检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：赖艳娴南方医科大学

学位级别：博士

研究背景和目的LncRNA通过参与转录、转录后及表观遗传调控,调节细胞的增殖、凋亡功能,促进心血管疾病的发生和进展。LncRNAPTENP1是肿瘤抑制基因PTEN的假基因。PTEN已被证实与SMC的增殖、凋亡及主动脉瘤(AA)的扩张有关。PTENP1可作为... 详细信息

研究背景和目的LncRNA通过参与转录、转录后及表观遗传调控,调节细胞的增殖、凋亡功能,促进心血管疾病的发生和进展。LncRNAPTENP1是肿瘤抑制基因PTEN的假基因。PTEN已被证实与SMC的增殖、凋亡及主动脉瘤(AA)的扩张有关。PTENP1可作为竞争性内源性RNA(ceRNA)靶向吸附miR-21,解除miR-21对PTEN的抑制,上调PTEN的表达,进而影响PTEN的下游通路。然而,尚不清楚PTENP1是否以及如何影响人主动脉平滑肌细胞(HASMCs)的增殖、凋亡,从而促进AA或主动脉夹层(AD)的发展。在本研究中,我们试图论证PTENP1通过ceRNA机制靶向吸附miR-21,从而调控PTEN的表达,影响HASMCs的增殖、凋亡功能,并阐明PTENP1是AA或AD干预的潜在靶点。方法1.检测PTENP1、PTEN在人正常动脉组织、AD组织标本中是否存在差异表达分别对人AD、正常动脉组织进行病理学分析,并通过RT-PCR、WB、免疫组化、原位杂交检测PTENP1、PTEN在组织中的表达。2.探索PTENP1对HASMCs增殖、凋亡功能的影响(1)敲低PTENP1后通过免疫荧光实验检测细胞的增殖水平。(2)构建PTENP1过表达腺病毒载体,转染HASMCs后通过RT-PCR、WB、TUNEL、Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡情况。3.探索PTENP1对AAA模型的影响构建PTENP1慢病毒载体,转染C57BL/6J小鼠,植入Ang II泵,诱导AAA模型。模型建立后检测小鼠的腹主动脉直径、成瘤率,对瘤体进行病理分析。4.探索PTENP1调节HASMCs功能的机制(1)通过RNA pull-down、荧光素酶、免疫荧光实验,探索PTENP1通过ceRNA机制靶向miR-21,调节PTEN表达。(2)分别过表达和敲低PTENP1,探索PTENP1通过调节PTEN表达影响PI3K/Akt信号通路及细胞周期。结果***1、PTEN在人AD组织中的表达上调PCR、WB实验表明,在人AD组织中PTENP1和PTEN均被上调,且原位杂交检测示PTENP1主要表达于主动脉壁中层的平滑肌。人AD组织中SMC的生物标志物如α-SMA、MYH11和SM22的表达水平较正常主动脉组织显著降低。***1调控HASMCs增殖、凋亡的功能TUNEL、流式细胞仪检测分别表明,与control组相比,过表达PTENP1显著增加凋亡因子cleaved-casp3的表达,促进细胞凋亡。而敲低PTENP1则减轻了 H2O2诱导的HASMCs凋亡。免疫荧光实验证明,与control组相比,敲低PTENP1显著增加增殖相关因子phospho-H3、Ki-67的表达,促进细胞增殖。3.过表达PTENP1促进Ang II诱导的AAA模型的发展我们在AngⅡ诱导的C57BL/6J小鼠AAA模型中成功过表达PTENP1病毒。与注射空病毒组相比,过表达PTENP1病毒组小鼠的腹主动脉最大直径明显增大、AAA发生率明显增高。进一步的病理分析结果证明,过表达PTENP1促进小鼠主动脉壁SMC凋亡和弹性纤维的降解,加剧AngⅡ诱导的AAA形成。***1通过ceRNA机制靶向miR-21,上调PTEN的表达,进而调控HASMCs的功能为进一步分析其机制,我们进行了 RNA pull-down实验,并用miR-21模拟物或抑制剂进行一系列荧光素酶实验,证明PTENP1通过ceRNA机制与PTEN转录本竞争性地结合miR-21,直接“海绵”吸附miR-21,减少其对PTEN的抑制,上调PTEN的表达。免疫荧光实验进一步支持这一发现:在过表达PTENP1基础上使用miR-21模拟物,PTEN的表达下调,细胞凋亡减少。PTEN拯救实验结果示敲低PTEN显著减轻过表达PTENP1诱导的细胞凋亡,证明PTEN是PTENP1调节路径必不可少的环节。最后,WB显示,在HASMCs中过表达PTENP1显著上调PTEN的表达,并降低了 Akt的磷酸化以及cyclinD1、cyclinE的水平;敲低PTENP1则相反。结论假基因PTENP1通过ceRNA机制靶向miR-21上调PTEN的表达从而抑制其下游PI3K/Akt通路传导,抑制cyclinD1、cyclinE的表达,使细胞周期停滞,最终调节HASMCs的凋亡、增殖功能,促进AA或AD的形成和发展。

