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生物医学工程研究 2007年第2期26卷 107-110页

作者：王静王常勇何文俊段翠密吕双红军事医学科学院基础医学研究所组织工程研究室北京100850

探索以液态胶原作为支架材料,体外构建组织工程化心肌片层的可行性。用含0.04%EDTA的0.25%胰酶分离新生大鼠原代心肌细胞,然后与Ι型胶原M、atrigel和2×DMEM混合,注入方形模具内,制备心肌细胞-胶原复合体,体外培育1周后,施加外力,... 详细信息

探索以液态胶原作为支架材料,体外构建组织工程化心肌片层的可行性。用含0.04%EDTA的0.25%胰酶分离新生大鼠原代心肌细胞,然后与Ι型胶原M、atrigel和2×DMEM混合,注入方形模具内,制备心肌细胞-胶原复合体,体外培育1周后,施加外力,拉伸刺激条件下继续培养1周。通过光学显微镜下观察H、.E.染色、激光共聚焦和透射电镜观察等对构建的组织工程化心肌片层进行评价。结果表明:心肌片层在培养的第2天出现自发性的跳动,随时间的延长,跳动的区域逐渐增多,并于外力拉伸后的第4天形成一致跳动。激光共聚焦研究结果表明:在构建的工程化心肌组织中,肌原纤维显示排列有序,多数沿拉伸方向伸展,其形态类似于心肌组织。电镜观察显示:拉伸的心肌片层中的心肌细胞含有较多的肌原纤维,肌小节结构和Z带清晰可见。采用新生大鼠心肌细胞与液态Ι型胶原复合方式,可在体外再造出片层状心肌组织,构建的组织工程化心肌片层具有与心肌组织类似的结构和特性。

关键词：心肌细胞 Ⅰ型胶原心肌片层组织工程工程化心肌组织外力拉伸

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子宫内膜体外构建及其应用研究进展

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生殖医学杂志 2007年第1期16卷 60-63页

作者：王和平王常勇江红军事医学科学院基础医学研究所组织工程研究室北京100850

体外构建子宫内膜是利用组织工程学原理,在体外构建结构、形态与功能上与体内子宫内膜相似的三维模拟体。种子细胞分离培养、生物支架材料的合理选择及体外构建方法的优化是体外构建子宫内膜的重要因素。构建的子宫内膜在病理研究、三... 详细信息

体外构建子宫内膜是利用组织工程学原理,在体外构建结构、形态与功能上与体内子宫内膜相似的三维模拟体。种子细胞分离培养、生物支架材料的合理选择及体外构建方法的优化是体外构建子宫内膜的重要因素。构建的子宫内膜在病理研究、三维培养体系、胚胎发育学及移植等方面具有重要的研究意义。只有更进一步模拟自然子宫的结构,优化构建技术路线和培养条件,才可以再造出真正意义上的组织工程化子宫。

关键词：组织工程子宫内膜细胞培养支架材料

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间充质干细胞与血液系统疾病

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基础医学与临床 2007年第3期27卷 346-352页

作者：马杰史明霞赵春华中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所组织工程研究中心实验血液学国家重点实验室北京100005

近年来间充质干细胞一直是细胞生物学研究领域的热点之一,其自我更新、多向分化能力以及强的免疫调节功能等生物学特性已被广泛认识,有关它在相关疾病治疗中应用的基础与临床研究也取得了一定进展。随着研究的深入,间充质干细胞在一些... 详细信息

近年来间充质干细胞一直是细胞生物学研究领域的热点之一,其自我更新、多向分化能力以及强的免疫调节功能等生物学特性已被广泛认识,有关它在相关疾病治疗中应用的基础与临床研究也取得了一定进展。随着研究的深入,间充质干细胞在一些疾病的发生、发展过程中所起的作用也逐渐被认识。本文就间充质干细胞与一些血液系统疾病之间的关系进行综述。

关键词：间充质干细胞血液系统疾病

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成体脂肪来源的Flk-1^+间充质干细胞用于杜氏肌营养不良症治疗的可行性研究

