检索结果-内蒙古大学图书馆

中国生物工程杂志 2019年第3期39卷 46-55页

作者：高福兰齐家龙舒聪妍谢航航黄惟巍刘存宝杨旭孙文佳白红妹马雁冰昆明医科大学昆明650500 中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南省重大传染病疫苗工程技术研究中心昆明650118

目的:白细胞介素(IL)-33具有重要的免疫调控作用,在疾病中扮演着重要的角色。本文旨在通过基因优化实现IL-33在哺乳动物细胞中的高效表达,为疾病机理研究以及疫苗免疫佐剂应用等提供基础。方法:根据小鼠白细胞介素-33成熟肽(m IL-33)的... 详细信息

目的:白细胞介素(IL)-33具有重要的免疫调控作用,在疾病中扮演着重要的角色。本文旨在通过基因优化实现IL-33在哺乳动物细胞中的高效表达,为疾病机理研究以及疫苗免疫佐剂应用等提供基础。方法:根据小鼠白细胞介素-33成熟肽(m IL-33)的氨基酸序列,以哺乳动物细胞基因表达密码子偏好性进行基因优化设计;化学合成优化的m IL-33基因片段,通过搭桥PCR将编码人CD8α信号肽的核酸序列分别与优化或未优化的m IL-33基因连接,并与绿色荧光蛋白(EGFP)基因分别构建到双表达单元质粒p Bud CE4. 1的不同启动子下;重组质粒经lipofectamine 3000和PEI转染293FT细胞;以Western blot和ELISA检测重组蛋白的表达;收集表达的m IL-33刺激巨噬细胞Raw264. 7,ELISA检测培养上清的TNFα水平,以证明IL-33的生物学活性。结果:重组质粒经酶切鉴定及测序分析证实构建成功; lipofectamine 3000转染效率较PEI转染更高; Western blot和ELISA结果显示密码子优化的m IL-33表达水平较未优化序列更高,在EF-1α启动子和CMV启动子指导下m IL-33在293FT细胞表达水平相当,CD8α信号肽成功引导m IL-33的分泌,产物具生物学活性。结论:密码子优化操作显著改善了m IL-33在哺乳动物细胞中的表达水平,为进一步研究奠定了基础。

关键词：序列优化白细胞介素-33成熟肽(mIL-33) 293FT

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

2019年云南省昆明市2株柯萨奇病毒A4毒株全基因序列分析

引用

中国病毒病杂志 2020年第6期10卷 439-444页

作者：丛山日许丹菡张名冯昌增黄小琴孙浩杨昭庆马绍辉中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的对2019年云南昆明地区手足口病患者的粪便进行病毒分离并对毒株进行全基因组序列测定和遗传特性分析。方法利用人类横纹肌肉瘤细胞(human rhabdomyosarcoma,RD)进行病毒分离,提取病毒的RNA序列进行逆转录聚合酶链反应(reverse trans... 详细信息

目的对2019年云南昆明地区手足口病患者的粪便进行病毒分离并对毒株进行全基因组序列测定和遗传特性分析。方法利用人类横纹肌肉瘤细胞(human rhabdomyosarcoma,RD)进行病毒分离,提取病毒的RNA序列进行逆转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)并测序,利用MEGA 6.06、Simplot 3.5.1和Geneious 9.1.4等软件对毒株的全基因组序列进行分析。结果 KR3/YN/CHN/2019(简称KR3)和KR110/YN/CHN/2019(简称KR110)分离株经测序比对为柯萨奇病毒A组4型(coxsackievirus A,CV-A4),全基因序列长度分别为7 434个核苷酸和7 436个核苷酸,编码2 201个氨基酸;全基因核苷酸一致性及氨基酸同源性分别为92.4%和98.4%。2株CV-A4云南分离株与大多数中国流行株在同一分支,均属于C2亚型。结论 KR3和KR110分离株为CV-A4,与中国CV-A4流行株一致,同属于C2亚型。

