报告基因结果显示,与细胞对照组相比,H3N2感染组细胞NF-κB转录活性显著增高(P<0.01);与H3N2感染组相比,利巴韦林0.5μg/mL,清开灵1/128稀释组,毒热平1μg/mL,10μg/mL,100μg/mL组均可不同程度下调NF-κB的转录活性(P<0.01)。RT-PCR结果显示,与细胞对照组比较,H3N2病毒组的TLR7、TNF-α、IL-8、IFN-βmRNA表达明显增高(P<0.01);与H3N2感染组相比,一定浓度的药物组TLR7、TNF-α、IL-8、IFN-βmRNA表达量明显降低(P<0.05或P<0.01)。结论:流感病毒H3N2攻击细胞可以显著上调TLR7受体的表达和核因子NF-κB转录活性,并引起下游相关靶基因的表达增多。毒热平注射液可以下调H3N2引起的TLR7信号通路的激活,抑制NF-κB的转录活性,减少下游炎性因子TNF-α、IL-8、IFN-β的表达。关键词:H3N2;毒热平注射液;NF-κB;双荧光素酶报告系统;TLR7;

关键词： H3N2 毒热平注射液 NF—κB 双荧光素酶报告系统 TLR7 信号转导

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白首乌总苷与环磷酰胺合用对荷瘤小鼠免疫功能的影响

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北京中医药大学学报 2009年第3期32卷 167-169页

作者：曾郁敏邱泽计潘爱群顾立刚王玥琦北京中医药大学中医药抗病毒教育部重点实验室北京100029 唐山市工人医院

目的探讨白首乌总苷与环磷酰胺(CY)合用对荷瘤小鼠免疫功能的影响。方法选择小鼠H22肝癌、S180腹水瘤制备肿瘤模型;按计划给药10 d后,称重计算胸腺指数,MTT比色法检查脾脏T、B淋巴细胞的增殖能力。结果白首乌总苷单独使用无明显抗肿瘤作... 详细信息

目的探讨白首乌总苷与环磷酰胺(CY)合用对荷瘤小鼠免疫功能的影响。方法选择小鼠H22肝癌、S180腹水瘤制备肿瘤模型;按计划给药10 d后,称重计算胸腺指数,MTT比色法检查脾脏T、B淋巴细胞的增殖能力。结果白首乌总苷单独使用无明显抗肿瘤作用,但可增加荷瘤小鼠的胸腺指数(和模型组比较P<0.05)及T、B淋巴细胞的增殖能力(和模型组比较P<0.001)。白首乌总苷与CY联合使用,可明显增加CY治疗的荷H22小鼠胸腺指数(和CY组比较P<0.05)及T、B淋巴细胞增殖能力(和CY组比较P<0.001);可明显增加CY治疗的荷S180小鼠的体重及胸腺指数(和CY治疗组比较P<0.05),明显增强其B淋巴细胞增殖能力(和CY组比较P<0.01)。结论通过本实验证明白首乌总苷与常用化疗药CY合用可改善化疗后小鼠细胞免疫和体液免疫的功能,对常用化疗药有一定减毒作用。

关键词：白首乌总苷免疫功能环磷酰胺荷瘤小鼠

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黄芩苷在流感病毒致肺纤维化早期进展中的作用机制

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中国药理学通报 2013年第9期29卷 1303-1307页

作者：万巧凤顾立刚李根茂葛东宇宁夏医科大学病原生物学与免疫学系宁夏银川750004 北京中医药大学中医药抗病毒教育部重点实验室北京100029

目的探索黄芩苷在流感病毒感染致肺纤维化早期进展中的分子机制。方法制备甲型流感病毒性肺炎小鼠模型,用不同剂量黄芩苷溶液灌胃治疗后,观察肺指数、肺组织切片Masson染色观察纤维化程度;采用RT-PCR测定肺组织p38MARK mRNA表达,采用Wes... 详细信息

目的探索黄芩苷在流感病毒感染致肺纤维化早期进展中的分子机制。方法制备甲型流感病毒性肺炎小鼠模型,用不同剂量黄芩苷溶液灌胃治疗后,观察肺指数、肺组织切片Masson染色观察纤维化程度;采用RT-PCR测定肺组织p38MARK mRNA表达,采用Western-blot测定肺组织磷酸化p38MAPK,磷酸化NF-κB-p65及TGF-β1蛋白表达。结果黄芩苷187.5、375 mg·kg-1剂量均能明显抑制肺指数及肺组织纤维蛋白的分泌;明显降低肺组织p38MAPK mRNA和蛋白表达(P<0.01);明显抑制磷酸化NF-κB-p65及TGF-β1蛋白表达(P<0.05)。结论黄芩苷抗流感病毒感染作用可能与其在肺炎致肺纤维化早期抑制纤维蛋白形成相关。

关键词：黄芩苷甲型流感病毒肺炎纤维化 p38MARK NF-κB-p65 TGF-β1

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毒热平注射液对巨噬细胞TIR信号通路的影响

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中国中药杂志 2010年第6期35卷 741-744页

作者：张艳丽王宁萍顾立刚李澎涛宁夏医科大学病原生物学与免疫学教研室宁夏银川750004 北京中医药大学中医药抗病毒教育部重点实验室北京100029

目的:研究毒热平注射液对流感病毒感染的小鼠腹腔巨噬细胞株Ana-1细胞TIR(Toll/IL-1 receptors)信号传导通路的影响。方法:用100 TCID50流感病毒亚甲型鼠肺适应株A/FM/1/47(H1N1)感染小鼠腹腔巨噬细胞株Ana-1后换用10,1 mg.L-1含药维持... 详细信息

目的:研究毒热平注射液对流感病毒感染的小鼠腹腔巨噬细胞株Ana-1细胞TIR(Toll/IL-1 receptors)信号传导通路的影响。方法:用100 TCID50流感病毒亚甲型鼠肺适应株A/FM/1/47(H1N1)感染小鼠腹腔巨噬细胞株Ana-1后换用10,1 mg.L-1含药维持液继续培养,分别于12,24 h弃细胞上清液并收集细胞,提取巨噬细胞RNA,进行实时定量PCR反应(RT-PCR),动态测定毒热平注射液对病毒感染前后巨噬细胞TIR信号传导通路中各信号蛋白:Toll样受体7(TLR7)、髓样分化因子88(MyD88),IL-1受体相关激酶4(IRAK4)、肿瘤坏死因子相关激酶6(TRAF6)和核因子κB(NF-κB)mRNA表达水平的影响。结果:毒热平注射液可剂量依赖性地下调病毒感染巨噬细胞TLR7,MyD88,IRAK4,TRAF6,NF-κB mRNA的表达水平。结论:毒热平注射液能通过调节TIR信号传导通路各信号蛋白的活性发挥抗病毒感染作用。

关键词： Ana一1 毒热平注射液流感病毒 TIR TLR7

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