检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：李国星昆明医科大学

学位级别：硕士

[目的]痤疮是一种毛囊、皮脂腺单位的慢性炎症性皮肤病,雄激素导致的皮脂腺过度分泌、毛囊皮脂腺导管角化异常、微生物诱导的炎症反应、环境因素及遗传因素等均可导致其发生。目前痤疮发病机制中的分子生物学、微生物学及细胞学等研究... 详细信息

[目的]痤疮是一种毛囊、皮脂腺单位的慢性炎症性皮肤病,雄激素导致的皮脂腺过度分泌、毛囊皮脂腺导管角化异常、微生物诱导的炎症反应、环境因素及遗传因素等均可导致其发生。目前痤疮发病机制中的分子生物学、微生物学及细胞学等研究较为充分,但不同皮损形态(微粉刺、粉刺、炎性丘疹等)、不同严重程度的痤疮微观形态学研究(毛囊开口、毛囊及周围炎症特征等)较为缺乏。组织病理学是微观形态学研究的主要手段,但由于痤疮多位于面部,组织病理学有创、操作相对复杂、不适合多次检测等缺陷,造成痤疮微观形态学研究不易开展,这对于痤疮发病的病理生理机制等基础研究及临床药物、疗法效果评价带来障碍。皮肤镜具有无创、实时、动态等特点,有光学放大以及消除皮肤表面反射光功能,可显示裸眼不可见的表皮及浅部真皮细微结构,具有动态、亚微观检测痤疮微观形态变化的应用前景,因此我们利用皮肤镜采集不同形态皮损、严重程度的寻常型痤疮图像,并结合组织病理学分析不同形态皮损的皮肤镜表现与组织病理学的一致性关系,汇总不同严重程度、不同形态痤疮的皮肤镜特征,分析其规律,为痤疮的微观形态学、影像学研究做一些基础性工作。[方法]收集2018年10月—2019年2月之间的昆明医科大学第一附属医院皮肤科就诊的寻常痤疮患者,选取符合纳入标准的患者共120例,记录患者姓名,性别,年龄、临床诊疗经过及严重程度分级等资料,患者3周内皮损未行治疗(包括口服、外用及光电方式等)。按照Pillsbury分级标准分为Ⅰ～Ⅳ级,轻度痤疮患者56例,中度痤疮41例,重度痤疮23例;另外分别选取以粉刺、丘疹、脓疱、瘢痕为主的痤疮患者25例、30例、30例、25例,进行皮肤镜图像采集(每例患者共选取3个皮损,采集一个最典型皮损的皮肤镜图像),记录皮肤镜特征(背景、毛孔、毛囊角栓、血管形态、血管分布、附加特征等),部分患者行组织病理活检;对照组:年龄、性别匹配的无痤疮的正常健康人。采用SPSS 17.0软件进行统计学分析,计数资料用率(%)表示,运用卡方检验,计量资料用均数±标准差(x±s),运用方差分析。P<0.05表示差异具有统计学意义。计算轻、中重度痤疮及各皮损特征的皮肤镜出现频率比较。[结果]1、不同严重程度痤疮皮肤镜特征:56例轻度痤疮患者淡红色背景28例(50.00%);花环状血管31例(55.36%);局灶性血管分布35例(62.50%);附加特征:30例(53.57%)可见毛孔粗大,40例(71.43%)可见毳毛增多;41例中度痤疮患者黄红色背景16例,红色背景16例(39.02%),花环状血管20例(48.78%),局灶性血管分布20例(48.78%),肉芽组织样结构23例(56.10%),毳毛增多22例(53.66%);23例重度痤疮患者黄红色背景16例(69.56%),非典型血管12例(52.17%),血管弥漫性分布15例(65.21),毛囊周围淡黄色晕17例(73.91%),肉芽组织样结构13例(56.52%);经χ2检验:轻度、中度、重度痤疮:除血管形态、毳毛增多无统计学意义外(P>0.05),背景、血管分布、毛孔粗大、毛囊周围淡黄色晕、肉芽组织样结构均有统计学意义(P<0.05);2、不同形态皮损类型皮肤镜特征:粉刺皮损25例,淡红色背景17例(68.00%),点状血管13例,(52.00%)局灶性分布19例(76.00%);脓疱患者30例,红色背景12例(40.00%),花环状血管14例(46.67%),弥漫性分布12例(40.00%),毛周“红点征”20例(66.67%);丘疹皮损30例,黄红色背景11例(36.67%),花环状血管14例(46.67%),局灶性分布19例(63.33%),毛周“红点征”22例(73.33%);瘢痕25例,黄红色背景15例(60.00%),非典型血管14例(56.00%),弥漫性分布18例(72.00%);经x2检验:粉刺、脓疱、丘疹、瘢痕各项指标差异均有统计学意义(P<0.05);3、毛囊周围“油滴状晕”:在中、重度痤疮皮肤镜皮损中出现频率较高(58.54%,73.91%),且大多围绕毛囊、皮脂腺分布;4、“肉芽组织”样结构:在中、重度痤疮患者有较高频率(56.10%,56.52%);“肉芽组织”结构反映了痤疮反复发作,早期发生在毛囊、皮脂腺周围,后期突破毛囊,全真皮层慢性炎症,但仍以毛囊为中心;5、毛孔扩张:在轻度痤疮患者比例较高(53.57%),与之对应病理的毛囊角栓,提示皮脂分泌增多,也提示毛囊漏斗部可能存在堵塞;6、毛囊周围“红点征”:炎性丘疹出现频率较高(73.33%),其次是脓疱(66.67%),甚至在微粉刺阶段(20.00%),这间接证实痤疮发病机制始终以炎症反应为中心,是痤疮发病的核心因素,结合组织病理学,这一现象的本质是围绕毛囊、皮脂腺规则分布扩

关键词：寻常型痤疮皮肤镜评价

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西维来司他钠联合乌司他丁治疗急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征的疗效及安全性

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临床合理用药杂志 2022年第36期15卷 84-87页

作者：陆通安苏丽娟彭演国施云弟顾凌福建医科大学附属闽东医院重症医学科福建省福安市355000 福建医科大学附属闽东医院产科福建省福安市355000 福建医科大学附属闽东医院神经外科福建省福安市355000

