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蛇足石杉内生真菌Cladosporium tenuissimum MT-35的代谢产物研究

天然产物研究与开发 2022年第6期34卷 981-986页

作者：石璠钰杨洪芸莫婷齐博文王雯静张蓓蓓刘晓史社坡北京中医药大学中药学院中药现代研究中心北京100029 宁夏回族医药研究所银川750021

为研究蛇足石杉内生真菌极细枝孢菌(Cladosporium tenuissimum MT-35)的代谢产物,本实验采用硅胶柱色谱及半制备液相色谱等方法从蛇足石杉极细枝孢菌*** MT-35的糙米发酵物中分离出10个化合物,根据化合物的理化性质及MS、NMR数据分别鉴... 详细信息

为研究蛇足石杉内生真菌极细枝孢菌(Cladosporium tenuissimum MT-35)的代谢产物,本实验采用硅胶柱色谱及半制备液相色谱等方法从蛇足石杉极细枝孢菌*** MT-35的糙米发酵物中分离出10个化合物,根据化合物的理化性质及MS、NMR数据分别鉴定为4-hydroxy-3-methoxy-2(1 H)-quinolinone(1)、acropyrone(2)、lumichrome(3)、(1 H-indol-3-yl)oxoacetamide(4)、1,6-dihydro-1-methyl-6-oxo-3-pyridinecarboxylic acid(5)、尿嘧啶(6)、过氧化麦角甾醇(7)、麦角固醇(8)、9(Z),12(Z)-十八碳二烯酰胺(9)、8-O-4-dehydrodiferulic acid(10)。除化合物7和8外,其他化合物均为首次从***中分离得到。对分离鉴定的化合物进行体外抗炎和抗乙酰胆碱酯酶活性筛选,结果表明化合物3、7、8、9对脂多糖诱导的小鼠单核巨噬细胞释放一氧化氮具有抑制活性,IC_(50)值分别为36.8±1.0、13.9±0.2、36.6±0.0、53.2±1.4μmol/L,其余化合物在浓度为100μmol/L时,对RAW 264.7细胞NO释放无明显抑制活性;化合物3对乙酰胆碱酯酶具有一定的抑制活性,IC_(50)为77.9±11.1μmol/L,其余化合物在浓度为100μmol/L时,对乙酰胆碱酯酶无明显抑制活性.

关键词：蛇足石杉内生真菌极细枝孢菌结构鉴定抗炎活性抗乙酰胆碱酯酶活性

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利用可溶性微针递送苦参增强银屑病治疗（英文）

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Journal of Traditional Chinese Medical Sciences 2025年第2期 277-286+333页

作者：周子涵张洁陈以文王冰冰侯萍丁紫帆张陆政王建林杨乃亮闫聪北京中医药大学生命科学学院北京中医药大学中药学院北京中医药大学现代中医药研究中心北京中医药研究院中国科学院过程工程研究所北京中医药大学东直门医院

目的：评估苦参（Sophora flavescens Ait., S. flavescens, Ku Shen）-可溶性微针（SFA-MN）对改善银屑病小鼠皮损症状的效果。方法：采用双模具成型工艺制备SFA-MN，使用20%w/v聚乙烯吡咯烷酮和15%w/v聚乙烯醇。对SFA-MN的形态、机械... 详细信息

目的：评估苦参（Sophora flavescens Ait., S. flavescens, Ku Shen）-可溶性微针（SFA-MN）对改善银屑病小鼠皮损症状的效果。方法：采用双模具成型工艺制备SFA-MN，使用20%w/v聚乙烯吡咯烷酮和15%w/v聚乙烯醇。对SFA-MN的形态、机械性能、体外溶解性、成分鉴定及对咪喹莫特诱导的银屑病小鼠皮损症状的改善效果进行评估。结果：SFA-MN表现出良好的机械性能，能够有效穿透真皮层，促进药物高效递送。此外，它显著抑制了银屑病小鼠背部病变区域的肥大细胞水平，并降低了T淋巴细胞因子CD3和肿瘤坏死因子TNF-α的阳性表达。同时，该微针贴片缓解了银屑病样小鼠模型的皮肤炎症、脾脏肿胀和胸腺萎缩。通过比较次级碎片的质量核比（m/z），从SFA-MN中检测到七种主要成分：N-甲基金雀花碱、5α, 9α-二羟基苦参碱、槐胺碱、苦参碱、氧化槐果碱、氧化苦参碱和苦参醇O。结论：将传统中草药苦参与可溶性微针技术相结合的药物递送策略，为治疗银屑病样小鼠模型提供了更具针对性和有效性的免疫调节作用，与模型组相比显著增强了治疗效果。

