检索结果-内蒙古大学图书馆

免疫学杂志 2014年第1期30卷 6-12页

作者：方宁李丹余丽梅章涛赵春华陈代雄遵义医学院附属医院贵州省细胞工程重点实验室 563003 中国医学科学院基础医学研究所组织工程中心北京100005

目的探讨人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)对大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型的治疗效应和免疫调节作用。方法分离、培养hAMSCs,流式细胞术(FCM)检测其免疫表型;用豚鼠脊髓匀浆+完全弗氏佐剂+百日咳毒素复制大鼠EAE模型;模型动物随机... 详细信息

目的探讨人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)对大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型的治疗效应和免疫调节作用。方法分离、培养hAMSCs,流式细胞术(FCM)检测其免疫表型;用豚鼠脊髓匀浆+完全弗氏佐剂+百日咳毒素复制大鼠EAE模型;模型动物随机分为正常对照组、模型组、培养基组、hAMSCs治疗组和泼尼松治疗组,每组6只。hAMSCs治疗组经双侧侧脑室移植5×105个hAMSCs;采用Kono评分法动态观察行为学变化;采用HE染色、免疫荧光染色观察脑和脊髓病理改变以及hAMSCs在脑和脊髓内的分布;采用FCM检测外周血淋巴细胞亚群,采用流式微球阵列法(CBA)检测血浆细胞因子的含量。结果 hAMSCs治疗后EAE大鼠行为学评分逐渐减低(P<0.01),脑和脊髓炎性细胞浸润减轻。hAMSCs移植第3周,大鼠脑和脊髓组织可见较多人细胞核抗原阳性细胞即hAMSCs存活;与模型组和培养基组相比,hAMSCs治疗组外周血Treg、Th2、Tc1、Tc2淋巴细胞百分比明显升高(P<0.01或P<0.05),而Th17细胞显著减少(P<0.01);血浆Th2型细胞因子IL-4和IL-10含量升高(P<0.05或P<0.01),而Th1型细胞因子IL-2和IFN-γ含量降低(P<0.05或P<0.01)。结论 hAMSCs能改善大鼠EAE的神经功能,减轻神经组织的免疫损伤,其机制可能主要与上调FoxP3+Treg细胞和下调Th17细胞有关。

关键词：人羊膜间充质干细胞实验性自身免疫性脑脊髓炎免疫调节大鼠

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血管紧张素Ⅱ2型受体重组腺病毒的扩增及其在INS-1细胞中的转染

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军事医学 2014年第12期38卷 927-931,935页

作者：李晓静刘敏王妍户义尹士男母义明解放军总医院第一附属医院内分泌科北京100048 解放军总医院内分泌科北京100853 军事医学科学院基础医学研究所组织工程研究中心北京100850 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的利用人胚肾(HEK)293A细胞株扩增含有大鼠血管紧张素Ⅱ2型受体(AT2R)基因的重组腺病毒,并在大鼠胰岛素瘤细胞INS-1细胞株中进行转染,构建AT2R高表达的胰岛β细胞模型。方法利用293A细胞株扩增重组腺病毒Ad-G-AT2R-EGFP和对照病毒Ad-C... 详细信息