目的探讨西维来司他钠联合乌司他丁治疗急性肺损伤(ALI)/急性呼吸窘迫综合征(ARDS)患者的疗效及安全性。方法回顾性选取2020年5月—2022年5月福建医科大学附属闽东医院收治的60例ALI/ARDS患者作为研究对象,根据治疗方法分为对照组和观察... 详细信息

目的探讨西维来司他钠联合乌司他丁治疗急性肺损伤(ALI)/急性呼吸窘迫综合征(ARDS)患者的疗效及安全性。方法回顾性选取2020年5月—2022年5月福建医科大学附属闽东医院收治的60例ALI/ARDS患者作为研究对象,根据治疗方法分为对照组和观察组,各30例。患者入院后均进行原发病的对症处理,在此基础上,对照组患者予以乌司他丁单药治疗,观察组患者在对照组基础上予以西维来司他钠治疗,2组均用药7 d。比较2组治疗前及治疗7 d后呼吸功能指标[动脉血氧分压(PaO_(2))/吸入氧浓度(FiO_(2))、血管外肺水指数(ELWI)]、实验室指标[白介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、C反应蛋白(CRP)、降钙素原(PCT)、白细胞计数(WBC)、血肌酐(SCr)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、尿素氮(BUN)],住院指标[ICU住院时间、机械通气时间及急性生理学和慢性健康状况Ⅱ(APACEⅡ)评分]、不良反应及28 d存活率。结果治疗7 d后,2组PaO_(2)/FiO_(2)较治疗前升高,ELWI较治疗前降低,且观察组PaO_(2)/FiO_(2)较对照组更高,ELWI较对照组更低(P<0.01)。治疗7 d后,2组血清IL-6、TNF-α、CRP、PCT、SCr、ALT、BUN水平及WBC较治疗前降低,且观察组血清IL-6、TNF-α、CRP、PCT、ALT水平及WBC较对照组更低(P<0.01)。与对照组相比,观察组ICU住院时间、机械通气时间更短,APACEⅡ评分更低(P<0.01)。2组不良反应总发生率比较,差异无统计学意义(P=1.000)。随访28 d,观察组存活率为90.00%(27/30),高于对照组的66.67%(20/30)(χ^(2)=4.812,P=0.028)。结论西维来司他钠联合乌司他丁治疗ALI/ARDS可有效减轻机体炎性反应,改善肺通气功能,促进疾病快速康复,且可保护主要脏器功能,提高28 d存活率,且安全性较高。

关键词：急性肺损伤急性呼吸窘迫综合征西维来司他钠乌司他丁肺功能

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反射式共聚焦显微镜在疣状表皮痣中的初步研究

反射式共聚焦显微镜在疣状表皮痣中的初步研究

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作者：郑丽君安徽医科大学

学位级别：硕士

研究背景疣状表皮痣(VEN)是由角质形成细胞增生引起的错构瘤病变,可单独发生或与发育异常相关,通常在出生时或出生后几年内发生,这些角质形成细胞是由胚胎外胚层中的多潜能生殖细胞产生,并由镶嵌后合子突变产生。VEN常表现为沿Blaschko... 详细信息

研究背景疣状表皮痣(VEN)是由角质形成细胞增生引起的错构瘤病变,可单独发生或与发育异常相关,通常在出生时或出生后几年内发生,这些角质形成细胞是由胚胎外胚层中的多潜能生殖细胞产生,并由镶嵌后合子突变产生。VEN常表现为沿Blaschko线状排列的有色素沉着的乳头瘤样丘疹和斑块,根据临床形态分为局限型、泛发型和炎性线状疣状表皮痣。目前其诊断主要依靠临床表现及组织病理学,组织学中主要分为非炎性及炎性两种。反射式共聚焦显微镜(RCM)是一种无创的高分辨成像工具,可用于在体皮肤的组织学评估。目前RCM在很多皮肤疾病中已广泛使用,查阅相关文献发现VEN的RCM成像特征目前并无系统性研究分析,本研究拟在观察VEN在RCM下的特征,明确RCM下VEN的特征有助于实现VEN的无创诊断。目的疣状表皮痣的反射式共聚焦显微镜特征尚未被具体研究,根据疣状表皮痣的组织学特点,旨在确定反射式共聚焦显微镜下疣状表皮痣的特征,分析反射式共聚焦显微镜在疣状表皮痣诊断中的意义,为实现疣状表皮痣的无创诊断提供基础。方法选取已组织病理学确诊或同意行组织病理学活检为VEN的患者,完善临床资料采集、RCM成像采集及组织病理学采集,从中挑选出组织活检确诊为VEN的33为患者,回顾性分析这33位患者的临床表现、组织病理学及RCM成像特征,将33位患者临床分型为局限型、泛发型及ILVEN,组织病理学分为非炎性及炎性,记录33位患者在RCM下的特征。结果33位VEN患者中男性13例,女性20例,平均年龄为8.82岁(2～37岁),无家族史,出生时发病15人,1～6个月发病13人,7～12个月4人,1人不清楚,皮损初发于头颈部8人,躯干3人,上肢6人,下肢13人,臀部3人;VEN的临床分型:局限型2人,泛发型21人,其中单侧泛发型10人,双侧泛发型11人,炎性线状疣状表皮痣10人;VEN的组织病理学特点:非炎性主要表现为角化过度、棘层肥厚、乳头瘤样增生、表皮突延长及真皮浅层少量淋巴细胞浸润,炎性主要表现为角化过度伴局灶性角化不全,棘层肥厚、乳头瘤样增生以及真皮浅层血管周围淋巴细胞轻度至中度浸润;VEN的RCM成像特征:观察到角化过度31人(93.94%),乳头瘤样增生28人(84.85%),基底层色素含量增多26人(78.79%),表皮突延长23人(69.70%),血管扩张26人(78.79%),炎细胞浸润17人(51.52%),角化不全2人(6.06%)及角化不良1人(3.03%)。结论RCM成像可实时观察疣状表皮痣的主要微观特征。这些特征包括角化过度、乳头瘤样增生、基底层色素含量增加、表皮突延长、血管扩张及炎细胞浸润,在ILVEN中偶可观察到角化不全及角化不良。这些特征与组织病理学有明显的相关性,RCM可以辅助诊断VEN。

