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中国药物警戒 2023年第7期20卷 742-748页

作者：陈林珍王璇张晓朦马志强陆珊吴嘉瑞赵崇军张冰北京中医药大学中药品质评价北京市重点实验室北京102488 北京中医药大学中药学院北京102488

目的基于斑马鱼模型初步探讨杠柳毒苷的毒性靶器官和潜在作用机制。方法将斑马鱼(4dayspostfertilization,4 dpf)暴露于不同浓度(低浓度1μg·mL^(-1),高浓度1.5μg·mL^(-1))的杠柳毒苷溶液中24 h,统计杠柳毒苷对斑马鱼的致死... 详细信息

目的基于斑马鱼模型初步探讨杠柳毒苷的毒性靶器官和潜在作用机制。方法将斑马鱼(4dayspostfertilization,4 dpf)暴露于不同浓度(低浓度1μg·mL^(-1),高浓度1.5μg·mL^(-1))的杠柳毒苷溶液中24 h,统计杠柳毒苷对斑马鱼的致死率;10%致死剂量下(评价杠柳毒苷的肝毒性;通过网络药理学与分子对接技术预测杠柳毒苷肝毒性潜在作用机制,并通过实时荧光定量PCR(real-time PCR,RT-PCR)对预测靶点进行验证。结果杠柳毒苷对斑马鱼的亚致死浓度(LC10)为1.6126μg·mL^(-1),亚致死浓度暴露条件下,与空白组相比,杠柳毒苷能够引起斑马鱼肝脏面积减小和明显的肝脏细胞凋亡,组织病理切片结果显示杠柳毒苷能够诱导肝细胞出现结构排列松散紊乱以及明显空泡化等病理特征。此外,杠柳毒苷能够显著升高斑马鱼ALT、AST活性,证明杠柳毒苷对斑马鱼模型有显著的肝毒性;网络药理学结果表明杠柳毒苷诱导肝毒性与21个潜在作用靶点相关,PPI蛋白互作网络分析排名前5位的靶点为信号转导与转录激活因子3(STAT3)、热休克蛋白(HSP)90AA1、缺氧诱导因子1A(HIF1A)、一氧化氮合酶3(NOS3)、雷帕霉素靶蛋白(MTOR),KEGG结果显示杠柳毒苷肝毒性可能与缺氧诱导因子-1(HIF-1)信号通路、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路、钙(Calcium)信号通路等信号通路相关,RT-PCR进一步验证以上预测结果。结论杠柳毒苷可能是通过影响HIF-1信号通路与PI3K-Akt信号通路,进而引发肝毒性。

关键词：杠柳毒苷肝毒性斑马鱼作用机制

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复方苦参注射液抗肿瘤、镇痛活性评价及机制研究

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中国中药杂志 2022年第10期47卷 2712-2720页

作者：范琦琦折改梅魏静李芝奇陈美琳董英于啊香李建伟秦文杰王伟林瑞超赵崇军游蓉丽北京中医药大学中药学院中药品质评价北京市重点实验室北京102488 北京振东光明药物研究院有限公司北京100085

该研究基于体内斑马鱼模型评价复方苦参注射液(compound kushen injection,CKI)抗肿瘤及镇痛活性,并探究其抗肿瘤的作用机制。通过斑马鱼卵黄囊显微注射LPC H12肝癌细胞建立斑马鱼肿瘤异种移植模型,实验过程中设置复方苦参注射液高(H-C... 详细信息