关键词：可溶性微针苦参银屑病免疫调节药物递送

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丹参SmRopGEF1基因的克隆、亚细胞定位与表达分析

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中国现代中药 2023年第6期25卷 1199-1206页

作者：陈颖满金辉石玥黄钰莹张晓芹王馨刘珊瑚何高洁安克露王晓晖魏胜利北京中医药大学中药学院北京102488 北京中医药大学生命科学学院北京102488 北京中医药大学北京中医药研究院中药现代研究中心北京102488

目的:克隆丹参SmRopGEF1基因,研究其编码蛋白的亚细胞定位及其对逆境胁迫的应激反应和激素诱导下的表达水平。方法:根据前期丹参转录组测序结果设计SmRopGEF1基因特异引物,利用聚合酶链式反应(PCR)扩增SmRopGEF1基因序列;使用生物信息... 详细信息

目的:克隆丹参SmRopGEF1基因,研究其编码蛋白的亚细胞定位及其对逆境胁迫的应激反应和激素诱导下的表达水平。方法:根据前期丹参转录组测序结果设计SmRopGEF1基因特异引物,利用聚合酶链式反应(PCR)扩增SmRopGEF1基因序列;使用生物信息学方法分析SmRopGEF1蛋白序列特征及进化关系;构建pET28a-SmRopGEF1原核表达载体并转化至大肠埃希氏菌中诱导表达,构建35S启动的SmRopGEF1的绿色荧光蛋白原生质体瞬时表达载体,利用激光共聚焦显微镜观察SmRopGEF1的亚细胞定位;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测逆境胁迫(低温、盐及干旱)和激素诱导(生长素、脱落酸、茉莉酸甲酯)下的基因表达量。结果:丹参SmRopGEF1基因开放阅读框(ORF)全长为1701 bp,编码566个氨基酸,蛋白相对分子质量是62362.99。生物信息学分析显示SmRopGEF1蛋白含有1个PRONE保守结构域,系统进化树分析表明SmRopGEF1蛋白与芡欧鼠尾草和一串红RopGEF1蛋白为高同源蛋白。成功构建pET28a-SmRopGEF1原核表达载体并在大肠埃希氏菌Rosetta(DE3)菌株中表达、纯化出SmRopGEF1重组蛋白。亚细胞定位的结果显示SmRopGEF1存在于植物细胞的细胞核中。qRT-PCR实验结果表明盐胁迫和冷胁迫能够显著提高SmRopGEF1的表达量;干旱胁迫后丹参愈伤中SmRopGEF1表达量下降。茉莉酸甲酯诱导后SmRopGEF1表达量升高。结论:克隆了丹参SmRopGEF1基因,其在抗逆胁迫中起到重要作用并且可能参与茉莉酸甲酯信号转导。研究结果丰富了丹参防御反应机制的研究,为选育丹参抗逆优良品种、提高丹参的产量与品质提供了参考。

关键词：丹参鸟嘌呤核苷酸交换因子序列分析基因表达

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指纹图谱及网络药理学联合分析芪胶升白胶囊的药效成分及机制

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中国中药杂志 2023年第6期48卷 1526-1534页

作者：王倩姜俊许霞张仕林刘莉宋青青李军北京中医药大学中药学院中药现代研究中心北京102488 山东省食品药品检验研究院山东济南250100 贵州汉方药业有限公司贵州贵阳550000

芪胶升白胶囊(以下简称芪胶)具有补血益气的功效,临床常用于癌症的辅助治疗,防治肿瘤放化疗所引起的白细胞减少症,但其作用机制尚不明确。该研究基于指纹图谱和网络药理学预测分析芪胶的药效成分及作用机制。首先,采用HPLC建立20批芪胶... 详细信息

芪胶升白胶囊(以下简称芪胶)具有补血益气的功效,临床常用于癌症的辅助治疗,防治肿瘤放化疗所引起的白细胞减少症,但其作用机制尚不明确。该研究基于指纹图谱和网络药理学预测分析芪胶的药效成分及作用机制。首先,采用HPLC建立20批芪胶的指纹图谱,并利用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》(2012版)对结果进行相似度评价,结果显示相似度大于0.97。同时,通过对照品指认了其中阿魏酸、毛蕊异黄酮苷、刺芒柄花苷、毛蕊异黄酮、朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷、芒柄花黄素、宝霍苷I和Z-藁本内酯等11个共有峰。采用网络药理学方法建立芪胶“成分-靶标-通路”网络,并结合文献,分析得出芪胶中阿魏酸、毛蕊异黄酮苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮等10个关键成分,可能通过调控EGFR、RAF1、PIK3R1和RELA等10个潜在靶标,参与PI3K-Akt和MAPK等关键信号通路辅助治疗肿瘤、癌症及白细胞减少症。采用AutoDock Vina对关键靶点和成分进行分子对接验证,对接结合能均小于-5 kcal·mol^(-1),表明10个关键成分与各潜在的靶标具有良好的结合活性。综上,该研究建立了芪胶HPLC指纹图谱,结合网络药理学方法初步揭示了芪胶的药效成分及作用机制,为芪胶质量控制与深入的开发提供参考。

