检索结果-内蒙古大学图书馆

中华微生物学和免疫学杂志 2001年第6期21卷 594-599页

作者：史耕先刘音李琳朱立平中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院免疫学教研室北京100005

目的　采用重组腺相关病毒 (AAV)载体pAGX(+) ,把 6A8α 甘露糖苷酶基因的正义或反义DNA片段转导入EB病毒转化的B淋巴细胞 ,以获得正义或反义 6A8DNA长期表达的B淋巴细胞株。方法　构建含正义或反义 6A8DNA片段的重组pAGX(+)质粒。经包... 详细信息

目的　采用重组腺相关病毒 (AAV)载体pAGX(+) ,把 6A8α 甘露糖苷酶基因的正义或反义DNA片段转导入EB病毒转化的B淋巴细胞 ,以获得正义或反义 6A8DNA长期表达的B淋巴细胞株。方法　构建含正义或反义 6A8DNA片段的重组pAGX(+)质粒。经包装后转导淋巴细胞 ,经G418筛选 ,用有限稀释法克隆转导成功的淋巴细胞。Northern杂交和RT PCR检测转导基因的mRNA表达水平。ConA结合试验检测细胞在转导基因后 6A8α 甘露糖苷酶活性的改变。结果　pAGX 反义6A8DNA及pAGX 正义 6A8DNA经包装获得了高复制滴度的重组AAV(rAAV)颗粒 ,藉助rAAV成功地把 6A8基因转导入EB病毒转化的B细胞株SKW6和B淋巴样白血病细胞株BJAB。Northern杂交结果显示 ,转导的正义或反义 6A8DNA获得表达。经 1年余传代培养 ,RT PCR检测见BJAB和SKW6细胞中转导的正义或反义 6A8DNA的mRNA表达增加 ,新霉素抗性基因 (neoR)也获得表达 ,表明转导基因获得了长期表达。ConA结合强度在转导反义 6A8DNA的细胞升高 ,提示转导反义 6A8DNA可影响 6A8α 甘露糖苷酶的表达。结论　用AAV载体成功地把 6A8α 甘露糖苷酶基因的正义或反义DNA片段转导入EB病毒转化的B淋巴细胞SKW6和B淋巴样白血病细胞株BJAB ,转导的基因获得长期表达 ,并干扰 6A8α 甘露糖苷酶的表达。

关键词：重组腺相关病病毒 EB病毒转化 B淋巴细胞外源基因转导

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应用原位双膜法快速筛选人Flt3配体甲醇酵母高表达转化子

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生物化学与生物物理进展 2002年第2期29卷 307-310页

作者：张艳丽陈松森杨克恭狄旭熊安琪张友鸿中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

原位双膜法是一种基于免疫原理的快速筛选高表达甲醇酵母转化子的方法 ,即首先将固体培养基上的菌落转印至醋酸纤维素薄膜上 ,再利用硝酸纤维素薄膜原位捕获穿过醋酸纤维素薄膜的菌落外泌蛋白 ,然后用免疫方法检测与硝酸纤维素薄膜结合... 详细信息

原位双膜法是一种基于免疫原理的快速筛选高表达甲醇酵母转化子的方法 ,即首先将固体培养基上的菌落转印至醋酸纤维素薄膜上 ,再利用硝酸纤维素薄膜原位捕获穿过醋酸纤维素薄膜的菌落外泌蛋白 ,然后用免疫方法检测与硝酸纤维素薄膜结合的蛋白 .利用此法筛选到人Flt3配体 (hFL)的甲醇酵母高表达转化子 ,液体诱导表达量约 2 0mg L .ELISA结果证明 ,原位双膜法所得的菌落染色强度与该菌落液体诱导表达水平正相关 .蛋白质印迹结果显示 ,培养上清在 2 5ku处有明显杂交条带 ,而对照组杂交呈阴性 ,且表达量随诱导天数增加 .原位双膜法是一种良好的筛选方法 ,可以快捷、准确地筛选高表达酵母转化子 .

