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2012年第十一届全国超声心动图学术会议暨新技术国际研讨会

作者：杨俊杰刘志强王海滨王晶陈韵岱解放军总医院心血管内科军事医学科学院基础医学研究所组织工程研究室

目的:通过转基因模式使自体脂肪来源干细胞(ADSCs)过表达HO-1,并评价其治疗心梗疗效。方法:在获得自体ADSCs的同时,向兔的心肌梗死区域分别注射过表达HO-1的ADSCs(HO-1-ADSCs组)、无基因修饰细胞(ADSCs组)和PBS液(对照组)。注射4周之后... 详细信息

目的:通过转基因模式使自体脂肪来源干细胞(ADSCs)过表达HO-1,并评价其治疗心梗疗效。方法:在获得自体ADSCs的同时,向兔的心肌梗死区域分别注射过表达HO-1的ADSCs(HO-1-ADSCs组)、无基因修饰细胞(ADSCs组)和PBS液(对照组)。注射4周之后,运用超声行动图测量心脏功能,从病理角度分析其治疗效果和分化潜能。结果:超声心动图显示HO-1-ADSCs组心肌功能和左室结构均有明显改善。详细的组织学分析表明HO-1-ADSCs分化为心肌样细胞组织和管腔样

关键词：心肌梗死干细胞移植基因修饰自体脂肪动物实验疗效评价

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GLI1蛋白在小鼠胚胎颌面部发育中的表达

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北京口腔医学 2012年第6期20卷 301-304页

作者：杜娟范志朋马鑫刘淑红吴燕范明王松灵首都医科大学口腔医学院口腔医学研究所基因治疗与牙齿组织工程实验室北京100050 军事医学科学院基础所

目的通过研究GLI1蛋白在小鼠胚胎颌面发育阶段的表达,探讨GLI1蛋白在颌面部发育中的功能。方法利用免疫组化技术研究GLI1蛋白在小鼠胚胎11-14.5dpc(days postcoitum)阶段颌面部的表达情况。结果发现GLI1蛋白在颌面形成阶段11-14.5 dpc... 详细信息

目的通过研究GLI1蛋白在小鼠胚胎颌面发育阶段的表达,探讨GLI1蛋白在颌面部发育中的功能。方法利用免疫组化技术研究GLI1蛋白在小鼠胚胎11-14.5dpc(days postcoitum)阶段颌面部的表达情况。结果发现GLI1蛋白在颌面形成阶段11-14.5 dpc时在颌面部不同来源组织中表达不同,且主要在间质表达,在Meckel's软骨中特异性表达。结论 GLI1在颌面不同来源组织中功能不同,主要参与间质来源组织功能调控。

关键词： GLI1 颌面发育间质 Meckel’s软骨

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纤维蛋白胶携带ADSCs移植治疗心肌梗死的示踪研究

纤维蛋白胶携带ADSCs移植治疗心肌梗死的示踪研究

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2012年第十一届全国超声心动图学术会议暨新技术国际研讨会

作者：杨俊杰刘志强张锦明王晶陈韵岱解放军总医院心血管内科军事医学科学院基础医学研究所组织工程研究室解放军总医院核医学科

目的:检测并评价报告基因技术在研究可注射性纤维蛋白胶提高ADSCs移植治疗心梗疗效中的作用。方法:使用优化技术将携带融合报告基因的慢病毒载体高效转染感染ADSCs,该融合标记报告基因可同时编码表达荧光素酶和短缩型胸腺嘧啶核苷激酶(m... 详细信息

目的:检测并评价报告基因技术在研究可注射性纤维蛋白胶提高ADSCs移植治疗心梗疗效中的作用。方法:使用优化技术将携带融合报告基因的慢病毒载体高效转染感染ADSCs,该融合标记报告基因可同时编码表达荧光素酶和短缩型胸腺嘧啶核苷激酶(mrfp-ttk)。转染后的ADSCs细胞系(BF-ADSCs)被用于细胞生物学性能等方面的评估。BF-ADSCs连同纤维蛋白胶支架载体(Fibrin)联合

