检索结果-内蒙古大学图书馆

质谱学报 2022年第3期43卷 300-311页

作者：贾金茹彭博李婷刘文静李菡李波赵云芳宋月林北京中医药大学中药学院中药现代研究中心北京100029 安利(中国)植物研发中心江苏无锡214145

由于色谱分离需要耗费大量的时间,导致传统LC-MS研究中药成分的分析通量较低,而多级质谱全扫描(MS/MS^(ALL))采用了气态分段技术(GPF),可以在直接注射(DI)模式下,采集每个表观质量数MS^(1)信号的MS^(2)图谱,实现MS^(1)-MS^(2)数据列表... 详细信息

由于色谱分离需要耗费大量的时间,导致传统LC-MS研究中药成分的分析通量较低,而多级质谱全扫描(MS/MS^(ALL))采用了气态分段技术(GPF),可以在直接注射(DI)模式下,采集每个表观质量数MS^(1)信号的MS^(2)图谱,实现MS^(1)-MS^(2)数据列表的高通量构建。为快速表征枸杞子化学成分组,本研究采用DI-MS/MS^(ALL)全面采集枸杞子提取物中各化学成分的多级质谱数据,根据高分辨MS^(1)和MS^(2)碎片离子信息推导质谱裂解途径,结合数据库检索以及相关文献,从枸杞子中初步鉴定了38个化学成分,包括1个氨基酸类、19个有机酸类、2个糖脂类、6个苯丙素类、1个黄酮类、6个生物碱类以及3个酰胺类化合物。DI-MS/MS^(ALL)可作为中药等复杂体系快速全面定性分析的有力工具。

关键词：直接注射-多级质谱全扫描(DI-MS/MS^(ALL)) 枸杞子化学成分组裂解途径 MS^(1)-MS^(2)数据列表

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中成药临床综合评价指南(2022年版试行)

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中国中药杂志 2023年第1期48卷 256-264页

作者：元唯安张俊华刘建平杨忠奇曹俊岭廖星席晓宇韩梅李文元丘振文冯时茵郭媛媛曹璐佳廖小红艾彦伶黄菊贾露露苏祥飞吴雪戴泽琦郭继华路冰清张霄潇唐健元上海中医药大学附属曙光医院上海201203 天津中医药大学中医药研究院天津300193 北京中医药大学循证医学中心北京100029 广州中医药大学第一附属医院广东广州510407 北京中医药大学东直门医院北京100700 中国中医科学院中医临床基础医学研究所北京100700 中国药科大学国家药物政策与医药产业经济研究中心江苏南京211198 成都中医药大学附属医院四川成都610075 北京中医药大学东方医院北京100078 首都医科大学附属北京儿童医院北京100045 中华中医药学会北京100029

当前,中成药临床综合评价相关研究和主题日渐增多且呈现学术争鸣现象,就评价实例看,尚存在评价主体机构不清、评价主题不明、评价对象多而杂、评价内容不完整、评价过程不规范等现实问题和技术难点;就评价标准规范看,已有多种不同类型... 详细信息

当前,中成药临床综合评价相关研究和主题日渐增多且呈现学术争鸣现象,就评价实例看,尚存在评价主体机构不清、评价主题不明、评价对象多而杂、评价内容不完整、评价过程不规范等现实问题和技术难点;就评价标准规范看,已有多种不同类型和侧重点不同的规范或指南通过不同学术团体或相关机构发布。为了引导规范、高效地开展中成药临床综合评价,进一步提升评价的权威性和评价质量,需要研制专业指南。该项目组结合中成药自身特点和国内外最新研究成果,从评价的设计、主题遴选、评价内容与指标、结果报告、结果应用及评价、质量控制等6个方面制定了详细的规范。该指南按照中华中医药学会团体标准研制要求,经过多轮专家论证和公开征求意见后,形成了目前的试行稿。

关键词：中成药临床综合评价指南卫生技术评估

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产姜黄素大肠杆菌工程菌的构建

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生物工程学报 2021年第6期37卷 2077-2084页

作者：张乐丁宁海燕闫雅茹李娜李赛男屠鹏飞刘晓史社坡北京中医药大学中药现代研究中心

姜黄素是姜科植物的特征性成分,具有重要的药理活性。文中利用姜黄素生物合成关键酶β-酮酰辅酶A合酶(Diketide-CoA synthase,DCS)基因和姜黄素合酶(Curcumin synthase,CURS)基因构建非天然融合基因DCS::CURS,并将其与4-香豆酰辅酶A连接... 详细信息

