检索结果-内蒙古大学图书馆

病毒学报 2024年第6期40卷 1411-1419页

作者：李双丽吴雅楠吴雯西赵宸廖国阳李卫东中国医学科学院、北京协和医学院医学生物学研究所、云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

流感是由流感病毒引起的急性呼吸道传染病,接种相应的流感疫苗是预防和控制流感传播及流感导致的严重并发症的最经济有效的手段,由于基于鸡胚培养的流感疫苗在面临大流行威胁时可能存在鸡胚无法及时供应、难以快速大规模的生产疫苗等不... 详细信息

流感是由流感病毒引起的急性呼吸道传染病,接种相应的流感疫苗是预防和控制流感传播及流感导致的严重并发症的最经济有效的手段,由于基于鸡胚培养的流感疫苗在面临大流行威胁时可能存在鸡胚无法及时供应、难以快速大规模的生产疫苗等不足,细胞来源培养的流感疫苗的开发与生产越来越受到重视。本文主要从目前开发的用于生产流感疫苗的几种生产细胞(MDCK、Vero、PER.C6和昆虫细胞)的临床前和临床研究进展、优缺点以及不同细胞培养的流感病毒的工艺及细胞基质流感疫苗的质量控制等方面进行综述。

关键词：细胞来源流感疫苗 PER.C6 MDCK Vero 昆虫细胞

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巨噬细胞极化在单纯疱疹病毒1型感染中的作用研究进展

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病毒学报 2023年第6期39卷 1757-1767页

作者：张豪博张莹中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

巨噬细胞具有功能可塑性,使其能够根据微环境线索不同极化为不同表型,主要分为两种类型,即促炎M1型巨噬细胞和抗炎M2型巨噬细胞,它们在单纯疱疹病毒1型(Herpes simplex virus-1,HSV-1)感染的疾病发展中行使不同的功能。当巨噬细胞出现... 详细信息

巨噬细胞具有功能可塑性,使其能够根据微环境线索不同极化为不同表型,主要分为两种类型,即促炎M1型巨噬细胞和抗炎M2型巨噬细胞,它们在单纯疱疹病毒1型(Herpes simplex virus-1,HSV-1)感染的疾病发展中行使不同的功能。当巨噬细胞出现极化失衡时,可以通过多种因素对其失衡状态进行调节,靶向调节巨噬细胞的极化状态对于治疗HSV-1感染具有重要意义。本文对巨噬细胞极化及其在HSV-1感染中的作用研究进展进行总结,以期为HSV-1感染的进一步研究及治疗提供参考依据。

关键词：单纯疱疹病毒1型巨噬细胞极化表型

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柯萨奇病毒A组6型和B组1型混合感染叙利亚金黄地鼠动物模型的实验研究

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中国比较医学杂志 2025年第1期35卷 30-40页

作者：侯婧涵段素琴徐鸿界孙文亭李明学李艳艳靳玮华陈丽雄刘权赵远杨凤梅和占龙中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118 呼吸与共病全国重点实验室北京100005

目的建立柯萨奇病毒A组6型(coxsackievirus A6,CVA6)和B组1型(coxsackievirus B1,CVB1)混合感染叙利亚金黄地鼠手足口病动物模型。方法本研究将24只地鼠分为CVA6感染组、CVB1感染组、CVA6和CVB1混合感染组及对照组,采取鼻腔滴注病毒液和... 详细信息

目的建立柯萨奇病毒A组6型(coxsackievirus A6,CVA6)和B组1型(coxsackievirus B1,CVB1)混合感染叙利亚金黄地鼠手足口病动物模型。方法本研究将24只地鼠分为CVA6感染组、CVB1感染组、CVA6和CVB1混合感染组及对照组,采取鼻腔滴注病毒液和PBS方式造模。监测记录15 d内临床指标、生理指标、排毒情况,并在感染后第7天(D7)选取动物进行组织病理学和病毒抗原与核酸检测。结果单独和混合感染的实验组地鼠均出现类似人类手足口病的临床症状;WBC、NEUT、LYMPH结果提示病毒感染血象特征;咽拭子、粪便、血液和组织中均能检测到两种病毒核酸;粪便样品中能分离出两种病毒;脑等组织出现病理损伤表现及CVA6和CVB1病毒抗原蛋白和核酸的阳性共定位。结论经鼻腔同时滴注CVA6和CVB1混合液能够成功感染叙利亚金黄地鼠,复制出类似人类手足口病的疱疹、造成病毒性心肌炎和脑炎病理损伤等,结果显示混合感染组相较于单独感染组病情更为严重,表现为临床症状加重、病毒复制增高以及组织病理损伤明显。本研究为开展人类肠道病毒混合感染基础和临床研究提供一定借鉴和参考。

