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中国免疫学杂志 2009年第11期25卷 991-995页

作者：张春晶顾立刚牛旭艳王甫彭桂英北京中医药大学中医药防治病毒性疾病教育部重点实验室北京100029 齐齐哈尔医学院生化教研室齐齐哈尔161006

目的:观察人参皂苷Rg1对H2O2诱导HEK293T细胞损伤过程中NF-κB转录活性的影响,探讨人参皂苷Rg1的抗氧化机制。方法:H2O2模拟氧化应激条件,MTT法和台盼蓝染色法检测人参皂苷Rg1对细胞生长的影响;以DCFH-DA为探针流式细胞仪检测细胞内ROS... 详细信息

目的:观察人参皂苷Rg1对H2O2诱导HEK293T细胞损伤过程中NF-κB转录活性的影响,探讨人参皂苷Rg1的抗氧化机制。方法:H2O2模拟氧化应激条件,MTT法和台盼蓝染色法检测人参皂苷Rg1对细胞生长的影响;以DCFH-DA为探针流式细胞仪检测细胞内ROS水平;利用双荧光素酶顺式报告系统,检测人参皂苷Rg1对荧光素酶报告基因NF-κB-Luc相对荧光素酶值的影响,以检测人参皂苷Rg1是否具有下调H2O2诱导的NF-κB转录激活的作用。结果:H2O2诱导损伤的293T细胞存活率随H2O2浓度的增高而下降,相同H2O2浓度下,人参皂苷Rg1预保护组细胞存活率较损伤组显著提高(P<0.05);H2O2处理后细胞内自由基明显增加,其荧光强度增加了40%～50%,而给予有效浓度的人参皂苷Rg1后,荧光强度降低35%～40%;与正常对照组比较,H2O2模拟氧化应激条件下,HEK293T细胞中NF-κB荧光素酶报告活性明显升高(P<0.05),而在人参皂苷Rg1预保护组则明显受到抑制(P<0.05)。结论:人参皂苷Rg1对H2O2所致的细胞氧化应激损伤具有明显的保护作用,其可能机制是有效地清除了细胞内过多的自由基,下调了转录因子NF-κB的转录活性,继而抑制了NF-κB通路的激活。

关键词：人参皂苷Rg1 氧化应激 NF-κB 双荧光素酶报告系统

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白蛋白介导的siRNA药物递送系统研究进展

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国际药学研究杂志 2019年第11期46卷 805-812页

作者：龚莉鲁丹丹杨静朱庆均山东中医药大学济南250355 军事科学院军事医学研究院辐射医学研究所北京100850 教育部中医药经典理论研究重点实验室济南250355 山东省高校中医药抗病毒协同创新中心济南250355

小干扰RNA(siRNA)药物是核酸药物的一种,因其特异性强而备受关注,此类药物应用前景广泛,尤其在抗肿瘤领域具有巨大潜力。但由于其本质属于核酸药物,具有核酸药物在应用中的局限性:生物学稳定性差、易被体内的核酸酶降解,导致其生物利用... 详细信息

小干扰RNA(siRNA)药物是核酸药物的一种,因其特异性强而备受关注,此类药物应用前景广泛,尤其在抗肿瘤领域具有巨大潜力。但由于其本质属于核酸药物,具有核酸药物在应用中的局限性:生物学稳定性差、易被体内的核酸酶降解,导致其生物利用度差,限制了其发展。因此,有许多研究致力于开发siRNA药物体内递送系统,其中白蛋白作为人体血浆中含量最丰富的蛋白质受到广泛关注。白蛋白无免疫原性、循环半衰期长、易与各种药物结合且能在实体瘤中积聚,这些特性使其有望成为siRNA药物的有效递送载体。本文对siRNA药物的研究现状以及血清白蛋白作为siRNA药物递送载体的研究进展进行了回顾和综述。

关键词：血清白蛋白小干扰RNA(siRNA) 药物递送系统

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贯黄感冒颗粒抗甲型流感病毒的作用

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中华中医药杂志 2011年第4期26卷 663-666页