该研究基于体内斑马鱼模型评价复方苦参注射液(compound kushen injection,CKI)抗肿瘤及镇痛活性,并探究其抗肿瘤的作用机制。通过斑马鱼卵黄囊显微注射LPC H12肝癌细胞建立斑马鱼肿瘤异种移植模型,实验过程中设置复方苦参注射液高(H-CKI)、中(M-CKI)、低(L-CKI)剂量组和模型组,给药72 h后以肿瘤面积增长倍数、积分吸光度(integrated absorbance,IA)增长倍数为指标评价CKI对肿瘤的抑制作用;分别以冰乙酸(acetic acid,AA)和佛波酯(phorbol myristate acetate,PMA)建立斑马鱼外周疼痛和中枢疼痛模型,利用行为轨迹分析系统监测斑马鱼行为运动轨迹,以运动次数、运动时间、运动距离、运动速度等运动状态为指标评价CKI的镇痛活性;最后,通过实时定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerasechain reaction,RT-qPCR)检测B淋巴细胞瘤-2基因(B lymphocyte tumor-2,Bcl-2)与磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol-3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,Akt或PKB)通路相关基因的表达,验证抗肿瘤作用机制。与模型组相比,M-CKI组和H-CKI组肿瘤面积及积分吸光度的增长倍数显著降低,对外周疼痛和中枢疼痛具有明显的缓解作用,机制研究发现CKI能够上调半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3,Casp3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9(caspase-9,Casp9)表达,下调PI3K、Akt表达,且Bcl-2、缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor 1α,HIF-1α)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达水平显著降低。综上,CKI具有显著的抑制肿瘤生长及镇痛的功效,其机制与PI3K/Akt信号通路有关,该通路介导细胞凋亡,抑制肿瘤生长,缓解肿瘤疼痛。

关键词：复方苦参注射液活性机制抗肿瘤镇痛 RT-qPCR

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基于功能导向-算法集成的西洋参双功能保健食品组方规律和设计研究

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中草药 2022年第11期53卷 3415-3424页

作者：宋若兰马嘉慕郭海峰于爽姚鉴玲董英钟祥健单东杰吕芳折改梅北京中医药大学中药学院北京100029 中药品质评价北京市重点实验室北京100029 中国营养保健食品协会北京100028

目的基于西洋参“保健食品原料”与“中药材”的双重身份,以功能为导向,融合算法分析,实现西洋参保健食品组方规律挖掘与组方设计研究。方法依据功能导向-算法集成,收集西洋参保健食品数据与临床应用数据,借助BDP平台、自然语言处理与... 详细信息

目的基于西洋参“保健食品原料”与“中药材”的双重身份,以功能为导向,融合算法分析,实现西洋参保健食品组方规律挖掘与组方设计研究。方法依据功能导向-算法集成,收集西洋参保健食品数据与临床应用数据,借助BDP平台、自然语言处理与信息检索(natural language processing&information retrieval sharing platform,NLPIR)共享平台实现数据处理与信息挖掘,综合分析具有潜在开发价值的保健食品功能;以选定功能为导向,收集西洋参保健食品、中成药、方剂的组方信息并建立数据库,统计高频药味及类别,采用Apriori关联规则算法、层次分析法(analytic hierarchy process,AHP)-熵权-自组织特征映射(self-organizing maps,SOM)联用的赋权聚类算法(主观与客观算法联用)、逼近理想解排序(technique for order preference by similarity to an ideal solution,TOPSIS)综合评价法等机器学习算法提取样本数据特征并分析总结其内在规律,实现组方设计。结果综合西洋参保健食品功能与临床疾病和证型双方信息的分析结果,以“有助于增强免疫力”“对化学性肝损伤有辅助保护功能”双功能为导向,收集组方信息并建库。数据库中高频保健食品原料药味以补虚药居多,经赋权聚类筛选得到黄芪、麦冬、茯苓、五味子、枸杞子、三七、葛根、甘草共8味候选保健食品原料药味。结合药味关联分析及药对组合情况,进一步配伍组成备选组方,经评分优选得到保健食品组方为三七、西洋参、葛根、五味子、枸杞子。结论针对中药保健食品的中医药背景,依托大数据平台分析挖掘保健食品功能,借助机器学习算法抽提组方配伍规律,实现功能导向-算法集成西洋参双功能保健食品组方设计,或可为中药保健食品组方设计的功能导向化、组方计算化提供新思路。

关键词：保健食品西洋参组方规律组方设计功能算法数据挖掘

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基于Nrf2/HO-1信号通路探讨四逆散对胆汁淤积性肝炎大鼠氧化应激反应的影响