关键词：叙利亚金黄地鼠混合感染动物模型柯萨奇病毒A组6型柯萨奇病毒B组1型手足口病

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表达GⅡ.4型诺如病毒VP1复制缺陷型腺病毒构建与鉴定

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生物学杂志 2023年第6期40卷 7-11页

作者：施鹏林晓晨周艳李娇春宋泽鑫鲁辰星谭银珍胡晓青陈蓉李鸿钧中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

人诺如病毒(norovirus,NoV)在体外难以培养,不宜采用经典疫苗的方式进行疫苗研发,以腺病毒为载体的重组腺病毒疫苗为诺如病毒疫苗的研发提供另一种路线选择。构建表达人GⅡ.4型诺如病毒VP1蛋白的重组腺病毒为该技术路线的疫苗研发奠定... 详细信息

人诺如病毒(norovirus,NoV)在体外难以培养,不宜采用经典疫苗的方式进行疫苗研发,以腺病毒为载体的重组腺病毒疫苗为诺如病毒疫苗的研发提供另一种路线选择。构建表达人GⅡ.4型诺如病毒VP1蛋白的重组腺病毒为该技术路线的疫苗研发奠定基础。首先使用PCR扩增诺如病毒VP1片段,通过酶切、连接、转化,克隆含VP1基因的pshuttle-CMV-VP1穿梭质粒,再与腺病毒骨架质粒进行同源重组,重组质粒鉴定正确后使用PacⅠ酶切线性化,转染至HEK293细胞进行病毒包装,包装成复制缺陷型的完整腺病毒颗粒命名为rAd-VP1,病毒传代后进行滴度测定,并感染HEK293细胞,通过Western Blot方法鉴定重组腺病毒外源蛋白VP1的表达情况。结果表明,包装传代后的重组腺病毒浓缩后滴度达到CCID_(50)=5×10^(9)/mL,并且能在HEK293细胞成功表达VP1蛋白。研究为rAd-VP1的动物免疫评价和诺如病毒的疫苗研发提供基础。

关键词：诺如病毒主要结构蛋白VP1 腺病毒载体同源重组病毒包装

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表达SARS-CoV-2 Delta突变株S蛋白受体结合域和N蛋白的重组腺病毒的构建及鉴定

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中国生物制品学杂志 2023年第9期36卷 1025-1031页

作者：宋泽鑫周艳林晓晨赵永美施鹏王学付张朝武李鸿钧中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所、云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的构建表达严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory symptom coronavirus 2,SARS-CoV-2)Delta突变株S蛋白受体结合域(receptor binding domain,RBD)和N蛋白的重组腺病毒,并进行鉴定。方法将SARSCoV-2 RBD和N基因片段分别克隆至pcDNA3.0BA载体上,构建重组质粒pcDNA3.0BA-RBD-N,PCR扩增RBD-CMVN片段,连接至穿梭载体pShuttle-CMV上,将穿梭质粒pShuttle-RBD-N与pAdeasy-1进行同源重组,获得重组质粒pAdeasy-1-RBD-N,转染HEK293细胞进行重组腺病毒Ad-RBD-N包装,RT-PCR法检测重组腺病毒中RBD和N基因在HEK293细胞中的转录,Western blot和免疫荧光法检测重组腺病毒中RBD和N蛋白的表达。将Ad-RBD-N通过肌肉注射免疫12只雌性BALB/c小鼠,免疫剂量为5×10^(9)copies/只,免疫后14 d经尾静脉采血,ELISA法检测血清抗体效价。结果重组腺病毒RBD和N基因能在HEK293细胞中正常转录,RBD和N蛋白能在MA104细胞中正常表达。免疫重组腺病毒的小鼠可产生针对RBD和N蛋白的特异性IgG抗体。结论成功构建了表达SARS-CoV-2 Delta突变株S蛋白RBD和N蛋白的重组腺病毒,为Delta突变株疫苗的后续研究奠定了基础。

关键词：严重急性呼吸综合征冠状病毒2 S蛋白受体结合域 N蛋白腺病毒

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2022年云南省柯萨奇B组5型病毒全基因组分析

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中国公共卫生 2024年第9期40卷 1033-1039页

作者：楚昭阳陈俊薇冯昌增刘煜菡张名李丽马绍辉中国医学科学院&北京协和医学院医学生物学研究所遗传室云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118 云南大学生命科学学院昆明650504 昆明市妇幼保健院检验科昆明650031

目的分析2022年云南省4株柯萨奇B组5型病毒(CVB5)分离株的全基因组特征。方法设计CVB5全基因组扩增及测序引物,分段扩增CVB5分离株的全基因组,采用“引物移步法”测序,并进行序列拼接和组装。采用MEGA 7.0、Simplot 3.5.1和DNAStar 7.1... 详细信息