关键词：芪胶升白胶囊指纹图谱网络药理学癌症白细胞减少症

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基于血浆代谢组学和网络药理学探讨芎芷地龙汤治疗偏头痛的作用机制

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Journal of Traditional Chinese Medical Sciences 2023年第4期10卷 427-439,522页

作者：刘美斯王青卢姿含王力苇赵仕博 Shi Selinda 赵永烈北京中医药大学第三附属医院脑病科中国人民解放军总医院第六医学中心中医科北京中医药大学中药学院中药现代研究中心华盛顿大学医学中心移植中心

目的:基于网络药理学和血浆代谢组学探讨芎芷地龙汤(Xiongzhi Dilong decoction,XZDLD)对降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)诱导的偏头痛的作用机制。方法:采用超高效液相色谱-线性离子阱-静电场轨道阱高分辨质谱... 详细信息

目的:基于网络药理学和血浆代谢组学探讨芎芷地龙汤(Xiongzhi Dilong decoction,XZDLD)对降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)诱导的偏头痛的作用机制。方法:采用超高效液相色谱-线性离子阱-静电场轨道阱高分辨质谱法(ultra-high-performance liquid chromatography-linear trap quadrupole orbitrap mass spectrometry,UPLC-LTQ-Orbitrap-MS)对XZDLD的化学成分进行鉴定。经硬脑膜套管注射CGRP建立偏头痛大鼠模型,通过观察大鼠偏头痛样行为、测定机械痛阈和温度痛阈评估XZDLD治疗偏头痛的疗效。基于网络药理学和血浆代谢组学的联合分析识别其治疗偏头痛的关键靶点,并应用蛋白免疫印迹法和免疫组织化学对相关蛋白进行验证。结果:应用UPLC-LTQ-Orbitrap-MS共识别出方中38个化合物。与模型大鼠相比,XZDLD各组在前30分钟显著改善了偏头痛样行为(均P<0.05),并在第19‒22天提高了机械痛阈(均P<0.05),在第20‒22天提高了温度痛阈(均P<0.05)。基于网络药理学识别出128个XZDLD治疗偏头痛的潜在靶点。基于血浆代谢组学识别出在对照组、模型组和XZDLD组中有17种不同的内源性代谢产物,主要与色氨酸和酪氨酸代谢途径相关。将二者联合分析后确定了6个关键靶点进行验证:MAOA、MAOB、CYP1A1、CYP1A2、CYP1B1和ADH1C。与模型组相比,XZDLD显著降低了MAOA、MAOB和CYP1B1蛋白的表达(P=0.024;P=0.004;P=0.039),并升高了CYP1A1、CYP1A2和ADH1C的表达(P=0.033;P=0.045;P=0.027)。结论:芎芷地龙汤可以改善大鼠偏头痛样行为,提高痛阈,其作用机制可能与调节色氨酸和酪氨酸代谢途径有关,为其临床应用提供依据,同时为偏头痛研究提供思路。

关键词：芎芷地龙汤偏头痛超高效液相色谱-线性离子阱-静电场轨道阱高分辨质谱法网络药理学血浆代谢组学

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白木香细胞色素P450还原酶基因的克隆、表达与功能鉴定

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药学学报 2022年第8期57卷 2423-2429页

作者：海燕丁宁张泽坤张蓓蓓杜宇张晓雪李娜葛祥宇高博闻史社坡北京中医药大学中药学院中药现代研究中心北京100029 包头医学院内蒙古包头014060

细胞色素P450还原酶(cytochrome P450 reductase,CPR)是细胞色素P450酶电子传递链的组成部分,在生物体内起着重要的电子传递作用。本研究从白木香(Aquilaria sinensis)愈伤组织细胞中克隆得到1个CPR基因(Ascpr1),Ascpr1含有一个2124 bp... 详细信息

