检索结果-内蒙古大学图书馆

生物学杂志 2019年第6期36卷 12-16页

作者：陈林林周艳林晓晨杜静刘洋汪艺李鸿钧中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室

研究轮状病毒(Rotavirus,RV)非结构蛋白5(NSP5)在体外对RV复制的作用。以质粒pEGFP-N2为载体构建出可特异性表达重组蛋白NSP5的真核表达载体后,将重组质粒转染MA104细胞并分别通过免疫荧光和Western Blot检测NSP5在转染后不同时间的表... 详细信息

研究轮状病毒(Rotavirus,RV)非结构蛋白5(NSP5)在体外对RV复制的作用。以质粒pEGFP-N2为载体构建出可特异性表达重组蛋白NSP5的真核表达载体后,将重组质粒转染MA104细胞并分别通过免疫荧光和Western Blot检测NSP5在转染后不同时间的表达差异。随后,重组质粒转染组及对照组细胞分别接种相同剂量的RV,一定时间后根据GFP分布来确认重组蛋白NSP5在细胞内的迁移变化情况,并比较实验组和对照组之间的RV复制能力差异。结果发现,NSP5蛋白在重组质粒转染细胞48 h后表达达到顶峰。此外,GFP也显示NSP5蛋白随RV的感染从弥散状转变为点状聚集,且转染该重组质粒的细胞内RV复制水平明显高于对照细胞。说明了轮状病毒NSP5对病毒的复制具有明显促进作用,这也为深入了解RV的感染、复制及致病机理提供理论基础。

关键词：轮状病毒 NSP5 真核表达载体病毒复制

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单纯疱疹病毒Ⅱ型经不同途径感染BALB/c小鼠的病理学研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2019年第7期39卷 485-491页

作者：曾洁媛李琦涵范胜涛廖芸冯敏徐兴丽沈冬王建斌程继帅张莹昆明医科大学基础医学院 650500 中国医学科学院&北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

目的观察并比较分析单纯疱疹病毒Ⅱ型(herpes simplex virus type 2,HSV-2)经不同途径感染小鼠后的致病情况。方法将6周龄雌性BALB/c小鼠分为实验组和对照组。实验组小鼠分别经滴鼻、生殖道途径感染HSV-2(每只104CCID50/20 μl),对照组... 详细信息

目的观察并比较分析单纯疱疹病毒Ⅱ型(herpes simplex virus type 2,HSV-2)经不同途径感染小鼠后的致病情况。方法将6周龄雌性BALB/c小鼠分为实验组和对照组。实验组小鼠分别经滴鼻、生殖道途径感染HSV-2(每只104CCID50/20 μl),对照组小鼠经上述两种途径注射PBS。感染后不同时间点,分别取肺、神经系统、生殖系统组织进行病理学观察及病毒载量检测。通过原位杂交对小鼠三叉和骶神经节中lat基因的表达进行定位,同时对组织中病毒进行重激活检测。结果两种途径感染HSV-2的小鼠体重在6 d后均呈下降趋势,且均能观察到组织病理损伤。鼻腔感染以肺泡壁充血、脑血管袖套、淋巴细胞浸润等肺部、中枢神经系统病理损伤为主;而生殖道感染组主要出现是骶神经节坏死、阴道和子宫嗜酸性粒细胞增多、卵巢充血等生殖道病理现象。经两种途径感染的小鼠组织器官中病毒载量的情况也印证了上述病理结果,即鼻腔感染组小鼠的神经、肺组织中病毒载量明显高于生殖道组,而生殖道感染组小鼠的生殖道和骶神经节中病毒增殖则明显高于鼻腔感染组。感染后28 d,在处于潜伏感染小鼠的三叉和骶神经节中均能检测到HSV-2 lat基因mRNA的阳性信号,并且采集的组织碎块均能在与Vero细胞共培养时使细胞病变,且生殖道感染组的lat基因阳性信号及重激活后病毒增殖趋势相对高于鼻腔感染组。结论HSV-2通过鼻腔和生殖道两种途径感染BALB/c小鼠均能引起组织病理损伤,且病理损伤空间特异性与感染途径密切相关。

关键词：单纯疱疹病毒Ⅱ型生殖道感染鼻腔感染病理学分析

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靶向IL-4主动免疫抑制屋尘螨抽提物诱导的小鼠气道炎症反应

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中国细胞生物学学报 2019年第5期41卷 918-925页