关键词：动脉瘤平滑肌细胞增殖凋亡假基因 PTENP

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肺脏超声定量评价血管外肺水含量及相关机制研究

肺脏超声定量评价血管外肺水含量及相关机制研究

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作者：宗海峰南方医科大学

学位级别：博士

背景:血管外肺水增多是成人、儿童以及新生儿常见肺脏疾病的病理基础之一。血管外肺水是指肺内液体积聚在肺血管外,主要在肺泡间质和肺泡内,其在临床上表现为肺水肿。肺液累积可引起呼吸衰竭。目前,临床上血管外肺水可以通过多种手段进... 详细信息

背景:血管外肺水增多是成人、儿童以及新生儿常见肺脏疾病的病理基础之一。血管外肺水是指肺内液体积聚在肺血管外,主要在肺泡间质和肺泡内,其在临床上表现为肺水肿。肺液累积可引起呼吸衰竭。目前,临床上血管外肺水可以通过多种手段进行评估,但各有缺点。随着肺脏超声技术的发展,肺脏超声被用来诊断肺水肿以及定量评价血管外肺水。同时,肺脏超声可以用来判断肺脏病理改变。基于肺脏超声的图像特点,结合临床观察,我们试图寻求适合新生儿定量血管外肺水评价的策略。另外,运用肺脏超声动态监测肺内血管外肺水增多超声图像随时间的转变,并探求其潜在机制。方法:本研究通过经气管插管向新西兰兔肺内注入不同剂量生理盐水建立动物模型,研究不同含量血管外肺水在肺脏超声上的表现,运用肺脏超声定量评价血管外肺水。通过我们预先设定的B线评分系统和不同血管外肺水含量模型来研究超声定量评分与血管外肺水之间的相关性,以及不同血管外肺水对氧合的影响。同时,结合临床观察,运用肺脏超声监测新西兰兔肺内注入不同剂量生理盐水后4小时期间超声图像的改变,通过组织病理分析研究其超声图像与病理改变的相关性。运用qRT-PCR、Western Blot以及免疫组化方法检测其对肺表面活性蛋白B和C,以及肺内水通道蛋白1和Na、K-ATPase蛋白表达的影响。结果:随着注入肺内生理盐水量的增加超声B线评分相应增加,呼吸窘迫加重。B线评分与肺脏湿/干(r2=0.946)和PaO2/FiO2(r2=0.916)具有显著的统计学相关性。此外,同一研究者和不同研究者之间的B线评分一致性良好。当注入肺内的生理盐水体积≤4ml/kg时,4小时后肺脏超声显示肺水大部分被吸收。当注入的生理盐水体积≥6ml/kg,部分肺水肿的区域表现为肺实变,qRT-PCR及Western blot结果显示肺表面活性蛋白B和肺表面活性蛋白C的mRNA和蛋白表达显著下调(P<0.05)。同时,水通道蛋白1和Na、K-ATPase的mRNA及蛋白表达水平显著降低。免疫组化染色显示了同样的结果。结论:本研究显示,B线评分可作为评价血管外肺水增多的一个敏感、定量、无创、实时的指标。B线评分与肺重量测量结果有显著的相关性,另外,B线评分还可以预测肺氧合状态。在临床上可以指导液体管理和呼吸支持策略。随着血管外肺水的增加,4小时后肺超声图像从肺水肿变为肺实变,其潜在的机制与肺表面活性蛋白表达的显著下调有关。在临床上可以指导外源性肺表面活性物质的应用。同时,随着血管外肺水的增加,4小时后水通道蛋白1和Na、K-ATPase的蛋白表达显著下调,可能导致肺泡液的清除障碍,加重肺损伤。

关键词：血管外肺水肺脏超声 B线评分定量肺表面活性蛋白水通道蛋白

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饮茶与老年代谢综合征关系的研究进展

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中华老年医学杂志 2021年第5期40卷 676-681页

作者：白灵彭阳邹云锋杨曦广西医科大学第一附属医院老年病学内分泌代谢科广西心脑血管疾病防治精准医学重点实验室广西心脑血管疾病临床医学研究中心南宁530021 广西医科大学公共卫生学院职业卫生与环境卫生学教研室南宁530021 广西医科大学公共卫生学院毒理学教研室南宁530021

代谢综合征是以肥胖、高血糖、高血压及血脂异常等多种代谢紊乱症状同时存在为特征的临床症候群。目前,代谢综合征的发病率逐年上升,且在老年人群中更为普遍,严重威胁老年人生活质量。茶是全球范围内广泛流行的饮料,饮茶被发现具有降低... 详细信息

代谢综合征是以肥胖、高血糖、高血压及血脂异常等多种代谢紊乱症状同时存在为特征的临床症候群。目前,代谢综合征的发病率逐年上升,且在老年人群中更为普遍,严重威胁老年人生活质量。茶是全球范围内广泛流行的饮料,饮茶被发现具有降低血压、血糖和血脂水平等诸多功效。现就饮茶对老年人代谢综合征及其组分的作用及可能的机制进行综述。

