检索结果-内蒙古大学图书馆

中西医结合肝病杂志 2022年第12期32卷 1066-1072页

作者：郭晓霞叶永安李小科郭琲婷吕蕾秦雪梅山西省中医药研究院山西太原030012 北京中医药大学东直门医院山西大学中医药现代研究中心

目的:探讨肝硬化患者中医证型演变过程中肠道菌群的分布特征,评价其与肝硬化严重程度的相关性。方法:收集10例健康志愿者与44例肝硬化患者的血液和粪便标本进行检验。16S rDNA高通量测序获得肝硬化不同中医证型患者间肠道菌群的差异菌属... 详细信息

目的:探讨肝硬化患者中医证型演变过程中肠道菌群的分布特征,评价其与肝硬化严重程度的相关性。方法:收集10例健康志愿者与44例肝硬化患者的血液和粪便标本进行检验。16S rDNA高通量测序获得肝硬化不同中医证型患者间肠道菌群的差异菌属,使用Spearman相关性分析相关菌群属与临床指标的相关性,采用RDA分析驱动群落变异的主要影响因子。结果:随着肝郁脾虚证向湿热内蕴证的转化,患者病情加重,肠道屏障功能损伤严重,嗜黏蛋白阿克曼菌、青春双岐杆菌、狄氏副拟杆菌、普拉梭菌丰度下降,殊异韦荣球菌丰度上升。殊异韦荣球菌与ALT、AST、TBil、PT及肝硬化预后指标MELD、CTP呈显著正相关(P<0.001),普拉梭菌与ETX呈负相关(P<0.001),嗜黏蛋白阿克曼菌与肝硬化预后指标LSM、MELD呈负相关(P<0.001)。TBil、PT是驱动不同中医证型患者间肠道菌群群落变异的主要因子。其中TBil对菌群群落变异的影响差异有统计学意义(P=0.014)。结论:殊异韦荣球菌可能在肝硬化患者中医证型演变及病情发展中发挥重要作用,而调节青春双歧杆菌的含量可有效控制疾病进展。狄氏副拟杆菌协助普拉梭菌对于抑制肠道菌群移位具有重要调节作用。TBil是肝硬化两种中医证型间肠道群落变异的主要驱动因子。

关键词：肝硬化中医证型菌群失调

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苗族药血人参中缩合鞣质类化学成分研究

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中国中药杂志 2021年第16期46卷 4131-4138页

作者：张云封朱枝祥王文萱张航刘莉张仕林赵云芳宋月林郑姣屠鹏飞霍会霞李军北京中医药大学中药学院中药现代研究中心北京100029 贵州汉方药业有限公司贵州贵阳550081

利用硅胶、ODS、Sephadex LH-20柱色谱和半制备高效液相色谱技术对苗族药血人参(茸毛木蓝Indigofera stachyodes的干燥根)的化学成分进行研究,通过理化性质和NMR、MS等谱学数据共鉴定了11个缩合鞣质类化合物,分别为血人参鞣质A(1)、epic... 详细信息

利用硅胶、ODS、Sephadex LH-20柱色谱和半制备高效液相色谱技术对苗族药血人参(茸毛木蓝Indigofera stachyodes的干燥根)的化学成分进行研究,通过理化性质和NMR、MS等谱学数据共鉴定了11个缩合鞣质类化合物,分别为血人参鞣质A(1)、epicatechin-(2β→O→7,4β→8)-epiafzelechin-(4β→8)-catechin(2)、肉桂鞣质D1(3)、肉桂鞣质B1(4)、epicatechin-(2β→O→7,4β→8)-epiafzelechin-(4α→8)-epicatechin(5)、gambiriin C(6)、原花青素A1(7)、原花青素A2(8)、aesculitannin B(9)、原花青素A4(10)、原花青素B5(11)。其中化合物1为新化合物,命名为血人参鞣质A,化合物2~11为首次从木蓝属植物中分离得到。化合物1、2、4~11对血小板活化具有明显的抑制作用。