目的利用人胚肾(HEK)293A细胞株扩增含有大鼠血管紧张素Ⅱ2型受体(AT2R)基因的重组腺病毒,并在大鼠胰岛素瘤细胞INS-1细胞株中进行转染,构建AT2R高表达的胰岛β细胞模型。方法利用293A细胞株扩增重组腺病毒Ad-G-AT2R-EGFP和对照病毒Ad-CMV-EGFP,并测定病毒滴度。在INS-1细胞中瞬时转染后利用实时PCR、Western印迹以及免疫荧光和激光共聚焦技术检测细胞中AT2R与AT1R的表达。结果扩增后得到重组腺病毒Ad-G-AT2R-EGFP和Ad-CMV-EGFP的滴度分别为9×109和8×109pfu/ml。在INS-1细胞中转染Ad-GAT2R-EGFP后,AT2R mRNA的表达随病毒感染复数(multiplicity of infection,MOI)值的增加呈剂量依赖性增加。当MOI值为10时,AT2R mRNA的表达达到峰值(P<0.05),同时AT2R蛋白的表达明显高于转染了Ad-CMV-EGFP的细胞和未转染细胞,但AT1R的表达无显著变化。结论成功扩增并得到高滴度且携带有AT2R基因的重组腺病毒载体,并将其转染入INS-1细胞中构建出AT2R高表达的胰岛β细胞模型,为下一步探讨AT2R在胰岛β细胞中的作用奠定了基础。

关键词：受体,血管紧张素,2型腺病毒科人胚胎肾293A细胞大鼠胰岛素瘤INS-1细胞

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乳腺干细胞培养基的建立及有效性验证

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中国组织工程研究 2014年第10期18卷 1585-1590页

作者：张军红杨晶豆晓伟王春华李青赵春华中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院组织工程中心细胞生物学系北京市100051 河北省邢台市眼科医院河北省眼病治疗中心河北省眼科研究所病理科河北省邢台市054000 河北医科大学生理学教研室河北省石家庄市050017 河北省邢台市眼科医院河北省眼病治疗中心河北省眼科研究所耳鼻喉科河北省邢台市054000 贵阳医学院附属医院骨科贵州省贵阳市550004

背景:干细胞培养基,尤其是乳腺干细胞培养基现阶段尚无有效的制备方法。目的:利用Sca-1+乳腺细胞验证自制乳腺干细胞培养基的有效性。方法:用BM培养基培养乳腺器官样小体,6 d后以免疫荧光方法监测成纤维细胞Sca-1和vimentin的表达。筛选... 详细信息

背景:干细胞培养基,尤其是乳腺干细胞培养基现阶段尚无有效的制备方法。目的:利用Sca-1+乳腺细胞验证自制乳腺干细胞培养基的有效性。方法:用BM培养基培养乳腺器官样小体,6 d后以免疫荧光方法监测成纤维细胞Sca-1和vimentin的表达。筛选出MaECM培养基,培养乳腺细胞6 d后,免疫磁珠筛选Sca-1+和Sca-1-细胞群,流式细胞术分析Sca-1阳性细胞的纯度,1×104 Sca-1+或Sca-1-细胞种植在4只鼠双侧乳腺脂肪垫上,6-8周后取出乳腺脂肪垫,以卡红整体染色和苏木精-伊红染色分析长出乳腺的结构数量。结果与结论:乳腺器官样小体用BM培养基培养6 d后,检测到大量Sca-1和vimentin阳性的成纤维细胞,说明BM培养基不适合分离Sca-1+乳腺干细胞。筛选出的MaECM培养基能够抑制成纤维的生长。磁珠筛选后,流式细胞术检测Sca-1+细胞在Sca-1+和Sca-1-细胞群的纯度分别是92%和5%。移植实验显示在8个种植Sca-1+细胞的脂肪垫生长出6个乳腺结构;而在8个种植Sca-1-细胞的脂肪垫中除1只鼠死亡,其余脂肪垫中均未长出乳腺结构。提示MaECM培养基适用于培养鼠乳腺干细胞。

关键词：干细胞培养乳腺干细胞成纤维细胞 Sca-1 乳腺干细胞培养基国家重大科学研究计划(973)资助项目 863项目

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人羊膜上皮细胞治疗大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎的效应及免疫调节作用

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中国免疫学杂志 2013年第10期29卷 1011-1016,1032页