关键词：柯萨奇病毒A组4型(CV-A4) 手足口病全基因组肠道病毒进化分析遗传特性

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

不同细胞对柯萨奇病毒A组10型毒株的敏感性及滴度检测影响因素分析

引用

中国病毒病杂志 2020年第4期10卷 267-271页

作者：高微捷岳磊杨婷宋霞李华谢天宏何鑫卫星辰谢忠平中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的探讨不同细胞对柯萨奇病毒A组10型(coxsackievirus A10,CV-A10)毒株的敏感性和滴度检测影响因素,为临床样品分离、病毒培养及保存使用提供基础数据。方法10株已在非洲绿猴肾(African green monkey kidney,Vero)细胞分离并培养2代的C... 详细信息

目的探讨不同细胞对柯萨奇病毒A组10型(coxsackievirus A10,CV-A10)毒株的敏感性和滴度检测影响因素,为临床样品分离、病毒培养及保存使用提供基础数据。方法10株已在非洲绿猴肾(African green monkey kidney,Vero)细胞分离并培养2代的CV-A10毒株,检测其在Vero细胞、人胚肺二倍体细胞(human embryonic lung diploid cell,KMB17)、人横纹肌肉瘤(human rhabdomyosarcoma,RD)细胞及人喉癌细胞(human laryngeal carcinoma cell,HeP-2)上的感染性滴度,并对毒株进行蚀斑纯化和冻融处理。结果CV-A10毒株均能适应Vero细胞、KMB17细胞及RD细胞,不能适应HeP-2细胞。RD细胞上第1天即开始病变,第4天达到增值高峰,感染性滴度最高,达到7.75 lgCCID50/ml;KMB17细胞上病变最慢,第3天发生病变,第5天达到增值高峰,滴度为4.85 lgCCID50/ml。毒株在37℃放置3 d感染性滴度明显下降,4℃放置3 d,-30℃和-80℃放置30 d感染性滴度均无影响。结论RD细胞是CV-A10毒株最敏感的细胞,HeP-2细胞不敏感。CV-A10毒株反复冻融次数不宜超过5次,保存温度越低越好并避免4℃和常温下长时间放置。

关键词：柯萨奇病毒A组10型感染性滴度生长特性细胞敏感性 Vero细胞 RD细胞 KMB17细胞

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

新工艺制备Hib结合疫苗原液长期稳定性试验

引用

昆明医科大学学报 2020年第2期41卷 12-15页

作者：朱文勇王明清宋绍辉李双丽胡文廖国阳中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的在前期开发的b型流感嗜血杆菌(haemophilus influenzae type b,Hib)荚膜多糖提取新工艺及利用1-氰基-4-二甲基氨基吡啶·四氟化硼(1-cyano-4-dimethylaminopyridinium tetrafluoroborate,CDAP)活化的疫苗制备新方法的基础上,评价利用新方法生产的Hib结合疫苗原液的稳定性。方法将疫苗原液在2~8℃条件下放置36个月,根据实验设计,不同时间取样并按照《中国药典》中相应的检测指标、检测方法进行评价。结果新工艺制备的Hib结合疫苗原液在2~8℃储存条件下,大部分指标保持相对稳定,只有分子量大小、高分子结合物含量及效力结果下降,但保存30个月仍符合2010年《中国药典》的相关要求。结论新方法与传统方法生产的Hib结合疫苗原液稳定性基本相同,证明了利用新方法制备Hib结合疫苗的新工艺可以用于扩大生产规模。

关键词：新工艺 Hib 原液稳定性

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

单纯疱疹病毒Ⅰ型感染的天然免疫反应及其逃逸机制

引用

生物技术通讯 2020年第4期31卷 478-485页

作者：张晶晶李琦涵中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)属于疱疹病毒α亚科,在人群中广泛传播,感染机体后可建立潜伏感染并在宿主体内存活终生。病毒感染后机体的许多先天免疫被激活,同时HSV-1也进化出逃避宿主的免疫反应,其中涉及到不同的信号通路、转录因子及免疫... 详细信息

单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)属于疱疹病毒α亚科,在人群中广泛传播,感染机体后可建立潜伏感染并在宿主体内存活终生。病毒感染后机体的许多先天免疫被激活,同时HSV-1也进化出逃避宿主的免疫反应,其中涉及到不同的信号通路、转录因子及免疫细胞等。本文简要综述HSV-1的感染机制和病毒的逃逸机制,为今后防治药物和疫苗的研发奠定基础。