作者：贾翎张志远曾郁敏吴珺顾立刚吴莹邱泽计祈广见葛东宇北京中医药大学中医药防治病毒性疾病教育部重点实验室北京100029 海南医学院药学院海口571101

目的:观察贯黄感冒颗粒体内、外抗甲型流感病毒的作用。方法:体外观察贯黄感冒颗粒对甲型流感病毒H1N1和H3N2致细胞病变作用的影响,体内观察其对甲型流感病毒FM1感染小鼠的保护作用。结果:贯黄感冒颗粒体外对所试两株病毒所致的细胞病... 详细信息

目的:观察贯黄感冒颗粒体内、外抗甲型流感病毒的作用。方法:体外观察贯黄感冒颗粒对甲型流感病毒H1N1和H3N2致细胞病变作用的影响,体内观察其对甲型流感病毒FM1感染小鼠的保护作用。结果:贯黄感冒颗粒体外对所试两株病毒所致的细胞病变均显示抑制作用,对H1N1的IC50为1.38mg/mL,TI为5.66;对H3N2的IC50为0.69mg/mL,TI为11.31。体内实验结果显示贯黄感冒颗粒中剂量组可降低甲型流感病毒FM1感染所致小鼠的死亡率,延长平均生存时间。结论:贯黄感冒颗粒体内外均有抗甲型流感病毒的作用。

关键词：贯黄感冒颗粒流感病毒抗病毒体内体外

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黄芩苷对流感病毒性肺炎小鼠肺组织TLR3/TRIF信号通路的作用

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时珍国医国药 2014年第10期25卷 2354-2356页

作者：王丽黄菱李燕兵顾立刚万巧凤宁夏医科大学基础医学院宁夏银川750004 北京中医药大学中医药抗病毒教育部重点实验室北京100029 宁夏医学科学研究所宁夏银川750004

目的探讨黄芩苷是否通过TLR3/TRIF信号传导途径对甲型流感病毒诱导的肺损伤的调节作用。方法用流感病毒亚甲型鼠肺适应株A/FM/1/47(H1N1)复制流感病毒性肺炎小鼠模型,通过不同剂量黄芩苷溶液灌胃治疗后,采用实时荧光定量PCR技术测定TLR7... 详细信息

目的探讨黄芩苷是否通过TLR3/TRIF信号传导途径对甲型流感病毒诱导的肺损伤的调节作用。方法用流感病毒亚甲型鼠肺适应株A/FM/1/47(H1N1)复制流感病毒性肺炎小鼠模型,通过不同剂量黄芩苷溶液灌胃治疗后,采用实时荧光定量PCR技术测定TLR7/TRIF mRNA表达,采用Western blot方法测定肺组织磷酸化NF-κB-65蛋白表达,应用ELISA法检测肺匀浆炎性细胞因子TNF-α及IFN-β的含量。结果甲型流感病毒感染机体后,TLR3及TRIF mRNA表达水平显著升高;磷酸化NF-κB-65蛋白表达水平也显著升高;肺匀浆TNF-α、IFN-β分泌显著升高。经黄芩苷治疗后,黄芩苷750 mg/kg、375mg/kg剂量均能够有效下调TLR3及TRIF mRNA表达(P<0.01);降低磷酸化NF-κB-65蛋白表达(P<0.01);降低TNF-α的分泌(P<0.01)、增强IFN-β的合成(P<0.01)。结论黄芩苷可通过调节TLR3/TRIF介导的磷酸化NF-κB的活性而减轻肺组织炎性病理损伤及增强机体的抗病毒能力。

关键词：黄芩苷流感病毒肺组织 TLR3 TRIF NF-κB

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黄芩苷干预甲型H1N1流感病毒感染诱导的A549细胞周期分布及凋亡

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病毒学报 2011年第2期27卷 108-116页

作者：张春晶顾立刚于海涛齐齐哈尔医学院生物化学与分子生物学生物遗传教研室齐齐哈尔市161042 北京中医药大学中医药防治病毒性疾病教育部重点实验室北京100029

以甲型H1N1流感病毒作为刺激因素,在人肺腺癌A549细胞培养内采用MTT比色法和细胞病变（CPE）法观察黄芩苷不同作用时间的抗病毒效率;以碘化丙啶（Propidium iodide,PI）单染流式细胞仪分析细胞周期中各时期的细胞百分数和对细胞增殖的影... 详细信息