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中国实验血液学杂志 2007年第2期15卷 306-312页

作者：刘艳宁闫曦孙昭韩钦赵春华中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所组织工程中心北京100005 中国医学科学院、中国协和医科大学血液学研究所国家实验血液学重点实验室

为了探讨成体脂肪来源的间充质干细胞(adipose derived mesenchymal stemcell,AD-MSC)移植治疗杜氏肌营养不良症(Duchenne muscular dystrophy,DMD)的可行性,从成年GFP小鼠脂肪组织中分离得到间充质干细胞(mesen-chymal stem cell,MSC),用流式细胞术分析其细胞表型和细胞周期;在体外分别以成肌和成内皮诱导体系诱导AD-MSC的定向分化,通过免疫荧光染色和RT-PCR进行鉴定;经尾静脉移植AD-MSC到CTX肌肉损伤模型小鼠和mdx小鼠(DMD动物模型)体内,通过RT-PCR和免疫荧光染色检测供体细胞的分布和分化情况,并进行统计分析。结果表明:从GFP小鼠脂肪组织中分离得到的Flk-1+MSC可以在体外分化为肌肉细胞和血管内皮细胞;细胞移植后,可在损伤肌肉部位检测到GFP阳性的肌纤维、血管内皮细胞和肌肉干细胞;mdx小鼠移植后肌膜上抗肌萎缩蛋白(dystro-phin)的表达部分恢复,骨骼肌中心核肌纤维比例也大大降低。结论:AD-MSC是一种较为理想的供移植治疗DMD的干细胞,它不仅可以定向归巢到损伤的肌肉组织中,参与肌纤维重建,而且能改善组织供血,缓解DMD病征,同时部分供体细胞以干细胞形式存在,可以代替原来肌肉干细胞的功能,不断修复损伤的肌肉组织。

关键词：间充质干细胞分化社氏肌营养不良干细胞移植

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海藻酸钡-多聚赖氨酸-海藻酸微囊植入大鼠体内的生物相容性的实验研究

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生物医学工程研究 2007年第2期26卷 159-161页

作者：邱丽媛郭希民段翠密王滟濛李晶刘皙洁东北农业大学动物医学学院生理教研室哈尔滨150030 军事医学科学院基础医学研究所组织工程研究中心北京100850

研究海藻酸钡-多聚赖氨酸-海藻酸(BPA)微囊在大鼠体内的生物相容性。用静电微囊发生仪制备BPA微囊,将4mL空微囊分别注射于20只Sprague-Dawley大鼠腹腔内,于1、2、4、8周各取5只大鼠,处死后用生理盐水灌洗腹腔,收集灌洗液,待微囊全部沉淀... 详细信息

研究海藻酸钡-多聚赖氨酸-海藻酸(BPA)微囊在大鼠体内的生物相容性。用静电微囊发生仪制备BPA微囊,将4mL空微囊分别注射于20只Sprague-Dawley大鼠腹腔内,于1、2、4、8周各取5只大鼠,处死后用生理盐水灌洗腹腔,收集灌洗液,待微囊全部沉淀后,计算其中空微囊数并观察微囊的形态改变。结果表明:移植后1、2、4、8周从大鼠腹腔内取出的微囊95%～98%为完整、圆形、表面光滑、无明显的结缔组织包绕。说明我们所制作的BPA微囊具有较好的生物相容性。

关键词：海藻酸钡-多聚赖氨酸-海藻酸微囊生物相容性回收移植

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雌激素与孕激素在兔子宫内膜上皮细胞体外增殖中的作用

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解放军医学杂志 2006年第6期31卷 582-584页

作者：段翠密王海滨江红王常勇宋宇轩王和平郭希民李晶项婷婷军事医学科学院基础医学研究所组织工程研究室北京100850

目的探讨雌激素E2和孕激素P4不同水平对家兔子宫内膜上皮细胞体外增殖的影响。方法离心法获取家兔子宫内膜上皮细胞;用上皮角蛋白抗体的免疫荧光细胞染色对细胞进行鉴定,用流式细胞仪检测上皮细胞的纯度。设不同雌激素和孕激素水平组合... 详细信息