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中国实验方剂学杂志 2024年第12期30卷 1-7页

作者：曹丹陈祺陈小橹陈林珍王海燕郝巨辉张威马志强北京中医药大学中药品质评价北京市重点实验室北京102488 北京同仁堂科技发展股份有限公司制药厂北京100079 大连市妇女儿童医疗中心(集团) 生殖与遗传医学中心辽宁大连116000 北京中医药大学中药学院北京102488 哈尔滨医科大学附属第一医院哈尔滨150001

目的:基于核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素氧合酶-1(HO-1)信号通路探讨四逆散对胆汁淤积性肝炎大鼠肝脏氧化应激损伤的影响及其作用机制。方法:30只6周雄性SD大鼠,随机分为正常组、模型组、四逆散低、高剂量组(2.5、5.0 g·kg^(-1)... 详细信息

目的:基于核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素氧合酶-1(HO-1)信号通路探讨四逆散对胆汁淤积性肝炎大鼠肝脏氧化应激损伤的影响及其作用机制。方法:30只6周雄性SD大鼠,随机分为正常组、模型组、四逆散低、高剂量组(2.5、5.0 g·kg^(-1))、熊去氧胆酸(UDCA,63 mg·kg^(-1))组,每组6只。各组大鼠连续给药7 d,第5天除对照组给予10 m L·kg^(-1)橄榄油外,其余各组均给予80 mg·kg^(-1)的α-萘异硫氰酸酯(ANIT);采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清中胆汁淤积相关生化指标水平,以及肝组织中抗氧化因子的含量;通过苏木素-伊红(HE)染色观察肝组织病理变化;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肝组织中Nrf2、HO-1和醌氧化还原酶1(NQO1) mRNA与蛋白的相对表达量。结果:与正常组比较,模型组血清各胆汁淤积生化指标水平、肝组织中抗氧化应激因子含量均显著升高(P<0.01),模型组肝细胞排列紊乱、门管区有明显的瘀血性坏死,炎性细胞浸润,小叶间胆管破坏等病理学改变;模型组大鼠肝组织中Nrf2、HO-1和NQO1 mRNA与蛋白相对表达水平均明显下调(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,四逆散高剂量组的血清各胆汁淤积生化指标水平、肝组织中抗氧化应激因子含量均显著降低(P<0.01);肝病理损伤较模型组有明显改善,表现为坏死面积明显缩小,炎性细胞浸润显著减少,小叶间静脉有少量瘀血;肝组织中Nrf2、HO-1和NQO1 mRNA与蛋白相对表达水平均明显上调(P<0.05,P<0.01)。结论:四逆散能显著改善肝内胆汁淤积性肝炎大鼠肝损伤,其机制可能与Nrf2/HO-1信号通路介导的抑制氧化应激反应有关。

关键词：四逆散胆汁淤积性肝炎氧化应激核因子E2相关因子2(Nrf2) 血红素氧合酶-1(HO-1)

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基于^(1)H-NMR结合LC-MS技术分析熊胆粉及常见胆类中药中的胆酸类成分

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中草药 2022年第17期53卷 5283-5292页

作者：曹妍张佩杰李婷许霞常安琪李军刘地发屠鹏飞宋月林北京中医药大学中药学院中药现代研究中心北京100029 北京中医药大学中药品质评价北京市重点实验室北京100029 江西青峰药业有限公司创新天然药物与中药注射剂国家重点实验室江西赣州341000

目的建立基于核磁共振氢谱技术(^(1)H-NMR)结合液质联用技术(LC-MS)的分析方法,阐明熊胆粉中胆酸类成分组成,找出熊胆粉与其他常见胆类中药中的差异性成分。方法利用^(1)H-NMR非靶标分析熊胆粉及其他常见胆类中药的化学成分组,通过信... 详细信息