以甲型H1N1流感病毒作为刺激因素,在人肺腺癌A549细胞培养内采用MTT比色法和细胞病变（CPE）法观察黄芩苷不同作用时间的抗病毒效率;以碘化丙啶（Propidium iodide,PI）单染流式细胞仪分析细胞周期中各时期的细胞百分数和对细胞增殖的影响,以Hoechst33258染色荧光显微镜观察细胞凋亡的形态学变化,并采用免疫荧光实验测定膜受体通路Caspase 8和线粒体通路Caspase 9及作为细胞凋亡标志的Caspase 3的活性。结果显示：流感病毒感染36h后宿主细胞周期阻滞于S期（P〈0.05）,并在G0期细胞峰前出现一个亚二倍体细胞峰（凋亡细胞峰）。A549细胞中Caspase 8/3活性明显升高,但标记Caspase 9活性的荧光亮度增强不明显。黄芩苷对甲型流感病毒感染诱导的细胞损伤有较好的保护作用,最大剂量的黄芩苷100μg/mL无毒,可抑制病毒细胞病变的产生,50100μg/mL治疗组可明显调节流感病毒感染诱导的细胞周期分布（P〈0.05）,细胞凋亡现象明显减少,100μg/mL黄芩苷治疗组Caspase 8/3活性显著降低,接近正常对照组细胞水平,有剂量依赖性。实验说明：黄芩苷可拮抗甲型流感病毒H1N1细胞病变,调控细胞周期分布,并通过抑制Caspase 8的激活,进一步抑制Caspase 3活性,从而发挥抗病毒作用。

关键词：黄芩苷甲型流感病毒细胞增殖细胞凋亡

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人参皂苷Rg1和Rb1对流感病毒感染细胞的影响及其机制研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2009年第10期29卷 894-898页

作者：张春晶顾立刚牛旭艳王甫彭桂英北京中医药大学基础医学院中西医结合基础中医药防治病毒性疾病教育部重点实验室 100029 齐齐哈尔医学院生化与分子生物学教研室

目的研究人参皂苷Rg1和Rb1对流感病毒感染所致的细胞氧化应激损伤、细胞内转录因子（NF—KB和AP—1）转录活性及前炎症细胞因子IL-8释放的影响。方法甲型流感病毒H3N2作为刺激因素，以DCFH—DA为探针，流式细胞仪检测细胞内活性氧（iRO... 详细信息

目的研究人参皂苷Rg1和Rb1对流感病毒感染所致的细胞氧化应激损伤、细胞内转录因子（NF—KB和AP—1）转录活性及前炎症细胞因子IL-8释放的影响。方法甲型流感病毒H3N2作为刺激因素，以DCFH—DA为探针，流式细胞仪检测细胞内活性氧（iROS）产生水平。利用双荧光素酶顺式报告系统，榆测人参皂苷Rg1和Rb1对NF—κB—luc及AP-1-luc相对荧光素酶值的影响。RT—PCR法进一步验证人参皂苷Rg1和Rb1对TL-8mRNA表达水平的影响。结果病毒感染后细胞中ROS产生增加45％～55％，而给予有效浓度人参皂苷Rg1和Rb1后，荧光强度降低，与正常细胞内自由基含量基本相同。通过NF-κB及AP-1双荧光素酶报告系统检测发现，与正常对照组比较，病毒感染的细胞中NF—κB及AP-1荧光素酶报告活性明显升高；与病毒损伤组比较，人参皂苷Rg1、Rb1治疗组NF—κB及AP—1荧光素酶报告活性明显受到抑制。RT—PCR结果显示人参皂苷Rg1和Rh1能明显抑制病毒诱导的1L-8mRNA表达水平的变化，使之趋近于正常对照组水平。结论人参皂苷Rg1和Rb1可拈抗病毒感染细胞中ROS产生水平、降低氧化应激敏感的信号传导通路Nn-κB及AP-1的转录活性，并抑制二者下游靶基因IL-8表达。

