检索结果-内蒙古大学图书馆

应用酵母单杂交体系筛选与大鼠谷胱甘肽S-转移酶P增强子GPEⅠ相互作用的转录激活因子

中国医学科学院学报 2000年第4期22卷 317-321页

作者：廖名湘左瑾刘东远方福德中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的　探讨谷胱甘肽 S-转移酶 (GST- P)基因表达调控机制的多样性及其与化学致癌的关系 ,筛选与大鼠 GST- P增强子元件 GPE 相互作用的调控因子。方法　采用酵母单杂交体系筛选与 GPE 核心序列相互作用的转录激活因子 ,应用 DNA序列测... 详细信息

目的　探讨谷胱甘肽 S-转移酶 (GST- P)基因表达调控机制的多样性及其与化学致癌的关系 ,筛选与大鼠 GST- P增强子元件 GPE 相互作用的调控因子。方法　采用酵母单杂交体系筛选与 GPE 核心序列相互作用的转录激活因子 ,应用 DNA序列测定及计算机分析等手段对所测的 DNA序列进行分析。结果　共获得两个阳性克隆 p YGPE1和 p YGPE2。 DNA测序分析表明 :p YGPE1的插入片段与大鼠原癌基因 c- jun c DNA具有 99%的同源性 ,其编码的氨基酸序列与大鼠 c- Jun蛋白具有 10 0 %的同源性。 p YGPE2的插入片段与大鼠线粒体腺苷酸转位酶 c DNA具有 99%的同源性 ,其编码的氨基酸序列与大鼠腺苷酸转位酶具有 10 0 %的同源性。结论　大鼠 c- Jun蛋白和线粒体腺苷酸转位酶在酵母细胞内与大鼠 GST- P增强子 GPE 核心序列结合 ,可能是作用于 GPE 的反式作用因子。

关键词：酵母单杂交体系谷胱甘肽S-转移酶增强子GPE Ⅰ

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丝裂原活化蛋白激酶信号途径在热休克蛋白90基因表达中的作用

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中国医学科学院学报 2000年第4期22卷 327-331页

作者：李江伟吴宁华沈珝琲中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的　研究丝裂原活化蛋白激酶 - (MAPK)信号传导途径对 Jurkat细胞中热休克蛋白 90基因(hsp90 )表达的影响。方法　用 Western免疫印迹 -增强型化学发光系统 (ECL)检测热休克前后 Jurkat细胞胞外信号调节激酶 (ERK)、p38激酶及 c- Jun... 详细信息

目的　研究丝裂原活化蛋白激酶 - (MAPK)信号传导途径对 Jurkat细胞中热休克蛋白 90基因(hsp90 )表达的影响。方法　用 Western免疫印迹 -增强型化学发光系统 (ECL)检测热休克前后 Jurkat细胞胞外信号调节激酶 (ERK)、p38激酶及 c- Jun N-末端蛋白激酶 (JNK)的底物 c- Jun的磷酸化程度 ;分别用 JNK1的显性负突变质粒 DN- JNK1、p38c DNA反义表达质粒 anti- p38及 ERK激酶的特异性抑制剂 PD980 5 9瞬时转染或处理Jurkat细胞 ,再行 RT- PCR检测 hsp90 α和 hsp90 β基因的表达水平。分别以转染空载体 (p CDNA3)及未经任何处理的 Jurkat细胞作为相应对照组。结果　 45℃热休克 15 min后 ,Jurkat细胞中 JNK1和 p38激酶的磷酸化程度与热休克前相比明显增强 ,ERK的磷酸化较热休克前有所增强。转染 DN- JNK1的细胞中 hsp90 α和 hsp90 β基因的组成性和热诱导表达均较转染空载体的对照组降低 ,尤其对 hsp90 α基因的热诱导表达的影响更为明显 (仅为对照组的6 8% ) ;转染 anti- p38后 ,hsp90 α基因的组成性表达和 hsp90 β基因热诱导表达分别比转染空载体的对照组增加2 6 %和 2 2 % ;经 PD980 5 9处理的 Jurkat细胞中 ,hsp90 α基因的组成性表达比未处理的细胞增加 46 % ,但 PD980 5 9处理对 hsp90 α和