关键词：代谢综合征X 茶

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下颌前移矫治器治疗OSAHS前后对肺动脉功能及结构的影响及机制探讨

下颌前移矫治器治疗OSAHS前后对肺动脉功能及结构的影响及机制探讨

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作者：王雯张士珑王雅杰乔星康文静刘艳艳河北医科大学口腔医院

课题来源及背景 OSAHS是临床常见的慢性睡眠障碍性疾病,有研究证明OSAHS是肺动脉高压（PAH）的独立危险因素。但OSAHS对肺动脉功能及结构影响以及其致病机理尚不明确。本研究拟首先使用课题组建立的成熟的OSAHS动物模型,探讨OSAHS对肺... 详细信息

课题来源及背景 OSAHS是临床常见的慢性睡眠障碍性疾病,有研究证明OSAHS是肺动脉高压（PAH）的独立危险因素。但OSAHS对肺动脉功能及结构影响以及其致病机理尚不明确。本研究拟首先使用课题组建立的成熟的OSAHS动物模型,探讨OSAHS对肺动脉功能及结构的影响。其次,对OSAHS相关的肺血管损伤机制进行探讨。目前认为,内皮介导的一氧化氮合成障碍是内皮功能障碍的主要原因之一。因此本研究拟系统阐述NO途径在OSAHS所致肺动脉损伤中的作用。同时,在动物实验中,我们拟观察下颌前移矫治器（MAD）治疗OSAHS对肺血管功能及结构的影响,从而对MAD治疗OSHAS及预防其可能产生的PAH做出评价。在临床实验部分我们拟对OSAHS患者,OSAHS合并轻度PAH患者在使用MAD治疗前及治疗3个月后进行多导睡眠监测（PSG）、肺动脉压监测（PAP）、血流介导舒张功能检测（FMD）、NO水平检测,Epworth嗜睡量表评估,并与基线值及对照组进行比较,从而评价MAD治疗OSAHS的效果。最后对NO与上述指标进行相关分析,从而对NO途径在OSAHS所致PAH中所起作用进行探讨。项目创新点：创新点1：首次应用新西兰白兔建立上气道阻塞OSAHS动物模型,研究OSAHS对肺动脉功能及结构的影响;并在组织及分子水平揭示NO通路在OSAHS引起的肺动脉损伤中所起的作用。创新点2：应用下颌前移矫治器（MAD）治疗OSAHS观察其对实验动物肺动脉结构和功能的影响。创新点3：研究临床OSHAS患者使用MAD治疗前后肺动脉功能及NO水平变化,为MAD治疗OSAHS及预防其可能引发的肺动脉病理性改变提供实验基础和理论依据。已发表文章及专著：（1）Wen Wang, Fang Yuan, Yali Hou, Dongru Yang, Shilong Zhang, Haiyan Lu*. Treatment of obstructive sleep apnoeahypopnea syndrome （OSAHS） with a mandible advanced device increases nitric oxide release and ameliorates pulmonary hypertension in rabbits. J Oral Maxillofac Surg,2021,79（3）:694.e1-694.e12. （2）口腔颌面部疾病的临床病理诊断与治疗【M】北京：科学技术文献出版社.2019（副主编）（3）常见口腔疾病诊治要点【M】.吉林科学技术文献出版社.2019（主编）。

关键词：肺动脉损伤下颌前移矫治器临床治疗

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代谢紊乱相关慢性非传染性疾病社区流行趋势演变及患病风险预测 ...

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作者：洪国保南方医科大学

学位级别：博士

一、研究背景1.代谢紊乱相关慢性非传染性疾病(NCDs)的流行趋势进展全世界总死亡人数的73.4%死于慢性非传染性疾病(Chronic noncommunica ble diseases,NCDs),其中高尿酸血症、代谢综合征(Metabolic syndrome,Me tS)、高血压、糖尿病、... 详细信息