关键词：心肌梗死干细胞移植可注射性纤维蛋白胶疗效评价超声诊断动物模型

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脑源性神经营养因子对脑梗死大鼠神经细胞凋亡及Bcl-2、Bax蛋白表达的影响

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中国微侵袭神经外科杂志 2012年第11期17卷 514-517页

作者：关健戴建武佟伟民杜世伟王任直中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院神经外科 100730 中国科学院遗传与发育生物学研究所组织工程研究实验室北京100101 中国医学科学院基础医学研究所实验动物中心北京100730

目的探讨侧脑室内立体定向注射脑源性神经营养因子(BDNF)对脑梗死大鼠神经细胞凋亡及Bcl-2、Bax蛋白表达的影响。方法 32只SD大鼠成功制作大脑中动脉闭塞模型,随机分为BDNF组(n=16)和对照组(n=16),在两组大鼠侧脑室内分别注射10μl BDN... 详细信息

目的探讨侧脑室内立体定向注射脑源性神经营养因子(BDNF)对脑梗死大鼠神经细胞凋亡及Bcl-2、Bax蛋白表达的影响。方法 32只SD大鼠成功制作大脑中动脉闭塞模型,随机分为BDNF组(n=16)和对照组(n=16),在两组大鼠侧脑室内分别注射10μl BDNF溶液(0.5μmol)和10μl磷酸盐缓冲液(PBS液)。注射2周后,2组大鼠分别行神经功能严重性评分(mNSS)及梗死面积测定,应用免疫组化染色、Western blot分析脑组织Bcl-2、Bax蛋白的表达,Tunel检测细胞凋亡。结果与对照组比较,BDNF组脑梗死面积缩小,神经细胞凋亡数少,Bax蛋白表达低,Bcl-2蛋白表达高,短期内神经功能恢复好,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论 BDNF可能通过调节Bcl-2、Bax蛋白表达,减少神经细胞凋亡,改善脑缺血大鼠的功能。

关键词：梗塞大脑中动脉神经营养因子脑源性细胞凋亡模型动物大鼠

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人羊膜上皮细胞静脉移植治疗大鼠心肌梗死

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中国组织工程研究 2012年第36期16卷 6717-6723页

作者：王钰莹方宁陈代雄余丽梅章涛赵春华遵义医学院附属医院贵州省细胞工程重点实验室贵州省遵义市563003 中国医学科学院基础医学研究所组织工程研究中心北京市100005

背景:人羊膜上皮细胞在体外适当诱导条件下可分化为心肌样细胞,可望成为细胞心肌成形术的种子细胞,但在心肌梗死原位是否能分化成心肌细胞值得探讨。目的:探讨人羊膜上皮细胞移植在心肌梗死原位的分化及对心肌梗死后心室重构和心功能的... 详细信息

背景:人羊膜上皮细胞在体外适当诱导条件下可分化为心肌样细胞,可望成为细胞心肌成形术的种子细胞,但在心肌梗死原位是否能分化成心肌细胞值得探讨。目的:探讨人羊膜上皮细胞移植在心肌梗死原位的分化及对心肌梗死后心室重构和心功能的影响。方法:用胰酶消化分离人羊膜上皮细胞,行流式细胞仪检测和免疫组化染色以鉴定其表型特征。结扎SD大鼠左冠状动脉前降支以建立心肌梗死模型,实验分为人羊膜上皮细胞移植组、模型组及假手术组,人羊膜上皮细胞移植组于造模后1周经舌下静脉移植Brdu标记的人羊膜上皮细胞。移植后1,4,6周采用超声心动图检查心功能变化,应用苏木精-伊红和Masson染色观察心肌重构的变化,以免疫荧光双染色法检测人羊膜上皮细胞在心肌梗死区的植活与分化。结果与结论:①所分离的人羊膜上皮细胞表达CD29、CD166、CD73和CK19,不表达CD44、CD34、CD45、CD80、CD86和HLA-DR。②人羊膜上皮细胞移植后6周,心肌梗死区仍可见Brdu标记的阳性细胞,表达心肌特异蛋白连接蛋白43、α-辅肌动蛋白和结蛋白。③移植组大鼠左心室纤维化程度明显低于模型组。④移植组大鼠射血分数、左室短轴缩短率显著高于模型组(P<0.01);舒张期左室前壁厚度和收缩期左室前壁厚度也显著大于模型组(P<0.05)。提示人羊膜上皮细胞在心肌梗死原位可分化为心肌细胞,可减缓心室重构并改善心脏功能。