作者：高瑞雨严皎袁明翠马雁冰中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室

以IL-4为主要驱动的Th2应答是过敏性哮喘的主要免疫病理特征,该文旨在探讨靶向IL-4主动免疫对屋尘螨过敏原刺激的小鼠气道炎症反应的干预作用及潜力。研究以重组制备的、呈现IL-4肽表位的乙肝核心抗原病毒样颗粒免疫BALB/c小鼠,并以屋... 详细信息

以IL-4为主要驱动的Th2应答是过敏性哮喘的主要免疫病理特征,该文旨在探讨靶向IL-4主动免疫对屋尘螨过敏原刺激的小鼠气道炎症反应的干预作用及潜力。研究以重组制备的、呈现IL-4肽表位的乙肝核心抗原病毒样颗粒免疫BALB/c小鼠,并以屋尘螨抽提物诱导气道过敏性炎症反应。结果显示,靶向IL-4的主动免疫激发了持续的IL-4特异IgG抗体高水平应答;显著减少气道浸润的总炎性细胞以及其中占主要的嗜酸性粒细胞数目;显著降低了支气管肺泡灌洗液中Th2细胞因子IL-4、IL-13和IL-5水平,而Th1的IFN-γ有升高趋势;显著下调了血清IgG1而上调IgG2a水平;此外,显著抑制了乙酰甲胆碱刺激的过敏小鼠气道高反应性。研究表明,靶向IL-4的主动免疫具有抑制过敏性气道炎症反应的潜力。

关键词：白细胞介素-4 病毒样颗粒屋尘螨抽提物哮喘

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登革病毒Ⅰ型拷贝数标准质粒和检测体系的建立及其应用

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中国生物制品学杂志 2019年第1期32卷 76-79页

作者：林垚洪珊文送娇席珏敏王晓丹陈俊英潘玥叶超管娇琼孙强明中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的建立登革病毒Ⅰ型(dengue virus-Ⅰ,DENV-Ⅰ)拷贝数标准质粒及其检测体系。方法将DENV-Ⅰ的前膜蛋白基因克隆至pMD19-T载体,建立DENV-Ⅰ标准质粒,采用实时荧光定量PCR法进行扩增,获得Ct值与病毒拷贝数的关系,绘制标准曲线,得到相应... 详细信息

目的建立登革病毒Ⅰ型(dengue virus-Ⅰ,DENV-Ⅰ)拷贝数标准质粒及其检测体系。方法将DENV-Ⅰ的前膜蛋白基因克隆至pMD19-T载体,建立DENV-Ⅰ标准质粒,采用实时荧光定量PCR法进行扩增,获得Ct值与病毒拷贝数的关系,绘制标准曲线,得到相应的标准曲线方程。采用建立的标准质粒及检测体系对3份2017年云南西双版纳DENV-Ⅰ患者的血清进行检测。结果经双酶切及测序鉴定,DENV-Ⅰ拷贝数标准质粒构建正确。实时荧光定量PCR得到的标准曲线方程为y=-0. 300 5 x+12. 133,R^2=0. 991 9。3份血清样品原液的病毒拷贝数分别为9 417 703. 12、21 949 591. 01及19 027 096. 91 copies/μL。结论成功建立了DENV-Ⅰ拷贝数标准质粒及其检测体系,且准确性较好,灵敏度较高,可用于血清样品中DENV-Ⅰ拷贝数的检测。

关键词：登革病毒Ⅰ型病毒拷贝数标准质粒

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分子排阻高效液相色谱法检测组分无细胞百白破联合疫苗的纯度

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中国疫苗和免疫 2019年第3期25卷 276-280页

作者：梁疆莉马艳顾琴高娜孙明波杨卉娟中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室

目的建立组分无细胞百白破联合疫苗(DTaP)纯度分析的分子排阻高效液相色谱(SE-HPLC)方法,用于疫苗生产过程的质量检测指标。方法建立SE-HPLC法检测DTaP中破伤风类毒素(TT)、白喉类毒素(DT)、百日咳毒素(PT)、百日咳丝状血凝素(FHA)、百... 详细信息

目的建立组分无细胞百白破联合疫苗(DTaP)纯度分析的分子排阻高效液相色谱(SE-HPLC)方法,用于疫苗生产过程的质量检测指标。方法建立SE-HPLC法检测DTaP中破伤风类毒素(TT)、白喉类毒素(DT)、百日咳毒素(PT)、百日咳丝状血凝素(FHA)、百日咳黏附素(PRN)五种组分纯化液和TT脱毒液纯度的方法,同时用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)法对各组分纯度进行对比检测和分析。结果选TSK-GEL G4000PWXL色谱柱,DTaP组分的SE-HPLC法纯度检测和分析显示,PT、FHA、PRN、DT纯化液的平均纯度分别为98.46%、91.88%、94.16%、90.11%;TT纯化液二聚体、单体的含量分别占74.50%、25.50%,TT脱毒液二聚体、单体的含量分别占57.22%、42.78%。上述结果与SDS-PAGE法的检测和分析结果相似。结论 SE-HPLC法可以用于DTaP五种纯化液的纯度分析,其与SDS-PAGE法都可以对DTaP生产过程中的纯度指标进行监控。