姜黄素是姜科植物的特征性成分,具有重要的药理活性。文中利用姜黄素生物合成关键酶β-酮酰辅酶A合酶(Diketide-CoA synthase,DCS)基因和姜黄素合酶(Curcumin synthase,CURS)基因构建非天然融合基因DCS::CURS,并将其与4-香豆酰辅酶A连接酶(4-coumarate coenzyme A ligase,4CL)和乙酰辅酶A羧化酶(Acetyl coenzyme A carboxylase,ACC)基因共同引入大肠杆菌Escherichia coli,构建由阿魏酸合成姜黄素的工程大肠杆菌,利用LB培养基和改良的M9培养基进行两步发酵。通过对生长培养阶段诱导蛋白表达方法和发酵培养阶段接种菌体量、培养基组成及发酵培养时间等条件的优化,并在发酵培养阶段加入大孔吸附树脂降低产物在培养液中的累积等方法,姜黄素的合成产率达到386.8mg/L。本研究首次将非天然融合基因DCS::CURS用于合成姜黄素工程菌的构建,得到了姜黄素产率较高的大肠杆菌菌株,为后续通过进一步复杂的代谢网络优化、构建姜黄素合成能力更强的工程菌提供参考。

关键词：大肠杆菌姜黄素非天然融合蛋白工程菌

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基于DNA条形码及HPLC对市售黄芩的种质资源鉴定和质量评价

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中国中药杂志 2022年第7期47卷 1814-1823页

作者：张靖晗刘珊瑚张志飞石玥满金辉尹光耀王馨刘凤波王晓晖魏胜利北京中医药大学中药学院北京102488 北京中医药大学中药学院中药现代研究中心北京100029 中药材规范化生产教育部工程研究中心北京100102

黄芩Scutellaria baicalensis是我国常用的大宗药材,该研究根据以前的叶绿体基因组测序结果,选取trnH-psbA、petA-psbJ、ycf4-cemA序列对市售黄芩样品进行种质资源鉴定,并通过HPLC测定市售样品的黄芩苷含量,以期确定检测黄芩市场样品的... 详细信息

黄芩Scutellaria baicalensis是我国常用的大宗药材,该研究根据以前的叶绿体基因组测序结果,选取trnH-psbA、petA-psbJ、ycf4-cemA序列对市售黄芩样品进行种质资源鉴定,并通过HPLC测定市售样品的黄芩苷含量,以期确定检测黄芩市场样品的最佳DNA条形码,市场样品的种质资源和质量。该研究从我国24个省收集104份样品并提取DNA进行PCR扩增,trnH-psbA、petA-psbJ、ycf4-cemA 3段序列的扩增效率分别为100%、59.62%、25.96%;序列分析结果表明利用trnH-psbA、petA-psbJ、ycf4-cemA分别能够鉴定5、4、2个基因型,但是与野生型基因型序列不相同,3段序列联合分析仅形成6个基因型;系统进化树和遗传距离分析结果表明,trnH-psbA片段可用于鉴别黄芩真伪样品,因此trnH-psbA片段为鉴定市场样品种质资源最佳片段,对其所鉴定的市场样品基因型(THap1~THap5)进行分析,发现THap2为市场样品主要流通基因型,占总样品量的86.55%,说明市场黄芩样品种质资源比较少。HPLC检测市售黄芩样品中的黄芩苷含量结果表明,所有采集的市售黄芩样品黄芩苷含量均超过药典规定标准,样品之间黄芩苷含量差异显著,最大相差12.21%,说明市售黄芩样品质量参差不齐,而且不同采集省份和各个基因型之间的黄芩苷含量没有显著性差异。该研究为建立黄芩鉴定标准化体系提供依据,有利于指导黄芩市场样品的流通及临床科学合理用药。

关键词：黄芩 DNA条形码分子鉴定质量评价

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蛇足石杉内生真菌Penicillium chrysogenum MT-40的代谢产物研究

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中草药 2022年第13期53卷 3904-3911页

作者：贾放放齐博文张蓓蓓王雯静王阳石钰刘晓朱枝祥王娟史社坡北京中医药大学中药学院中药现代研究中心北京100029 高平市中医医院山西高平048400

目的研究蛇足石杉Huperziaserrata内生真菌PenicilliumchrysogenumMT-40的代谢产物。方法利用硅胶、SephadexLH-20及半制备液相色谱等方法进行分离纯化,根据化合物的理化性质及IR、MS、NMR等数据鉴定化合物的结构;利用体外模型进行抑制... 详细信息