作者：李丹方宁陈代雄余丽梅章涛赵春华遵义医学院附属医院贵州省细胞工程重点实验室遵义563003 中国医学科学院基础医学研究所组织工程中心北京100005

目的:观察人羊膜上皮细胞(hAECs)对大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型的治疗效应和免疫调节作用。方法:分离、培养hAECs,流式细胞术(FCM)检测其免疫表型;用豚鼠脊髓匀浆+完全弗氏佐剂+百日咳毒素复制大鼠EAE模型;EAE大鼠经双侧侧... 详细信息

目的:观察人羊膜上皮细胞(hAECs)对大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型的治疗效应和免疫调节作用。方法:分离、培养hAECs,流式细胞术(FCM)检测其免疫表型;用豚鼠脊髓匀浆+完全弗氏佐剂+百日咳毒素复制大鼠EAE模型;EAE大鼠经双侧侧脑室移植5×105个hAECs;采用kono评分动态观察行为学变化;采用HE染色、免疫荧光染色观察脑和脊髓病理改变,以及hAECs在脑和脊髓内的分布;采用FCM检测外周血淋巴细胞亚群,采用流式微球芯片捕获技术(CBA)检测血浆细胞因子的含量。结果:hAECs治疗后EAE大鼠行为学评分逐渐减低(P<0.01),神经功能明显改善,体重稳定,脑和脊髓炎性细胞浸润减轻。hAECs移植后3周,宿主脑和脊髓组织中均有较多人细胞核抗原阳性细胞即hAECs存活;与对照组相比,hAECs治疗组FoxP3+Treg、Th2、CTL、NKT、B淋巴细胞百分比明显升高(P<0.01或P<0.05),而Th17细胞显著减少(P<0.01);Th2型细胞因子IL-4和IL-10含量升高(P<0.05或P<0.01),而Th1型细胞因子IL-2和IFN-γ含量降低(P<0.05或P<0.01)。结论:hAECs能改善大鼠EAE的神经功能,减轻神经组织的免疫损伤,其机制可能主要与上调FoxP3+Treg和下调Th17细胞有关。

关键词：人羊膜上皮细胞实验性自身免疫性脑脊髓炎免疫调节大鼠

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人羊膜间充质干细胞对大鼠胶原性关节炎的疗效及免疫调节作用

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免疫学杂志 2013年第6期29卷 461-466页

作者：肖瑶方宁陈代雄余丽梅章涛赵春华遵义医学院附属医院贵州省细胞工程重点实验室 563003 中国医学科学院基础医学研究所组织工程中心北京10005

目的探讨人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)对大鼠胶原性性关节炎(CIA)的疗效和免疫调节作用。方法从人羊膜分离培养hAMSCs,流式细胞术(FCM)分析其表型;用牛Ⅱ型胶原和弗氏佐剂诱导大鼠CIA模型;动物随机分为正常对照组、CIA模型组、hAMSCs治... 详细信息

目的探讨人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)对大鼠胶原性性关节炎(CIA)的疗效和免疫调节作用。方法从人羊膜分离培养hAMSCs,流式细胞术(FCM)分析其表型;用牛Ⅱ型胶原和弗氏佐剂诱导大鼠CIA模型;动物随机分为正常对照组、CIA模型组、hAMSCs治疗组、培养基对照组和氨甲蝶呤(MTX)治疗组,每组6只。hAMSCs治疗组经双踝关节腔注射2×106hAMSCs。观察关节炎指数(AI)、足趾容积、关节影像和病理变化以评价疗效;流式细胞术(FCM)检测外周血单个核细胞中淋巴细胞亚群百分比。结果与模型组和培养基组比较,hAMSCs治疗组和MTX治疗组AI和足趾容积均明显下降(P<0.05),踝关节关节骨质破坏和炎症反应减轻;Th1、Th2、Th17、CTL1、CTL2和NKT亚群百分比明显下降,而Foxp3+Treg细胞显著上调(P<0.01)。hAMSCs治疗组和MTX治疗组比较,淋巴细胞亚群的变化相似,但后者Foxp3+Treg细胞上调幅度不及前者(P<0.01)。结论 hAMSCs可能通过调节Foxp3+Treg和Th17细胞发挥对大鼠CIA的治疗作用。