一、研究背景1.代谢紊乱相关慢性非传染性疾病(NCDs)的流行趋势进展全世界总死亡人数的73.4%死于慢性非传染性疾病(Chronic noncommunica ble diseases,NCDs),其中高尿酸血症、代谢综合征(Metabolic syndrome,Me tS)、高血压、糖尿病、慢性肾脏病(Chronic kidney disease,CKD)为5种最常见代谢紊乱相关NCDs,它们常互为因果或共病且最终结局多为心血管疾病,因此有必要联合研究。以上NCDs的患病率多年来在全球均持续升高,但近期多个国家报道了新的流行趋势演变-部分NCDs患病率趋于稳定甚至下降。中国与上述主要NCDs演变趋势相关的流行病学数据比较缺乏。不同时期的全国多中心横断面研究未见于高尿酸血症、CKD,在高血压、糖尿病、MetS领域的横断面研究虽报道较多但均非重复横断面研究,因此各项报道的研究方案如诊断标准、年龄范围、抽样地区等存在较大差异,也难以相互直接比较以精确反映上述主要NCDs流行趋势的变化。国内未见同时研究以上5种最常见代谢紊乱相关NCDs及其共病流行趋势的重复横断面调查报道。国内针对单个NCD社区流行趋势的重复横断面研究同样少见,且部分研究缺乏不同性别、年龄段的流行趋势分析。文献可查到的有关单个NCD或单个共病流行趋势的为数不多的重复横断面研究报道、以及还需要进一步研究的内容归纳如下:1)高尿酸血症:仅见2项来自北京及山东的研究报道了高尿酸血症患病率呈升高趋势。未见针对南方人群的重复横断面研究报道,国内外未见研究尿酸正常高值的重复横断面研究报道。2)MetS:仅见1项研究报道55岁以上人群MetS患病率没有变化。缺乏针对55岁以下人群MetS的重复横断面研究报道,未见研究MetS各组分的重复横断面报道。3)CKD:仅见1项研究报道新疆墨县维吾尔族人群的CKD患病率上升,未发现针对汉族社区人群的重复横断面研究报道。4)高血压:5项研究报道高血压患病率的上升趋势但3项研究报道先升后降趋势。仅有的两项对血压正常高值的调查也结论矛盾。缺乏珠海地区高血压流行趋势的重复横断面研究报道,未见研究南方人群血压正常高值的报道。5)糖尿病:3项研究分别提示上升、先升后降、仅男性上升但女性稳定的不同趋势。此外仅1项研究报道了糖尿病前期的患病率上升。未见南方人群的重复横断面报道。6)MetS+CKD共病、高尿酸+CKD共病、高尿酸+高血压共病、高尿酸+糖尿病共病、高尿酸+MetS共病:国内均未见重复横断面研究报道。2.以上NCDs的患病风险预测指标研究进展部分NCDs的患病风险预测指标研究仍不够深入,特别缺乏相关共病、高尿酸血症患病风险的良好预测标志物,具体归纳如下:2.1高密度脂蛋白胆固醇亚型与MetS+CKD共病的相关性及风险预测国内外缺乏MetS+CKD共病患病风险研究的报道,未见高密度脂蛋白胆固醇(High density lipoprotein cholesterol,HDL)亚型 HDL2b、HDL2b/HDL、HDL3/HDL、HDL3/HDL2b与MetS+CKD共病的相关性及风险预测的研究报道。2.2视黄醇结合蛋白4与高尿酸血症的相关性及预测价值国内外有关高尿酸血症自身患病风险的单个预测标志物报道很少且预测性能不佳。国内外未见文献报道视黄醇结合蛋白4(Retinol binding protein 4,RBP4)预测高尿酸血症的价值。RBP4与高尿酸的相关性研究在成人社区人群的研究暂未见文献报道,现有文献仅见于特定人群如糖尿病、CKD、MetS患者等。2.3.各种新型人体脂肪评价指标与高尿酸血症的相关性及预测价值研究进展国内外有关新型人体脂肪评价指标在高尿酸血症领域的文献较少(暂仅查到8篇,其中来自社区人群5篇,仅1项覆盖全部年龄段成人)。每项研究仅涉及1～2个新指标,且预测价值有限。国内外未见研究报道同时比较3种及以上新指标预测高尿酸血症的价值,因此各新指标的预测价值无法相互比较,不能明确最佳指标。国内外未见研究报道腹部体积指数(abdominal volume index,AVI)、锥度指数(conicity index,C-index)与高尿酸血症的相关性及预测性能。未见来自广东人群的研究报道,涉及南方人群的研究也仅1项。2.4炎症与MetS的时间关联及性别异质性仍存争议、结论矛盾尽管横断面研究报道了炎症与MetS的相关性及种族差异,但无法证明二者的因果关系。国外仅有的4项随访研究报道了 C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)与MetS的影响及性别差异,但结论矛盾,且研究设计多有缺陷。国内暂未见随访研究报道。3.珠海地区的特点适合流行病学研究及本团队既往工作基础珠海地区具备开展NCDs社区流行趋势研究的优势:是中

关键词：重复横断面慢性非传染性疾病共病代谢紊乱流行趋势预测

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泛素羧基末端水解酶L1在高血压和血管重构中的作用及机制

泛素羧基末端水解酶L1在高血压和血管重构中的作用及机制

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作者：徐爱丽大连医科大学

学位级别：博士

背景:血管重构是高血压病及其并发症的病理生理学基础,炎症在血管重构中发挥重要的作用。血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)是强烈的促炎症因子,参与高血压的发生、发展过程。泛素羧基末端水解酶L1(Ubiquitin carboxyl terminal hydrolase L1,UCH-L1... 详细信息