关键词：血人参缩合鞣质化学成分血小板

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心肌细胞损伤的体外模型研究新进展

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中国中药杂志 2021年第13期46卷 3257-3269页

作者：李妍怡李俊俊戈福星马晓静李春艾晓妮高小力屠鹏飞柴兴云北京中医药大学中药学院中药现代研究中心北京100029 北京大学医学部药学院北京100083

心血管疾病严重危害人类生命健康,其中伴随的心肌损伤越来越受到社会各界的重点关注。中药作为我国新药研发的天然宝贵资源,其多组分、多途径、多靶点的特征已在抗心肌损伤方面显示出独特的优势。近年来,随着离体心肌细胞培养技术的广... 详细信息

心血管疾病严重危害人类生命健康,其中伴随的心肌损伤越来越受到社会各界的重点关注。中药作为我国新药研发的天然宝贵资源,其多组分、多途径、多靶点的特征已在抗心肌损伤方面显示出独特的优势。近年来,随着离体心肌细胞培养技术的广泛应用,成本经济、环境可控、样本均一的心肌细胞损伤模型,逐渐成为研究心肌细胞药理损伤作用机制以及开发相关抗损伤药物的重要方法之一。一个合理的体外模型不仅能减少经济投入、有效防止人力耗散,又能准确反映实验机制,更理想地模拟临床变化过程,故筛选和构建损伤模型是研究的关键和核心。该文根据临床病症的不同将模型分类,总结了心肌细胞缺氧-复氧损伤、肥大损伤、氧化应激损伤、炎症损伤、内环境紊乱以及毒性损伤等十余种模型的建模原理、评价指标和应用案例,并分析归纳其相应的优点与技术难点,以期为心肌损伤机制深入研究,及相应的药物研发提供有益的参考。

关键词：心肌损伤心肌细胞损伤模型心脏病综述

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沉香提取物保护胆汁酸诱导胃黏膜损伤的药理机制

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中国药理学与毒理学杂志 2021年第10期35卷 793-794页

作者：马家乐王鑫玉靳凤玉赵一慕史景景郑姣李军北京中医药大学中药学院中药现代研究中心北京100029

目的胃黏膜上皮细胞损伤是胆汁反流性胃炎最重要的病理特征之一。沉香在我国传统用药中用于治疗胃病已有数千年的历史。然而胆汁酸诱导胃黏膜上皮细胞损伤的病理机制以及中药沉香改善胆汁反流性胃炎的作用靶点尚未完全阐明。本研究探讨... 详细信息