关键词：单纯疱疹病毒Ⅰ型天然免疫激活免疫逃逸

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

一株柯萨奇病毒A组9型病毒的全基因组分析

引用

中国病毒病杂志 2020年第5期10卷 355-358页

作者：丛山日刘红波许丹菡郭伟黄小琴孙浩杨昭庆马绍辉中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的对2010年云南省昆明市1例手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)并发脑炎患儿的粪便中分离到的1株柯萨奇病毒A组9型(coxsackievirus A9,CV-A9)毒株的全基因组序列和遗传特性进行分析。方法利用人类横纹肌肉瘤(human rhabdomyo... 详细信息

目的对2010年云南省昆明市1例手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)并发脑炎患儿的粪便中分离到的1株柯萨奇病毒A组9型(coxsackievirus A9,CV-A9)毒株的全基因组序列和遗传特性进行分析。方法利用人类横纹肌肉瘤(human rhabdomyosarcoma,RD)细胞对该粪便标本进行病毒分离,提取病毒RNA,采用反转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RTPCR)分段扩增病毒的全基因组序列,利用MEGA 6.06、Geneious 9.0.2和SimPlot 3.5.1等软件对该毒株的全基因序列进行分析。结果获得1株CV-A9分离株(A744/YN/CHN/2010,简称A744),其全基因组序列长为7319bp。该毒株与CV-A9重组株(A108/YN/CHN/2009)核苷酸一致性和氨基酸同源性最高,分别为97.4%和99.0%,可能发生重组事件。结论A744分离株为CV-A9,与中国其他CV-A9分离株同属D2基因亚型。

关键词：柯萨奇病毒A组9型全基因组进化分析遗传特性

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

人柯萨奇B2病毒感染恒河猴模型的初步研究

引用

中国比较医学杂志 2019年第12期29卷 52-60页

作者：段素琴杨亚平杨凤梅李艳艳刘权赵远马绍辉和占龙中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室

目的通过对人柯萨奇B2病毒经口腔感染恒河猴婴猴的感染特征进行初步分析研究,为人柯萨奇B2病毒恒河猴感染模型的建立提供实验方法及技术支持,为后续开展其感染机制、病理生理等研究奠定基础。方法将柯萨奇B2病毒经口腔感染方式感染3~4... 详细信息

目的通过对人柯萨奇B2病毒经口腔感染恒河猴婴猴的感染特征进行初步分析研究,为人柯萨奇B2病毒恒河猴感染模型的建立提供实验方法及技术支持,为后续开展其感染机制、病理生理等研究奠定基础。方法将柯萨奇B2病毒经口腔感染方式感染3~4月龄的恒河猴婴猴,观察记录恒河猴临床症、体温;采集血液检测生理生化指标;血样和疱疹检测病毒;疱疹组织进行病理检测。结果恒河猴感染后2~5 d出现手、足、口疱疹;动物出现精神沉郁、活动及饮食量减少的情况;体温呈现稽留热曲线图;疱疹液和血样中都可检测到柯萨奇B2病毒;血常规检测出现白细胞减少、单核细胞增加、淋巴细胞数量减少、粒细胞数量增加、嗜酸性细胞增加、嗜碱性细胞减少的情况。血液生化检测发现肝功、肾功、心肌酶都发生了不同程度的升高;疱疹组织病理学显示恒河猴疱疹呈鳞状上皮增厚,表面角化过度,局部坏死伴炎细胞浸润,脓肿形成。结论人柯萨奇B2病毒感染婴猴后出现一系列较为特征的手足口疱疹、临床症状、生理生化、病毒血症等情况,表明经口腔感染方式恒河猴婴猴可以成功构建柯萨奇B2病毒感染的动物模型,建立的相关检测方法和技术是可行的,为后续建立开展恒河猴柯萨奇B2病毒感染模型、发病机制研究、药物及疫苗的评价奠定了实验基础。