关键词：丝裂原活化蛋白酶信号途径热休克蛋白90

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白血病细胞系中B-Raf与Raf-1的表达及活性

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中国医学科学院学报 2000年第6期22卷 533-535页

作者：张静刘彦信刘士廉郑德先中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的研究白血病细胞及正常人外周血淋巴细胞中的 B- Raf和 Raf- 1表达水平及激酶活性。方法利用 Western印迹法检测 B- Raf和 Raf- 1表达水平，利用免疫沉淀及 Western印迹法检测 Raf- 1及 B- Raf的激酶活性。结果 Raf- 1在白血病细胞... 详细信息

目的研究白血病细胞及正常人外周血淋巴细胞中的 B- Raf和 Raf- 1表达水平及激酶活性。方法利用 Western印迹法检测 B- Raf和 Raf- 1表达水平，利用免疫沉淀及 Western印迹法检测 Raf- 1及 B- Raf的激酶活性。结果 Raf- 1在白血病细胞及正常人外周血淋巴细胞中均有表达 ,表达水平基本相似，其激酶活性较低； B- Raf仅在白血病细胞中表达，且在 Jurkat和 K562细胞中的表达水平较高，其激酶活性也较高。结论在白血病细胞中， B- Raf的高表达及活化可能是白血病发病的机制之一。

关键词： Raf-1 B-Raf 激酶活性白血病细胞

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血管紧张素转换酶基因缺失纯合型与糖尿病肾病相关联

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基础医学与临床 2000年第5期20卷 27-29页

作者：陈素杰周哲陈孟芝徐茜董瑞琴杨晓娟邱长春中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院分子生物学室中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院分子生物学室

应用PCR 扩增方法检测203 例NIDDM 患者和165 例正常对照者血管紧张素(ACE)基因的16 内含子中287bp 片段缺失/插入多态性。结果显示，糖尿病肾病患者组ACE 基因缺失纯合型(DD)频率明显高于非肾病组和正常对照组，P<0.001；DD 缺失纯... 详细信息

应用PCR 扩增方法检测203 例NIDDM 患者和165 例正常对照者血管紧张素(ACE)基因的16 内含子中287bp 片段缺失/插入多态性。结果显示，糖尿病肾病患者组ACE 基因缺失纯合型(DD)频率明显高于非肾病组和正常对照组，P<0.001；DD 缺失纯合型患者肾病进展速度明显快于缺失/插入(DI)杂合型及插入/插入(II)纯合型糖尿病患者，P<0.01。表明ACE 基因缺失纯合型是糖尿病肾病的独立危险因素之一，并可作为NIDDM 肾病发生发展的有效预测指标。

关键词：血管紧张素转换酶基因多态性糖尿病肾病

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单核苷酸多态性的研究进展

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中国医学科学院学报 2000年第4期22卷 392-394页

作者：杜玮南孙红霞方福德中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

单核苷酸多态性 (SNP)是指在基因组水平上由单个核苷酸的变异所引起的一种 DNA序列多态性。SNP现象在人类基因组中广泛存在 ,并具有很高的信息含量。目前已发现数万个 SNP标记 ,且有多个生物医学网站开辟了专页对其加以介绍。随着对 SN... 详细信息

单核苷酸多态性 (SNP)是指在基因组水平上由单个核苷酸的变异所引起的一种 DNA序列多态性。SNP现象在人类基因组中广泛存在 ,并具有很高的信息含量。目前已发现数万个 SNP标记 ,且有多个生物医学网站开辟了专页对其加以介绍。随着对 SNP检测和分析技术的进一步发展 ,尤其是与 DNA芯片等技术的结合 ,它已成为第三代遗传标记 ,初步满足对疾病相关基因定位研究的需要 ,尤其是对多基因遗传病高精度基因定位的要求 ,并将最终取代目前最常用的微卫星标记技术进入基因应用研究的领域。

关键词：单核苷酸多态性遗传标记基因研究 DNA芯片

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DNA重新甲基化酶3b在成年及新生小鼠部分组织中的选择性剪接表达

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中国医学科学院学报 2000年第4期22卷 312-316页