目的分析2022年云南省4株柯萨奇B组5型病毒(CVB5)分离株的全基因组特征。方法设计CVB5全基因组扩增及测序引物,分段扩增CVB5分离株的全基因组,采用“引物移步法”测序,并进行序列拼接和组装。采用MEGA 7.0、Simplot 3.5.1和DNAStar 7.1等软件对CVB5毒株的全基因组序列进行遗传特征分析。结果基于VP1和全基因组系统进化分析发现,4株CVB5分离株均为C基因型。与原型株相比,4株毒株VP1区均发生多处氨基酸变异。P1、P2、P3系统进化分析和simplot重组分析显示,CVB5分离株可能与多种肠道病毒B群毒株发生重组。结论2022年云南省昆明地区手足口病(HFMD)患者临床样本中分离到的4株CVB5均属于C基因型。

关键词：柯萨奇B组5型病毒全基因组序列分析云南省

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应用R语言BUGSnet程序包实现贝叶斯网状Meta分析

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中国循证医学杂志 2022年第5期22卷 600-608页

作者：向虹岳磊赵红李华谢天宏杨婷王杰张宇昊谢忠平中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗工程技术研究中心云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

BUGSnet程序包是一款功能强大、用于实现贝叶斯网状Meta分析的R语言程序包。该程序包基于JAGS软件并可根据公认的报告规范(PRISMA、ISPOR-AMPC-NCA和NICE-DSU)进行高质量的贝叶斯网络Meta分析。本文借助类固醇佐剂治疗天疱疮的网状Meta... 详细信息

BUGSnet程序包是一款功能强大、用于实现贝叶斯网状Meta分析的R语言程序包。该程序包基于JAGS软件并可根据公认的报告规范(PRISMA、ISPOR-AMPC-NCA和NICE-DSU)进行高质量的贝叶斯网络Meta分析。本文借助类固醇佐剂治疗天疱疮的网状Meta分析实例展示BUGSnet程序包处理连续性数据或二分类数据实现贝叶斯网状Meta分析的操作流程。

关键词：网状Meta分析 R软件 BUGSnet程序包贝叶斯推理

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3种ELISA方法与微量细胞中和试验检测SARS-CoV-2抗体滴度的相关性分析

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中国生物制品学杂志 2023年第6期36卷 719-723页

作者：蒋国润赵恒廖芸范胜涛李丹丹张莹于丽王丽春李琦涵徐兴丽中国医学科学院、北京协和医学院医学生物学研究所、云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的分析不同方法检测严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory symptom coronavirus 2,SARSCoV-2)疫苗免疫后抗体滴度的相关性,为其特异性抗体检测提供方法学依据。方法采用微量细胞中和试验及3种ELISA方法(分别以S蛋白... 详细信息

目的分析不同方法检测严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory symptom coronavirus 2,SARSCoV-2)疫苗免疫后抗体滴度的相关性,为其特异性抗体检测提供方法学依据。方法采用微量细胞中和试验及3种ELISA方法(分别以S蛋白、N蛋白和灭活全病毒颗粒为抗原)检测SARS-CoV-2灭活疫苗临床试验血清样品的IgG抗体阳转率及中和抗体滴度,并进行微量细胞中和试验与3种ELISA方法的相关性分析。结果中和抗体、S抗体、N抗体和全病毒抗体检测所得抗体阳转率分别为84.3%、91.3%、65.2%和46.6%,抗体几何平均滴度分别为16.6、945.9、72.7和18.8。3种ELISA方法(分别以S蛋白、N蛋白和灭活全病毒颗粒为抗原)与微量细胞中和试验检测结果的相关系数(r)分别为0.494、0.371和0.181。结论检测SARS-CoV-2 S抗体水平能在很大程度上反映以抗体水平升高为特征的体液免疫反应的激活情况。

关键词：严重急性呼吸综合征冠状病毒2 中和抗体 S抗体 N抗体全病毒抗体

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云南株埃可病毒6型的全基因序列分析

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中国病原生物学杂志 2023年第8期18卷 869-874页

作者：陈俊薇张名刘煜菡郭伟冯昌增马绍辉云南大学生命科学学院云南昆明650504 中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室

目的对分离自云南省手足口病患者粪便的8株埃可病毒6型(Echovirus 6,E6)进行全基因组遗传特征分析,为E6基因组的变异和重组研究提供数据参考。方法分别采用人横纹肌肉瘤细胞(human rhabdomyosarcoma cells,RD)、人胚肺二倍体成纤维细胞(... 详细信息

