检索结果-内蒙古大学图书馆

衡阳医学院学报 1995年第4期23卷 237-239页

作者：杨和平彭建平刘革修万腊香涂玉林杨永宗董薇李岱宗周爱儒汤键黄曦衡阳医学院分子生物学研究中心北京医科大学心血管研究所中国预防医学科学院基因工程国家重点实验室

合成反义和正义ｃ－ｍｙｂ１８－ｍｅｒ，分别导入培养的ＷＫＹ主动脉平滑细胞（ＳＭＣｓ），同时用内皮素诱导ＳＭＣｓ增殖。反义ｃ－ｍｙｂ寡核苷酸（ＯＤＮｓ）对内皮素诱导ＳＭＣｓ的抗细胞增殖抑制作用随浓度（６０μｍｏｌ·... 详细信息

合成反义和正义ｃ－ｍｙｂ１８－ｍｅｒ，分别导入培养的ＷＫＹ主动脉平滑细胞（ＳＭＣｓ），同时用内皮素诱导ＳＭＣｓ增殖。反义ｃ－ｍｙｂ寡核苷酸（ＯＤＮｓ）对内皮素诱导ＳＭＣｓ的抗细胞增殖抑制作用随浓度（６０μｍｏｌ·Ｌ－１～１２０μｍｏｌ·Ｌ－１）的增加而增加。用１２０μｍｏｌ·Ｌ－１反义ＯＤＮＳ抗细胞增殖能力随时间延长而下降。免疫组化显示受抑制细胞ｍｙｂ水平较同期对照组或正义ＯＤＮｓ组低。以上为反义ＯＤＮｓ抑制外源性生长因子或细胞因子诱导靶基因的高表达和细胞增殖提供了新的线索，同时为探讨癌基因表达调控与动脉ＳＭＣｓ增殖的关系提供了一种新方法。

关键词：反义寡核苷酸 c-myb 平滑肌细胞癌基因

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一氧化氮合成酶（NOS）基因表达的半定量检测及其运用

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生理学报 1994年第4期46卷 347-354页

作者：张晨晖李倩虹张继峰周洪张新波汤健北京医科大学心血管基础研究所分子生物学研究室

本工作参照Ｍａｒｔｉｎ（１９９３）定量ＲＴ－ＰＣＲ方法，建立了一种灵敏、简捷、特异的定量ＮＯＳｍＲＮＡ测定方法；证明了ＮＯＳｍＲＮＡ不仅存在于脑组织，亦广泛分布于心、肾、肺和肝组织中，其中以脑组织含量最高，肾、心次之... 详细信息

本工作参照Ｍａｒｔｉｎ（１９９３）定量ＲＴ－ＰＣＲ方法，建立了一种灵敏、简捷、特异的定量ＮＯＳｍＲＮＡ测定方法；证明了ＮＯＳｍＲＮＡ不仅存在于脑组织，亦广泛分布于心、肾、肺和肝组织中，其中以脑组织含量最高，肾、心次之。除内皮细胞以外，平滑肌细胞中亦有ＮＯＳ基因的表达；此外，本工作还观察到，自发性高血压大鼠的脑、肾、肝和平滑肌细胞中ＮＯＳｍＲＮＡ水平下降，提示ＮＯＳ基因表达受抑，可能与高血压的病因密切相关。

关键词：一氧化氮合成酶基因表达自发性高血压大鼠半定量PCR

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心血管疾病基因治疗的基础研究Ⅲ．重组质粒fPGV－MT－LacZ在大鼠血管平滑肌细胞中的表达

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北京大学学报（医学版） 1994年第S1期32卷 120-123页

作者：朱小君胡征毕万里唐朝枢周爱儒汤健北京医科大学心血管基础研究所分子生物学室

为观察外源性基因在心血管细胞内的表达，本工作构建了含有外源性标记基因ＬａｃＺ的逆转录病毒质粒ｆＰＧＶ－ＭＴ－ＬａｃＺ。应用脂质体（Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ）包裹质粒，转染培养的大鼠主动脉平滑肌细胞，经Ｇ４ｌ８筛选、克隆以... 详细信息

为观察外源性基因在心血管细胞内的表达，本工作构建了含有外源性标记基因ＬａｃＺ的逆转录病毒质粒ｆＰＧＶ－ＭＴ－ＬａｃＺ。应用脂质体（Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ）包裹质粒，转染培养的大鼠主动脉平滑肌细胞，经Ｇ４ｌ８筛选、克隆以及β－半乳糖苷酶的酶活测定，证明外源性基因可以在血管平滑肌细胞中表达。揭示血管平滑肌细胞可作为心血管疾病基因治疗的一种靶细胞。

