检索结果-内蒙古大学图书馆

基础医学与临床 2011年第6期31卷 642-646页

作者：汪晓艳蒋崇亮朱勇王芳余佳冯涛重庆医科大学基础医学院分子医学与肿瘤研究中心重庆400016 中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的研究microRNA-144(miR-144)通过调节视网膜母细胞瘤蛋白(RB)对红系分化的影响。方法用氯化高铁血红素(hemin)诱导人慢性髓系白血病细胞系K562可实现在体外模拟红系分化过程,使用Real-time PCR检测miR-144表达;利用体外合成的寡核苷... 详细信息

目的研究microRNA-144(miR-144)通过调节视网膜母细胞瘤蛋白(RB)对红系分化的影响。方法用氯化高铁血红素(hemin)诱导人慢性髓系白血病细胞系K562可实现在体外模拟红系分化过程,使用Real-time PCR检测miR-144表达;利用体外合成的寡核苷酸(mimic-144)转染K562细胞,检测过量表达miR-144对红系分化的影响;结合生物信息学分析、双荧光素酶报告系统和Western blot寻找并确定miR-144的靶基因。结果 miR-144在hemin诱导的K562红系分化过程中表达显著升高(P<0.05),在K562细胞中过表达miR-144可以促进血红蛋白(γ-globin)和红细胞表面标志CD235a的表达和积累;RB为miR-144的靶基因之一;在K562红系分化中,RB呈先略升后降的趋势,以0 h为参照,12 h RB/GAPDH灰度值最低为:0.092±0.007(P<0.05)。结论 miR-144通过负调控RB的表达促进hemin诱导的K562红系分化。

关键词： microRNA-144 红系分化视网膜母细胞瘤蛋白

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PCGF1蛋白的表达、纯化及其单克隆抗体的制备与鉴定

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细胞与分子免疫学杂志 2011年第1期27卷 71-73页

作者：李辉吴旭东龚燕华阴彬武警医学院组织学与胚胎学教研室天津300162 中国医学科学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005 武警医学院生物化学教研室天津300162

目的:原核表达人表观抑制因子Polycomb家族成员PCGF1蛋白片段,并制备其鼠源单克隆抗体(mAb)。方法:应用PCR技术扩增人PCGF1基因编码区部分序列(CDS区第382～567bp的DNA片段)并插入到pET-32a(+)质粒中,在大肠杆菌BL21中进行His-PCGF1-128... 详细信息

目的:原核表达人表观抑制因子Polycomb家族成员PCGF1蛋白片段,并制备其鼠源单克隆抗体(mAb)。方法:应用PCR技术扩增人PCGF1基因编码区部分序列(CDS区第382～567bp的DNA片段)并插入到pET-32a(+)质粒中,在大肠杆菌BL21中进行His-PCGF1-128/189融合蛋白(简写为His-N128/189)的原核表达。利用所表达的融合蛋白中含有的6×His标签进行亲和层析纯化。用所获得的纯化蛋白免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术,分别通过ELISA和Western blot法筛选稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株,用免疫双向扩散法鉴定mAb的Ig亚类。取1株杂交瘤细胞按照常规方法制备腹水,利用Millipore公司的mAb纯化试剂盒纯化mAb,用Western blot法检测mAb的效价。结果:表达纯化了重组人His-N128/189蛋白;筛选出2株可稳定分泌特异性抗人PCGF1 mAb的杂交瘤细胞株,其免疫球蛋白类型均为IgG1类;通过腹水制备和纯化获得高效价(1∶6000)、高特异性的鼠抗人PCGF1 mAb。结论:原核表达的PCGF1片段融合蛋白可以被纯化,并具有足够的蛋白免疫原性,所制备的相应mAb可特异识别内源性和外源性PCGF1蛋白,可以运用于PCGF1基因功能的研究。

关键词： PCGF1 单克隆抗体杂交瘤技术

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黄连素降糖调脂机制的研究

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中国实验动物学报 2011年第1期19卷 29-33,93页

作者：张茜肖新华王彤朱席琳李文慧刘英袁涛孙晓方孙琦向红丁王姮中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院内分泌科北京100730 中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室北京100730

目的旨在研究黄连素对KKAy小鼠体重、血糖、血脂、胰岛素等相关代谢指标的影响,且应用基因芯片探讨黄连素降血糖、调血脂的机制。方法选用KKAy小鼠16只,随机分为黄连素组(给予每日250 mg/kg的黄连素粉末悬浊液)和对照组(给予等体积生理... 详细信息