关键词：反射式共聚焦显微镜疣状表皮痣特征

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黄芩—槐花药对干预高血压及其肾损伤的作用及机制研究

黄芩—槐花药对干预高血压及其肾损伤的作用及机制研究

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作者：管怡晴南方医科大学

学位级别：硕士

目的:构建黄芩-槐花干预高血压的“活性成分-作用靶点”网络,分析并验证其治疗高血压的物质基础及作用机制;进一步鉴定黄芩-槐花的有效成分并通过动物实验研究黄芩-槐花治疗高血压及肾损伤的作用和机制。方法:(1)检索中药系统药理学数据... 详细信息

目的:构建黄芩-槐花干预高血压的“活性成分-作用靶点”网络,分析并验证其治疗高血压的物质基础及作用机制;进一步鉴定黄芩-槐花的有效成分并通过动物实验研究黄芩-槐花治疗高血压及肾损伤的作用和机制。方法:(1)检索中药系统药理学数据库TCMSP中黄芩与槐花的化学成分及作用靶点,与TTD、OMIM、CTD和Genecards数据库中的高血压相关靶点取交集,运用网络分析软件Cytoscape绘制“活性成分-作用靶点”网络。通过Metascape在线分析平台进行基因GO功能和KEGG通路富集分析,最后使用分子对接软件Sybyl分析黄芩和槐花中的关键成分与高血压靶点的结合情况,并进一步采用动物实验进行验证;(2)运用高效液相色谱-质谱法鉴定黄芩和槐花的化学成分;(3)选取自发性高血压大鼠(SHR)为高血压肾损伤模型,通过观察黄芩-槐花对模型血压、肾功能以及肾脏组织病理学改变的影响,明确黄芩-槐花治疗高血压及其肾损伤的作用;(4)运用16S rRNA高通量测序技术分析各组大鼠的肠道微生物,研究黄芩-槐花对SHR肠道菌群丰富度和多样性的影响;并通过组织学染色观察各组大鼠肠道的病理组织学改变,运用免疫荧光、免疫组化和Western blot法检测肠道屏障相关蛋白的表达,明确黄芩-槐花对肠道微生态的调节作用;(5)通过酶联免疫吸附试验(ELISA)分析大鼠血清硫酸吲哚酚(IS)的含量,生化试剂盒检测肾脏组织中氧化应激相关指标的水平,明确黄芩-槐花对肠源性毒素IS及IS诱导的氧化应激反应的影响;ELISA检测大鼠粪便中短链脂肪酸(SCFAs)的含量,实时定量PCR法检测肾脏组织中与血管收缩和舒张功能相关的SCFAs受体Olfr78和GRP41的mRNA表达,明确黄芩-槐花对菌群代谢产物SCFAs及其受体的影响;同时通过ELISA分析与SCFAs密切相关的炎性因子水平,明确黄芩-槐花对炎症反应的影响。结果:(1)黄芩-槐花的“活性成分-作用靶点”网络包括26个化合物,45个高血压靶点。基因GO功能分析提示黄芩-槐花治疗高血压的作用靶点功能涉及分子功能、生物过程及细胞组成三个方面;KEGG通路富集分析揭示其作用机制可能与HIF-1信号通路、钙信号通路、Apelin信号通路等17条信号通路相关。分子对接预测槐花中的异鼠李素与一氧化氮合酶作用力强,黄芩中的苏荠黄酮与血管紧张素转化酶作用力强。动物实验进一步验证此结果:异鼠李素能升高SHR血清和内皮中一氧化氮合酶的水平;苏荠黄酮能降低SHR血清中血管紧张素转化酶的水平;(2)高效液相色谱-质谱法鉴定出黄芩-槐花有31种化学成分,结合入血成分较少的分析,提示未入血成分可能通过肠道菌群途径发挥作用;(3)动物实验发现,黄芩-槐花能降低SHR的血压,降低血肌酐、尿素氮和尿微量白蛋白水平,减少胶原纤维沉积,抑制肾纤维化,改善肾脏功能;(4)16S rRNA高通量测序分析提示黄芩-槐花提高菌群的生物多样性和丰富度,降低菌群紊乱指标一厚壁菌门和拟杆菌门的比值(F/B);动物实验结果表明黄芩-槐花增加肠道紧密连接蛋白的表达,修复肠道屏障结构;(5)黄芩-槐花减少大鼠血清中的硫酸吲哚酚含量,并降低肾脏氧化应激标志物的水平,增加抗氧化酶的含量;黄芩-槐花增加大鼠粪便中SCFAs的含量,抑制与血管收缩功能相关的SCFAs受体Olfr78的mRNA表达,增加与血管舒张功能相关的SCFAs受体GPR41的mRNA表达,同时减少血清炎性因子的含量。结论:黄芩-槐花具有多成分及多途径的作用特点。黄芩-槐花能有效治疗高血压及其肾损伤,其作用机制可能与改善肠道菌群紊乱、修复肠道屏障功能、减少硫酸吲哚酚并抑制肾脏氧化应激反应、增加菌群代谢产物SCFAs、调节SCFAs相关受体水平及减少炎症反应相关。

关键词：网络药理学黄芩槐花高血压高血压肾损伤肠道菌群

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二甲双胍通过AMPK-Pdlim5信号通路调控代谢综合征小鼠动脉粥样硬化的形成

二甲双胍通过AMPK-Pdlim5信号通路调控代谢综合征小鼠动脉粥样硬...

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作者：李挺广州医科大学

学位级别：硕士

研究目的：　　动脉粥样硬化（As）是众多心血管疾病的病理学基础，也是代谢综合征（MS）终末表现之一，平滑肌细胞迁移是导致动脉粥样硬化的原因之一。近年来，降糖药二甲双胍（Met）降低糖尿病患者心血管病事件的报道，引发各界关注... 详细信息