关键词：基因治疗基因表达标记基因LacZ 血管平滑肌细胞

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心血管疾病基因治疗的基础研究Ⅵ．一种新的体内基因转移方法

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北京大学学报（医学版） 1994年第S1期32卷 131-133页

作者：朱小君姚阿卿赵民清付爱华周爱儒汤健北京医科大学心血管基础研究所分子生物学室

将医用缝合线浸泡在质粒ＤＮＡ溶液中，然后缝合在大鼠股四头肌上，可以观察到外源基因在肌肉组织中高效、稳定地表达，其表达量高于磷酸钙共沉淀和ＤＮＡ沉淀块埋植法，较肌肉直接注射法表达量高１０倍左右。

关键词：基因治疗基因转移医用缝合线标记基因LacZ

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心血管疾病基因治疗的基础研究Ⅰ．重组质粒pN2－LacZ在体外的表达

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北京大学学报（医学版） 1994年第S1期32卷 111-114页

作者：姚阿卿杨亚东朱小君李岱宗孙双丹温进坤周爱儒汤健北京医科大学心血管基础研究所分子生物学室

构建了带有标记基因ＬａｃＺ的逆转录病毒质粒ｐＮ２－ＬａｃＺ。用磷酸钙共沉淀的方法，将ｐＮ２－ＬａｃＺ转染培养的大鼠血管平滑肌细胞，Ｇ４１８筛选得到抗性集落。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ和Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ分析表明，ＬａｃＺ... 详细信息

构建了带有标记基因ＬａｃＺ的逆转录病毒质粒ｐＮ２－ＬａｃＺ。用磷酸钙共沉淀的方法，将ｐＮ２－ＬａｃＺ转染培养的大鼠血管平滑肌细胞，Ｇ４１８筛选得到抗性集落。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ和Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ分析表明，ＬａｃＺ基因已整合到细胞染色体上并转录出相应的ｍＲＮＡ。组化染色和酶活力测定结果表明，外源基因ＬａｃＺ可在血管平滑肌细胞中表达出有活性的蛋白质产物。提示，血管平滑肌细胞可作为心血管疾病基因治疗的靶细胞。

关键词：标记基因LacZ 血管平滑肌细胞基因治疗

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内皮素对血管平滑肌细胞中一氧化氮合成酶基因表达的影响

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北京大学学报（医学版） 1994年第S1期32卷 5-8页

作者：周洪张晨晖李倩虹牛大地张新波温进坤周爱儒北京医科大学心血管基础研究所分子生物学研究室

应用反转录－聚合酶链式反应（ｒｅｖｅｒｓｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ－ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ，ＲＴ－ＰＣＲ）方法，测定出一氧化氮合成酶（ＮｉｔｒｉｃＯｘｉｄｅＳｙｎｔｈａｓｅ，ＮＯＳ）ｍＲＮＡ... 详细信息

应用反转录－聚合酶链式反应（ｒｅｖｅｒｓｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ－ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ，ＲＴ－ＰＣＲ）方法，测定出一氧化氮合成酶（ＮｉｔｒｉｃＯｘｉｄｅＳｙｎｔｈａｓｅ，ＮＯＳ）ｍＲＮＡ不仅在心血管系统细胞中广泛存在，并且发现内皮素可以促进血管平滑肌细胞中ＮＯＳｍＲＮＡ的表达（＋３４．８％），增高血管平滑肌细胞中ＮＯＳ酶活性（＋７４％）。结果提示，由内皮素引起的血管平滑肌细胞中ＮＯＳ基因表达和ＮＯＳ活性的增加，可能是高血压中的一个重要的负反馈因素。

关键词：内皮素一氧化氮合成酶血管平滑肌细胞高血压

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心血管疾病基因治疗的基础研究Ⅱ．Pro－UK和t－pA基因的体外表达

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北京大学学报（医学版） 1994年第S1期32卷 115-119页

作者：姚阿卿孙双丹李岱宗温进坤王贵春周爱儒黄培堂俞炜源汤健北京医科大学心血管基础研究所分子生物学室上海市肿瘤所

构建了带有人的全长Ｐｒｏ－ＵＫ或ｔ－ｐＡ基因ｃＤＮＡ的逆转录病毒质粒ｐＮ２－ＣＭＶ－ＵＫ或ｐＮ２－ＣＭＶ－ｔＰＡ。重组质粒转染包装细胞ＰＡ３ｌ７后获得含假病毒的培养上清。用假病毒上清感染培养的血管平滑肌细胞（ＶｓＭＣ... 详细信息