关键词：无细胞百白破疫苗分子排阻高效液相色谱法纯度

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云南汉族人群mircoRNA-149、mircoRNA-219、mircoRNA-let-7基因多态性与非小细胞肺癌发生和发展的相关性

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昆明医科大学学报 2021年第10期42卷 22-28页

作者：杨佳李娅娴王莹莹肖琳李传印谭芳马千里刘舒媛中国医学科学院&北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118 昆明医科大学第一附属医院干部医疗科云南昆明650032 昆明医科大学第三附属医院胸外科云南昆明650118

目的探讨mircoRNA基因多态性与云南汉族人群非小细胞肺癌发生发展的相关性。方法选取云南地区汉族人群非小细胞肺癌患者415例,健康对照460例,采用Taqman探针基因分型法对3个SNP位点rs2292832 T>C(pre-miR-149)、rs107822 C>T(pre-... 详细信息

目的探讨mircoRNA基因多态性与云南汉族人群非小细胞肺癌发生发展的相关性。方法选取云南地区汉族人群非小细胞肺癌患者415例,健康对照460例,采用Taqman探针基因分型法对3个SNP位点rs2292832 T>C(pre-miR-149)、rs107822 C>T(pre-miR-219a-1),rs629367 C>A(pri-let-7a-1)进行基因分型并分析其等位基因、基因型在非小细胞肺癌患者(按病理分层为鳞癌、腺癌及其他类型肺癌;按临床分期分层为Ⅰ+Ⅱ期、Ⅲ+Ⅳ期)及健康对照中的频率差异。结果rs2292832、rs107822、rs629367位点的等位基因、基因型频率在非小细胞肺癌组和对照组间的差异没有统计学意义,在分层分析及遗传模式分析中也无显著性差异。结论rs2292832、rs107822、rs629367可能与云南汉族人群非小细胞肺癌无相关性。

关键词：非小细胞肺癌 miRNA SNPs 相关性云南汉族人群

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大肠埃希菌外膜囊泡作为新型外源质粒递送载体的研究

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中国生物制品学杂志 2019年第1期32卷 10-14,19页

作者：舒聪妍王世杰高福兰黄惟巍马雁冰中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南省重大传染病疫苗工程技术研究中心云南昆明650118

目的探讨大肠埃希菌外膜囊泡(outer membrane vesicles,OMVs)作为新型DNA疫苗递送载体的潜力及价值。方法从大肠埃希菌DH5α的培养上清中经过滤、超滤、超速离心等步骤收集天然分泌的OMVs,采用密度梯度离心法纯化OMVs。将纯化后的OMVs... 详细信息

目的探讨大肠埃希菌外膜囊泡(outer membrane vesicles,OMVs)作为新型DNA疫苗递送载体的潜力及价值。方法从大肠埃希菌DH5α的培养上清中经过滤、超滤、超速离心等步骤收集天然分泌的OMVs,采用密度梯度离心法纯化OMVs。将纯化后的OMVs与哺乳动物吞噬细胞及非吞噬细胞进行体外孵育,观察不同细胞对OMVs的摄取效率。通过电击转化方式将带绿色荧光蛋白的真核表达质粒pIRES2-EGFP转入OMVs中,并与RAW264. 7细胞共孵育,观察OMVs携带真核表达质粒进入细胞并表达绿色荧光蛋白的情况。结果密度梯度离心法可有效纯化OMVs,纯化后的OMVs进入不同哺乳动物细胞的效率不同,进入吞噬细胞的效率高于非吞噬细胞,经电击转化后,质粒DNA可被导入OMVs中,并随吞噬细胞摄取及表达。结论约5 300 bp的真核表达质粒可用电击方式导入OMVs中,并通过OMVs介导该质粒在吞噬细胞中表达,提示OMVs具有作为新型质粒DNA递送载体的潜力。

关键词：细菌外膜囊泡质粒递送系统 DNA疫苗

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柯萨奇病毒A组6型TaqMan一步法实时荧光定量PCR方法的建立