研究目的：　　动脉粥样硬化（As）是众多心血管疾病的病理学基础，也是代谢综合征（MS）终末表现之一，平滑肌细胞迁移是导致动脉粥样硬化的原因之一。近年来，降糖药二甲双胍（Met）降低糖尿病患者心血管病事件的报道，引发各界关注。但目前为止， Met抑制As形成的机制尚不完全明确。除降血糖外，目前关注较多的是Met与腺苷酸激活的蛋白激酶（AMPK）的关系。口服剂量下，Met可使AMPK活性增强。关于 AMPK 调控 As 的研究主要着眼于两方面：从物质代谢角度看，AMPK 在 As 发生过程中对脂质代谢和炎症反应影响重大，患者的AMPK活性和表达水平低下，加重As生成;从AMPK作用对象来看，它对As各阶段靶细胞的生物学行为起调控作用，AMPK不仅调控血管内皮细胞的通透性，更重要的是，它影响平滑肌细胞（SMCs）的增殖及迁移。　　细胞迁移是一个以动态极化、片状伪足形成等一系列变化为特征的分子生物学过程。细胞骨架是迁移的结构基础，主要成分是以肌动蛋白（actin）为亚基的肌动蛋白纤维。我们前期发现：AMPK 的全新蛋白底物 PDZ-Lim domain 5（Pdlim5）是actin连接蛋白actinin的伴随蛋白，扩增激活态的AMPK对细胞迁移的抑制作用是通过磷酸化Pdlim5发挥作用的。特别是，Pdlim5在AMPK活性处于生理水平时不被活化，只有在扩增激活 AMPK 活性时才会使 Pdlim5 磷酸化。糖尿病患者服用 Met会引起体内AMPK活性增强，因此很可能活化Pdlim5，通过AMPK-Pdlim5信号通路抑制以细胞迁移为基础的As发生发展。目前，世界上关于AMPK-Pdlim5信号通路在MS动物模型上的研究尚无报道，而利用Met扩增MS模型AMPK活性，解读Met在MS模型中抑制As发生发展的分子生物学机理，可为防治以As为代表的MS症候群提供有效的治疗靶点和可靠的实验依据。　　研究方法：　　（1）免疫荧光法检测Met刺激小鼠主动脉平滑肌细胞系（MOVAS）后，微管骨架蛋白tubulin和肌动蛋白骨架蛋白actin的信号变化，探索Met对两个骨架系统的影响。　　（2）构建带有Flag标签的Pdlim5的模拟磷酸化S177D、模拟去磷酸化S177A、野生型WT质粒，分别转染进MOVAS中，免疫印迹法验证Met刺激细胞后AMPK及Pdlim5的表达情况，探索Met对AMPK-Pdlim5信号通路的作用。在转入不同质粒的MOVAS皿中行划痕实验，加入Met刺激观察划痕愈合速度。制作AMPKα1-/-平滑肌细胞系，转入Flag-WT-Pdlim5质粒，使用Met刺激后观察AMPK和Pdlim5的表达及细胞划痕的变化，明确Met对细胞迁移的调控机制。　　（3）免疫印迹法检测Met、PDGF-BB、TNF-α刺激MOVAS后平滑肌细胞分化标记蛋白KLF4的表达情况，评估Met对平滑肌细胞类型转化的作用。　　（4）使用链脲佐菌素（STZ）腹腔注射ApoE-/-小鼠并高脂喂养8周以构建小鼠MS模型（高血脂、高血糖），辅以Met治疗，探索Met对小鼠动脉粥样硬化形成的影响。　　（5）构建腺相关病毒：构建携带EGFP标签的模拟磷酸化的EGFP-S177D-Pdli m5-Ad、模拟去磷酸化的EGFP-S177A-Pdlim5-Ad、野生型EGFP-WT-Pdlim5-Ad，分别心肌原位注射入已构建MS模型的小鼠体内，辅以Met治疗8周，共分8组：EG FP-S177D-Pdlim5-Ad+Met(-)/Met(+)、EGFP-S177A-Pdlim5-Ad+Met(-)/Met(+)、EGFP-WT-Pdlim5-Ad+Met(-)/Met(+)、CTL-Ad+Met(-)/Met(+)，动物取材后行主动脉根部及主动脉全长油红O染色观、主动脉根部α-SMA染色、HE染色、Masson染色分别观察脂质沉积、平滑肌细胞的迁移分布情况、血管形态以及血管纤维化情况。　　（6）制作ApoE-/-背景的AMPKα1-/-小鼠（AMPKα1-/-ApoE-/-）并构建MS模型，心肌原位注射入EGFP-WT-Pdlim5-Ad，给予Met治疗8周后，行油红O染色、α-SMA染色分别观察主动脉脂质的沉积以及平滑肌的迁移分布情况。　　研究结果：　　（1）MOVAS在Met处理后肌动蛋白骨架系统发生改变，应力纤维增粗，黏附斑增强，细胞的迁移运动受到明显抑制，但Met对微管骨架系统无明显影响;（2） Met 刺激后，普通 MOVAS 细胞表达 pAMPK 增加。同时在质粒Flag-WT-Pdlim5 +Met(+)组和 Flag-S177D-Pdlim5+Met(+)/Met(-)组，pPdlim5 表达增多、肌动蛋白骨架系统形态发生改变、划痕后细胞迁移受到抑制;

关键词：动脉粥样硬化代谢综合征二甲双胍药理作用腺苷酸激活蛋白激酶 Pdlim5蛋白细胞迁移

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早期缺氧缺血性脑水肿扩散峰度成像时间进程变化的实验研究

早期缺氧缺血性脑水肿扩散峰度成像时间进程变化的实验研究

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作者：何晓宁大连医科大学

学位级别：硕士

目的本研究以新生约克猪缺氧缺血性脑病动物模型为基础,利用扩散峰度成像(diffusion kurtosis imaging,DKI)技术评价早期缺氧缺血性脑水肿的扩散改变。以期为新生儿缺氧缺血性脑病(hypoxic-ischemic encephalopathy,HIE)提供一种动态、... 详细信息

