目的探讨超声二维斑点追踪成像(speckle tracking imaging,STI)技术评价小鼠心肌梗死(myocardial infarction,MI)后节段性室壁运动异常的方法。方法 10周龄C57BL/6雄性小鼠行左冠状动脉前降支结扎造成心肌梗死,在梗死后第7天行常规超声心动图检测,采集胸骨旁长轴左心室二维图像,测量并计算左室后壁厚度(LVPWd)、左室射血分数(EF%)等参数。进而采用STI模块,测量运动峰值速度(Peak velocity)和加速时间(Time to peak)等参数。心脏取材后置于4%多聚甲醛中固定,石蜡包埋,行HE染色和天狼猩红染色。结果心肌梗死后7天,小鼠心脏间质出现显著胶原沉积。超声心动图提示MI组LVPWd与Sham组相比显著减小(0.66±0.02 mm vs 0.54±0.03 mm,P<0.01),EF(%)下降(71.6±1.69%vs 32.6±3.00%,P<0.001)。STI技术-向量分析示心肌梗死后室壁运动明显降低,室壁运动速度-时间曲线则进一步明确MI组存在明显心肌反向运动。节段性分析示MI组各节段的室壁峰值速度均小于相应节段的Sham组(均P<0.001),加速时间均长于相应节段的Sham组(均P<0.01)。结论应用STI技术可实现对于小鼠急性心肌梗死后节段性室壁运动变化的定性、定位和定量分析。
目的建立信使RNA(mRNA)电转抗CD3抗体刺激的外周血单个核细胞(PBMC)的方法,为制备基因修饰CDR3δ移植型γδT淋巴细胞,为肿瘤细胞过继治疗提供新的技术方法。方法以SpeⅠ内切酶消化重组p GEM4Z/EGFP/A64质粒,回收纯化线性化的重组质粒p GEM4Z/EGFP/A64,体外转录成mRNA;在电转参数为500 V500μs、400 V 500μs或300 V 500μs等不同条件下,转染抗CD3抗体刺激的人PBMC;用倒置荧光显微镜观察和流式细胞仪观察和分析绿色荧光蛋白的表达;台盼蓝染色计算不同电转条件下细胞的存活率,以确定mRNA电转最佳条件。结果 p GEM4Z/EGFP/A64质粒经过SpeⅠ内切酶酶切,获得了线性化的质粒;体外转录得到了增强型绿色荧光蛋白(EGFP)mRNA;与其他转染条件相比,在500 V 500μs电转参数下转染EGFP mRNA的PBMC细胞,电转后48 h绿色荧光蛋白表达量较高;与其他转染条件相比,在500 V 500μs电转参数下转染EGFP mRNA的PBMC细胞,电转48 h后绿色荧光蛋白表达的阳性细胞高达77%;台盼蓝染色分析不同电转条件下细胞的存活率,在细胞电转48 h后,500 V 500μs参数电转条件下细胞存活率可以达到85%以上。结论电转参数为500 V 500μs的条件可用于电转mRNA于抗CD3抗体扩增的人PBMC,以制备基因修饰T淋巴细胞。
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