关键词：原位双膜法人Flt3配体甲醇酵母高表达转化子表达巴斯德毕赤酵母

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连接介导PCR及其在体内足迹研究中的应用

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生物化学与生物物理进展 1997年第3期24卷 224-227页

作者：纪新军刘德培梁植权中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

连接介导聚合酶链反应是以连接反应为基础的单侧PCR技术 ,首先在DNA片段的一端连接上一个公共连接子 ,而后在这个连接子与另一个DNA序列特异的引物间扩增 .Vent聚合酶的使用 ,延伸产物捕获及连接子标记选择策略的采用 ,大大提高了连接... 详细信息

连接介导聚合酶链反应是以连接反应为基础的单侧PCR技术 ,首先在DNA片段的一端连接上一个公共连接子 ,而后在这个连接子与另一个DNA序列特异的引物间扩增 .Vent聚合酶的使用 ,延伸产物捕获及连接子标记选择策略的采用 ,大大提高了连接介导聚合酶链反应的敏感性 .

关键词：连接介导PCR 连接子体内足迹法聚合酶链反应

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RRM RNA结合蛋白的结构与功能

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生物化学与生物物理进展 1999年第4期26卷 305-307页

作者：杜光伟周严袁建刚强伯勤中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

ＲＲＭＲＮＡ结合蛋白是一类含一个或数个ＲＲＭ结构域及附属结构域的ＲＮＡ结合蛋白，参与ＲＮＡ前体的剪接、ＲＮＡ的细胞定位、ＲＮＡ的稳定性等多种转录后调控过程．在ＲＲＭ基序中含有许多保守... 详细信息

ＲＲＭＲＮＡ结合蛋白是一类含一个或数个ＲＲＭ结构域及附属结构域的ＲＮＡ结合蛋白，参与ＲＮＡ前体的剪接、ＲＮＡ的细胞定位、ＲＮＡ的稳定性等多种转录后调控过程．在ＲＲＭ基序中含有许多保守的氨基酸以保证对ＲＮＡ的结合活性，但是这一家族的不同蛋白质却能特异地结合各种不同的ＲＮＡ分子．ＲＲＭＲＮＡ

关键词：转录后调控 RNA结合蛋白 RRM基序

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一种检测细胞微量点突变的方法——等位基因特异的PCR

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生物化学与生物物理进展 2000年第5期27卷 553-555页

作者：殷文璇刘德培李竹红梁植权中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

为了灵敏、方便地检测出细胞群体中含量极低的点突变 ,利用一 β珠蛋白基因簇Gγ 2 0 2C→G突变的杂合细胞株 ,优化传统的等位基因特异PCR的反应条件 ,以定量的PCR产物为模板 ,在含 5 %甲酰胺的体系中用半巢式的等位基因特异引物进行扩... 详细信息

为了灵敏、方便地检测出细胞群体中含量极低的点突变 ,利用一 β珠蛋白基因簇Gγ 2 0 2C→G突变的杂合细胞株 ,优化传统的等位基因特异PCR的反应条件 ,以定量的PCR产物为模板 ,在含 5 %甲酰胺的体系中用半巢式的等位基因特异引物进行扩增 .结果表明 ,该方法灵敏可靠 ,可快速检测到细胞群体中低于 0 0 2 5

关键词：等位基因特异PCR 细胞群体微量点突变检测

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恶性疟细胞毒性T淋巴细胞单表位疫苗抗原递呈细胞模型的建立

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中国医学科学院学报 2001年第4期23卷 390-394页

作者：乔苗史丽丽王恒中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院病原学系北京100005

目的构建恶性疟细胞毒性T淋巴细胞（cytotoxic T lymphocyte，CTL）单表位疫苗及建立抗原递呈细胞模型。方法一采用中国人群常见的HLAⅠ类分子A11限制的恶性疟CTL抗原表位（VTCGNGIQVR），合成其DNA序列并克隆于真核表达载体，构建CTL... 详细信息

目的构建恶性疟细胞毒性T淋巴细胞（cytotoxic T lymphocyte，CTL）单表位疫苗及建立抗原递呈细胞模型。方法一采用中国人群常见的HLAⅠ类分子A11限制的恶性疟CTL抗原表位（VTCGNGIQVR），合成其DNA序列并克隆于真核表达载体，构建CTL单表位DNA疫苗。将上述克隆在HLA-A11表型细胞株中进行表达，流式细胞仪检测细胞表面HLAⅠ类分子表达水平。结果上述CTL单表位DNA疫苗编码的短肽在细胞内的表达明显促进HLA-A11分子在细胞表面的表达，用流式细胞仪测定平均荧光强度可量化表达水平(P ＜ 0．05)。结论成功构建CTL单表位短肽表达载体，模拟体内环境建立了抗原递呈细胞模型，提示CTL表位在该细胞模型内被内源性加工和递呈，以该表位为基础的疫苗可以为HLA-A11遗传背景的人群提供免疫防护。