背景:血管重构是高血压病及其并发症的病理生理学基础,炎症在血管重构中发挥重要的作用。血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)是强烈的促炎症因子,参与高血压的发生、发展过程。泛素羧基末端水解酶L1(Ubiquitin carboxyl terminal hydrolase L1,UCH-L1)是去泛素化酶家族中重要的一员,最新研究表明,UCH-L1通过激活炎症信号通路参与心肌肥厚、房颤等心血管疾病的发生,但在高血压血管重构和功能障碍中的作用仍不清楚。目的:探讨泛素羧基末端水解酶L1(UCH-L1)在高血压血管重构和功能障碍中的作用及机制。明确泛素羧基末端水解酶L1(UCH-L1)可否作为有效控制高血压的新靶点。方法:1.动物模型建立:采用8-10周龄UCH-L1基因敲除小鼠、骨髓移植嵌合体小鼠及UCH-L1特异性抑制剂LDN处理的C57BL/6J小鼠,通过微量缓释泵灌注Ang Ⅱ(490 ng/kg/min)14天构或DOCA-盐处理21天构建小鼠高血压模型。2.动脉血压测定:采用植入式遥测法或鼠尾套管血压仪测量小鼠动脉收缩压和舒张压。3.组织病理和细胞分析:应用H&E染色观察血管组织间质炎性细胞的浸润情况。Masson三色染色(Masson‘s trichrome stain)检测血管组织纤维化的情况。免疫组织化学染色观察巨噬细胞浸润的情况。流式细胞技术分析组织中免疫炎症细胞的数量。4.基因表达水平分析:采用实时定量PCR检测血管纤维化和炎症相关基因的表达水平。5.血管舒缩功能评估:将小鼠离体胸主动脉切成4 mm节段,放置在血管张力传感器上。应用去甲肾上腺素刺激,以检测主动脉环内皮收缩功能,记录血管对浓度依次递增的乙酰胆碱和硝普钠的舒张功能。6.分析方法:结果用均数±标准误(Mean±SEM)表示。若实验数据符合正态分布,则使用t检验来确定两组之间的显著性差异。若实验数据不呈现正态分布,则使用Mann Whitney检验。采用方差分析对三组以上数据进行分析。结果:*** Ⅱ处理14天后,血管组织中UCH-L1的表达比对照组明显增高。*** Ⅱ处理野生型小鼠14天后,动脉血压明显升高、血管纤维化程度增加,炎症反应增强,表现为血管组织巨噬细胞的浸润增加、促炎细胞因子(IL-1β、IL-6和TNF-α)表达升高、氧化应激反应增强(表现为DHE荧光强度和NADPH氧化酶NOX1、NOX2和NOX4表达水平均增高)以及血管内皮舒缩功能障碍;相反,这些病理改变和功能异常在UCH-L1基因敲除小鼠均得到明显改善。***-L1特异性抑制剂LDN显著抑制Ang Ⅱ诱导的高血压、管壁厚度、纤维化、炎症反应及氧化应激。4.与野生型小鼠相比,敲低UCH-L1可以显著降低DOCA-盐处理诱导的动脉血压升高、血管纤维化,促炎细胞因子表达增加、氧化应激反应增强。5.与野生型小鼠骨髓细胞移植到野生型小鼠组比较,UCH-L1敲除小鼠的骨髓细胞移植到野生型小鼠组的动脉血压升高、血管纤维化、炎症反应、氧化应激以及血管功能障碍也明显减轻。结论:本研究证明,UCH-L1在Ang Ⅱ或DOCA-盐刺激高血压的血管重构中发挥重要作用,其主要机制是在实验条件下血管组织中UCH-L1表达水平升高,招募并激活大量骨髓来源的巨噬细胞到血管周围,释放大量炎症因子,引起管壁增厚、纤维化、炎症反应和氧化应激,导致血管重构和功能障碍。因此,抑制UCH-L1活性可以作为干预高血压血管重构发生的一个新的潜在靶点。

关键词：泛素羧基末端水解酶L1 高血压血管重构巨噬细胞

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BMMSCs联合常温机械灌注对大鼠DCD供肝质量的影响及其机制研究

BMMSCs联合常温机械灌注对大鼠DCD供肝质量的影响及其机制研究

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作者：杨柳天津医科大学

学位级别：博士

目的:探讨骨髓间充质干细胞(BMMSCs)联合常温机械灌注(NMP)对大鼠DCD供肝质量的影响及其作用机制。方法:用贴壁法提取BMMSCs。夹闭胸主动脉热缺血30min获取心脏死亡捐献(DCD)供肝。在体外建立稳定的大鼠NMP系统,供肝根据不同的保存方式... 详细信息