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国际检验医学杂志 2020年第11期41卷 1314-1317页

作者：刘红波丛山日许丹菡黄小琴孙浩杨昭庆马绍辉中国医学科学院&北京协和医学院医学生物学研究所云南昆明650118 云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的建立一种灵敏、特异的一步法实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR),用于快速、准确地检测柯萨奇病毒A组6型(CV-A6)。方法利用MEGA7.0软件比对GenBank数据库中15条CV-A6 VP1序列,选择高保守区域设计特异性引物和探针;以体外转录获得的... 详细信息

目的建立一种灵敏、特异的一步法实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR),用于快速、准确地检测柯萨奇病毒A组6型(CV-A6)。方法利用MEGA7.0软件比对GenBank数据库中15条CV-A6 VP1序列,选择高保守区域设计特异性引物和探针;以体外转录获得的RNA为标准品,绘制标准曲线,建立检测CV-A6病毒的RT-qPCR方法;对该方法的灵敏度、特异度、重复性进行评估;并利用该方法对CV-A6病毒感染后的乳鼠组织进行病毒载量的检测。结果该方法在102~1011 copy/μL模板范围内出现良好的扩增曲线,检测极限约为102 copy/μL,标准曲线中R2系数为0.999,扩增效率为109.6%;且该方法对肠道病毒71型(EV-A71)、柯萨奇病毒A组16型(CV-A16)和柯萨奇病毒A组10型(CV-A10)均无交叉反应;另外,该方法在组间重复试验中,变异系数(CV)值小于2.0%。结论本实验建立的方法具有较强的灵敏度、特异度和重复性,可用于CV-A6病毒的日常检测、实验室诊断和定量分析。

关键词：柯萨奇病毒A组6型 TaqMan探针荧光定量聚合酶链反应

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人类单纯疱疹病毒流行情况分析

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中华微生物学和免疫学杂志 2019年第12期39卷 937-950页

作者：冯敏高杨杨亚丽李琦涵中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118 云南省第二人民医院病理科昆明650021

单纯疱疹病毒1型(herpes simplex virus type 1,HSV-1)通常引起口唇疱疹,但近年来其引发的生殖道疱疹亦越来越多,且与阿尔茨海默病的发生密切相关。HSV-1和HSV-2已经成为全球感染率最高的性传播疾病之一,并显著增加罹患艾滋病及其他生... 详细信息

单纯疱疹病毒1型(herpes simplex virus type 1,HSV-1)通常引起口唇疱疹,但近年来其引发的生殖道疱疹亦越来越多,且与阿尔茨海默病的发生密切相关。HSV-1和HSV-2已经成为全球感染率最高的性传播疾病之一,并显著增加罹患艾滋病及其他生殖道疾病的风险,这些新的流行病学资料改变了过去对HSV的忽视,促使各个国家迫切开始重视针对HSV感染情况的数据收集和开发新的疫苗设计策略。基于全球对HSV感染的新认识和举措,本文将从不同角度分别对世界和国内HSV流行情况作一综述,以期了解HSV近年的感染趋势和传播特点。

关键词：单纯疱疹病毒诊断和检测方法流行病学分析

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轮状病毒动物感染模型研究进展

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预防医学情报杂志 2020年第4期36卷 441-445,450页

作者：汪艺周艳杜静纳璐李鸿钧昆明医科大学昆明650500 中国医学科学院、北京协和医学院医学生物学研究所、云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

建立动物模型对于疾病致病机理、疫苗研制、药物筛选都具有重要意义。疾病动物模型的建立不仅与病原体的特性有关,还涉及到动物的种类。至今,用于轮状病毒感染的动物模型尚且不多,具有敏感性又适用于大多数毒株的,能完全模拟人的致病过... 详细信息

建立动物模型对于疾病致病机理、疫苗研制、药物筛选都具有重要意义。疾病动物模型的建立不仅与病原体的特性有关,还涉及到动物的种类。至今,用于轮状病毒感染的动物模型尚且不多,具有敏感性又适用于大多数毒株的,能完全模拟人的致病过程的实验动物还不确定,给轮状病毒疫苗及治疗药物的研发带来了很大的不便。为推进寻求理想的轮状病毒实验动物模型,查阅近几年国内外关于轮状病毒感染动物模型种类、利用轮状病毒感染动物模型进行的相关实验研究进展以及相关的文献报道,并对其进行了总结分析,为将来可能的优化、选择轮状病毒感染动物模型提供理论参考依据。

关键词：轮状病毒实验动物感染模型药物筛选疫苗研发

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