目的胃黏膜上皮细胞损伤是胆汁反流性胃炎最重要的病理特征之一。沉香在我国传统用药中用于治疗胃病已有数千年的历史。然而胆汁酸诱导胃黏膜上皮细胞损伤的病理机制以及中药沉香改善胆汁反流性胃炎的作用靶点尚未完全阐明。本研究探讨牛磺胆酸(TCA)通过调节内质网应激途径促进细胞凋亡的作用,并探讨了沉香提取物(CPE)对胃黏膜上皮细胞的保护作用和作用机制。方法利用TCA(0.5,1.0,1.5,2.0μmol·L^(-1))处理人胃黏膜上皮细胞GES-1细胞24 h后,利用CCK-8试剂盒检测GES-1细胞存活率,确认TCA诱导细胞损伤的IC50为1.467μmol·L^(-1)。选择1.5μmol·L^(-1)的TCA诱导GES-1细胞损伤,同时采用CPE(1,5,10 mg·L^(-1))处理细胞后,检测CPE对细胞存活率的改善作用。利用Hoechst33342染色和Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测TCA对细胞凋亡的激活以及CPE的改善作用。通过Western印迹法检测胱天蛋白酶7、活化胱天蛋白酶7、PARP、活化PARP等凋亡蛋白表达情况。进一步通过Western印迹法检测内质网应激相关蛋白Bip,PERK,eIF2α,CHOP的表达,探讨胆汁酸处理和CPE对内质网应激的影响。体内实验采用胆汁反流性胃炎小鼠检测体重变化、血浆炎症因子IL-6,IL^(-1)β,TNF-α水平,采用HE染色、TUNEL染色、免疫组化进一步验证CPE对胆汁反流性胃炎的治疗作用。结果TCA剂量依赖性地降低GES-1细胞的存活率(IC50=1.467μmol·L^(-1)),CPE 5和10 mg·L^(-1)显著增加TCA损伤细胞的存活率(P<0.05)。Hoechst33342染色和流式细胞术分析结果显示,TCA处理后细胞凋亡率显著提高,CPE给药后剂量依赖性抑制了TCA诱导的细胞凋亡(P<0.05)。Western印迹法结果显示,TCA处理GES-1细胞后,通过增加胱天蛋白酶7和PARP的裂解激活了GES-1细胞的凋亡。进一步的实验表明,TCA可上调内质网应激继而诱导细胞凋亡,CPE抑制内质网应激相关蛋白PERK和eIF2α的磷酸化,降低CHOP的表达水平,从而发挥其抗凋亡作用。体内实验胆汁反流性胃炎小鼠血浆炎症因子水平以及胃黏膜上皮细胞凋亡和CHOP蛋白水平也明显增加,CPE给药后明显降低。CPE通过抑制PERK/eIF2α/CHOP信号通路,有效抑制TCA激活的GES-1细胞凋亡,并且CPE对胃黏膜的抗凋亡作用也在体内得到验证。结论CPE通过调控PERK/eIF2α/CHOP信号通路介导的内质网应激抑制TCA诱导的胃黏膜上皮细胞凋亡,为胆汁反流性胃炎的治疗提供了潜在的药物。

关键词：沉香胆汁反流胆汁酸胃黏膜损伤内质网应激

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白木香查尔酮异构酶基因的克隆鉴定与表达分析

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药学学报 2021年第2期56卷 630-638页

作者：丁宁海燕王晓晖屠鹏飞高博闻史社坡北京中医药大学中药学院中药现代研究中心北京100029 包头医学院内蒙古包头014060

查尔酮异构酶(chalcone isomerase,CHI)是黄酮类成分生物合成途径中的关键酶之一,在植物防御反应中发挥重要作用。本研究根据白木香转录组测序结果并结合RT-PCR技术首次从白木香愈伤组织中克隆得到1个CHI基因,命名为AsCHI1。白木香AsCHI... 详细信息

查尔酮异构酶(chalcone isomerase,CHI)是黄酮类成分生物合成途径中的关键酶之一,在植物防御反应中发挥重要作用。本研究根据白木香转录组测序结果并结合RT-PCR技术首次从白木香愈伤组织中克隆得到1个CHI基因,命名为AsCHI1。白木香AsCHI1基因的开放阅读框(ORF)长654 bp,编码蛋白含217个氨基酸,其蛋白分子质量为23.11 kDa。AsCHI1蛋白具有查尔酮异构酶保守的活性位点,系统进化树显示AsCHI1蛋白为I型CHI蛋白,与棉花(Gossypium hirsutum)CHI蛋白亲缘关系较近。构建原核表达载体pET28a-AsCHI1并在*** BL21(DE3)菌株中成功表达AsCHI1,利用Ni2+亲和色谱纯化得到可溶性AsCHI1重组蛋白。体外酶活性分析证明重组蛋白AsCHI1可以催化柚皮素查尔酮转化为柚皮素。实时荧光定量PCR检测结果表明白木香愈伤组织经盐、甘露醇、低温以及重金属胁迫诱导后,AsCHI1基因的表达量明显上升;植物激素脱落酸、赤霉素和水杨酸均能够诱导愈伤组织中AsCHI1基因表达,说明AsCHI1在白木香自我防御反应中发挥作用。本研究结果为进一步探讨白木香中黄酮类成分的生物合成及其在白木香防御反应中的作用提供参考。