目的探讨雌激素E2和孕激素P4不同水平对家兔子宫内膜上皮细胞体外增殖的影响。方法离心法获取家兔子宫内膜上皮细胞;用上皮角蛋白抗体的免疫荧光细胞染色对细胞进行鉴定,用流式细胞仪检测上皮细胞的纯度。设不同雌激素和孕激素水平组合添加于培养液,利用MTT法间接测定上皮细胞的体外增殖能力。结果利用离心法可获得高纯度的子宫内膜上皮细胞(96%);雌激素(100nmol/L)和少量孕激素(10nmol/L)对上皮细胞增殖有促进作用。免疫荧光细胞检测结果表明,经激素刺激的子宫内膜上皮细胞对上皮角蛋白抗体反应呈阳性。结论性腺激素对体外培养的子宫内膜上皮细胞有促进增殖的作用,而且不会使其分化为其他类型细胞。

关键词：子宫内膜雌激素孕激素细胞增殖

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组织工程化子宫片层构建的实验研究

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解放军医学杂志 2006年第4期31卷 342-345页

作者：王和平宋宇轩江红郭希民王海滨段翠密李晶项婷婷王常勇北京军事医学科学院基础医学研究所组织工程室 100850 西北农林科技大学动物科技学院

目的利用组织工程方法体外构建了与子宫壁内膜和肌层相近的子宫片层。方法将分离培养的兔子宫平滑肌细胞和基质细胞分别与液态Ⅰ型胶原支架材料混合,依次接种于自制静态力学拉伸模具中,再将上皮细胞接种在基质层上,形成组织工程化子宫... 详细信息

目的利用组织工程方法体外构建了与子宫壁内膜和肌层相近的子宫片层。方法将分离培养的兔子宫平滑肌细胞和基质细胞分别与液态Ⅰ型胶原支架材料混合,依次接种于自制静态力学拉伸模具中,再将上皮细胞接种在基质层上,形成组织工程化子宫组织。采用组织学和免疫组织化学方法观察所构建的组织工程化子宫的组织学特征,扫描电镜检测上皮细胞微结构。结果分离培养的兔子宫平滑肌细胞、基质细胞和内膜上皮细胞的纯度均达到95%以上。在静态力学拉伸下培养14天后,在胶原凝胶上生长的平滑肌细胞和基质细胞按拉伸方向有序排列,上皮细胞生长在最上层。激素处理后,扫描电镜观察显示上皮细胞表面有羽状突或纤毛,并且附有大量的微绒毛。结论由平滑肌细胞、基质细胞、上皮细胞和Ⅰ型液态胶原构建,并经静态力学拉伸构建的组织工程化子宫片层能较好地模拟自然子宫的形态结构和功能。

关键词：细胞培养组织工程子宫胶原

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Dextran分离纯化大鼠胰岛的生物学特性

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解放军医学杂志 2006年第4期31卷 338-341页

作者：吴靖芳刘杰江红孔庆学李洪波张静王常勇张家口河北北方学院组织胚胎学教研室 075029 军事医学科学院基础医学研究所组织工程研究中心

目的探讨一种分离纯化大鼠胰岛的方法，并评价该法分离得到的胰岛的生物学特性。方法常规外科手术分离胰腺。然后将其剪为lrnm3左右碎块，置于0．9mg／ml胶原酶V37℃振荡消化10～17min，以含10％胎牛血清的Hank’s液终止消化。60目筛网... 详细信息