关键词：人羊膜上皮细胞心肌梗死移植分化心功能干细胞

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砷对小鼠成神经瘤细胞N2a的毒性作用

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农垦医学 2012年第6期34卷 488-491页

作者：吕海龙魏建峰李思源慕晓玲姜玉峰石河子大学医学院第一附属医院肝胆外科新疆石河子832008 中国医学科学院基础医学研究所组织工程研究中心北京100730 石河子大学医学院组织胚胎学教研室新疆石河子832002

目的:观察亚砷酸钠对小鼠成神经瘤细胞系N2a细胞的毒性作用。方法:将不同浓度亚砷酸钠对小鼠成神经瘤细胞N2a进行染毒,采用细胞毒性试验(MTS)法观察NaAsO2对N2a细胞的毒性作用,Hoechst33258荧光染色观察凋亡细胞的形态,采用AnnexinV-FIT... 详细信息

目的:观察亚砷酸钠对小鼠成神经瘤细胞系N2a细胞的毒性作用。方法:将不同浓度亚砷酸钠对小鼠成神经瘤细胞N2a进行染毒,采用细胞毒性试验(MTS)法观察NaAsO2对N2a细胞的毒性作用,Hoechst33258荧光染色观察凋亡细胞的形态,采用AnnexinV-FITC/PI双重染色的流式细胞检测细胞凋亡率,Caspase-3试剂盒检测Caspase-3酶活性。结果:不同浓度的NaAsO2(10,20,30,40和50μmol/L)作用于N2a细胞,24h后均引起了细胞明显的形态学变化,促进细胞凋亡率,且浓度越大,凋亡效果越明显。结论:NaAsO2对N2a细胞能产生神经毒性,导致细胞凋亡。

关键词：砷小鼠成神经瘤细胞N2a 细胞凋亡

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RhoA／Rho激酶信号通路在TGF—β1诱导的人皮肤成纤维细胞表型转化中的作用

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中华整形外科杂志 2011年第5期27卷 376-380页

作者：胡永亮刘真焦大凯马恬王常勇贾赤宇解放军第309医院整形美容烧伤修复中心北京100091 军事医学科学院基础医学研究所组织工程研究室航空工业中心医院整形外科

目的观察TGF—β1对人皮肤成纤维细胞表型转化的作用是否受到RhoA／Rho激酶信号通路的影响，以探究该通路是否参与了人皮肤成纤维细胞的表型转化。方法原代培养人皮肤成纤维细胞，将第4代细胞用TGF—β1（10ng／ml）刺激后，分不同作... 详细信息