关键词：手足口病人柯萨奇B2病毒恒河猴模型口服感染

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

试验设计法优化肺炎支原体培养基

引用

中国生物制品学杂志 2019年第1期32卷 66-71页

作者：李双丽李泽华朱文勇陈枫李卫东廖国阳中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的试验设计(design of experiment,DOE)法优化肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae,MP)培养基,以期提高MP产量。方法以MP(FH株)为试验菌株,PPLO培养基为基础,菌体蛋白含量为响应值,采用Plackett-Burman试验、最陡爬坡试验及Box-Behnken试验对脑心浸液、水解乳蛋白、胨3号、精氨酸、小牛胸腺DNA、葡萄糖和胰蛋白胨7种培养基添加成分进行筛选及优化。以菌体蛋白含量及颜色变化单位(color change unit,CCU)为指标,验证改良培养基培养MP的效果。结果培养基各添加成分对MP生长影响作用大小依次为葡萄糖、胰蛋白胨、脑心浸液、精氨酸、月胨3号、水解乳蛋白、小牛胸腺DNA,最终筛选出脑心浸液、葡萄糖及胰蛋白胨3种添加物,最适浓度分别为5. 68、1. 34及2. 64 g/L。采用改良培养基培养MP 96 h时,菌体蛋白含量及CCU达最大,分别为851. 29μg/mL及10~9 ccu/mL。结论 DOE法实现了对MP培养基的优化,获得了影响MP生长的主要参数,提高了MP菌体产量。

关键词：肺炎支原体 PPLO培养基试验设计优化

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

细胞工厂制备F基因型腮腺炎减毒活疫苗工艺初步研究

引用

国际生物制品学杂志 2020年第6期43卷 282-286页

作者：杨振清邱恒王微郑俊杰赵卫中何云龙李琦涵王晶晶中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

目的:初步建立以人二倍体细胞KMB 17为培养基质的F基因型腮腺炎减毒活疫苗细胞工厂工艺。方法:分别使用细胞工厂和细胞培养瓶,以含体积分数5%和10%牛血清的培养基将KMB 17细胞培养至单层后计数,并按不同感染复数(multiplicity of infect... 详细信息

目的:初步建立以人二倍体细胞KMB 17为培养基质的F基因型腮腺炎减毒活疫苗细胞工厂工艺。方法:分别使用细胞工厂和细胞培养瓶,以含体积分数5%和10%牛血清的培养基将KMB 17细胞培养至单层后计数,并按不同感染复数(multiplicity of infection,MOI)接种F基因型腮腺炎病毒,观察细胞病变情况,初步确定细胞工厂工艺最适MOI和病毒收获时间。在无血清培养基条件下,对两种生产工艺制备的腮腺炎减毒活疫苗半成品和成品进行病毒滴度检测、热稳定性试验及其他相关质量指标的检测。结果:在细胞工厂中获得了生长状态良好的KMB 17细胞,经洗涤后,在MOI为0.020时,培养7~9 d后可获得滴度较高的病毒收获液,经过滤、冻干,成品病毒滴度较稳定,其他质量指标经检测均符合中国药典2015年版三部的要求。结论:初步建立了细胞工厂制备F基因型腮腺炎减毒活疫苗的生产工艺。

关键词：腮腺炎疫苗细胞工厂 KMB 17细胞

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

恒河猴自发性脂肪瘤的病例分析

引用

实验动物科学 2020年第4期37卷 59-63页

作者：杨凤梅李艳艳刘权陈丽雄王俊斌赵远马进徐鸿界禹文海和占龙中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

在人工饲养猴场中发现一只雄性恒河猴腹部有一隆起肿块,采食、饮水、排便等皆正常。对其进行保定触诊,肿块皮肤完整,肿块组织边界清楚,质地硬,实质感较强,不规则形,直径约10 cm,触诊无明显痛感;用针管刺入肿块组织抽取无液体样内容物。... 详细信息

在人工饲养猴场中发现一只雄性恒河猴腹部有一隆起肿块,采食、饮水、排便等皆正常。对其进行保定触诊,肿块皮肤完整,肿块组织边界清楚,质地硬,实质感较强,不规则形,直径约10 cm,触诊无明显痛感;用针管刺入肿块组织抽取无液体样内容物。经B超检测该肿块内组织形状规则,边界清晰,包膜回声及少许血流信号,呈纤维素样变;检查体温正常;血液生理及生化指标检测,结果与正常猴比较:ALP升高,TP、ALB、TC、RBC、HCT降低;实施肿块切除手术,取肿块组织切片镜检,确诊为脂肪瘤。经手术后经过术后护理,该恒河猴预后良好。

关键词：恒河猴脂肪瘤检测

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：