目的探讨一种分离纯化大鼠胰岛的方法，并评价该法分离得到的胰岛的生物学特性。方法常规外科手术分离胰腺。然后将其剪为lrnm3左右碎块，置于0．9mg／ml胶原酶V37℃振荡消化10～17min，以含10％胎牛血清的Hank’s液终止消化。60目筛网过滤。DextranT40非连续密度梯度离心纯化胰岛。纯化后的胰岛经DTZ染色，吖啶橙／碘化丙啶（AO／PI）染色、放射免疫分析检测胰岛素分泌量，纯化后的胰岛进行异种移植，检测降糖效果。结果胰岛分布于11％Dextran和1640及11％和22％Dextran界面之间，平均每只Wistar大鼠消化后可获得2181士14个胰岛，纯化后回收1826±24个胰岛，胰岛收获量达（85．7±5．9）％，纯度高达95％以上。胰岛对葡萄糖刺激有良好的反应性，纯化后胰岛异种移植，可逆转实验性糖尿病SD大鼠血糖7～10天。结论胶原酶消化，Dextran T40纯化是一种简单、高效的胰岛分离纯化方法，获得的胰岛有良好的生物学特性。

关键词：胰岛分离纯化糖尿病移植大鼠

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壳聚糖-hVEGF_(165)基因微粒的制备及体外转染的实验研究

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中国生物医学工程学报 2006年第1期25卷 14-18,24页

作者：王荣祺张军王常勇易甫李保罗江红郭希民董宝军段翠密董灵芝军事医学科学院基础医学研究所组织工程研究室第四军医大学西京医院心内科西安710032 贵阳医学院病理生理学教研室贵阳550004

采用复凝聚法制备壳聚糖-hVEGF165基因微粒,观察微粒形态,测定微粒的粒径、基因包封率和载药量,以LipofectamineTM2000转染试剂作为阳性对照,检测微粒对心肌细胞的转染活性及对心肌细胞存活率的影响。结果表明,微粒形态多呈球形,粒径小... 详细信息

采用复凝聚法制备壳聚糖-hVEGF165基因微粒,观察微粒形态,测定微粒的粒径、基因包封率和载药量,以LipofectamineTM2000转染试剂作为阳性对照,检测微粒对心肌细胞的转染活性及对心肌细胞存活率的影响。结果表明,微粒形态多呈球形,粒径小,基因包封率和载药量均较高,转染活性略低于脂质体,但微粒对心肌细胞的毒性明显低于脂质体。

关键词：壳聚糖微粒血管内皮生长因子基因转染心肌细胞

来源：评论

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BPA微囊与APA微囊机械强度和生物相容性的比较研究

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组织工程与重建外科杂志 2006年第2期2卷 70-72页

作者：李洪波江红段翠密苏小平孔庆学吴靖芳刘杰郭希民王常勇军事医学科学院基础医学研究所组织工程研究室北京100850

目的比较海藻酸钡-多聚赖氨酸-海藻酸(BPA)微囊与海藻酸-多聚赖氨酸-海藻酸(APA)微囊的生物相容性和机械强度的生物物理特性。方法用静电微囊发生仪制备BPA和APA微囊,通过机械振荡法和肌肉下移植来检测微囊的机械强度。通过微囊大鼠腹... 详细信息

目的比较海藻酸钡-多聚赖氨酸-海藻酸(BPA)微囊与海藻酸-多聚赖氨酸-海藻酸(APA)微囊的生物相容性和机械强度的生物物理特性。方法用静电微囊发生仪制备BPA和APA微囊,通过机械振荡法和肌肉下移植来检测微囊的机械强度。通过微囊大鼠腹腔移植来观察BPA和APA微囊的生物相容性。结果机械振荡48h后APA微囊的破损率为4.3%,BPA微囊仅为1.5%;肌肉下移植1个月后,组织切片H&E染色显示,APA和BPA微囊均保持完整,仅有轻度纤维化包裹;腹腔移植4、8和10周后,从大鼠腹腔内取出的微囊中95%～98%为结构完整,呈圆形,表面光滑,光镜下无明显的结缔组织包绕。结论所制备的BPA微囊的生物相容性河机械强度优于APA微囊。

关键词：机械强度生物相容性比较研究海藻酸多聚赖氨酸腹腔移植机械振荡生物物理特性组织切片染色显示结缔组织肌肉大鼠表面光滑振荡法纤维化破损率腹腔内圆形静电

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