目的建立基于核磁共振氢谱技术(^(1)H-NMR)结合液质联用技术(LC-MS)的分析方法,阐明熊胆粉中胆酸类成分组成,找出熊胆粉与其他常见胆类中药中的差异性成分。方法利用^(1)H-NMR非靶标分析熊胆粉及其他常见胆类中药的化学成分组,通过信号归属表征熊胆粉中胆酸类成分组成,以^(1)H-NMR图谱分段积分后峰面积为变量进行多元统计分析。利用LC-MS对熊胆粉及其他常见胆类中药中10个胆酸类成分(胆酸、熊去氧胆酸、猪去氧胆酸、鹅去氧胆酸、牛磺熊去氧胆酸、牛磺鹅去氧胆酸、甘氨熊去氧胆酸、甘氨猪去氧胆酸、牛磺胆酸、甘氨胆酸)进行含量测定,并以含量为变量进行多元统计分析。结果基于^(1)H-NMR图谱及多元统计分析发现胆酸类成分为胆类中药的主要成分,也是熊胆粉与其他常见胆类中药的主要差异性成分。结合文献及对照品比对,从熊胆粉中初步鉴定出7个胆酸类成分。进一步结合LC-MS含量测定结果和多元统计分析验证熊胆粉与其他常见胆类中药的主要差异性胆酸类成分为熊去氧胆酸、鹅去氧胆酸、牛磺熊去氧胆酸和牛磺鹅去氧胆酸。结论熊胆粉与其他常见胆类中药的胆酸类成分存在显著差异。与其他胆类中药相比,熊胆粉中熊去氧胆酸、鹅去氧胆酸及其牛磺型结合胆酸含量较高。^(1)H-NMR技术具有对化学成分组全面、快速分析的优势,可与LC-MS检测相互补充,共同应用于中药复杂体系成分分析和代谢组学的深入研究。

关键词： ^(1)H-NMR LC-MS 熊胆粉常见胆类中药胆酸类成分多元统计分析熊去氧胆酸鹅去氧胆酸牛磺熊去氧胆酸牛磺鹅去氧胆酸

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基于斑马鱼模型探究多花黄精多糖的免疫调节作用

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世界中医药 2023年第6期18卷 761-765,772页

作者：张雪赵苑伶陈林珍刘妍刘静赵崇军刘永刚马志强北京中医药大学中药学院北京102488 中药品质评价北京市重点实验室北京102488

目的:探讨多花黄精多糖(Polygonatum Cyrtonema Hua Polysaccharides,PCP)及PCP-1对氯霉素所致免疫损伤的保护作用。方法:采用水提醇沉法得到黄精粗多糖,除蛋白脱色素后,得到PCP。利用DEAE-Sepharose Fast Flow层析柱和HW-55F凝胶柱先后... 详细信息

目的:探讨多花黄精多糖(Polygonatum Cyrtonema Hua Polysaccharides,PCP)及PCP-1对氯霉素所致免疫损伤的保护作用。方法:采用水提醇沉法得到黄精粗多糖,除蛋白脱色素后,得到PCP。利用DEAE-Sepharose Fast Flow层析柱和HW-55F凝胶柱先后对PCP进行洗脱,收集洗脱液,减压浓缩,冷冻干燥后得到纯化的PCP-1。以受精后2 d(2 dpf)的转基因斑马鱼为实验动物,采用不同浓度的氯霉素处理,通过比较斑马鱼尾部中性粒细胞的数目,确定氯霉素的最优造模剂量,建立斑马鱼免疫抑制模型。分别加入不同浓度的PCP和PCP-1孵育24 h后,拍照统计斑马鱼泄殖腔至尾部中性粒细胞数目,观察PCP和PCP-1的免疫调节作用。结果:PCP-1为均一多糖,分子量为3 350 Da。与溶剂对照组比较,氯霉素组的中性粒细胞数目显著减少(P<0.01);与氯霉素组比较,在实验剂量范围内,PCP和PCP-1均可以增加斑马鱼体内中性粒细胞的数目(P<0.01),且量效关系明显。结论:PCP和PCP-1均具有一定的增强免疫活性及改善免疫损伤的作用。