目的观察TGF—β1对人皮肤成纤维细胞表型转化的作用是否受到RhoA／Rho激酶信号通路的影响，以探究该通路是否参与了人皮肤成纤维细胞的表型转化。方法原代培养人皮肤成纤维细胞，将第4代细胞用TGF—β1（10ng／ml）刺激后，分不同作用时间（0、3、6、24h）提取细胞内总蛋白。BCA法测定总蛋白浓度，Western—blot检测a—SMA的表达水平；并用相同的方法检测不同浓度TGF—β1（0、2、10、50ng／ml）刺激人皮肤成纤维细胞后，a-平滑肌肌动蛋白（d—smoothmuscleactin，a—SMA）的表达水平。用RhoA／Rho激酶信号通路阻断剂Y-27632处理后，再用TGF—β1刺激，作为实验组，将未作处理的正常细胞作为空白对照组，Y-27632（10μmol／L）组作为阴性对照组，只用TGF-β（10ng／ml）刺激组作为阳性对照组，分别检测a-SMA的表达差异。使用ANOVA对蛋白表达量进行统计学分析，P〈0．05为差异有统计学意义。结果10ng／mlTGF-β按不同作用时间刺激人皮肤成纤维细胞后，a—SMA的表达量分别为：0h为1．0，3h为1．9±0．2、6h为2．1±0．1，24h为3．1±0．1。24h较其他3个时间点a-SMA表达量明显上升（n=4，P〈0．05）。不同浓度TGF—β1刺激人皮肤成纤维细胞后，a—SMA的表达量分别为：0ng／ml为1．0，2ng／ml为1．4±0．2，10ng／ml为3．2±0．1，50ng／ml为3．1±0．2。10ng／ml表达量明显高于0ng／ml和2ng／ml（n=4，P〈0．05），较50ng／ml差异无统计学意义（n=4，P〉0．05）。用Y-27632（10μmol／L）处理后，再用TGF—β1刺激，细胞的表型转化明显受到抑制，实验组a—SMA的表达量（1．2±0．2）较阳性对照组（2．9±0．1）明显降低（n=5，P〈0．05），与空白对照组（1．0）和阴性对照组（1．1±0．1）相比差异均无统计学意义（n=5，P〉0．05）。结论RhoA／Rho激酶信号通路参与了TGF—B。诱导的人皮肤成纤维细胞表型转化过程。

关键词：成纤维细胞 RhoA/Rho激酶信号通路转化生长因子β1 a-平滑肌肌动蛋白

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寒冷刺激诱导大鼠棕色脂肪组织中的心脏干细胞增多

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中国循环杂志 2011年第5期26卷 382-385页

作者：杨俊杰刘志强王海滨刘剑锋陈韵岱中国人民解放军总医院心血管内科北京市100853 军事医学科学院基础医学研究所组织工程研究室

目的:检测寒冷刺激下大鼠肩胛部棕色脂肪组织中的心脏干细胞。方法:将大鼠随机分为2组,每组6只。实验组在寒冷环境下(4℃)饲养,对照组在常温条件(24℃)饲养。4周后分离肩胛部棕色脂肪比较两组脂肪组织活性。运用联合酶消化法提取并体外... 详细信息

目的:检测寒冷刺激下大鼠肩胛部棕色脂肪组织中的心脏干细胞。方法:将大鼠随机分为2组,每组6只。实验组在寒冷环境下(4℃)饲养,对照组在常温条件(24℃)饲养。4周后分离肩胛部棕色脂肪比较两组脂肪组织活性。运用联合酶消化法提取并体外培养棕色脂肪来源细胞,使用流式方法检测相应细胞表面标记物的表达情况,体外培养4周后运用免疫荧光等技术检测心肌特异性抗原的表达,并比较不同细胞接种密度下自发心肌分化的效果。结果:饲养4周后,实验组较对照组大鼠肩胛部棕色脂肪中解偶联蛋白-1(UCP-1)表达增加,棕色脂肪来源细胞的CD133,CD29和CD29/CD133表达增加,差异均有统计学意义(P<0.01)。体外培养4周,细胞表达心肌特异性标志物。在不同的细胞接种密度下,实验组提取自发分化心肌细胞的效率最高可达(27.3±2.8)%,逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)进一步证实心肌细胞相关基因表达阳性。相比之下,对照组提取的棕色脂肪来源细胞自发分化心肌样细胞的效率均较正常心肌组织微弱。结论:寒冷刺激下棕色脂肪中存在更多的心脏干细胞,提示温度对心脏干细胞体内定位或增殖具有一定作用。