关键词：白木香沉香查尔酮异构酶克隆鉴定表达分析

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保元汤活性成分4’,7,8-三羟基二氢黄酮抑制过氧化氢诱导人脐静脉内皮细胞损伤的作用机制研究

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环球中医药 2022年第11期15卷 2078-2084页

作者：孟英心张子歆王凌潇马家乐靳凤玉王鑫玉赵一慕郑姣屠鹏飞北京中医药大学中药学院中药现代研究中心 100029

目的研究保元汤中4’,7,8-三羟基二氢黄酮(4’,7,8-trihydroxydihydroflavonoid, TF)对过氧化氢(hydrogen peroxide, H_(2)O_(2))诱导人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells, HUVEC)氧化损伤的改善作用,并进一步阐明其药理机制。方法用不同浓度的TF处理HUVEC血管内皮细胞6小时后给予15μmol/L和30μmol/L H2O2刺激1小时,检测细胞存活率并确定TF起效剂量。利用2,2-二苯基-1-苦肼基自由基(2,2-dipheny 1-1-picrychydrazy 1,DPPH)分析实验、DCF-DA荧光探针和蛋白免疫印迹法(Western Blot)分别检测TF对自由基的清除作用,以及H_(2)O_(2)损伤后TF对HUVEC细胞内活性氧(reactive oxygen species, ROS)水平和细胞凋亡相关蛋白磷酸化蛋白激酶B(phosphorylated protein kinase B,P-Akt)、B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)以及腺苷二磷酸核糖聚合酶(poly adenosinediphosphate-ribose polymerase, PARP)表达的调控作用。结果 TF给药处理能显著提高H2O2损伤后HUVEC细胞的存活率(P<0.01)。机制研究表明,TF能显著加速自由基的清除,降低细胞中ROS水平,并通过调控P-Akt/PARP/Bcl-2通路抑制HUVEC细胞的凋亡。结论 TF作为保元汤的活性成分,能保护内皮细胞对抗H2O2诱导的氧化损伤,其作用机制可能与其加速自由基的清除、提高细胞清除ROS能力和抑制细胞凋亡有关。

关键词： 4’,7,8-三羟基二氢黄酮保元汤人脐静脉内皮细胞氧化损伤

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反相-亲水作用色谱-定制多反应监测法同步测定肉苁蓉多成分含量

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分析化学 2020年第11期48卷 1573-1593页

作者：宋青青张珂李婷管朋维龚兴成许霞李军屠鹏飞宋月林北京中医药大学中药学院中药现代研究中心北京中医药大学中药品质评价北京市重点实验室

建立了反相色谱-亲水作用色谱-定制多反应监测(RPLC-HILIC-tailored MRM)方法,对肉苁蓉中极性跨度大、含量差异大的27个化学成分的含量进行同步测定。利用RPLC与HILIC的在线直接偶联实现大、中、小极性化学成分的同步色谱保留和分离。Ac... 详细信息