关键词：多花黄精多糖分离纯化斑马鱼免疫调节中性粒细胞

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斑马鱼作为一种重要的工具进行肝脏疾病研究

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中国中药杂志 2021年第2期46卷 320-332页

作者：李芝奇徐玥赵霞贾哲王昭懿冯丹李翠柏马志强赵崇军林瑞超北京中医药大学中药学院中药品质评价北京市重点实验室北京102488 德宏职业学院云南德宏678400

随着肝胆相关疾病发病率的增加,深入理解肝病发展过程中分子、细胞和生理因素在中医药临床诊断和治疗中的作用显得尤为重要。合适的动物模型能够帮助针对性的识别相关疾病的可能机制。斑马鱼Danio rerio模型传统上主要用于研究胚胎发育... 详细信息

随着肝胆相关疾病发病率的增加,深入理解肝病发展过程中分子、细胞和生理因素在中医药临床诊断和治疗中的作用显得尤为重要。合适的动物模型能够帮助针对性的识别相关疾病的可能机制。斑马鱼Danio rerio模型传统上主要用于研究胚胎发育,近些年已经被逐渐的用于肝脏疾病、相关药物筛选和评价等方面的研究。斑马鱼胚胎发育迅速,5日龄幼鱼的消化器官全部成熟。在此阶段内,它们可发展为由发育缺陷或化合物诱导的肝胆疾病。斑马鱼肝脏在细胞组成、功能、信号传导、对损伤的反应以及介导肝脏疾病的细胞过程等方面与人类相似。不仅如此,人类和斑马鱼之间基因、蛋白的高度保守性,使其成为研究肝脏疾病基本机制的一个可替代系统。因此,可以通过基因筛查以鉴定涉及特定疾病过程的新基因,通过化学筛查作用于特定过程的药物。该文介绍了斑马鱼作为模式系统的实验属性,并强调斑马鱼模型在肝脏疾病等方面的,尤其是脂肪肝方面,相关病理机制以及药物筛选、评价的研究进展,以期为未来中医药肝毒性评价提供思路和技术。

关键词：斑马鱼中药肝脏毒性药物筛选和评价机制

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炒苦杏仁炮制原理研究及对炒苦杏仁质量标准的思考

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中华中医药杂志 2021年第7期36卷 4249-4252页

作者：辛洁萍王海丽王敏白玉莹徐文娟徐新房李向日北京中医药大学中药学院北京市中药品质评价重点实验室北京102488

目的:在"杀酶保苷"的基础上,进一步探究苦杏仁后再炒的炮制原理并制定符合其饮片特点的含量限度标准。方法:采用HPLC-MS分析技术和HPLC法探究苦杏仁苷的变化规律,并对市售炒苦杏仁饮片的质量进行考察。结果:苦杏仁后再炒,D-... 详细信息

目的:在"杀酶保苷"的基础上,进一步探究苦杏仁后再炒的炮制原理并制定符合其饮片特点的含量限度标准。方法:采用HPLC-MS分析技术和HPLC法探究苦杏仁苷的变化规律,并对市售炒苦杏仁饮片的质量进行考察。结果:苦杏仁后再炒,D-苦杏仁苷含量显著增加,L-苦杏仁苷含量下降;随着炮制程度的加深,D-苦杏仁苷的含量下降。20批炒苦杏仁中苦杏仁苷的平均含量为3.4%。结论:炒制促进了L-苦杏仁苷向D-苦杏仁苷的转化,增加了D-苦杏仁苷的含量;随着炮制火候的加深,D-苦杏仁苷的含量逐渐降低,说明火候对苦杏仁苷有一定影响;故《中华人民共和国药典》(2020年版)中将炒苦杏仁含量限度标准修改为:含苦杏仁苷不得少于2.4%。

关键词：炒苦杏仁炮制原理苦杏仁苷炮制火候限度标准

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温郁金、温莪术和醋莪术的寒热药性及其7种挥发性成分的比较研究

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中医药学报 2024年第4期52卷 40-48页

作者：张海霞宋肖桦李千程水清文佳王璇王旭星李向日北京中医药大学中药学院、北京市中药品质评价重点实验室、国家中医药管理局中药炮制技术传承基地北京102488

目的:验证温郁金、温莪术和醋莪术的寒热药性,探究3者挥发油中7种挥发性成分与其寒热药性的相关性。方法:采用水蒸气蒸馏法提取挥发油并对其含有的7种挥发性成分的含量通过气相色谱法(GC法)进行测定,给予SD雄性大鼠灌服寒凉药构建胃寒... 详细信息