目的本研究以新生约克猪缺氧缺血性脑病动物模型为基础,利用扩散峰度成像(diffusion kurtosis imaging,DKI)技术评价早期缺氧缺血性脑水肿的扩散改变。以期为新生儿缺氧缺血性脑病(hypoxic-ischemic encephalopathy,HIE)提供一种动态、无创以及更加精确的诊断和评价方法。主要研究内容如下:***是否能够动态、无创、准确地评价早期缺氧缺血性脑水肿;***对瘦素干预早期缺氧缺血性脑水肿疗效的评价。材料与方法1.选取足月新生健康约克种猪20只(雄性10只,雌性10只),随机分为两组:HIE组15只(雄性8只,雌性7只),对照组5只(雄性2只,雌性3只)。HIE组的动物制备缺氧缺血性脑病模型:颈部正中纵切口长约3-5 cm,分离双侧颈总动脉,使用外科手术线结扎双侧颈总动脉,缝合切口,之后将动物放入缺氧箱内,给予持续4%氧气和96%氮气的混合气体2 L/min,维持氧浓度在4%,乏氧持续30分钟。对照组仅做分离双侧颈总动脉的假手术。HIE组和对照组在模型建立后3、6、9、12、16及24 h分别进行DKI扫描。扫描完成后,两组各随机选取动物取脑行病理学检查(HE染色切片)。2.选取足月新生健康约克种猪35只(雄性19只,雌性16),随机分为三组:HIE组15只(雄性8只,雌性7只),瘦素组15只(雄性8只,雌性7只),对照组5只(雄性3只,雌性2只)。HIE组和瘦素组的动物均制备缺氧缺血性脑病模型,制备过程同上。瘦素组在乏氧后立即腹腔注射瘦素。各组在模型建立后3、6、9、12、16及24 h分别进行DKI扫描。使用Image J软件测量HIE组和瘦素组各时间点MK及MD图的病灶面积。扫描完成后,每组各随机选取动物取脑行病理学检查(HE染色切片及电子显微镜切片)。3.采用SPSS 19.0统计分析软件进行数据分析。将所有数据行正态分布检验及方差齐性检验,数据以均数±标准差的形式表示。各组间参数值比较及各组内每个时间点间参数值变化比较采用重复测量方差分析;病灶各参数值的百分比变化率比较采用t检验;HIE组和瘦素组病灶面积比较采用独立样本t检验。所有多重比较均采用LSD法。P<0.05为差异有统计学意义。结果1.缺氧缺血后各时间点,病灶在DKI相关参数图像(MK、Ka及Kr)上呈不均匀高信号,DTI相关参数图像(MD、Da及Dr)呈均匀低信号;HIE组病灶MK、Ka、Kr值显著高于对照组,而MD、Da、Dr值则显著低于对照组(P<0.05);HIE组病灶的DKI相关参数值百分比变化率均大于DTI相关参数值的变化率,且轴向参数(Ka、Da)的变化率均大于相应的径向参数(Kr、Dr)的变化率(P<0.05);随时间变化,HIE组病灶的MK、Ka、Kr值逐渐增高,MD、Da、Dr值则逐渐减低(P<0.05);HIE组病理切片显示神经细胞肿胀,间质水肿,大量炎症细胞浸润,周围血管扩张。2.瘦素组病灶的MK、Ka、Kr值显著低于HIE组,而MD、Da、Dr值则显著高于HIE组(P<0.05);HIE组和瘦素组病灶的DKI相关参数值(MK、Ka、Kr)百分比变化率均大于DTI相关参数值(MD、Da、Dr)的变化率,同时,瘦素组病灶的各参数值变化率均低于HIE组(P<0.05);HIE组和瘦素组病灶的MK、Ka、Kr值逐渐增高,MD、Da、Dr值逐渐减低(P<0.05),但瘦素组的参数值变化趋势较HIE组明显趋于缓和;瘦素组的病灶面积明显小于HIE组(P<0.05);病理结果显示瘦素组的神经损伤程度要明显小于HIE组。结论扩散峰度成像(DKI)技术以其多b值、多参数的优势以及更加真实的成像模型,能够比传统的扩散成像技术更全面、更敏感地反映病灶内微结构的改变,并准确、动态、无创地评价了缺氧缺血性脑水肿的变化趋势及治疗效果。因此,DKI在缺氧缺血性脑病中的应用前景是十分广阔的。

关键词：磁共振成像扩散峰度成像缺氧缺血疾病模型新生猪

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蛛网膜下腔出血后脑动脉平滑肌细胞对ATP释放的分子机制研究

蛛网膜下腔出血后脑动脉平滑肌细胞对ATP释放的分子机制研究

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作者：杜明月昆明医科大学

学位级别：硕士

[目的]蛛网膜下腔出血(subarachnoid hemorrhage,SAH)是一种非常严重的常见疾病,然而对其发生的病理机制复杂尚不明确。目前通常把血液中的氧合血红蛋白(Oxy-hemoglobin,OxyHb)认为是导致血管痉挛(cerebral vasospasm,CVS)的重要原因。... 详细信息