关键词：恶性疟 CTL表位疫苗细胞毒性T淋巴细胞人类白细胞抗原Ⅰ类分子

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硒及维生素E抑制补体-中性粒细胞活化反馈机制参与炎症应答的调控

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中国医学科学院学报 2000年第6期22卷 580-584页

作者：侯健存吴元德凌允礼中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所病理室北京100005

笔者发现并验证补体介导炎症损伤的机制是补体活化激活中性粒细胞（ PMN）呼吸爆发所释放的活性氧自由基（ ROS）能再次活化补体，在补体- PMN- ROS之间形成的这一相互反馈活化、增强炎症应答的辅助机制有其特殊的参与调节炎症应答的作... 详细信息

笔者发现并验证补体介导炎症损伤的机制是补体活化激活中性粒细胞（ PMN）呼吸爆发所释放的活性氧自由基（ ROS）能再次活化补体，在补体- PMN- ROS之间形成的这一相互反馈活化、增强炎症应答的辅助机制有其特殊的参与调节炎症应答的作用，即补体活化的抑制或 ROS的清除皆能阻滞此活化反馈机制而下调炎症应答。为验证此设想，笔者选择补体活化抑制剂亚硒酸钠（ SS）、抗氧化剂维生素 E（ VitE）与甘草类黄酮（ GF）抑制补体- PMN- ROS活化反馈机制，在试管实验中利用化学发光技术，在 PMN及补体混合培养液中以佛波酯（ TPA）或菊糖单独活化 PMN或补体后检测活性氧的产生量及补体的活化程度；并在小鼠体内实验中观察肺、肝及皮肤血管炎模型的发生率。结果证实此活化反馈上调炎症应答机制的存在；补体活化的抑制或 ROS的清除皆能抑制上调炎症应答，防止血管炎的发生，其发生率可从不服药组的 100％降至各剂量服药组的 20％～ 57％。本研究不但为阐明炎症反应的发生和调控机制提供了新的证据，而且进一步提示 PMN呼吸爆发产生 ROS是炎症反应组织损伤的生理及病理过程中的关键，因此有可能使用营养素抗氧化剂（ nutrient antioxidants）来调节生物炎症反应。以往在一次流行性出血热疫区选择 80例患者仅以亚?

关键词：补体活化反馈炎症应答调控亚硒酸钠维生素E

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犬腺病毒 1型疫苗株 E3缺失表达载体的构建

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中国医学科学院学报 2001年第1期23卷 40-44,F003页

作者：黎皓唐七义张云王树蕙郭彩云中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所病原室北京100005

探索以犬腺病毒 1型疫苗株 (Cannaught Laboratory Limited, CLL)作为病毒重组疫苗和基因转移载体的可行性。方法构建带增强型绿色荧光蛋白（ enhanced green fluorescent protein, EGFP）报告基因的 E3缺失重组病毒 CLLEGFP。将 CLLEGF... 详细信息

探索以犬腺病毒 1型疫苗株 (Cannaught Laboratory Limited, CLL)作为病毒重组疫苗和基因转移载体的可行性。方法构建带增强型绿色荧光蛋白（ enhanced green fluorescent protein, EGFP）报告基因的 E3缺失重组病毒 CLLEGFP。将 CLLEGFP感染各种人源细胞，并以灌胃、腹腔注射、尾静脉注射和肌肉注射等不同途径接种昆明小鼠。多时间点取小鼠组织标本，冷冻干燥切片，观察 EGFP的表达。 4周后采集小鼠血清，以 Western blot分析抗 EGFP抗体的产生。结果 CLLEGFP能够感染各种人源细胞并表达 EGFP。在腹腔接种 CLLEGFP 3 d的小鼠肝组织细胞中可见转导的 EGFP。 Western blot分析显示，以各种途径免疫接种重组病毒 4周后的小鼠血清中均存在抗 EGFP特异抗体。结论 CLL具有开发成为病毒重组疫苗和基因转移载体的潜力。

关键词：重组犬腺病毒1型疫苗株绿色荧光蛋白EGFP 表达载体

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吗啡长时程作用对SH-SY5Y细胞cAMP系统及c-Fos磷酸化的影响