构建了带有人的全长Ｐｒｏ－ＵＫ或ｔ－ｐＡ基因ｃＤＮＡ的逆转录病毒质粒ｐＮ２－ＣＭＶ－ＵＫ或ｐＮ２－ＣＭＶ－ｔＰＡ。重组质粒转染包装细胞ＰＡ３ｌ７后获得含假病毒的培养上清。用假病毒上清感染培养的血管平滑肌细胞（ＶｓＭＣ），经Ｇ４ｌ８筛选得到抗性集落。Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ分析表明，Ｐｒｏ－ＵＫ或ｔ－ｐＡ基因已整合到宿主细胞染色体。在转染的ＶＳＭＣ中，Ｐｒｏ－ＵＫ和ｔ－ｐＡ的含量分别为２６５ｎｇ／１０７细胞／２４小时和５．６ｎｇ／１０７细胞／２４小时。溶圈法测定结果证明，Ｐｒｏ－ＵＫ基因导入细胞后可以表达出有生物活性的尿激酶原。

关键词： Pro-UK或t-pA基因基因治疗血管平滑肌细胞

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人一氧化氮合成酶（NOS）cDNA的克隆

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北京大学学报（医学版） 1994年第S1期32卷 21-23页

作者：周洪赵新荣王瑜张晨晖汤健徐国威北京医科大学心血管基础研究所上海市肿瘤研究所分子生物学研究室

人一氧化氮合成酶（ＮＯＳ）ｃＤＮＡ的克隆北京医科大学心血管基础研究所周洪，赵新荣，王瑜，张晨晖，汤健上海市肿瘤研究所分子生物学研究室徐国威ＮＯ是近年来发现的一种血管和神经的信使分子（１）。它也可由血管内皮细胞释放，具... 详细信息

人一氧化氮合成酶（ＮＯＳ）ｃＤＮＡ的克隆北京医科大学心血管基础研究所周洪，赵新荣，王瑜，张晨晖，汤健上海市肿瘤研究所分子生物学研究室徐国威ＮＯ是近年来发现的一种血管和神经的信使分子（１）。它也可由血管内皮细胞释放，具有舒张血管、降低血压、抑制血管平滑...

关键词：一氧化氮合成酶 NOS 舒张血管血管内皮细胞基础研究所信使分子汤健周洪北京医科大学重组噬菌体

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制备性SDS-PAGE纯化大肠杆菌表达的重组人VEGF

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高技术通讯 1994年第3期4卷 28-31页

作者：杨亚东卢传义王贵春杨鸿朱小君周爱儒汤健马大龙李岱宗北京医科大学心血管基础研究所分子生物学研究室VEGF VPF制备性SDS-PAGE复性Miles检涮

在利用基因工程方法实现大肠杆菌表达外源重组人ＶＥＧＦ的基础上，应用制备性ＳＤＳ－ＰＡＧＥ从包涵体中分离纯化了这一因子。纯化蛋白在含有氧化型与还原型谷胱甘肽和肝素的缓冲液中复性，复性后的ＶＥＧＦ蛋白成为同源双体，经Ｍｉ... 详细信息

在利用基因工程方法实现大肠杆菌表达外源重组人ＶＥＧＦ的基础上，应用制备性ＳＤＳ－ＰＡＧＥ从包涵体中分离纯化了这一因子。纯化蛋白在含有氧化型与还原型谷胱甘肽和肝素的缓冲液中复性，复性后的ＶＥＧＦ蛋白成为同源双体，经Ｍｉｌｅｓ方法检测，证明可提高血管通透性，具有生物活性。这一研究为制备具有生物活性的重组人ＶＥＧＦ蛋白，从而开展有关其生理与病理意义的研究奠定了基础。

关键词：血管透因子生物活性制备

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内皮素对血管平滑肌细胞中—氧化氮合成酶基因表达的影响

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中国高血压杂志 1994年第2期2卷 75-77页

作者：周洪张晨晖李倩虹牛大地张新波温进坤周爱儒北京医科大学心血管基础研究所分子生物学研究室北京100083

应用反转录－聚合酶链式反应（reversetranscription－polymerasechainreaction，RT-PCR）方法，测定出一氧化氮合成酶（nitricoxidesynthetase，NOS）mRNA不仅在心血管系统细胞中广泛存在，并且发现内皮素可以促进血管平滑肌细胞中NOSm... 详细信息

应用反转录－聚合酶链式反应（reversetranscription－polymerasechainreaction，RT-PCR）方法，测定出一氧化氮合成酶（nitricoxidesynthetase，NOS）mRNA不仅在心血管系统细胞中广泛存在，并且发现内皮素可以促进血管平滑肌细胞中NOSmRNA的表达（＋34．8％），增高血管平滑肌细胞中NOS酶活性（＋74％）。结果提示，由内皮素引起的血管平滑肌细胞中NOS基因表达和NOS活性的增加，可能是高血压中的一个重要的负反馈因素。

关键词：内皮素一氧化氮合成酶高血压

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