关键词：人羊膜间充质干细胞胶原性关节炎免疫调节大鼠

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静脉移植人羊膜间充质干细胞改善大鼠心肌梗死后心功能

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基础医学与临床 2013年第12期33卷 1516-1522页

作者：方宁王钰莹陈代雄余丽梅章涛赵春华遵义医学院附属医院贵州省细胞工程重点实验室贵州遵义563003 中国医学科学院基础医学研究所组织工程中心北京100005

目的探讨人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)静脉移植能否改善心肌梗死(MI)后心功能、减轻心肌纤维化和分化成心肌细胞。方法用流式细胞术和免疫组化染色对分离的hAMSCs进行表型分析和鉴定。结扎大鼠左冠状动脉前降支以建立MI模型,随机分为假... 详细信息

目的探讨人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)静脉移植能否改善心肌梗死(MI)后心功能、减轻心肌纤维化和分化成心肌细胞。方法用流式细胞术和免疫组化染色对分离的hAMSCs进行表型分析和鉴定。结扎大鼠左冠状动脉前降支以建立MI模型,随机分为假手术组、模型组对照组和hAMSCs移植组,每组12只。成模后1周,移植组经舌下静脉注射2×106BrdU标记的hAMSCs。用超声心动图检查心功能,用HE和Masson染色观察心肌组织病理,用免疫荧光双染色检测hAMSCs在MI区的存活及向心肌细胞分化的标志物。结果 1)移植后1、4和6周,hAMSCs组射血分数和左室短轴缩短率均显著高于模型组(P<0.01);舒张期左室前壁厚度和收缩期左室前壁厚度也都明显大于模型组(P<0.01,P<0.05);2)hAMSCs移植后6周,纤维化面积明显少于模型组(P<0.01);3)hAMSCs移植后6周,MI区BrdU阳性细胞表达心肌特异蛋白连接蛋白-43、α-辅肌动蛋白和结蛋白。结论 hAMSCs静脉移植能改善心肌梗死后心功能和心室重构,在心肌梗死原位可分化为心肌细胞。

关键词：人羊膜间充质干细胞心肌梗死移植分化心功能

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不同途径移植人羊膜上皮细胞对心肌梗死大鼠心脏的保护作用

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中国新药与临床杂志 2013年第6期32卷 476-481页

作者：王钰莹方宁陈代雄余丽梅章涛赵春华遵义医学院附属医院贵州省细胞工程重点实验室贵州遵义563003 中国医学科学院基础医学研究所组织工程研究中心北京100005

目的比较经舌下静脉和心外膜直视注射移植人羊膜上皮细胞(hAECs)对心肌梗死大鼠的心脏保护作用。方法雄性SD大鼠48只,随机分为假手术组(n=12)、模型组(n=12)、hAECs心外膜移植组(n=12)和hAECs静脉移植组(n=12),结扎大鼠左冠状动脉前降... 详细信息

目的比较经舌下静脉和心外膜直视注射移植人羊膜上皮细胞(hAECs)对心肌梗死大鼠的心脏保护作用。方法雄性SD大鼠48只,随机分为假手术组(n=12)、模型组(n=12)、hAECs心外膜移植组(n=12)和hAECs静脉移植组(n=12),结扎大鼠左冠状动脉前降支制备心肌梗死模型。hAECs经体外分离、纯化、培养和标记后,在心肌梗死后1周,分别经心外膜和舌下静脉注射hAECs,4周后测定心功能,免疫组化法检测Ⅷ因子相关抗原(vWF)的表达,免疫荧光观察移植细胞的定植和存活。结果免疫荧光染色可见两种途径移植组心肌组织中均有DAPI标记细胞存在;免疫组化结果显示,200倍视野下hAECs静脉移植组和hAECs心外膜移植组的vWF染色阳性微血管计数较模型组明显增高[(22.00±2.61)和(19.80±2.32)vs.(9.80±1.17),P<0.01]。与模型组相比,两移植组左心功能显著改善(P<0.05)。结论 hAECs经静脉移植和心外膜移植均可归巢至心肌梗死区,并促进新生血管形成,对梗死大鼠的心脏具有保护作用。