目的:探讨骨髓间充质干细胞(BMMSCs)联合常温机械灌注(NMP)对大鼠DCD供肝质量的影响及其作用机制。方法:用贴壁法提取BMMSCs。夹闭胸主动脉热缺血30min获取心脏死亡捐献(DCD)供肝。在体外建立稳定的大鼠NMP系统,供肝根据不同的保存方式,将实验分为4组:正常(Normal)组,静态冷保存(SCS)组,NMP组,BMMSCs联合NMP组,保存时间最长为8 h。模拟DCD供肝氧化应激损伤,建立体外IAR20细胞氧化应激损伤模型,与BMMSCs共培养6 h。采用生物化学方法检测肝脏流出道灌注液的肝功能;HE染色观察肝组织病理学改变;透射电镜观察线粒体超微结构;TUNEL或Annexin V-FITC/PI双染检测细胞凋亡情况;免疫荧光检测CD14、CD68和髓过氧化物酶(MPO)的表达情况;免疫组化染色及Western blot检测肝脏组织内皮素-1(ET-1)、内皮型一氧化氮合酶(e NOS)、诱导型一氧化氮合酶(i NOS)、血管性血友病因子(v WF)、细胞间黏附分子(ICAM-1)、血管间黏附分子-1(VCAM-1)、JUN N端激酶(JNK)、p-JNK(Thr183/Tyr185)、NF-κB(p65)、p-NF-κB(Ser36)、AMP依赖的蛋白激酶(AMPK)α、p-AMPK(Thr172)、乙酰辅酶A羧化酶(ACC)和p-ACC(Ser79)的表达情况;ELISA检测下腔静脉灌注液中的ET-1、一氧化氮(NO)、ICAM-1、VCAM-1、TM和PAF的水平;MDA、GSH检测氧化应激水平;DCFH-DA荧光探针法检测细胞ROS水平;JC-1荧光探针法检测线粒体膜电位水平。结果:与SCS比较,BMMSCs联合NMP和单纯NMP能显著改善DCD供肝肝功能和肝脏组织学损伤,减轻肝细胞凋亡。进一步发现:***联合NMP可改善DCD肝脏微循环:改善肝脏ET-1/NO平衡和微循环灌注,与SCS相比,BMMSCs联合NMP显著抑制肝内ET-1、i NOS、NO的表达,促进e NOS的表达(P<0.05);抑制巨噬细胞活化和细胞间黏附,改善内皮细胞损伤,与SCS比较,BMMSCs联合NMP显著下调肝脏巨噬细胞CD14和CD68的表达,抑制肝内ICAM-1和VCAM-1的表达和v WF的表达,且作用优于单纯NMP(P<0.05)。***联合NMP能减轻DCD肝脏氧化应激损伤,改善肝细胞线粒体损伤和提高线粒体膜电位功能(P<0.05),并且BMMSCs联合NMP明显优于单纯NMP;BMMSCs联合NMP可显著抑制JNK-NF-κB通路减轻氧化应激,促进AMPK激活保护受损的线粒体(P<0.05),进而改善大鼠DCD肝脏氧化应激损伤和线粒体功能;细胞模型中,BMMSCs可显著减少体外IAR20氧化应激模型中细胞损伤,抑制IAR20细胞活性氧(ROS)的释放,改善细胞线粒体损伤,提高线粒体膜电位水平,BMMSCs显著下调氧化应激模型IAR20细胞JNK-NF-κB信号通路,促进AMPK激活,再次验证了BMMSCs发挥保护作用的机制。结论:在供肝短缺的形势下,提高DCD供肝质量是扩大可用供体库的有效方法。本研究证明:BMMSCs联合NMP可更有效改善DCD供肝质量,并通过以下机制发挥保护作用:(1)抑制巨噬细胞活化和细胞间黏附,改善窦内皮损伤及微循环灌注;(2)抑制JNK-NF-κB通路减轻DCD供肝氧化应激损伤,促进AMPK激活改善线粒体损伤和线粒体功能而发挥保护作用。BMMSCs联合NMP对DCD供肝的保存为提高DCD供肝质量提供了有效的新方法,为临床DCD供肝的使用提供了基础实验依据。

关键词：骨髓间充质干细胞心脏死亡器官捐献常温机械灌注肝脏微循环氧化应激线粒体

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含笑内酯衍生物DMAMCL抑制Metadherin介导的肾小管炎症反应改善糖尿病肾脏疾病

含笑内酯衍生物DMAMCL抑制Metadherin介导的肾小管炎症反应改善糖...

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作者：刘文婷南方医科大学

学位级别：博士

研究背景糖尿病肾脏疾病(diabetes kidney disease,DKD)是我国终末期肾脏病的首要病因,目前治疗手段十分有限,无法根治。深入探究DKD的分子发病机制,研发有效的治疗药物是全球肾脏病学界共同关注的重大问题。肾脏炎症反应在DKD的发病机... 详细信息