细胞色素P450还原酶(cytochrome P450 reductase,CPR)是细胞色素P450酶电子传递链的组成部分,在生物体内起着重要的电子传递作用。本研究从白木香(Aquilaria sinensis)愈伤组织细胞中克隆得到1个CPR基因(Ascpr1),Ascpr1含有一个2124 bp的开放阅读框,编码707个氨基酸残基,其蛋白分子质量为78.82 kD。系统进化分析显示,AsCPR1为Ⅱ型CPR蛋白,与来源于可可树(Theobroma cacao)的CPR蛋白亲缘关系较近。跨膜预测结果显示该蛋白的第52~71位氨基酸为跨膜区,在大肠杆菌Transetta(DE3)中成功表达了N-端缺失67个氨基酸残基的融合蛋白,经亲和色谱纯化后获得对细胞色素C具有还原能力的融合蛋白AsCPR1。本研究结果为进一步研究P450酶参与的白木香防御物质合成及CPR在白木香防御反应中的作用奠定基础。

关键词：白木香细胞色素P450还原酶基因克隆沉香

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管花肉苁蓉实时荧光定量PCR分析中内参基因的选择和验证

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植物生理学报 2021年第4期57卷 969-981页

作者：李铁铮王金铃刘晓王晓晖北京中医药大学中药学院中药现代研究中心北京100029 北京中医药大学中药学院北京100029

本实验基于管花肉苁蓉的转录组数据,选择了12个常用候选内参基因,研究其在管花肉苁蓉不同组织中以及不同非生物胁迫下的稳定性。利用geNorm、NormFinder和BestKeeper三种常用软件计算候选内参基因的稳定性,并用RefFinder对其综合稳定性... 详细信息

本实验基于管花肉苁蓉的转录组数据,选择了12个常用候选内参基因,研究其在管花肉苁蓉不同组织中以及不同非生物胁迫下的稳定性。利用geNorm、NormFinder和BestKeeper三种常用软件计算候选内参基因的稳定性,并用RefFinder对其综合稳定性进行评价。实验结果表明,在愈伤组织中,EF-1α和ACT是干旱胁迫下内参基因的最佳组合;RPL和PP2A是盐处理下最稳定的两个内参基因;重金属胁迫下,H2A和F-box是最合适的内参基因,而ACT和F-box是冷处理和水杨酸处理下最稳定的内参基因;茉莉酸甲酯处理样本中最合适的内参基因是α-TUB2、F-box和GAPDH。种子中,EF-1α与F-box是脱落酸处理下的最佳内参基因;EF-1α和H2A结合分别是赤霉素处理下最合适的内参基因;而ACT和DNAj是氟啶酮处理下最稳定的内参基因。此外,DNAj和F-box被认为是最适合管花肉苁蓉中各组织的内参基因组合。本研究还对愈伤组织中G6PDH1和G6PDH2在不同非生物胁迫条件下的相对表达水平进行了研究,证明内参基因的选择对实时荧光定量PCR结果精确度有很大影响。

关键词：实时荧光定量PCR 管花肉苁蓉内参基因基因表达

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龙血竭抗肿瘤作用研究进展

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中国中药杂志 2021年第8期46卷 2037-2044页

作者：田颖颖杨爱琳陈孝男李嘉琪唐雷梦媛黄惠铭刘亚鑫邱海玲欧阳里山李军屠鹏飞胡仲冬北京中医药大学中药学院中药现代研究中心北京100029

作为我国的传统中药,龙血竭具有活血化瘀、软坚散结、收敛止血、清肿止痛、调经理血等功效,被誉为"活血圣药",临床上其已被广泛应用于治疗多种疾病。随着对龙血竭研究的深入,其在抗肿瘤方面的药用价值不断显现。现代药理研究... 详细信息

作为我国的传统中药,龙血竭具有活血化瘀、软坚散结、收敛止血、清肿止痛、调经理血等功效,被誉为"活血圣药",临床上其已被广泛应用于治疗多种疾病。随着对龙血竭研究的深入,其在抗肿瘤方面的药用价值不断显现。现代药理研究表明,龙血竭发挥抗肿瘤作用主要是通过抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡、诱导DNA损伤和细胞周期阻滞、诱导肿瘤细胞衰老、诱导肿瘤细胞自噬、抑制肿瘤细胞的转移能力和血管生成以及逆转肿瘤细胞多药耐药性等机制来实现的。该文重点总结了龙血竭提取物及其化学成分在抗肿瘤方面的研究进展,以期为龙血竭的深入研究和开发利用提供新的参考。

关键词：龙血竭抗肿瘤作用机制

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肿瘤耐药性产生机制及中药逆转作用的研究进展

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中国实验方剂学杂志 2022年第1期28卷 92-99页