关键词：人羊膜上皮细胞心肌梗死细胞移植心脏保护

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纤维蛋白胶联合干细胞移植治疗大鼠急性心肌梗死

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中华急诊医学杂志 2012年第12期21卷 1322-1326页

作者：张雪莲马依彤王常勇马翔阿迪拉·阿扎提刘芬陈邦党王宝珠新疆医科大学第一附属医院心脏中心冠心病科乌鲁木齐830054 军事医学科学院基础医学研究所组织工程研究中心

目的探讨纤维蛋白胶联合大鼠脂肪干细胞（ADSCs）移植于梗死心肌后的细胞存活及对心功能的影响。方法分离培养大鼠脂肪干细胞（ADSCs），流式细胞术鉴定其表型。将雌性SD大鼠左冠状动脉前降支结扎建立心肌梗死模型，模型建立1周后，存... 详细信息

目的探讨纤维蛋白胶联合大鼠脂肪干细胞（ADSCs）移植于梗死心肌后的细胞存活及对心功能的影响。方法分离培养大鼠脂肪干细胞（ADSCs），流式细胞术鉴定其表型。将雌性SD大鼠左冠状动脉前降支结扎建立心肌梗死模型，模型建立1周后，存活大鼠随机（随机数字法）分成4组，即对照组（n=10）、纤维蛋白胶组（n=10）、细胞组（n=10）及联合组（n=10）。于梗死边缘区分别移植100μl PBS、纤维蛋白胶和4，6二乙酰基-2-苯基吲哚（4，*** DAPI）标记的100μl ADSCs，联合组用纤维蛋白胶加ADSCs注射。移植后4周，用血流动力学评估心功能，后处死动物取心肌标本，测量心肌梗死面积；用DAPI、肌节辅肌动蛋白免疫组化双染法确定细胞的存活；Ⅷ因子染色法检测血管新生。数据用SPSS15．0统计软件统计分析（多组间比较采用单因素方差分析，两组间比较采用成组t检验）。以P〈0．05为差异具有统计学意义。结果细胞移植后4周，联合组的LVSP，＋dp／dtmax均高于其他三组（P〈0．05）。联合组心肌梗死面积（28．5±3．6）％明显低于细胞组（33．33±2．3）％和纤维蛋白胶组（35．96±2．11）％，（均P〈0．05）。联合组梗死区的毛细血管密度（108．7±11．38／mm^2）显著高于细胞组、纤维蛋白胶组和对照组（均P〈0．01）。用DAPI、肌节辅肌动蛋白免疫组化双染法示联合组心肌梗死区的存活细胞数量多于单纯细胞移植组。结论纤维蛋白胶联合ADSCs移植可以提高细胞的存活并显著改善大鼠心肌梗死后的心功能。

关键词：脂肪干细胞纤维蛋白胶细胞移植急性心肌梗死大鼠

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体外诱导人羊膜上皮细胞分化为胰岛素分泌细胞的研究

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中国应用生理学杂志 2012年第2期28卷 139-143,I0002页

作者：赵玉洁方宁陈代雄余丽梅喻皇飞赵春华遵义医学院附属医院贵州省细胞工程重点实验室贵州遵义563003 中国医学科学院基础医学研究所组织工程中心北京100005

目的:通过体外诱导分化实验,探讨人羊膜上皮细胞(hAECs)向胰岛素分泌细胞(ISCs)分化的能力。方法:采用胰蛋白酶消化法从人羊膜组织分离提取hAECs,用流式细胞仪和免疫细胞化学法进行鉴定。取第3代hAECs在含尼克酰胺和N2补充物的无血清培... 详细信息