目的研究蛇足石杉Huperziaserrata内生真菌PenicilliumchrysogenumMT-40的代谢产物。方法利用硅胶、SephadexLH-20及半制备液相色谱等方法进行分离纯化,根据化合物的理化性质及IR、MS、NMR等数据鉴定化合物的结构;利用体外模型进行抑制血小板ATP释放及抗乙酰胆碱酯酶活性筛选。结果从***-40固体发酵培养后的代谢产物中分离得到了20个化合物,分别鉴定为(±)-N-(3a,4,5,6,7,8,9,10,11,12,13,13a-dodecahydrocyclododeca[d]oxazol-2-yl)-4-hydroxybenzamide(1)、cyclo-(Trp-Tyr)(2)、cyclo-(Trp-Phe)(3)、meleagrin(4)、alternariol(5)、alternariol methyl ether(6)、altenuene(7)、koninginin B(8)、koninginin F(9)、koninginin D(10)、过氧化麦角甾醇(11)、β-谷甾醇(12)、volemolide(13)、4-hydroxy-17R-methylincisterol(14)、4-hydroxy-3,6-dimethyl-2H-pyran-2-one(15)、对羟基苯甲酸(16)、对羟基苯甲醛(17)、香草酸(18)、对羟基苯乙酸(19)、酪醇(20)。结论化合物1为新化合物,命名为(±)-盘尼西碱A;化合物5在100μmol/L时有一定的抑制血小板释放ATP作用,抑制率为(40.6±5.2)%;所有化合物在100μmol/L时未表现出乙酰胆碱酯酶抑制活性。

关键词：蛇足石杉内生真菌产黄青霉菌生物碱聚酮 (±)-盘尼西碱A alternariol

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基于叶绿体基因matK及UPLC对市售大黄的种质资源鉴定和质量分析

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药学学报 2022年第2期57卷 514-524页

作者：满金辉石玥张靖晗张志飞尹光耀王馨刘凤波张媛王晓晖魏胜利北京中医药大学中药学院北京102488 北京中医药大学中药学院中药现代研究中心北京100029 中药材规范化生产教育部工程研究中心北京100102

大黄是多基原大宗常用药材,不同基原大黄其药理活性存在一定差异。本研究基于叶绿体基因matK序列对市售大黄饮片的种质资源进行鉴定,通过UPLC对其总蒽醌和游离蒽醌含量进行测定,以期确定市售大黄的主要种质及质量。本研究从27省40市收... 详细信息

大黄是多基原大宗常用药材,不同基原大黄其药理活性存在一定差异。本研究基于叶绿体基因matK序列对市售大黄饮片的种质资源进行鉴定,通过UPLC对其总蒽醌和游离蒽醌含量进行测定,以期确定市售大黄的主要种质及质量。本研究从27省40市收集89份市售大黄样品并提取DNA,通过PCR扩增matK基因,扩增的matK基因序列的分析结果表明,收集的市售大黄样品都是同一基原,即掌叶大黄,共鉴定了其8个基因型:Rp1、Rp2、Rp3、Rp4、Rp5、Rp6、Rp10和Rp12,其中来自甘肃、四川和云南省的Rp4和Rp6是主要流通基因型,分别占总样品量40.45%和37.08%。系统发育树结果表明,8个基因型主要分成2大支,其中主要基因型Rp4和Rp6聚在同一大支,遗传距离分析结果表明8个基因型遗传距离在0.001~0.010之间。利用UPLC检测市场样品中的总蒽醌和游离蒽醌含量结果表明,93.26%样品符合药典标准。样品之间总蒽醌含量和游离蒽醌的含量差异显著,其中游离蒽醌相差1.01%;总蒽醌含量相差3.79%,说明市售大黄样品质量存在参差不齐的现象,但是不同采集省份之间市售大黄总蒽醌和游离蒽醌含量没有显著性差异,各基因型之间的大黄样品中总蒽醌和游离蒽醌含量没有显著性差异。本文对大黄市场样品的种质资源、产地来源和药材质量进行研究,有利于指导大黄市场样品流通及临床科学合理用药,为其他中药材市场样品种质及质量鉴定提供参考。