目的对分离自云南省手足口病患者粪便的8株埃可病毒6型(Echovirus 6,E6)进行全基因组遗传特征分析,为E6基因组的变异和重组研究提供数据参考。方法分别采用人横纹肌肉瘤细胞(human rhabdomyosarcoma cells,RD)、人胚肺二倍体成纤维细胞(human embryonic lung diploid fibroblasts,KMB17)以及非洲绿猴肾细胞(Vero)对云南省2019年从手足口病患者粪便样分离的8株E6进行增殖培养。提取病毒RNA,RT-PCR扩增其VP1序列,并鉴定其血清型。设计针对E6的引物,分段扩增获得全基因组并测序,使用Mega 7.0、Geneious 9.1.4及Simplot 3.5.1等软件对其全基因组序列进行分析。结果8株E6分离株中RD细胞分离的病毒6株,KMB17细胞分离的病毒2株,Vero细胞未分离到病毒。8株E6病毒分离株基因组全长为7440~7450个核苷酸,编码2191个氨基酸,8个分离株之间全基因组核苷酸和氨基酸序列相似性分别为99.6%~99.8%和99.4%~99.9%。VP1序列分析显示,8个E6分离株均属于中国流行的优势基因型F。基于P1、P2、P3系统进化与重组分析显示:在P1区,8个E6分离株与E6原型株D􀆳Amori聚在一起,与VP1分型结果一致;在P2区,与柯萨奇病毒B组5型(Coxsackievirus B5,CVB5)、埃可病毒16型(Echovirus 16,E16)以及2个中国E6毒株聚类在一起;在P3区,与柯萨奇病毒A组9型(Coxsackievirus A9,CVA9)、E16和其他中国E6病毒分离株聚类在一起,表明8个E6病毒分离株与EV-B的其他血清型病毒之间可能发生过重组。结论8个云南分离株E6病毒均属于中国流行的优势基因型F,且与EV-B的其他血清型之间可能发生过重组事件。

关键词：埃可病毒6型全基因组序列系统进化分析

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基于N-ELISA的呼吸道合胞病毒快速中和抗体检测方法的建立

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中华微生物学和免疫学杂志 2024年第2期44卷 162-169页

作者：孙誉芳赵慧杨惠洁谢莹鲍春婷李淑艳王浇磊李长贵广州医科大学研究生院广州511495 中国食品药品检定研究院呼吸道病毒疫苗室北京102629 北京协和医学院/中国医学科学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118 长春生物制品研究所有限责任公司疫苗研究室长春130012

目的制备针对呼吸道合胞病毒(RSV)N蛋白的兔多克隆抗体,以其作为检测抗体建立基于ELISA的快速中和抗体检测方法。方法构建pET30a-N质粒,表达纯化N蛋白,免疫新西兰兔制备针对RSV N蛋白的多克隆抗体作为检测抗体。阳性血清系列稀释后与10... 详细信息

目的制备针对呼吸道合胞病毒(RSV)N蛋白的兔多克隆抗体,以其作为检测抗体建立基于ELISA的快速中和抗体检测方法。方法构建pET30a-N质粒,表达纯化N蛋白,免疫新西兰兔制备针对RSV N蛋白的多克隆抗体作为检测抗体。阳性血清系列稀释后与100半数组织培养感染剂量(TCID 50)/孔的RSV中和,接种Hep-2细胞培养,80%丙酮固定细胞,ELISA方法检测感染细胞中病毒的N蛋白,当每孔的吸光度值低于临界值时,视为中和试验阳性孔,阳性孔血清的最高稀释度为该血清的中和抗体滴度。优化抗体稀释度、检测时间、细胞密度及中和时间,建立基于N-ELISA的中和抗体检测方法,对建立的实验方法进行细胞代次、边缘孔效应、准确性、重复性以及精密度验证,初步应用于人RSV IgG阳性血清检测,分析与微量中和法的相关性。结果成功构建出pET30a-N质粒,表达纯化的N蛋白纯度较高,特异性良好;三免后兔血清效价为1∶51200,可特异性结合RSV;制备的抗RSV N兔多抗的效价为1∶51200,特异性良好,建立的快速中和抗体检测方法在4 d就可检测,中和时间可缩短至30 min,细胞代次、96孔板位置(边缘孔和非边缘孔)对该方法检测无影响,重复性、精密性、准确度良好,建立的方法和微量中和法检测64份RSV IgG阳性人血清,相关系数为0.9296,证明两种方法具有良好的正相关性。结论成功建立基于ELISA的快速中和抗体检测方法,可用于评价RSV疫苗接种后的血清抗体水平。

关键词：呼吸道合胞病毒中和抗体酶联免疫吸附试验

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