作者：黄惠铭杨爱琳田颖颖刘亚鑫欧阳里山屠鹏飞胡仲冬北京中医药大学中药学院中药现代研究中心北京100029 滨州医学院药学院山东烟台264003

恶性肿瘤严重危害人类生命和健康,我国癌症发病率和死亡率逐年上升,攻克肿瘤一直以来都是人类生存的一大难题。化学药物和分子靶向治疗是抗肿瘤临床通用方案,也是首选方案之一,此类药物靶标明确、疗效好,但不良反应大,且肿瘤细胞常常产... 详细信息

恶性肿瘤严重危害人类生命和健康,我国癌症发病率和死亡率逐年上升,攻克肿瘤一直以来都是人类生存的一大难题。化学药物和分子靶向治疗是抗肿瘤临床通用方案,也是首选方案之一,此类药物靶标明确、疗效好,但不良反应大,且肿瘤细胞常常产生耐药性阻碍药效的发挥,从而使肿瘤治疗变得困难,故研究耐药性的产生机制及如何逆转耐药性具有重要的意义。聚焦中药,多年研究发现,其拥有成分复杂、靶点繁多、方组内药味相辅相成、毒性小等居多特点,大量实验研究证明,中药有效成分或其提取部位能够明显抑制肿瘤细胞增殖、迁移、侵袭,诱导其凋亡、自噬、分化、衰老等。临床上已将中药运用于肿瘤的防护、辅助治疗、后期巩固等,中药研究将为逆转肿瘤细胞耐药性及抑制肿瘤细胞开启不一样的新篇章。已有研究表明,中药与化疗药物联用可逆转肿瘤细胞耐药性,增加化疗药物疗效,现已成为肿瘤治疗的主流趋势。此文就肿瘤细胞由保护性自噬、基因突变、酶系的过高表达、信号通路异常、核糖核酸和相关蛋白表达异常等所产生的耐药性机制,以及从中药中分离出的单体成分、单药或其提取部位及经典抗癌名方逆转肿瘤细胞耐药性的机制进行综述,为进一步研究中药抗肿瘤作用奠定基础。

关键词：肿瘤逆转耐药性中药作用机制

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藏族药矮紫堇抗急性心肌缺血的网络药理学研究

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中国中药杂志 2021年第12期46卷 3058-3065页

作者：周晓春黄美雯焦顺刚戈福星陈攀龙刘长鑫高小力屠鹏飞柴兴云北京中医药大学中药学院中药现代研究中心北京100029

通过SciFinder及CNKI数据库完成化合物搜索,并在FAFdurgs4、SEA Search Server数据库进行类药性筛选,结合在OMIM、GeneCards、DurgBank等疾病靶点数据库中搜索到的急性心肌缺血相关靶点集,并借助Cytoscape软件建立“化学成分-靶点-通路... 详细信息

通过SciFinder及CNKI数据库完成化合物搜索,并在FAFdurgs4、SEA Search Server数据库进行类药性筛选,结合在OMIM、GeneCards、DurgBank等疾病靶点数据库中搜索到的急性心肌缺血相关靶点集,并借助Cytoscape软件建立“化学成分-靶点-通路-疾病”网络,预测矮紫堇抗急性心肌缺血的潜在活性成分。通过STRING数据库构建蛋白互作(PPI)网络并预测网络中的核心靶点,利用DAVID数据库、R软件对核心靶点进行富集分析,最后利用Autodock Vina等软件将网络中预测到的潜在活性成分与核心靶点进行分子对接验证。结果显示,矮紫堇与急性心肌缺血相关的化合物共60个,涉及73个潜在的靶点,GO功能富集分析得到282条生物学过程(BP)、49条细胞成分(CC)、78条分子功能(MF);KEGG富集到85条通路,涉及酒精中毒通路、内分泌抵抗通路、钙离子信号通路、cAMP信号通路、血管内皮生长因子信号通路及心肌细胞的肾上腺素能信号转导通路等。网络拓扑分析结果表明,矮紫堇抗急性心肌缺血的关键成分可能为四氢巴马汀、四氢非洲防己碱、N-反式-阿魏酰去甲辛弗林、N-顺式-对香豆酰去甲辛弗林、N-反式-对香豆酰去甲肾上腺素、N-反式-对香豆酰去甲辛弗林,核心靶点包括CDH23、SCN4B、NFASC。分子对接结果显示,矮紫堇的关键成分与核心靶点具有稳定的结合活性。该研究为进一步阐明矮紫堇抗急性心肌缺血的药效物质、后续的临床应用及开发提供了一定的参考。

关键词：矮紫堇急性心肌缺血网络药理学分子对接药效物质作用机制

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