建立了反相色谱-亲水作用色谱-定制多反应监测(RPLC-HILIC-tailored MRM)方法,对肉苁蓉中极性跨度大、含量差异大的27个化学成分的含量进行同步测定。利用RPLC与HILIC的在线直接偶联实现大、中、小极性化学成分的同步色谱保留和分离。Acquity UPLC HSS T3色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.8μm)用于RPLC,Xbridge Amide色谱柱(150 mm×4.6 mm, 3.5μm)用于HILIC,色谱柱间通过混合器引入稀释泵来解决色谱机制不一致的问题。泵A(0.1%甲酸-水)和泵B(乙腈)输送流动相至RPLC柱进行梯度洗脱,流速为0.15 mL/min;泵C(0.1%甲酸-水)和泵D(乙腈)以1.0 mL/min的流速输送流动相至混合器,改变RPLC柱洗脱液的组成,促进极性大的化学成分在HILIC柱中的保留。通过灵活调节在线碰撞能,提高微量成分的质谱响应,抑制常量成分的质谱响应,形成定制多反应监测模式。最终同步测定36批肉苁蓉中27个化学成分,包括氨基酸类、有机酸类、糖类、苯乙醇苷类、环烯醚萜类、木质素类等类型。方法检出限为0.0032～160μg/g,定量限为0.032～320μg/g,线性相关系数大于0.9929,加标回收率为74.7%～125.1%,相对标准偏差(RSD)为1.6%～13.7%。本方法线性范围宽、准确度高、适用性广,为肉苁蓉及其它中药化学成分的深入定量分析提供了有效手段。

关键词：反相色谱-亲水作用色谱定制多反应监测模式极性跨度含量跨度肉苁蓉

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蛇胆中胆汁酸类化学成分分析

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中国中药杂志 2021年第1期46卷 130-138页

作者：曹妍李婷常安琪蒋珍珍于娟屠鹏飞宋月林北京中医药大学中药学院中药现代研究中心北京100029 漳州片仔癀药业股份有限公司福建漳州363000

蛇胆作为传统的名贵中药广泛应用于多种名优中成药的制备,胆汁酸为其主要活性成分。阐明蛇胆中的胆酸类成分,对于建立完整的蛇胆质量控制方法和阐明药效物质均具有重要意义。该文首先利用1H-NMR技术对蛇胆提取物非靶标性检测,再利用自... 详细信息

蛇胆作为传统的名贵中药广泛应用于多种名优中成药的制备,胆汁酸为其主要活性成分。阐明蛇胆中的胆酸类成分,对于建立完整的蛇胆质量控制方法和阐明药效物质均具有重要意义。该文首先利用1H-NMR技术对蛇胆提取物非靶标性检测,再利用自动馏分接收器剔除蛇胆中的牛磺胆酸部分,收集目标成分,浓缩处理后利用LC-MS对其中的胆酸类成分深入分析。非靶标检测结果表明胆汁酸为蛇胆的主要成分,结合文献及对照品比对,从蛇胆1H-NMR图谱中初步归属了6个胆酸类成分,分别为鹅去氧胆酸、胆酸、牛磺鹅去氧胆酸、牛磺胆酸、牛磺去氧胆酸和甘氨胆酸。由于其中牛磺胆酸含量过高从而影响微量成分的检出,通过自动接收器剔除蛇胆中的牛磺胆酸后,将处理过的蛇胆提取物经LC-MS平台检测,通过多级质谱数据分析,保留时间匹配,并结合对照品及数据库搜索,共发现并鉴定了57个胆酸类成分。该文基于1H-NMR和LC-MS平台并半制备蛇胆化学成分对蛇胆中胆酸类成分进行了全面、系统地表征,对蛇胆的质量控制和评价方法的建立具有一定的参考价值。

关键词：蛇胆胆汁酸 1H-NMR 自动流分接收器 LC-MS

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在线能量分辨质谱结合量子化学计算分析山奈素的多级质谱行为

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分析化学 2020年第10期48卷 1428-1433页

作者：管朋维宋青青张珂李婷李玮屠鹏飞李军宋月林北京中医药大学中药学院中药现代研究中心北京中医药大学中药品质评价北京市重点实验室

在多级质谱中,母离子碎裂成子离子的实质是在气态情况下,较高能量的中性气体分子与离子发生碰撞,转移能量,使化学键发生断裂。利用在线能量分辨质谱（Online ER-MS）,逐步改变碰撞能,可以观察到子离子信号产生和消失的过程,结合量子化... 详细信息

