绞股蓝属植物资源丰富,在我国分布广泛。绞股蓝属植物因含有丰富的达玛烷型三萜皂苷且药理活性多样而引起国内外广泛关注。目前对于绞股蓝属植物化学成分及药理活性研究主要集中于绞股蓝[Gynostemma pentaphyllum (Thunb.) Makino]和长梗绞股蓝(G. longipes C. Y. Wu ex C. Y. Wu&S. K. Chen) 2个种,对绞股蓝属其他种植物的研究则较少。本文采用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱联用技术,系统阐明缅甸绞股蓝(*** King ex Chakrav)中的化学成分。首先对不同来源缅甸绞股蓝进行液质分析,观察成分组成的一致性;根据绞股蓝属来源达玛烷型三萜皂苷质谱裂解规律、丙二酰基及乙酰基皂苷成分裂解特点,结合自建数据库及ChemSipder、SciFinder、PubChem在线数据库,对表征的各个峰的结构进行鉴定;通过液质基峰离子(base peak ion,BPI)色谱图对比缅甸绞股蓝与长梗绞股蓝的成分异同。实验结果显示,不同来源缅甸绞股蓝样品的成分组成一致性良好,共从缅甸绞股蓝样品中鉴定化学成分47个,包括12个黄酮和35个三萜皂苷类成分,其中6个为新化合物。缅甸绞股蓝中的皂苷普遍存在丙二酰基和乙酰基化现象,反相C18色谱分析时它们常常在相应的原型皂苷后相继出现。色谱图显示缅甸绞股蓝与长梗绞股蓝皂苷成分一致性良好,且主要成分绞股蓝皂苷XLIX和绞股蓝皂苷A及其丙二酰基成分在2个种间含量相当。综上,通过缅甸绞股蓝的液质分析,明确了缅甸绞股蓝的成分组成及特点,为缅甸绞股蓝的开发利用提供了实验依据。
目的探究鸟苷酸结合蛋白4(guanylate binding protein 4,GBP4)对于抗病毒天然免疫应答的调控及作用机制。方法构建GBP4及其酶活突变体质粒GBP4-M1(Δ60-67)、GBP4-M2(Δ82-84)和GBP4-M3(Δ112-116),通过蛋白免疫印迹和实时荧光定量PCR...
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目的探究鸟苷酸结合蛋白4(guanylate binding protein 4,GBP4)对于抗病毒天然免疫应答的调控及作用机制。方法构建GBP4及其酶活突变体质粒GBP4-M1(Δ60-67)、GBP4-M2(Δ82-84)和GBP4-M3(Δ112-116),通过蛋白免疫印迹和实时荧光定量PCR等实验,检测GBP4或其突变体的表达对Ⅰ型干扰素(type I interferon,IFN-I)反应的影响,并通过免疫荧光与免疫共沉淀实验验证GBP4与干扰素基因刺激因子(stimulator of interferon genes,STING)的相互作用。结果GBP4通过与STING相互作用,显著增加TANK结合激酶1(TANK-binding kinase 1,TBK1)、干扰素调节因子3(interferon regulatory factor 3,IRF3)与STING的磷酸化,IFN-I的应答以及下游干扰素刺激基因(interferon-stimulated genes,ISGs)表达也显著增多,且此作用依赖于GBP4的GTP酶活性结构域。结论GBP4通过促进环状GMP-AMP合成酶(cyclic GMP-AMP synthase,cGAS)-STING信号通路活化正向调控宿主IFN-Ⅰ反应,发挥抗病毒作用。
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