目的:通过体外诱导分化实验,探讨人羊膜上皮细胞(hAECs)向胰岛素分泌细胞(ISCs)分化的能力。方法:采用胰蛋白酶消化法从人羊膜组织分离提取hAECs,用流式细胞仪和免疫细胞化学法进行鉴定。取第3代hAECs在含尼克酰胺和N2补充物的无血清培养基中诱导培养,分别于诱导不同时间采用免疫细胞化学法检测胰岛素和β2微球蛋白的表达,采用放射免疫法检测上清液中胰岛素含量,采用RT-PCR检测胰岛素mRNA和胰十二指肠同源异型盒因子-1(PDX-1)mRNA的表达。结果:①hAECs高表达CD29、CD73、CD166和CK19;②hAECs诱导组第7、142、1天胰岛素阳性细胞百分率分别为74.00%±1.73%、75.33%±1.15%和75.67%±0.58%,而对照组未见胰岛素阳性细胞;③hAECs诱导组第7、14、21天培养物上清液中胰岛素含量分别达(328.47±3.22)μIU/ml、(332.26±1.22)μIU/ml和(329.68±2.57)μIU/ml,均显著高于对照组(P均<0.01);④hAECs诱导前后均有PDX-1 mRNA和β2微球蛋白表达,胰岛素mRNA表达仅见于诱导组。结论:hAECs能分化为ISCs,在Ⅰ型糖尿病细胞移植治疗方面具有潜在应用前景。

关键词：人羊膜上皮细胞胰岛素分泌细胞诱导分化

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人羊膜上皮细胞在大鼠受损肝组织中分化为肝细胞

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基础医学与临床 2012年第9期32卷 998-1003页

作者：宫黎明方宁陈代雄万卫红章涛余丽梅赵春华遵义医学院附属医院贵州省细胞工程重点实验室贵州遵义563003 中国医学科学院基础医学研究所组织工程中心北京100005

目的探讨人羊膜上皮细胞在大鼠损伤肝原位植活及向肝细胞分化。方法用胰蛋白酶消化法从羊膜组织中分离人羊膜上皮细胞(hAECs),用流式细胞术和免疫荧光染色进行表型分析和细胞鉴定。腹腔注射D-氨基半乳糖溶液建立大鼠肝损伤模型,随机分为... 详细信息

目的探讨人羊膜上皮细胞在大鼠损伤肝原位植活及向肝细胞分化。方法用胰蛋白酶消化法从羊膜组织中分离人羊膜上皮细胞(hAECs),用流式细胞术和免疫荧光染色进行表型分析和细胞鉴定。腹腔注射D-氨基半乳糖溶液建立大鼠肝损伤模型,随机分为hAECs移植组和对照组,每组20只。造模后24 h用微量注射器于肝左、中、右叶3点分别移植L-DMEM悬浮的hAECs悬液50μL(约1×106个细胞),对照组注射等量L-DMEM。于移植后48 h、1、2和4周处死各实验组5只大鼠,取肝脏制备冰冻切片,用免疫荧光双染色检查hAECs在受损肝原位的植活、分布及其向肝细胞分化的标志物表达。结果 1)FCM分析和免疫荧光染色结果显示,所分离的hAECs表达CD29、CD166及CK19,几乎不表达CD44、CD80、CD86、HLA-DR及波形蛋白;2)免疫荧光双染色结果显示,hAECs移植后1周主要定植于肝小叶且表达AFP,至2周表达CK18,至4周表达Alb。结论 hAECs在大鼠受损肝组织中能被植活且可分化为肝细胞,提示hAECs移植在临床肝病的治疗方面可能具有潜在应用价值。

关键词：人羊膜上皮细胞移植分化肝细胞肝损伤

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