关键词：棕色脂肪心脏干细胞寒冷刺激

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人羊膜间充质干细胞在大鼠受损肝组织中分化为肝细胞

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中国组织工程研究与临床康复 2011年第36期15卷 6709-6713页

作者：宫黎明方宁陈代雄万卫红章涛刘祖林余丽梅赵春华遵义医学院附属医院贵州省细胞工程重点实验室贵州省遵义市563003 中国医学科学院基础医学研究所组织工程研究中心北京市100005

背景:羊膜间充质干细胞在体外适当的诱导条件下可分化为肝细胞样细胞,而在受损肝脏原位是否可分化为肝细胞值得探讨。目的:观察人羊膜间充质干细胞在大鼠肝损伤原位植活及分化情况。方法:采用胰酶-胶原酶二酶消化法从羊膜组织中分离人... 详细信息

背景:羊膜间充质干细胞在体外适当的诱导条件下可分化为肝细胞样细胞,而在受损肝脏原位是否可分化为肝细胞值得探讨。目的:观察人羊膜间充质干细胞在大鼠肝损伤原位植活及分化情况。方法:采用胰酶-胶原酶二酶消化法从羊膜组织中分离人羊膜间充质干细胞。采用腹腔注射D-氨基半乳糖建立大鼠肝损伤模型,随机分为2组,人羊膜间充质干细胞移植组造模后注射L-DMEM悬浮的人羊膜间充质干细胞悬液,对照组注射等量L-DMEM。结果与结论:①FCM分析结果显示,所分离的人羊膜间充质干细胞表达CD29、CD44和CD166;免疫荧光染色显示人羊膜间充质干细胞表达波形蛋白,不表达CK19。②与对照组比较,人羊膜间充质干细胞移植后肝病理无明显差异,均呈急性肝坏死病理改变。③免疫荧光双染色结果显示,人羊膜间充质干细胞移植后1周主要定植于肝小叶且表达CK19,至2周表达CK18,至3周表达Alb。结果表明,人羊膜间充质干细胞在大鼠受损肝组织中能被植活,且可分化为肝细胞,提示人羊膜间充质干细胞移植在临床肝病的治疗方面可能具有潜在应用价值。

关键词：人羊膜间充质干细胞移植分化肝细胞肝损伤

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温敏性壳聚糖水凝胶对脂肪来源干细胞生物学性能影响的实验研究

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军医进修学院学报 2011年第10期32卷 1059-1061,1072页

作者：杨俊杰刘志强袁振良胡舜英陈韵岱解放军总医院心血管内科北京100853 军事医学科学院基础医学研究所组织工程研究室北京100850

目的检测温敏性壳聚糖水凝胶对脂肪来源干细胞(ADSCs)的生物学性能影响。方法提取大鼠ADSCs和制备温敏性壳聚糖水凝胶,体外检测在温敏性壳聚糖水凝胶携带下的ADSCs细胞活力、增殖情况、多向分化潜能等生物学性能。结果与正常培养条件下A... 详细信息

目的检测温敏性壳聚糖水凝胶对脂肪来源干细胞(ADSCs)的生物学性能影响。方法提取大鼠ADSCs和制备温敏性壳聚糖水凝胶,体外检测在温敏性壳聚糖水凝胶携带下的ADSCs细胞活力、增殖情况、多向分化潜能等生物学性能。结果与正常培养条件下ADSCs相比,温敏性壳聚糖水凝胶携带下的ADSCs细胞活力良好、增殖能力正常,并仍能保持多向分化潜能。结论温敏性壳聚糖水凝胶材料具有良好的细胞相容性,有望作为可注射性心肌组织工程研究中良好的可注射性支架材料。

关键词：脂肪来源干细胞壳聚糖水凝胶生物学性能

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