目的旨在研究黄连素对KKAy小鼠体重、血糖、血脂、胰岛素等相关代谢指标的影响,且应用基因芯片探讨黄连素降血糖、调血脂的机制。方法选用KKAy小鼠16只,随机分为黄连素组(给予每日250 mg/kg的黄连素粉末悬浊液)和对照组(给予等体积生理盐水),均连续灌胃4周。每周末测定小鼠空腹血糖(FBG)和体重。3周末进行口服糖耐量(OGTT)实验。4周末测定小鼠FBG、血脂和空腹胰岛素(FINS)水平。取小鼠骨骼肌组织进行RT-PCR基因芯片实验。结果黄连素组小鼠FBG、OGTT曲线下面积(AUC)、TC、TG、FINS和HOMA-IR值均比对照组显著降低(P<0.05或P<0.01)。基因芯片显示黄连素组GLUT4、MAPK8、MAPK14、PPARα、UCP2上调,PPARγ、PGC、CEBP、resistin、HNF4α下调。结论黄连素不仅能有效降低KKAy小鼠FBG,改善胰岛素敏感性,还能调节脂代谢。黄连素可能是通过AMPK-p38 MAPK-GLUT4通路调节KKAy小鼠血糖。PPARα上调参与黄连素对KKAy小鼠血脂的调节。

关键词：黄连素 KKAy小鼠基因芯片糖尿病脂代谢紊乱糖代谢

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PcG相关蛋白RYBP

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生命的化学 2011年第6期31卷 827-831页

作者：田硕陈等陈虹黄秉仁中国医学科学院基础医学研究所清华大学医学部北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

30多年前在果蝇体内鉴定到了PcG(Polycomb group)蛋白复合体,它是通过染色质修饰调控靶基因转录的表达抑制因子,通过抑制同源异形基因(homeotic gene,Hox)的表达调控机体发育。其相关蛋白质RYBP(Ring1 and YY1 binding protein)分布于... 详细信息

30多年前在果蝇体内鉴定到了PcG(Polycomb group)蛋白复合体,它是通过染色质修饰调控靶基因转录的表达抑制因子,通过抑制同源异形基因(homeotic gene,Hox)的表达调控机体发育。其相关蛋白质RYBP(Ring1 and YY1 binding protein)分布于细胞质和细胞核,参与调节基因转录、个体发育、细胞凋亡以及人类恶性肿瘤的发生等生物学过程。本文就RYBP的特性、作用机制及生物学功能进行综述。

关键词： PcG蛋白复合体 RYBP 转录抑制细胞凋亡

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表皮生长因子促进电压门控钠通道Nav1.5表达及人乳腺癌细胞的侵袭

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基础医学与临床 2011年第4期31卷 388-393页

作者：潘惠艳赵丽红代荫梅张卫华陈虹黄秉仁首都医科大学附属北京妇产医院中心实验室北京100006 中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院生物化学和分子生物学系国家医学分子生物学重点实验室北京100005

目的探讨表皮生长因子(EGF)是否调节乳腺癌MDA-MB-231细胞电压门控钠通道(VGSC)Nav1.5亚型基因的表达及其可能的信号分子传导途径。方法用Matrigel侵袭、免疫荧光定位、实时荧光定量RT-PCR(RFQ-PCR)和Western blot等方法,分别检测或探讨... 详细信息

目的探讨表皮生长因子(EGF)是否调节乳腺癌MDA-MB-231细胞电压门控钠通道(VGSC)Nav1.5亚型基因的表达及其可能的信号分子传导途径。方法用Matrigel侵袭、免疫荧光定位、实时荧光定量RT-PCR(RFQ-PCR)和Western blot等方法,分别检测或探讨EGFR和Nav1.5蛋白在细胞中的表达和定位、EGF和Nav1.5对细胞侵袭的作用、EGF对Nav1.5 mRNA和蛋白水平的影响以及PI3K在EGF增加侵袭中的作用。结果 MDA-MB-231细胞高表达EGF受体和Nav1.5蛋白,EGF增加细胞的侵袭达51.0%±2.6%,VGSC抑制剂Tetrodotoxin(TTX)10μmol/L阻滞EGF诱导的细胞侵袭(P<0.05);EGF增加Nav1.5 mRNA水平为(128±4)倍(P<0.05),Nav1.5蛋白水平有39%±4%上升(P<0.05)。PI3K抑制剂Wortmannin抑制EGF诱导的Nav1.5 mRNA和蛋白水平的增加,亦抑制EGF诱导的细胞侵袭。结论 EGF上调乳腺癌MDA-MB-231细胞VGSC Nav1.5亚型mRNA和蛋白的表达,促使乳腺癌细胞的侵袭,PI3K参与EGF诱导的Nav1.5的表达和细胞的侵袭。