关键词：大黄 matK基因分子鉴定质量评价

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三七PnMYB1R1基因的克隆、亚细胞定位与不同胁迫下的表达分析

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药学学报 2022年第5期57卷 1506-1515页

作者：石玥满金辉江伟业张靖晗张志飞尹光耀王馨黄钰莹张媛王晓晖魏胜利北京中医药大学中药学院北京102488 北京中医药大学中药学院中药现代研究中心北京100029 中药材规范化生产教育部工程研究中心北京100102

MYB转录因子是植物中最大的转录因子家族之一,在植物信号转导、生长发育和植物防御反应中起到重要作用。本研究以三七(Panax notoginseng)为材料,设计特异引物,克隆了三七中1R-MYB转录因子PnMYB1R1基因,并进行氨基酸序列分析、原核表达... 详细信息

MYB转录因子是植物中最大的转录因子家族之一,在植物信号转导、生长发育和植物防御反应中起到重要作用。本研究以三七(Panax notoginseng)为材料,设计特异引物,克隆了三七中1R-MYB转录因子PnMYB1R1基因,并进行氨基酸序列分析、原核表达和纯化、亚细胞定位、转录活性分析、组织特异性分析及非生物胁迫下的诱导表达分析。PnMYB1R1基因开放阅读框(ORF)长738 bp,编码245个氨基酸,蛋白分子质量27.0 kD。序列分析及系统进化树结果表明PnMYB1R1包含1个保守的R3结构域,属于1R-MYB型转录因子中的TRF-like类蛋白。构建原核表达载体pET28a-PnMYB1R1并在大肠杆菌BL21(DE3)菌株中成功表达PnMYB1R1重组蛋白,纯化得到可溶性重组蛋白。亚细胞定位实验结果表明PnMYB1R1定位于植物细胞的细胞核中。转录活性分析显示PnMYB1R1转录因子具有转录激活活性。实时荧光定量PCR结果表明PnMYB1R1基因在三七主根中表达量最高,茎、叶次之,须根中表达量最低。盐、低温及干旱胁迫均能够影响主根、须根、茎、叶中PnMYB1R1基因的表达水平,其中盐胁迫能够显著提高主根、须根、茎和叶中PnMYB1R1基因的表达水平。本研究为进一步揭示1R-MYB转录因子在三七中防御反应中作用奠定基础。

关键词：三七 PnMYB1R1 原核表达亚细胞定位转录活性表达分析

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人参炔三醇抑制氧化低密度脂蛋白诱导泡沫细胞形成的作用机制研究

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环球中医药 2023年第8期16卷 1502-1507页

作者：靳凤玉赵一慕高云阴紫钰马家乐王凌潇赵云芳郑姣北京中医药大学中医药研究院中药现代研究中心 100029 北京中医药大学中药学院 100029

目的探讨人参炔三醇(panaxytriol,PXT)抑制氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,oxLDL)诱导单核巨噬细胞脂质沉积的作用机制。方法单核细胞THP-1经佛波酯(phorbol-12-myristate-13-acetate,PMA)诱导成巨噬细胞后,采用不同浓度(0、1、5、10、20μmol/L)PXT处理单核巨噬细胞24小时,通过MTT法检测其对细胞存活率的影响。THP-1单核巨噬细胞经PMA刺激后,利用oxLDL诱导脂质蓄积,PXT处理后利用流式细胞仪,荧光显微镜和油红O染色检测巨噬细胞对oxLDL的摄取。采用Western blot检测细胞内白细胞分化抗原36(cluster of differentiation,CD36)、三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ATP-binding cassette transporter A1,ABCA1)、清道夫受体B1(scavenger receptor class B type 1,SRB1)的蛋白表达水平变化。结果MTT实验结果显示,与正常组比较,20μmol/L PXT处理THP-1单核巨噬细胞24小时后显著抑制了细胞活力(P<0.05),且其他浓度对细胞活力均无显著影响。流式细胞检测、细胞荧光成像和油红O染色结果显示,与模型组比较,PXT浓度依赖地降低巨噬细胞内DiI-oxLDL荧光强度与细胞内脂质蓄积(P<0.05)。Western blot结果显示,与模型组比较,PXT浓度依赖地降低了巨噬细胞中CD36蛋白的表达(P<0.05),而对其他蛋白无显著影响。结论PXT通过抑制清道夫受体CD36的表达,抑制巨噬细胞对oxLDL的吞噬及泡沫细胞的形成,具有潜在的抗动脉粥样硬化活性。