关键词：人参皂苷Rg1和Rb1 甲型H3N2流感病毒氧化应激核因子-κB 激活蛋白-1

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犀角地黄汤合银翘散含药血清抑制流感病毒感染大鼠肺泡巨噬细胞致炎物质的研究

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中华中医药杂志 2010年第12期25卷 1974-1978页

作者：吴莹金叶智孟建吴珺于雪飞郝钰北京中医药大学中医药防治病毒性疾病教育部重点实验室北京100029 北京市王府中西医结合医院北京102209

目的:研究犀角地黄汤合银翘散含药血清对甲型流感病毒鼠肺适应株(FM1)感染大鼠肺泡巨噬细胞(NR8383)后产生的致炎物质的影响。方法:运用中药血清药理学的方法制备等效剂量(13.8g/kg)的大鼠犀角地黄汤合银翘散含药血清。FM1感染NR8383细... 详细信息

目的:研究犀角地黄汤合银翘散含药血清对甲型流感病毒鼠肺适应株(FM1)感染大鼠肺泡巨噬细胞(NR8383)后产生的致炎物质的影响。方法:运用中药血清药理学的方法制备等效剂量(13.8g/kg)的大鼠犀角地黄汤合银翘散含药血清。FM1感染NR8383细胞1h后,加入15%的犀角地黄汤合银翘散含药血清,同时设正常细胞和病毒对照组。药物作用后6、12、24h,ELISA检测细胞上清中炎症细胞因子TNF-α、MCP-1的含量,放免法检测细胞上清中炎性介质PGE2、PLA2、LTB4的含量;药物作用后8、24、36、48h,生化法检测细胞内自由基NO、iNOS含量;药物作用后24h,RealtimePCR检测细胞内TNF-α、MCP-1的mRNA水平。结果:犀角地黄汤合银翘散含药血清抑制了FM1感染NR8383细胞后TNF-α、MCP-1的转录和表达(P<0.05),抑制了NO、iNOS的产生(P<0.05),降低了PGE2、PLA2、LTB4、MDA的含量(P<0.05)。结论:犀角地黄汤合银翘散含药血清明显抑制了流感病毒感染后肺泡巨噬细胞内炎性细胞因子、炎性介质及自由基的产生,具有抗炎作用。

关键词：犀角地黄汤合银翘散含药血清流感病毒肺泡巨噬细胞致炎物质

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槲皮素对甲型H1N1流感病毒诱导的A549细胞凋亡效应酶Caspase-3的影响

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中国中医药信息杂志 2011年第10期18卷 42-44页

作者：万巧凤吴莉杨美玲马锐梁军顾立刚宁夏医科大学宁夏银川750004 北京中医药大学中医药抗病毒教育部重点实验室北京100029

目的观察银杏叶主要活性成分槲皮素对甲型H1N1流感病毒感染的人肺上皮瘤细胞A549凋亡效应酶Caspase-3的影响。方法采用MTT法测定H1N1毒力、槲皮素细胞毒性作用、槲皮素对H1N1致A549细胞病变的抑制作用。然后用100 TCID50甲型H1N1感染A54... 详细信息

目的观察银杏叶主要活性成分槲皮素对甲型H1N1流感病毒感染的人肺上皮瘤细胞A549凋亡效应酶Caspase-3的影响。方法采用MTT法测定H1N1毒力、槲皮素细胞毒性作用、槲皮素对H1N1致A549细胞病变的抑制作用。然后用100 TCID50甲型H1N1感染A549 2 h后换用含10 mg/L槲皮素维持液继续培养,于感染后4、12、24、48 h收集细胞,提取细胞总蛋白,采用Western blot方法,应用Image-Pro Plus测定Caspase-3与β-actin灰度值,两者灰度比值为Caspase-3的相对表达量。结果甲型H1N1 A549的TCID50为10-4.75,槲皮素A549的最大无毒浓度为40 mg/L,槲皮素抑制甲型H1N1致A549细胞病变的最小有效浓度为10 mg/L。在甲型H1N1感染A549细胞后4～48 h内,槲皮素可显著抑制Caspase-3蛋白表达,具有明显的抗凋亡作用。结论槲皮素可通过抑制Caspase-3含量或活性而发挥抗病毒感染作用。