研究背景糖尿病肾脏疾病(diabetes kidney disease,DKD)是我国终末期肾脏病的首要病因,目前治疗手段十分有限,无法根治。深入探究DKD的分子发病机制,研发有效的治疗药物是全球肾脏病学界共同关注的重大问题。肾脏炎症反应在DKD的发病机制中起关键作用,但确切分子机制尚未完全阐明。核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)信号通路在DKD肾脏炎症反应中有中枢调控作用,通过药物抑制NF-κB炎症信号通路可能是有效的DKD治疗手段。含笑内酯(micheliolide,MCL)在NF-κB抑制剂小白菊内酯的结构基础上修饰而来,提高了水溶性、稳定性及生物活性。二甲胺基含笑内酯富马酸盐(dimethylaminomicheliolide,DMAMCL)是MCL的前体药物,对多种肿瘤及炎症性疾病有良好的治疗效果。我们前期研究发现DMAMCL可改善腹膜纤维化及肾脏纤维化,但其对DKD是否有治疗作用及相关的分子机制有待探讨。异黏蛋白(metadherin,Mtdh)是重要的原癌基因,通过调控多条信号通路参与肿瘤细胞的存活、增殖、血管形成、炎症反应等多种病理学过程。我们前期研究发现Mtdh在DKD小鼠肾脏中表达升高并可促进足细胞凋亡,但其在DKD炎症损伤中的作用尚未见报道。研究目的本研究旨在探讨DMAMCL对DKD的治疗作用,Mtdh在DKD肾脏炎症反应中的作用及MCL对Mtdh表达的调控机制。研究方法研究分别以db/db小鼠、高糖诱导的小鼠肾小管细胞系(mTEC)为DKD体内、外模型。采用免疫组织化学染色、Western blot检测蛋白的表达情况,实时荧光定量PCR检测mRNA的表达情况,免疫荧光染色观察p65的细胞分布情况。采用慢病毒感染、质粒转染的方法下调或过表达mTEC中的Mtdh。采用荧光素酶报告基因实验检测MCL对Mtdh转录的影响,pull down实验检测MCL与Mtdh的结合情况,免疫共沉淀检测Mtdh的泛素化情况。研究结果结果表明DMAMCL可有效改善DKD小鼠的肾功能、减少尿蛋白排泄,体内、外水平上DMAMCL(MCL)干预可抑制DKD模型NF-κB信号通路的激活及炎症因子的产生。Mtdh在DKD小鼠肾脏组织及高糖诱导的mTEC中表达升高,体外下调Mtdh的表达可抑制NF-κB炎症信号通路激活及炎症因子的产生。DMAMCL及MCL可分别在体内、外水平上抑制Mtdh的表达,且MCL可抑制Mtdh过表达诱导的NF-κB信号通路激活及炎症因子的产生。进一步探究MCL抑制Mtdh表达的分子机制发现,MCL可抑制Mtdh的转录,并促进其泛素化蛋白酶体途径降解。研究结论综上,我们发现DMAMCL对DKD小鼠具有良好的治疗作用。此外,Mtdh在DKD小鼠肾脏及高糖诱导的小管细胞中表达升高并通过调控NF-κB信号通路诱导炎症反应。DMAMCL可通过抑制Mtdh转录并促进其经泛素化降解从而抑制Mtdh的表达,这可能是DMAMCL改善DKD肾脏损伤的重要机制之一。

关键词：糖尿病肾脏疾病炎症反应 DMAMCL Metadherin NF-κB信号通路

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心肌Kv7.1钾通道IQ1基序蛋白的制备与纯化

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解剖科学进展 2022年第2期28卷 197-199,203页

作者：张瑞佳邵秀丽朱荣利张晓琳孙旋旋郝丽英封瑞中国医科大学药学院药物毒理学教研室辽宁沈阳110122

目的制备与纯化心肌Kv7.1钾通道IQ1基序的蛋白,为研究钾离子通道蛋白片段与钙调蛋白(calmodulin,CaM)的相互作用做准备,为明确相关心血管疾病发病机制奠定基础。方法采用基因重组技术,将IQ1基因片段插入pGEX-6p-1质粒,并将重组质粒转... 详细信息

目的制备与纯化心肌Kv7.1钾通道IQ1基序的蛋白,为研究钾离子通道蛋白片段与钙调蛋白(calmodulin,CaM)的相互作用做准备,为明确相关心血管疾病发病机制奠定基础。方法采用基因重组技术,将IQ1基因片段插入pGEX-6p-1质粒,并将重组质粒转化入大肠杆菌,使其在大肠杆菌中诱导表达IQ1蛋白,再采用酶裂解、超声破碎法提取IQ1蛋白,使用SDS-PAGE电泳确认制备蛋白的浓度与纯度,Pull-down assay方法检测蛋白的结合能力。结果本研究制备了较高浓度与纯度的心肌Kv7.1钾通道的IQ1蛋白,且在2mM的Ca;浓度下,CaM与IQ1的结合可能呈浓度依赖性,说明制备的IQ1蛋白具有很好的结合能力。结论采用基因重组技术与超声破碎方法能提取纯化心肌Kv7.1通道IQ1基序蛋白,并且浓度和结合能力均很好,可用来进一步的深入实验研究。

关键词：钾离子通道基因重组钙调蛋白 IQ基序蛋白长QT综合征

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基于血清药物化学和网络药理学的榅桲提取物入血成分抗动脉粥样硬化作用及机制研究

基于血清药物化学和网络药理学的榅桲提取物入血成分抗动脉粥样硬...

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作者：阿布来提·阿布力孜新疆医科大学

学位级别：博士

目的：　　动脉粥样硬化（atherosclerosis，AS）是因脂质代谢紊乱、炎症反应等因素引起的主动脉慢性进行性病变，是多种心血管疾病的病理基础。研究证实榅桲提取物具有降低血压、调节血脂、抗氧化应激等功效，但榅桲抗AS作用机制和物... 详细信息