关键词：表皮生长因子电压门控钠通道细胞信号侵袭乳腺癌

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噬菌体表面展示文库筛选人干细胞因子模拟肽

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中国医学科学院学报 2011年第4期33卷 351-356页

作者：苏林孔燕刘长征杨克恭陈松森中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005 北京大学临床肿瘤学院北京肿瘤医院北京市肿瘤防治研究所肾癌和黑色素瘤内科北京100036

目的用噬菌体表面展示文库筛选具有人干细胞因子(hSCF)生物学活性的模拟肽。方法采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)从噬菌体环七肽库和十二肽库筛选与重组hSCF受体(rc-kit/Ig1-3)有较高亲和力的噬菌体克隆,提取噬菌体单链DNA进行序列测定,... 详细信息

目的用噬菌体表面展示文库筛选具有人干细胞因子(hSCF)生物学活性的模拟肽。方法采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)从噬菌体环七肽库和十二肽库筛选与重组hSCF受体(rc-kit/Ig1-3)有较高亲和力的噬菌体克隆,提取噬菌体单链DNA进行序列测定,根据序列测定结果合成阳性小肽,四甲基偶氮噻唑盐(MTT)法检测合成小肽刺激UT-7细胞增殖的活性。结果经3轮筛选获得11个来源于环七肽库和8个来源于十二肽库与rc-kit/Ig1-3结合活性较高的噬菌体克隆,DNA测序结果显示环七肽库筛选到1个共有序列DPSPHTH,十二肽库没有筛选到共有序列。序列比对分析显示,这些小肽与hSCF没有同源序列。MTT法测定结果表明,合成的4个小肽均能促进UT-7细胞增殖,其中CE16和LE20刺激效果明显。结论获得4个具有较高hSCF生物学活性的模拟肽。

关键词：噬菌体表面展示文库人干细胞因子模拟肽筛选酶联免疫吸附测定法

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STEAP4基因多态性与维吾尔族人胰岛素抵抗的相关性

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中国医学科学院学报 2011年第3期33卷 299-305页

作者：郭艳英周玲姚晓光严治涛王红梅罗文利沈岩李南方中国医学科学院北京协和医学院基础医学院博士后流动站北京100005 新疆维吾尔自治区人民医院博士后工作站乌鲁木齐830001 新疆维吾尔自治区人民医院高血压科新疆高血压诊断治疗研究中心乌鲁木齐830001 中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的研究前列腺六次跨膜上皮抗原4(STEAP4)基因多态性与维吾尔族人胰岛素抵抗的关系。方法研究对象来自新疆和田地区2127例维吾尔族人肥胖等代谢性疾病的横断面调查研究,胰岛素抵抗病例组669例[胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)≥2.365%],正常... 详细信息

目的研究前列腺六次跨膜上皮抗原4(STEAP4)基因多态性与维吾尔族人胰岛素抵抗的关系。方法研究对象来自新疆和田地区2127例维吾尔族人肥胖等代谢性疾病的横断面调查研究,胰岛素抵抗病例组669例[胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)≥2.365%],正常对照组664例(HOMA-IR≤1.335%)。首先对50例胰岛素抵抗患者(HOMA-IR≥2.3)STEAP4基因的功能区进行测序,根据连锁不平衡(r2>0.8)和最小等位基因频率>5%的原则选择代表性变异在自然人群中行病例对照关联研究。结果 STEAP4基因测序共发现16个变异,其中新发现10个。在关联分析的3个变异中,rs8122(P/Pc=0.004/0.012)和rs1981529(P/Pc=0.015/0.045)与维吾尔族人的胰岛素抵抗表型关联。多元线性回归分析结果显示,rs8122 3种基因型间(GG>GA>AA)的腰围(P/Pc=0.032/0.256)、体重指数(BMI)(P/Pc=0.004/0.032)、HOMA-IR(P/Pc=0.010/0.08)、空腹胰岛素(P/Pc=0.023/0.184)及rs1981529 3种基因型间(AA>AG>GG)的腰围(P/Pc=0.005/0.040)、BMI(P/Pc=0.002/0.016)水平均有逐渐减小趋势。胰岛素抵抗病例组单倍型1(rs8122 G-rs1981529 A-rs34741656 G)的频率明显高于对照组(P=0.021)。结论 STEAP4基因多态性与新疆维吾尔族人的肥胖相关胰岛素抵抗关联。