在多级质谱中,母离子碎裂成子离子的实质是在气态情况下,较高能量的中性气体分子与离子发生碰撞,转移能量,使化学键发生断裂。利用在线能量分辨质谱（Online ER-MS）,逐步改变碰撞能,可以观察到子离子信号产生和消失的过程,结合量子化学计算可以准确归属子离子信号。本研究以黄酮类化合物山奈素为例,对其多级质谱行为进行深入分析。在串联离子阱-飞行时间质谱正离子模式下,母离子m/z 301.0712（[M+H];）主要通过自由基裂解和Retro-Diels-Alder裂解（RDA裂解）生成子离子m/z 286.0518、272.0454、165.0155、161.0573、153.0192和139.0381。为了阐明关键离子m/z 161.0573的来源,在三重四极杆质谱中构建离子对m/z 301>161,进一步派生出一组拟离子对（PITs）,对应一组递进式的碰撞能,利用多反应检测模式采集各拟离子对的相对峰面积,绘制裂解曲线。裂解曲线呈"M"型,表明m/z 161.0573有两种生成方式。结合结构计算推断"M"型裂解曲线的第一波峰由低裂解能的C环杂环裂解断裂1,4键继而中性丢失CH;产生,第二波峰由高裂解能的C环RDA裂解断裂0,4键继而中性丢失CH;OH产生。通过在线能量分辨质谱与量子化学计算的结合可以对化合物的多级质谱行为进行深入分析。

关键词：在线能量分辨质谱山奈素 Retro-Diels-Alder裂解裂解曲线

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利用在线加压溶剂提取-超高效液相色谱-离子阱-飞行时间-质谱法定性分析片仔癀化学成分组

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色谱 2021年第5期39卷 478-487页

作者：李玮蒋珍珍李菡屠鹏飞宋青青于娟宋月林北京中医药大学中药学院中药现代研究中心北京100029 漳州片仔癀药业股份有限公司福建漳州363000

片仔癀(Pien-Tze-Huang)是由三七、牛黄、蛇胆、麝香等名贵中药经加工精制而成的中药制剂。片仔癀中的三七皂苷、胆汁酸以及麝香酮等主要化学成分已被深入研究,然而其全方化学成分组成尚未被整体阐明。该文建立了在线加压溶剂提取-超高... 详细信息

片仔癀(Pien-Tze-Huang)是由三七、牛黄、蛇胆、麝香等名贵中药经加工精制而成的中药制剂。片仔癀中的三七皂苷、胆汁酸以及麝香酮等主要化学成分已被深入研究,然而其全方化学成分组成尚未被整体阐明。该文建立了在线加压溶剂提取-超高效液相色谱-离子阱-飞行时间质谱(online PLE-UHPLC-IT-TOF-MS)法,快速、直接分析片仔癀化学成分组。将少量片仔癀粉末(0.3 mg)均匀地平铺于预柱芯尾端,之后用正相硅胶填充预柱芯,滤膜密封后构成提取池。提取池装入预柱套后置于70℃的柱温箱内,连接于UHPLC-IT-TOF-MS分析系统。通过引入一个二位六通电子阀,将整个分析过程自动在提取相和洗脱相间切换。提取相用时3 min,以0.1%(v/v)甲酸水为提取溶剂,流速为0.2 mL/min;洗脱相以0.1%(v/v)甲酸水和乙腈为流动相进行梯度洗脱,IT-TOF-MS检测。通过与对照品、相关文献和自建中药数据库对照,并总结相关质谱裂解规律,从片仔癀中共检测到73个化学成分,初步鉴定并归属了其中71个,36个来源于三七,15个来源于蛇胆,9个来源于牛黄,11个可能来源于牛黄与蛇胆,另有2个结构无法确定。该研究深入解析了片仔癀的化学成分组,为其质量分析提供了丰富的信息。同时,该文构建的online PLE-UHPLC-IT-TOF-MS分析系统为中药复杂体系快速、直接分析提供了可靠的工具。

关键词：在线加压溶剂提取片仔癀化学成分组质谱裂解途径来源归属

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