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中国医学科学院学报 1999年第4期21卷 262-267页

作者：方芳曹清宋福津刘景生中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所药理室北京100005

目的　探讨吗啡长时作用下分化的人成神经瘤ＳＨＳＹ５Ｙ细胞中ｃＡＭＰ系统变化以及ＰＫＡ对转录因子ｃＦｏｓ的磷酸化调节。方法　采用蛋白竞争结合法、酶活性测定法及同位素掺入法分别观察ｃＡＭＰ、ＰＫＡ及ｃＦｏｓ的变化... 详细信息

目的　探讨吗啡长时作用下分化的人成神经瘤ＳＨＳＹ５Ｙ细胞中ｃＡＭＰ系统变化以及ＰＫＡ对转录因子ｃＦｏｓ的磷酸化调节。方法　采用蛋白竞争结合法、酶活性测定法及同位素掺入法分别观察ｃＡＭＰ、ＰＫＡ及ｃＦｏｓ的变化。结果　（１）１００μｍｏｌ／Ｌ吗啡作用２ｍｉｎ～３６ｈ可使ＳＨＳＹ５Ｙ细胞ｃＡＭＰ水平呈双相变化：短时作用下ｃＡＭＰ水平降低，随着吗啡作用时间的延长，ｃＡＭＰ水平逐渐回升，至３６ｈ时明显高于对照，这时加入１００ μｍｏｌ／Ｌ纳洛酮可诱发ｃＡＭＰ水平的反弹性超高现象。表明吗啡作用３６ｈ可使分化的ＳＨＳＹ５Ｙ细胞产生类吗啡依赖样变化；（２）吗啡长时作用下，胞质可溶相ＰＫＡ活性也呈双相变化，而膜相ＰＫＡ活性未见明显变化；（３）吗啡作用３６ｈ时，细胞ｃＦｏｓ磷酸化水平显著降低，ＰＫＡ抑制剂可抑制此作用；（４）纳洛酮可抑制上述ＰＫＡ活性及ｃＦｏｓ磷酸化水平的改变。结论　ＳＨＳＹ５Ｙ细胞ｃＡＭＰＰＫＡ系统的上调可能与吗啡依赖的形成有关，而且在吗啡依赖样细胞中ＰＫＡ可能通过磷酸酶而使细胞ｃＦｏｓ发生去磷酸化，从而激活某些基因的转录。

关键词：吗啡蛋白激酶A c-Fos磷酸化 cAMP 吗啡依赖

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MICA反应性Vδ1γδT细胞对上皮肿瘤细胞的细胞毒作用

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中国医学科学院学报 2004年第1期26卷 1-7页

作者：齐锦彭萍戴梦华李勇海崔莲仙何维中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所免疫室北京100005

目的研究人类MHCⅠ类链相关基因A(MICA)是否可以在体外诱导Vδ1γδT细胞的扩增,并且对MICA反应性Vδ1γδT细胞的细胞毒作用进行初步研究。方法采用分子克隆技术原核表达并纯化MICA蛋白,使用重组MICA蛋白在体外诱导肿瘤组织中的Vδ1γ... 详细信息

目的研究人类MHCⅠ类链相关基因A(MICA)是否可以在体外诱导Vδ1γδT细胞的扩增,并且对MICA反应性Vδ1γδT细胞的细胞毒作用进行初步研究。方法采用分子克隆技术原核表达并纯化MICA蛋白,使用重组MICA蛋白在体外诱导肿瘤组织中的Vδ1γδ肿瘤浸润T淋巴细胞(TILs),3-(4,5-二甲基噻唑-乙-YL)-2,5-二甲基-四唑溴盐(MTT)法检测MICA反应性Vδ1γδTILs的细胞毒活性。结果原核表达系统pET30表达并纯化了MICA;固相化的MICA蛋白可以诱导肿瘤组织中的Vδ1γδTILs在体外扩增,同时Vδ1γδTILs对MICA+的肿瘤细胞具有明显杀伤活性。结论MICA反应性Vδ1γδT细胞可能是肿瘤过继免疫治疗的新的候选效应细胞。

关键词：人类MHC Ⅰ类链相关基因A Vδ1 γδT细胞肿瘤浸润淋巴细胞人卵巢上皮肿瘤

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