关键词：遗传流行病学关联研究胰岛素抵抗维吾尔族

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人NSPc1慢病毒过表达系统的建立与鉴定

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基础医学与临床 2011年第4期31卷 440-444页

作者：李辉龚燕华胡光宇阴彬武警医学院组织胚胎学教研室北京100005 武警医学院生物化学教研室天津300162 中国医学科学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005 武警医学院

目的建立并鉴定人NSPc1慢病毒过表达系统,以便应用过表达技术进一步研究NSPc1功能。方法设计针对人NSPc1cDNA序列的带酶切位点引物,PCR扩增获得双链DNA后,与酶切后的pLenti6-TO-EGFP-TRIP载体片段进行连接、转化,酶切及DNA测序鉴定重组... 详细信息

目的建立并鉴定人NSPc1慢病毒过表达系统,以便应用过表达技术进一步研究NSPc1功能。方法设计针对人NSPc1cDNA序列的带酶切位点引物,PCR扩增获得双链DNA后,与酶切后的pLenti6-TO-EGFP-TRIP载体片段进行连接、转化,酶切及DNA测序鉴定重组克隆。提取阳性克隆质粒,转染293T细胞并用Western blot检测质粒过表达效果。用293T细胞制备慢病毒颗粒,感染293T细胞后收集细胞全蛋白,用Western blot检测慢病毒系统过表达效果。结果证实人NSPc1正确插入慢病毒载体,人NSPc1慢病毒过表达质粒及相应病毒颗粒能有效过表达NSPc1。结论人NSPc1慢病毒表达系统的成功建立,为应用过表达技术研究人NSPc1功能打下了基础。

关键词：过表达 NSPc1 慢病毒载体多梳家族

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基因组学与人类疾病

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遗传 2011年第8期33卷 807-808页

作者：周钢桥张学中国人民解放军军事医学科学院放射与辐射医学研究所蛋白质组学国家重点实验室基因组学与蛋白质组学研究室北京100850 中国医学科学院基础医学研究所&北京协和医学院基础医学院医学分子生物学国家重点实验室医学遗传学系北京100730

近年来,以高密度基因芯片和高通量测序为核心的基因组学技术迅速发展,已广泛应用到生物医学的各个领域并取得突出进展,使我们对于疾病的分子与遗传学基础的认识达到了一个新的水平。

关键词：基因组学技术人类疾病高密度基因芯片遗传学基础生物医学高通量领域并测序

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组蛋白赖氨酸甲基转移酶SET7/9对myogenin基因表达的影响

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医学研究杂志 2011年第1期40卷 32-35页

作者：潘炜松代辉张业沈珝琲中国医学科学院基础医学研究所/北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的利用本组构建的小鼠组蛋白赖氨酸甲基转移酶SET7/9真核表达质粒及RNA干扰(siRNA)质粒,在体外成肌细胞分化模型C2C12细胞中检测SET7/9对肌肉分化关键基因myogenin基因表达的影响。方法转染SET7/9真核表达质粒pCMV-3tag-6-SET7/9至C2... 详细信息

目的利用本组构建的小鼠组蛋白赖氨酸甲基转移酶SET7/9真核表达质粒及RNA干扰(siRNA)质粒,在体外成肌细胞分化模型C2C12细胞中检测SET7/9对肌肉分化关键基因myogenin基因表达的影响。方法转染SET7/9真核表达质粒pCMV-3tag-6-SET7/9至C2C12细胞,Western blot技术验证其表达;利用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)技术检测SET7/9对myogenin基因mRNA水平的影响;利用双荧光素酶报告系统检测SET7/9对myogenin基因启动子活性的影响;转染SET7/9的siRNA质粒,利用Real-time PCR技术检测其抑制效果以及对myogenin mRNA水平的影响。结果 SET7/9真核表达质粒pCMV-3tag-6-SET7/9可在C2C12细胞中有效表达;SET7/9可使myogenin mRNA水平升高并能够促进myogenin启动子活性升高;干扰SET7/9表达可使myogenin mRNA水平降低。结论组蛋白赖氨酸甲基转移酶SET7/9可激活肌肉分化关键基因myogenin的转录。

关键词： SET7/9 肌肉分化 RNA干扰 myogenin

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