作者：林岚许琪张焱尹斌范钰罗一菁韩少梅张正国吴冠芸沈岩中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的　探讨哺乳动物 DNA重新甲基转移酶 3b(Dnm t3b)在新生及成年小鼠多种组织中的选择性剪接表达。方法　采用 RT- PCR结合毛细管电泳分析新生及成年小鼠主要器官中 Dnmt3b的选择性剪接表达产物 ,并通过计算机分析 Dnm t3b外显子 10和... 详细信息

目的　探讨哺乳动物 DNA重新甲基转移酶 3b(Dnm t3b)在新生及成年小鼠多种组织中的选择性剪接表达。方法　采用 RT- PCR结合毛细管电泳分析新生及成年小鼠主要器官中 Dnmt3b的选择性剪接表达产物 ,并通过计算机分析 Dnm t3b外显子 10和外显子 2 1、2 2选择性剪接对该基因功能可能产生的影响。结果　成年小鼠肝组织中大部分 Dnm t3b转录本保留外显子 10 ,而其它组织的大部分转录本中此序列被剪切掉。成年小鼠肺组织主要表达缺失外显子 10的 Dnmt3b转录本 ,而新生小鼠肺组织则表达保留外显子 10的转录本。亲水性及二级结构分析表明 ,选择性剪接区域编码的肽段均位于 Dnmt3b蛋白分子的表面。结论　小鼠 Dnm t3b基因的选择性剪接具有组织及发育阶段特异性 ,其选择性剪接区域编码的肽段可能与蛋白分子的调控或酶分子的靶序列识别有关。

关键词：甲基转移酶选择性剪接毛细管电泳 DNA

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染色质结构与基因活化

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中国医学科学院学报 2000年第5期22卷 403-406页

作者：沈珝琲中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

核小体是染色质的基本单位。核小体对真核基因转录的阻扼现象是在特定细胞中基因组选择表达特异基因的最重要因素之一。染色质去阻扼后出现的开放构象能促进基因转录。本文讨论染色质动态调整的本质、组蛋白乙酰基转移酶和去乙酰基酶的... 详细信息

核小体是染色质的基本单位。核小体对真核基因转录的阻扼现象是在特定细胞中基因组选择表达特异基因的最重要因素之一。染色质去阻扼后出现的开放构象能促进基因转录。本文讨论染色质动态调整的本质、组蛋白乙酰基转移酶和去乙酰基酶的作用、以及通过甲基化 CpG结合蛋白而产生对染色质结构影响的机制等。染色质的顺式元件能参与确定染色体不同节段的功能，它将为生物信息学以及为基因组学与蛋白质组学之间的连接提供不可缺少的重要资料。染色质研究已引起临床医学家的关注，其研究成果可能为疾病的诊断和治疗提供新依据或途径。染色质结构动态调整对基因转录的新的调节活性标志着由分子到细胞或整体的综合研究手段在未来生命科学研究中将日益占据更为主导的地位。

关键词：染色质基因转录组蛋白乙酰化基因活化

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维生素D_3、9-顺式维甲酸及其相应核受体对hsp90β基因表达的调控

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中国医学科学院学报 2000年第4期22卷 322-326页

作者：张洪美吴宁华沈珝琲中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的　研究维生素 D3(VD3)、9-顺式维甲酸 (9- cis- RA)及其相应核受体对 hsp90 β基因表达的调控作用。方法　采用 DEAE- Dextran方法将人 hsp90 β基因调控片段 (- 10 39bp/ +15 31bp)介导的荧光素酶 (L uc)报告基因质粒 β1.11转染 J... 详细信息