[目的]蛛网膜下腔出血(subarachnoid hemorrhage,SAH)是一种非常严重的常见疾病,然而对其发生的病理机制复杂尚不明确。目前通常把血液中的氧合血红蛋白(Oxy-hemoglobin,OxyHb)认为是导致血管痉挛(cerebral vasospasm,CVS)的重要原因。Rho激酶已被证实是单体的G蛋白p的下游目标,其可以参与持续通过磷酸化的和抑制血管收缩。RhoA/Rho激酶通路在OxyHb的收缩作用中起作用,OxyHb在收缩血管时利用了 Rho易位的机制。ATP具有显著的血管收缩作用,并且有研究显示,平滑肌细胞可通过自分泌功能分泌ATP,但并未阐明ATP是否能作用于SAH后所致的脑血管痉挛,因此我想证实SAH条件下ATP的变化,从而讨论其是否可能和CVS有关系。缝隙连接是细胞间通信最常见的形式之一。它们由膜蛋白组成,形成离子和小分子之间的通道,这些离子和小分子连接着相邻细胞的细胞质。有研究表明,在不同的分类类群中,包括脊椎动物,存在着与特定的无脊椎缝隙连接蛋白被命名为innexins的同源基因,由PSI-BLAST搜索明确检测,并将其命名为pannexin-1(Panx1)。大量研究表明Panx1的激活会导致细胞外ATP水平升高,细胞内ATP作为细胞内代谢物通过Panx1通道被释放。在生理和病理生理条件下,细胞释放ATP;胞外ATP在被胞外酶(主要是CD39和CD73)快速降解为腺苷之前,起着自分泌和旁分泌的作用。细胞外ATP的作用由P2细胞表面受体(P2R)介导,其中包括跨细胞膜阳离子通道、P2X受体(P2XR)、G蛋白偶联受体、P2Y嘌呤能受体(P2YR)。P2XR代表ATP门控的同质或异体离子通道,由三个亚基组成,其中最重要的亚基是P2X1、P2X2、P2X3、P2X4 和 P2X7,ATP 对 P2X1 和 P2X4 敏感,ATP 通过激活 P2X嘌呤能受体影响影响机体功能。本课题以ATP作为重要血管收缩信号分子的理论基础,通过探究蛛网膜下腔出血(Subarachnoid Hemorrhage,SAH)时ATP的浓度与血管痉挛的关系、抑制Rho和pannexin-1与ATP含量的关系以及SAH、Rho和pannexin-1表达量变化的关系以及SAH后P2X1和P2X4表达量的变化,从而证明SAH后脑动脉平滑肌细胞存在ATP的释放导致CVS的机制。[方法]OxyHb环境培养动脉平滑肌细胞以模拟SAH微环境,通过药理学方法抑制脑动脉平滑肌细胞Rho和pannexin-1(PANX1)后,用化学发光法检测培基中ATP浓度,蛋白印迹法检测OxyHb受体蛋白Rho、释放ATP的泛连接酶蛋白PANX1以及ATP受体P2X的表达水平。1.模拟体外蛛网膜下腔出血微环境:(1)大鼠血管平滑肌细胞株培养;(2)体外诱导蛛网膜下腔出血模型;(3)检测释放到细胞培养基的ATP浓度。2.特异性抑制剂抑制相关基因:(1)利用特异性抑制剂抑制脑动脉平滑肌细胞的Rho和pannexin-1(PANX1)基因;(2)用化学发光法检测培养基中ATP浓度,以验证OxyHb促ATP增加是否通过Rho-PANX1途径实现。3.免疫蛋白印记:(1)首先检测OxyHb受体蛋白RhoA;(2)检测释放ATP的泛连接酶蛋白PANX1;(3)检测ATP受体P2X1和P2X4的表达水平。4、统计学方法:样本数据是否符合正态分布采用K-S检验方法,样本数据是否符合方差齐性采用Levene检验。符合正太分布的多组比较采用ANOVA单因素方差分析,其中两两比较采用LSD方法分析;不符合正态分布的多组比较采用Kruskal-Wallis H检验,其中两两比较采用Bonferroni校正法。检测结果以均数±标准差(Mean±SD)或中位数(四分位数)表示,检验水准α=0.05,双侧P<0.05表示差异具有统计学意义。[结果]***可诱导脑动脉平滑肌细胞的ATP释放增加,OxyHb浓度为10μM作用时间24h时ATP相对浓度最高(对照组与10μM-24h组t=16.076,P=0.000,对照组与 10μM-48h 组 t=16.142,P=0.000)。2.分别抑制Rho或PANX1均可使ATP释放减少(t1=8.333,P1<0.001;t2=27.913,P2<0.001)。***混合培养基培养下的细胞Rho、PANX1蛋白表达量均升高。***混合培养基培养下的细胞P2X1、P2X4蛋白表达量均升高,P2X1表达最高值于第14天出现,P2X4表达最高值于第7天出现。[结论]1.蛛网膜下腔出血后脑ATP释放增加。2.动脉平滑肌细胞存在Rho-pannexin-1途径向胞外释放ATP。***受体P2X的表达亦上调。4.蛛网膜下腔

关键词：蛛网膜下腔出血血管平滑肌细胞 ATP 血管痉挛

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运用LC-MS建立脂质组学方法以研究心肌梗死及n-3 PUFA摄入对脂质谱的影响

运用LC-MS建立脂质组学方法以研究心肌梗死及n-3 PUFA摄入对脂质...

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作者：华彤天津医科大学

学位级别：硕士

目的及内容:甘油磷脂(Glycerophospholipids,GPs)和鞘脂(Sphingolipids,SPs)类脂质分子具有多种结构并且广泛存在于机体中,参与调控多种生物学功能,在心血管疾病的发生和发展过程中发挥重要的作用,但目前对于心梗过程中甘油磷脂和鞘脂... 详细信息

目的及内容:甘油磷脂(Glycerophospholipids,GPs)和鞘脂(Sphingolipids,SPs)类脂质分子具有多种结构并且广泛存在于机体中,参与调控多种生物学功能,在心血管疾病的发生和发展过程中发挥重要的作用,但目前对于心梗过程中甘油磷脂和鞘脂类脂质谱的变化仍缺少系统性研究。Omega-3多不饱和脂肪酸(n-3 Polyunsaturated Fatty Acids,n-3 PUFA)是重要的营养物质,补充n-3 PUFA可用于预防心血管疾病的发生,但n-3 PUFA的摄入如何影响甘油磷脂和鞘脂类脂质谱尚不清楚。所以我们基于高效液相色谱串联质谱(High Performance Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry,HPLC-MS/MS)技术,针对甘油磷脂和鞘脂类脂质分子建立了检测方法,将建立的靶向脂质组学方法应用于研究心肌梗死和健康人群摄入n-3 PUFA后脂质代谢的变化。方法:我们选择了含有17个碳原子的甘油磷脂和鞘脂类脂质同系物作为内标化合物,使用质谱通过多反应监测扫描模式整理出甘油磷脂和鞘脂类脂质分子的质谱参数信息。根据不同脂质分子的电离特性,建立4个不同模式的靶向脂质组学方法。使用UPLC BEH C18色谱柱优化色谱分离条件。对小鼠进行心脏左前降支冠状动脉结扎手术诱导小鼠发生心肌梗死,利用建立的靶向脂质组学研究小鼠心梗发生后血浆和心脏组织中脂质分子含量的变化;并在健康人群摄入n-3 PUFA 0、3、7、14和21天后,对血浆中甘油磷脂和鞘脂类脂质分子进行检测。结果:我们基于高效液相色谱串联质谱建立靶向脂质组学,检测样本中的甘油磷脂和鞘脂类脂质分子。根据脂质分子的电离特性共开发了四种检测方法,分别是“甘油磷脂正离子模式方法”、“甘油磷脂负离子模式方法”、“鞘脂正离子模式方法”、“鞘脂负离子模式方法”。并基于甲基叔丁基醚对样本的预处理方法进行了优化。通过靶向脂质组学的检测,我们发现小鼠发生心肌梗死后,心脏组织中甘油磷脂类脂质分子,如溶血磷脂酸LPA(18:2)等含量下降,磷脂酰胆碱PC(30:0)等含量增多;鞘脂类脂质分子,如神经酰胺-1-磷酸Cer1P(14:0)、(16:0)、(16:1)等含量增多。但在血浆中没有发现含量显著变化的脂质分子。健康人群摄入n-3 PUFA后,甘油磷脂和鞘脂类脂质分子呈现规律性的变化。大部分溶血磷脂类脂质和一些低丰度脂质的含量变化呈现升高的趋势,如LPE(22:6),PS(36:2)、(36:3)等。多数磷脂酰胆碱、烷基磷脂酰胆碱以及部分溶血磷脂酰甘油脂质的含量在摄入n-3 PUFA后第21天降低。溶血磷脂酸,溶血磷脂酰胆碱,溶血磷脂酰乙醇胺和磷脂酰丝氨酸的含量与肌酸激酶同工酶水平呈负相关。通过对数据进行对比,我们发现溶血磷脂酰甘油LPG(22:5)、(22:6),磷脂酰乙醇胺PE(32:1)和磷脂酰丝氨酸PS(34:1)在心梗后含量升高,溶血磷脂酰乙醇胺LPE(22:6),磷脂酰丝氨酸PS(36:1)、(36:2)、(36:3)、(38:2)、(38:3)、(38:4)、(38:6)、(40:5)在心梗后含量降低,但是摄入n-3 PUFA后以上4种脂质呈现相反的变化趋势。结论:我们建立了一个涵盖400余种甘油磷脂和鞘脂类脂质分子的靶向脂质组学,可以将该靶向脂质组学运用于对人类以及动物的血浆、组织中进行脂质分子的检测,并可以对所测的脂质分子进行相对定量。我们将该方法应用于小鼠发生急性心肌梗死和健康人群摄入n-3 PUFA中的两种模型中进行靶向脂质组学的检测。心肌梗死发生后心脏组织中部分脂质分子的含量发生显著变化。其中溶血磷脂类、神经酰胺-1-磷酸等脂质分子可能与心梗相关的病理生理学过程有关。健康人群摄入n-3 PUFA后甘油磷脂类脂质分子呈现规律性的变化,为临床应用n-3 PUFA提供了药理基础。溶血磷脂酰乙醇胺LPE(22:6)、溶血磷脂酰甘油LPG(22:5)、(22:6)、磷脂酰乙醇胺PE(32:1)、磷脂酰丝氨酸PS(34:1)、(36:1)、(36:2)、(36:3)、(38:2)、(38:3)、(38:4)、(38:6)、(40:5)在心梗发生后的变化趋势与健康人群摄入n-3 PUFA后的变化趋势相反,提示以上4种脂质的变化可能与n-3 PUFA的保护作用有关。