目的:验证温郁金、温莪术和醋莪术的寒热药性,探究3者挥发油中7种挥发性成分与其寒热药性的相关性。方法:采用水蒸气蒸馏法提取挥发油并对其含有的7种挥发性成分的含量通过气相色谱法(GC法)进行测定,给予SD雄性大鼠灌服寒凉药构建胃寒实证模型,再分别给予热性药、寒性药、生莪术、醋莪术、生郁金的水煎液治疗。通过观测比较大鼠在造模和给药的全过程中体质量、肛温、进食量、大便粒数和质地的变化,比较温郁金、温莪术和醋莪术的寒热药性。结果:温莪术醋制前后7种挥发性成分的含量差异不明显;温莪术挥发油中1,8-桉叶素、樟脑、龙脑、吉马酮、莪术二酮的含量明显高于温郁金上述成分的含量(P<0.01)。温莪术的生品、醋制品对胃寒导致的腹泻治疗效果弱于热性药的治疗效果,温莪术的生品、醋制品表现为脾胃温性,温郁金的生品会加重腹泻,但致泻效果较寒性药致泻效果弱,温郁金表现为脾胃弱寒性。结论:1,8-桉叶素、樟脑、吉马酮、莪术二酮4种挥发性成分的药理作用与温热药作用一致,且其含量高低与温郁金、温莪术和醋莪术寒热药性变化一致,推测这4种挥发性成分可能是其发挥寒热药性的重要物质基础。

关键词：温郁金温莪术挥发油寒热药性

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基于斑马鱼模型的杠柳毒苷的心毒性评价

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中国药物警戒 2023年

作者：赵崇军陶晓宇于雪陈林珍王璇林瑞超张晓朦张冰北京中医药大学中药学院中药品质评价北京市重点实验室北京中医药大学中医学院北京中医药大学中药药物警戒与合理用药研究中心

目的基于斑马鱼模型初步探讨香加皮的“效-毒”成分杠柳毒苷的心脏毒性和潜在作用机制。方法将3dpf（3dayspostfertilization）的斑马鱼暴露于不同浓度的杠柳毒苷溶液中48h，统计杠柳毒苷对斑马鱼的致死率；在亚致死浓度剂量(sublethalc... 详细信息

目的基于斑马鱼模型初步探讨香加皮的“效-毒”成分杠柳毒苷的心脏毒性和潜在作用机制。方法将3dpf（3dayspostfertilization）的斑马鱼暴露于不同浓度的杠柳毒苷溶液中48h，统计杠柳毒苷对斑马鱼的致死率；在亚致死浓度剂量(sublethalconcentration，LC10)下(＜LC10)，基于心包水肿程度、心率变化、细胞凋亡等指标评杠柳毒苷的心脏毒性；通过网络药理学方法和分子对接技术预测杠柳毒苷心毒性潜在作用靶点及通路，并通过实时定量聚合酶链反应（realtimequantitativepolymerasechainreaction，RT-qPCR）)对预测机制进行验证。结果杠柳毒苷对斑马鱼的LC10为1.816 2 μg·mL-1，亚致死剂量条件下，与空白组相比，杠柳毒苷能够引起斑马鱼心率异常增高、不同程度的心包水肿以及明显的心肌细胞凋亡，具有显著的心脏毒性。杠柳毒苷诱导心毒性与41个潜在作用靶点有关，共涉及脂质动脉粥样硬化通路、血小板活化，糖尿病并发症中的AGE-RAGE信号通路等，且RT-qPCR进一步验证以上预测结果。结论杠柳毒苷可诱发斑马鱼心脏毒性，临床应用中药香加皮时需特别关注剂量、适应证等问题。

关键词：杠柳毒苷心毒性斑马鱼网络药理学作用机制

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