关键词：银杏槲皮素甲型H1N1流感病毒 A549细胞 Caspase-3

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二甲双胍对2型糖尿病伴非酒精性脂肪肝大鼠的治疗作用研究

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广西医学 2015年第3期37卷 292-295页

作者：李忻顾立刚赵婷婷张韫杨鑫张浩军严美花董晞赵海玲文玉敏李平北京中医药大学抗病毒教育部重点实验室北京市100029 中日友好医院北京市100029

目的观察二甲双胍对2型糖尿病(T2DM)伴非酒精性脂肪肝(NAFLD)大鼠肝功能及肝组织病理形态学的影响,并探讨其可能的作用机制。方法按随机数字表法将36只Wistar大鼠分成正常组(12只)和造模组(24只),采用小剂量链脲佐菌素腹腔注射加高脂饲... 详细信息

目的观察二甲双胍对2型糖尿病(T2DM)伴非酒精性脂肪肝(NAFLD)大鼠肝功能及肝组织病理形态学的影响,并探讨其可能的作用机制。方法按随机数字表法将36只Wistar大鼠分成正常组(12只)和造模组(24只),采用小剂量链脲佐菌素腹腔注射加高脂饲料喂养建立T2DM伴NAFLD模型。将造模成功的大鼠随机分为单纯模型组(14只)和二甲双胍组(10只),比较各组大鼠血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(CHO)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平,肝组织TG、CHO、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、一氧化氮(NO)和一氧化氮合酶(NOS)水平。结果与正常对照组比较,单纯模型组血清ALT、AST、TG、CHO、LDL-C水平均显著升高(P<0.05);肝组织TG、CHO、NO、NOS水平显著升高(P<0.05),SOD及CAT水平降低(P<0.05)。与单纯模型组比较,二甲双胍组血清ALT、AST、TG、CHO、LDL-C水平均显著降低(P<0.05),肝组织TG、CHO、NO、NOS水平显著降低(P<0.05);SOD及CAT水平升高(P<0.05)。结论二甲双胍治疗可显著改善T2DM伴NAFLD大鼠的脂肪肝,其机制可能与二甲双胍改善肝脏组织应激有关。

关键词： 2型糖尿病非酒精性脂肪肝二甲双胍氧化应激

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黄芩苷对甲型流感病毒感染的肺组织病理改善及其作用机制

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时珍国医国药 2015年第1期26卷 251-254页

作者：王富科万巧凤顾立刚葛东宇李根茂宁夏医科大学高等卫生职业技术学院宁夏银川750000 宁夏医科大学基础医学院宁夏银川750004 北京中医药大学中医药抗病毒教育部重点实验室北京100029

目的研究黄芩苷对流感病毒感染小鼠早期肺组织病理的影响,探讨黄芩苷对流感病毒致肺损伤的保护分子机制。方法用流感病毒亚甲型鼠肺适应株A/FM/1/47(H1N1)感染小鼠,建立小鼠流感病毒性肺炎的生物模型,用不同剂量黄芩苷溶液灌胃治疗后,... 详细信息

目的研究黄芩苷对流感病毒感染小鼠早期肺组织病理的影响,探讨黄芩苷对流感病毒致肺损伤的保护分子机制。方法用流感病毒亚甲型鼠肺适应株A/FM/1/47(H1N1)感染小鼠,建立小鼠流感病毒性肺炎的生物模型,用不同剂量黄芩苷溶液灌胃治疗后,制作小鼠肺组织切片观察HE及改良Masson染色后病理变化,采用实时荧光定量PCR测定肺组织TGF-β1、MMP-9 mRNA表达量;采用Westen blot方法测定肺组织TGF-β1、MMP-9蛋白表达量。结果黄芩苷中、小剂量组均能明显减轻肺组织病变,明显抑制肺组织纤维蛋白的分泌,显著下调肺组织TGF-β1、MMP-9 mRNA及蛋白表达。结论黄芩苷可减轻流感病毒感染致小鼠肺组织的损伤,可能与其抑制TGF-β1、MMP-9基因及蛋白表达相关。

关键词：黄芩苷流感病毒肺组织 TGF-β1 MMP-9

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