关键词：脂质代谢组学高效液相色谱串联质谱 omega-3 多不饱和脂肪酸甘油磷脂鞘脂心肌梗死

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回顾性研究我院创伤骨折患者术后转归相关影响因素

回顾性研究我院创伤骨折患者术后转归相关影响因素

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作者：孟令超锦州医科大学

学位级别：硕士

目的应用回顾性队列研究的方法,探讨在我院真实医疗救治中不同麻醉方式下的创伤骨折患者的转归及预后,并应用多因素回归分析的方法探索影响患者转归的相关因素,旨在提高围术期麻醉管理水平,为达到患者快速康复之目的提供真实世界的临床... 详细信息

目的应用回顾性队列研究的方法,探讨在我院真实医疗救治中不同麻醉方式下的创伤骨折患者的转归及预后,并应用多因素回归分析的方法探索影响患者转归的相关因素,旨在提高围术期麻醉管理水平,为达到患者快速康复之目的提供真实世界的临床研究依据。方法从我院电子病历系统（EMR,浙江仁和科技）和网络化麻醉监护信息管理系统（AIMS V5.1,北京易飞华通科技有限公司）收集2016年3月1日至2018年8月31日肩周骨折和髋周骨折699例患者信息,依据术中采用麻醉方式分为接受全身麻醉331例（GA）和接受区域阻滞麻醉368例（RA:神经阻滞、腰麻和/或腰硬联合麻醉）。采集患者基本情况(年龄,性别,ASA分级,查尔森共病指数（CCI）)、手术方式（切开复位内固定术、闭合复位内固定术）、围术期平均动脉压（MAP）、心率（HR）(包括入手术室时MAP/HR1、术中平均值MAP/HR2及出手术室时MAP/HR3),术前和术后血红蛋白含量（Hb）,术中出血量,输血量及在院期间术后并发症（术后谵妄,新发脑梗,呼吸衰竭,心衰,肾衰,深静脉血栓和死亡）。患者基本情况及术后并发症以医院EMR病例系统中记录为依据;手术方式、麻醉方式及患者术中循环数据的采集均来源于AIMS V5.1麻醉监测系统。运用临床回顾队列研究的方法,探讨不同麻醉方式对创伤骨折患者围术期的影响,并进一步应用多因素Logistic回归分析,探讨创伤骨折患者术后转归相关影响因素。结果一、不同麻醉方式对创伤骨折患者围术期的影响（一）术前基本情况不同麻醉方式两组患者在性别、术前合并症及ASA分级均无统计学差异（P值均>0.05）;但髋周骨折患者中,与GA组相比,RA组患者年龄较大,分别为72.69±14.83 vs.76.29±14.51岁,P=0.003;尤其是>80岁患者,临床多采用椎管内麻醉,相比GA组具有显著的统计学差异（P<0.001）。患者术前合并有高血压321例（占45.9%）;心血管疾病包括冠心病、心律失常、瓣膜病186例（占26.6%）;呼吸系统疾病99例（占14.2%）;脑部疾患中脑梗和老年痴呆患者132例（占18.9%）;糖尿病患者151例（占21.6%）;肾脏疾病16例（占2.3%）;血栓病史8例（占1.1%）;恶性肿瘤患者8例（占1.1%）。不同麻醉方式患者的术前合并症比较,无统计学差异（P值均>0.05）。根据Charlson共病指数评分,不同骨折部位和不同年龄段GA和RA组患者术前合并症亦无统计学差异（P值均>0.05）。手术方式的比较发现,闭合复位内固定和人工股骨头置换手术患者应用RA较多,而切开复位内固定及全髋置换手术患者选择GA较多,且组间比较具有显著的统计学差异（P=0.002,0.005）。（二）术中情况所有患者术中MAP与HR波动均在35%以内;入室时,不同麻醉方式患者的基础MAP具有显著的统计学差异（GA组97.17±14.71mm Hg,RA组102.87±14.53mm Hg,P<0.001）;术中MAP和HR变化率发现,两组患者MAP均明显下降,ΔMAP1-2变化率比较,无明显统计学差异（P=0.342）;同时,HR均有所升高,与GA组患者相比,RA组ΔHR1-2较稳定,且具有显著的统计学差异（P<0.001）;RA组肩周骨折患者术中循环相对稳定;而RA髋周骨折患者血压下降幅度与GA组一致;术毕出室前,GA组患者MAP和HR基本回到患者入室水平,ΔMAP1-3和ΔHR1-3变化幅度较小,但RA组患者MAP仍较入室时明显降低,髋周骨折RA组患者更甚,较入室降低13.64±15.60mm Hg,且具有显著的统计学差异（P<0.001）。术中失血情况,与GA组患者相比,RA组失血量及输血量均较少,且具有显著的统计学差异（P均<0.001）;患者围术期血红蛋白含量变化（ΔHb）,GA组12.75±15.07g/L,RA组10.82±14.70 g/L,组间比较无明显的统计学差异（P=0.094）。（三）术后转归GA组与RA组患者术毕进入ICU率分别为29.3%和28.8%;术后并发症率为12.4%和10.1%;住院期间死亡率为1.2%和1.4%,组间比较均无统计学差异（P=0.884、0.328、1.000）。但GA与RA两组患者依据年龄段进一步分析发现:相比GA组,80岁以上患者选择RA明显减少术后并发症的发生,且具有统计学差异（分别为24.1%和14.7%,P=0.039）;小于80岁患者术后并发症组间比较,无显著的统计学差异（P均>0.05）。提示,RA对于患者术后转归的优势在80岁以上患者较显著。另外,无论接受何种麻醉方式,随患者年龄增长,其术后并发率明显增加,具有显著的统计学差异（P=0.000,0.003）;其中GA组患者术后谵妄、呼吸衰竭、心衰及术