目的　研究维生素 D3(VD3)、9-顺式维甲酸 (9- cis- RA)及其相应核受体对 hsp90 β基因表达的调控作用。方法　采用 DEAE- Dextran方法将人 hsp90 β基因调控片段 (- 10 39bp/ +15 31bp)介导的荧光素酶 (L uc)报告基因质粒 β1.11转染 Jurkat细胞 ,并用 VD3和 9- cis- RA分别或同时刺激细胞 ,或将质粒 β1.11及野生型维生素D3受体 (VDR)或 /和维甲酸 X受体 α(RXRα)真核表达质粒共转染 Jurkat细胞 ,检测细胞裂解液中荧光素酶活性 ;用 Western印迹分析方法检测经 VDR真核表达质粒转染或用 VD3和 9- cis- RA刺激的 Jurkat细胞中内源性Hsp90β蛋白的改变 ;通过电泳迁移率变更分析 (EMSA)实验 ,检测 VDR和 RXR能否与含有 hsp90β基因第一内含子中维生素 D3应答元件 (i VDRE)的双链寡核苷酸片段发生特异结合。结果　 VD3和 9- cis- RA可分别低水平诱导hsp90β基因表达 ,而两种配体同时加入有协同作用。 VDR或 RXRα分别转染只能较弱地抑制 hsp90β基因表达 ,二者共转染能增强其抑制作用。 EMSA实验证实 ,VDR和 RXR都可特异结合于 i VDRE上。结论　 VD3和 9- cis- RA这两条信号途径共同参与 hsp90β基因的启动子活性调节。

关键词：维生素D3 9-顺式维甲酸维生素D3受体基因表达

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基质金属蛋白酶及其组织抑制物预测葡萄胎恶变的研究

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中华妇产科杂志 2000年第9期35卷 547-550页

作者：李志英向阳戴理程国钧张德永杨秀玉宋鸿钊湖北三峡学院医学院妇产科中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院妇产科 100730 中国医学科学院基础医学研究所遗传室解放军总医院妇产科

目的　探讨基质金属蛋白酶 (MMP 9、MMP 2 )及其组织抑制物 (TIMP 1、TIMP 2 )表达量与葡萄胎恶变的相关性。方法　提取组织总RNA ,应用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)技术检测2 2例正常早期妊娠绒毛及 37例葡萄胎组织中MMP 9、MMP 2、TI... 详细信息

目的　探讨基质金属蛋白酶 (MMP 9、MMP 2 )及其组织抑制物 (TIMP 1、TIMP 2 )表达量与葡萄胎恶变的相关性。方法　提取组织总RNA ,应用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)技术检测2 2例正常早期妊娠绒毛及 37例葡萄胎组织中MMP 9、MMP 2、TIMP 1、TIMP 2基因表达量。结果　MMP 9、MMP 2、TIMP 1及TIMP 2在葡萄胎组织及正常绒毛组织中的表达量差异无显著性 (P >0 .0 5 )。但MMP 9/TIMP 1比值在发生恶变的葡萄胎组织明显高于未发生恶变的葡萄胎组织及正常绒毛组织(P <0 .0 1) ;而MMP 2 /TIMP 2在各组织中则无明显差异。结论　MMP 9/TIMP 1与葡萄胎恶变有关 ;MMP 9与TIMP

关键词：金属蛋白酶类金属蛋白酶类组织抑制剂葡萄胎

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酵母单杂交体系——一种研究DNA-蛋白质相互作用的有效方法

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中国医学科学院学报 2000年第4期22卷 388-391页

作者：廖名湘方福德中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

酵母单杂交体系是借鉴酵母双杂交体系的基本原理 ,通过观察酵母细胞内报告基因的表达状况 ,研究DNA-蛋白质之间的相互作用。通过筛选 DNA文库可直接得到与靶序列相互作用的蛋白质基因序列 ,而无需分离、纯化蛋白 ,从而克服了体内研究的... 详细信息

酵母单杂交体系是借鉴酵母双杂交体系的基本原理 ,通过观察酵母细胞内报告基因的表达状况 ,研究DNA-蛋白质之间的相互作用。通过筛选 DNA文库可直接得到与靶序列相互作用的蛋白质基因序列 ,而无需分离、纯化蛋白 ,从而克服了体内研究的局限性。目前酵母单杂交体系已被广泛应用于寻找与目的 DNA片段相互作用的蛋白质分子 ,该体系是一种用于研究 DNA-蛋白质之间的相互作用的有效方法。本文就酵母单杂交体系的原理、具体实现方法、在研究 DNA结合蛋白质中的应用及其优缺点等方面作一简要介绍。

关键词：酵母单杂交体系 DNA-蛋白质相互作用

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