目的：　　动脉粥样硬化（atherosclerosis，AS）是因脂质代谢紊乱、炎症反应等因素引起的主动脉慢性进行性病变，是多种心血管疾病的病理基础。研究证实榅桲提取物具有降低血压、调节血脂、抗氧化应激等功效，但榅桲抗AS作用机制和物质基础尚未明确。本研究分析鉴定榅桲提取物化学成分，通过血清药物化学的方法确定其原型入血成分;通过网络药理学方法构建榅桲入血成分-作用靶点-蛋白互作网络，信号通路富集分析，初步预测榅桲入血成分抗AS作用机制;建立AS动物模型确定榅桲抗AS药理作用，从调血脂、抗氧化应激、抗炎症反应、血管保护功能等多个方面深入阐明其作用机制。　　方法：　　1．提取分离榅桲提取物，采用 UHPLC-Q-TOF-MS/MS技术分析鉴定化学成分，比较分析不同血清样品色谱图，确定榅桲原型入血移行成分。　　2．通过TCMSP数据库、Swiss ADME数据库筛选榅桲入血成分类药性，Swiss Target prediction数据库获取成分靶点，DisGeNET和OMIM数据库预测和筛选AS相关靶点。采用 Cytoscape软件构建活性成分-作用靶点网络，String和Cytoscape软件联用绘制蛋白互作网络图。采用DAVID对靶点进行GO功能富集分析，靶点导入KOBAS 3.0服务器进行靶点通路预测，构建“成分-靶点-通路”网络，结合相关文献分析预测榅桲入血成分抗AS作用机制。　　3．建立高脂乳剂联合维生素D3诱导大鼠AS模型。将动物随机分为空白组、模型组、阳性对照组（阿托伐他汀钙片5mg/kg）、榅桲低、中、高三个剂量组（分别为40、80、160mg/kg），每组12只，模型组、阳性对照组、榅桲三个剂量组均每日灌胃高脂乳剂一次，灌胃16W，第一周腹腔注射维生素D3 60U/kg，第三周注射20U/kg，第 9W 开始，空白组和模型组灌胃蒸馏水，阳性对照组和榅桲治疗组分别灌胃给予相应的受试药物，每天1次，连续给药8W。末次给药后，对颈动脉进行超声检查，用Power Lab生物信息采集系统测定血压和血流动力学参数，测定血脂（TC、TG、LDL-C、HDL-C）、肝功能（ALT、AST）水平，根据超声结果对主动脉和肝脏进行病理分析;根据网络药理学成分-靶点-通路分析结果，结合药效学指标，检测炎症因子（IL-1β、IL-6、TNF-α、CRP、IL-10），氧化应激（SOD、MDA、GSH-px），血管内皮功能因子 NO、eNOS、ET-1、TXB2、6-keto-PGF1α 水平，从抗炎、抗氧化、血管内皮保护功能等方面探讨榅桲抗AS作用;通过RT-PCR和Western blot法对前期预测的PI3K/AKT/GSK-3β通路和细胞凋亡相关靶蛋白进行验证，进一步阐明榅桲抗AS作用机制。　　结果：　　1．从榅桲提取物中总共鉴定出 72 种化合物，主要包括黄酮类、酚酸类、苯丙酸类、萜类、有机酸等成分;比较榅桲提取物、空白血清、含药血清、模拟含药血清色谱图，确定有14种原型入血成分，包括芦丁、绿原酸、亚细亚酸、齐墩果酸等目前研究比较广泛的活性成分。　　2．14个入血成分都能通过类药性评价，化学成分有281个靶点，与AS相关的2045 个疾病靶点互相映射选择与 AS 密切相关的 86 共同个靶点，靶点主要涉及PI3K-Akt信号通路、Metabolic信号通路、HIF-1信号通路等与AS 直接或间接相关的25个通路。　　3．药效学结果：1）超声、病理学、血脂四项结果提示大鼠AS模型建立成功。超声结果显示，模型组动脉壁明显增厚、血管腔狭窄、内壁有斑块或增生，超声评估打分结果秩均值高于其它组;与模型组相比，榅桲干预后动脉壁增厚降低、管腔狭窄程度及斑块面积降低，超声评估打分结果有所下降，阳性对照组和榅桲高剂量组作用最明显（P＜0.05或P＜0.01），榅桲能明显改善大鼠AS病变;2）所有实验动物血压在正常范围内（≤140mmhg），组间无统计学意义（P＞0.05）;与空白组相比，模型组 LV+dp/dtmax、LV-dp/dtmin 明显下降，所有给药组 LV+dp/dtmax、LV-dp/dtmin 有升高趋势，其中阳性对照组和榅桲高剂量组有统计学意义（P＜0.01），说明榅桲能改善AS大鼠心脏血流动力学功能;3）与空白组相比，模型组TC、TG、LDL-C明显升高（P＜0.01），HDL-C明显降低（P＜0.01）;与模型组相比，榅桲提取物各剂量组TC、TG、LDL-C明显降低（P＜0.05或P＜0.01），榅桲低、高剂量组HDL-C水平明显升高（P＜0.01）;4）组织病理学结果表明：空白组血管三层结构基本完整，血管内皮光滑完整，未见明显病变，中膜没有增厚及钙化病灶。模型组血管内皮和中膜有损伤，内膜粗糙，脱落，形成斑块，部分区域断裂，血

关键词：动脉粥样硬化榅桲入血成分疗效评价血清药物化学网络药理学

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