关键词：全身麻醉区域阻滞麻醉创伤骨折术后并发症危险因素

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云南省居家养老服务规范建设研究

云南省居家养老服务规范建设研究

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作者：罗琦昆明医科大学

学位级别：硕士

[目的]结合目前国家和云南省出台的政策文件,借鉴国内先进省市居家养老服务标准文件,基于云南省居家养老服务开展的实际情况,编制“云南省居家养老服务规范”,以期推进我省居家养老服务的发展和规范化建设,促进政府有关部门科学决策。... 详细信息

[目的]结合目前国家和云南省出台的政策文件,借鉴国内先进省市居家养老服务标准文件,基于云南省居家养老服务开展的实际情况,编制“云南省居家养老服务规范”,以期推进我省居家养老服务的发展和规范化建设,促进政府有关部门科学决策。[方法]1、采用文献分析法,回顾国内养老服务政策及标准化文件,以行为系统模式理论为指导,参考医学、护理学、心理学等领域的专业书籍,结合云南省省情,编写“云南省居家养老服务规范”。2、运用德尔菲专家咨询法、半结构式访谈法,对18名养老服务领域的专家进行两轮专家咨询,并对其中7名专家进行一轮半结构式访谈,收集专家对居家养老服务规范的修改意见,完善居家养老服务规范,运用层次分析法计算各服务项目的权重。3、选取20名研究对象及5名专家参与专家评审问卷编制,并进行信效度检验。选取4名养老服务领域的专家,运用专家评审问卷对“云南省居家养老服务规范”进行专家评审,多维度评价该服务规范的质量。[结果]1、参考北京、上海、浙江、天津等10个地区已推行的居家养老领域的服务标准及国家标准文件,编写“云南省居家养老服务规范”框架,共包含15个一级服务项目,128个二级服务项目。参考浙江省《居家养老服务规范》及《基础护理学》、《内科护理学》、《老年护理学》等专业书籍编写服务规范的内容,规范内容呈现形式包括文字叙述、图片和表格三种,大部分服务项目内容以适用人群/范围、服务要求、服务流程和注意事项四部分呈现。2、参与德尔菲专家咨询的专家共18名,主要从事老年科临床工作、养老服务管理与科研工作。两轮咨询专家积极系数分别为94.74%和83.33%,专家权威分别为0.906和0.914,专家意见协调系数W分别为0.315(χ2=806.316,P<0.001)、0.356(χ2=714.866,P<0.001),专家共提出36条修改意见,被采纳28条。最终形成的“云南省居家养老服务规范”共包含14个一级服务项目和1 17个二级服务项目。一级服务项目按照权重排序依次为:居家养老服务管理规范、日常工作规范、意外事件预防与应急救助规范、健康管理服务规范、饮食与老年食堂服务规范、陪伴与心理健康服务规范、消毒隔离服务规范、安宁疗护服务规范、清洁服务规范、移动与助行服务规范、涉法服务规范、家政服务规范、修饰服务规范、社区活动与培训管理规范。3、参考AGREE Ⅱ编写专家评审问卷,该共包含5个维度、11个条目以及两项总体评价指标。问卷重测信度为0.871,I-CVI为1.00,S-CVI为1.00,信效度较好。共4名专家参与居家养老服务规范专家评审,计算各维度的标化得分。服务规范的“范围和对象”维度与“清晰性”维度标化得分为93.75%,“严谨性”维度得分为90.63%,“实用性”维度得分为87.50%,“参与人员”得分为75.00%(均>60%);规范总质量评分为87.50%,4名专家均给出了“推荐”的评价意见。[结论]1、本研究以行为系统模式理论为指导,参考国内居家养老服务标准化文件以及专业书籍,编写云南省居家养老服务规范初稿。开展2轮德尔菲专家咨询和1轮半结构式访谈,对居家养老服务规范进行修改和完善。最终编写完成14个一级服务项目、117个二级服务项目的“云南省居家养老服务规范”。2、本研究德尔菲专家咨询结果显示,专家的积极程度、权威程度、专家意见协调程度较高。采用自编的专家评审问卷对服务规范进行综合评价,结果显示所有维度的标化得分均大于60%,专家均给出“推荐”意见,说明“云南省居家养老服务规范”总体质量较好,可以在云南省推广使用。3、本研究编写的“云南省居家养老服务规范”,是我省首个居家养老领域的服务规范,对我省居家养老服务工作、养老服务人才的培养具有指导作用,为居家养老服务的科学化管理提供依据,推动我省养老服务标准体系的建设。本研究结果对相关部门提出以下建议:(1)扩大居家养老服务的覆盖面,提高服务及政策的公平性;(2)丰富居家养老服务内涵,完善服务监管机制;(3)加快社区和服务队伍的建设,提高服务质量和满意度;(4)明确政府各部门职能,加快养老服务标准化体系建设。

关键词：居家养老服务规范云南省德尔菲法

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