关键词：氧化低密度脂蛋白泡沫细胞人参炔三醇白细胞分化抗原36 三磷酸腺苷结合盒转运体A1 清道夫受体B1

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多酶催化级联反应在天然产物酶法合成中的应用研究进展

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中国中药杂志 2023年第2期48卷 336-348页

作者：黄文倩王迎夏田维圣王娟屠鹏飞王晓晖史社坡刘晓北京中医药大学中药现代研究中心北京100029 北京大学药学院天然药物及仿生药物国家重点实验室北京100191

酶作为一种生物催化剂,具有催化效率高、反应选择性强、目标产物专一、反应条件温和、环境友好等优点,是合成复杂有机分子的重要工具。且随着基因测序技术、分子生物学、遗传操作等技术的不断发展,酶的多样性稳步增加,可催化的反应类型... 详细信息

酶作为一种生物催化剂,具有催化效率高、反应选择性强、目标产物专一、反应条件温和、环境友好等优点,是合成复杂有机分子的重要工具。且随着基因测序技术、分子生物学、遗传操作等技术的不断发展,酶的多样性稳步增加,可催化的反应类型也逐步多元化。在酶催化合成过程中,大多数简单反应通过单酶催化即可完成,而很多复杂反应的发生往往需要2个或以上的酶参与催化。因此,将多个酶组合到一起,构建多酶催化级联反应已逐渐成为生物化学领域的一个研究热点。如今,越来越多结构复杂的天然产物的生物合成途径得到解析,具有新颖催化活性的次级代谢酶不断被鉴定、发现并组合应用于结构多样性天然/非天然小分子的酶法合成中。该文总结了一系列多酶催化级联反应的例子,着重介绍了级联催化方法在糖类、核苷类、黄酮类、萜类、生物碱类以及手性分子等化合物合成中的应用,并对多酶催化级联方法目前存在的问题、解决对策及未来发展方向进行了讨论与展望。

关键词：酶催化生物催化多酶催化级联反应

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管花肉苁蓉花中二氢黄酮醇4-还原酶的克隆、表达分析和酶活性鉴定

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药学学报 2023年第4期58卷 1079-1089页

作者：邱海玲王方明高博闻米芯雨张泽坤杜宇史社坡屠鹏飞王晓晖北京中医药大学中药学院北京102488 北京中医药大学中药学院中药现代研究中心北京100029 北京大学药学院天然药物及仿生药物国家重点实验室北京100191 包头医学院内蒙古包头014060

二氢黄酮醇4-还原酶(dihydroflavonol 4-reductase,DFR)是花色素苷生物合成途径的关键酶,在植物花色调控中发挥重要作用。本研究通过管花肉苁蓉花转录组数据分析,利用RT-PCR技术克隆出一条DFR基因并命名为CtDFR,其开放阅读框(ORF)长1263... 详细信息

二氢黄酮醇4-还原酶(dihydroflavonol 4-reductase,DFR)是花色素苷生物合成途径的关键酶,在植物花色调控中发挥重要作用。本研究通过管花肉苁蓉花转录组数据分析,利用RT-PCR技术克隆出一条DFR基因并命名为CtDFR,其开放阅读框(ORF)长1263 bp,编码420个氨基酸,蛋白分子质量为47.5 kDa。序列分析表明CtDFR具有NADPH结合域和底物特异性结合域。实时荧光定量PCR表明CtDFR在管花肉苁蓉的红、紫色花中高表达,相对表达量分别是白色花的4.04、19.37倍。构建原核表达载体pET-28a-CtDFR,转入大肠杆菌BL21(DE3)菌株中,成功表达CtDFR蛋白,纯化得到可溶性重组蛋白。体外酶活性分析表明,重组蛋白CtDFR能催化二氢山柰酚、二氢槲皮素、二氢杨梅素生成无色天竺葵素、无色矢车菊素、无色飞燕草素。亚细胞定位实验结果表明CtDFR主要定位于细胞质中。本研究结果表明CtDFR在管花肉苁蓉花色调控中起到重要作用,为进一步探讨管花肉苁蓉花色形成及调控机制研究奠定了基础。

关键词：管花肉苁蓉花色二氢黄酮醇4-还原酶表达分析酶活性分析亚细胞定位

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