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第十五届中国实验动物学会科学年会

作者：禹文海李艳艳赵远马进鲁帅尧杨凤梅王俊斌陈丽雄徐鸿界刘权和占龙中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

目的对一例腹泻恒河猴进行肠道病原菌的分离鉴定，为腹泻恒河猴疾病检测、鉴别诊断和治疗提供参考依据。方法肛拭子采集粪便进行GN 增菌，经SS 琼脂培养后挑选可疑菌落接三塘铁琼脂培养，用ID32 E 细菌鉴定系统进行分离菌株鉴定，并进... 详细信息

目的对一例腹泻恒河猴进行肠道病原菌的分离鉴定，为腹泻恒河猴疾病检测、鉴别诊断和治疗提供参考依据。方法肛拭子采集粪便进行GN 增菌，经SS 琼脂培养后挑选可疑菌落接三塘铁琼脂培养，用ID32 E 细菌鉴定系统进行分离菌株鉴定，并进行16 种抗生素药敏试验和小白鼠致病性试验。结果分离到的2 株病原菌为布氏柠檬酸杆菌和克氏耶尔森菌，药敏试验表明该2 株病原菌对磺胺甲基异恶唑、林可霉素、甲硝哒唑和土霉素耐药，氨苄西林为中度敏感，阿米卡星、头孢曲松、磷霉素、头孢唑林、庆大霉素和头孢哌酮为高度敏感。致病性试验证明布氏柠檬酸杆菌菌株对小白鼠有强致病性，而克氏耶尔森菌对小白鼠致病性不强。结论恒河猴携带布氏柠檬酸杆菌和克氏耶尔森菌，布氏柠檬酸杆菌具有较强的致病性，今后在恒河猴饲养繁育过程中应引起重视。头孢、阿米卡星、庆大霉素和磷霉素等药物可作为治疗恒河猴该类疾病的临床用药。

关键词：恒河猴布氏柠檬酸杆菌克氏耶尔森菌分离鉴定耐药性分析

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基于线粒体D-loop基因全序列分析贵州、四川、广西恒河猴群体遗传多样性

基于线粒体D-loop基因全序列分析贵州、四川、广西恒河猴群体遗传...

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第十五届中国实验动物学会科学年会

作者：禹文海马进赵远鲁帅尧杨凤梅李艳艳王俊斌陈丽雄徐鸿界刘权和占龙中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

目的从分子水平探讨贵州、四川、广西恒河猴群体遗传多样性,为今后开展恒河猴遗传资源的保护及合理开发利用提供借鉴和背景资料。方法采用PCR 直接测序法测定贵州、四川、广西恒河猴38 份样品的线粒体D-loop 基因全序列,用MEGA 和DNA... 详细信息

目的从分子水平探讨贵州、四川、广西恒河猴群体遗传多样性,为今后开展恒河猴遗传资源的保护及合理开发利用提供借鉴和背景资料。方法采用PCR 直接测序法测定贵州、四川、广西恒河猴38 份样品的线粒体D-loop 基因全序列,用MEGA 和DNASP 软件对变异位点数、简约信息位点数、单倍型、单倍型多样度、核苷酸多样度等遗传信息进行分析,基于邻接法(Neighbor-joining,NJ)构建系统发生树。结果 38 份样品定义了31种单倍型,共发现136 个变异位点,其中单一多态位点20 个,简约信息位点113 个,缺失/插入3 个。结论不同地区恒河猴群体均存在着较丰富的遗传多态性。

关键词：恒河猴线粒体DNA 单倍型遗传多态性

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恒河猴肺中阴沟肠杆菌的分离鉴定及药物敏感性分析

恒河猴肺中阴沟肠杆菌的分离鉴定及药物敏感性分析

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第十五届中国实验动物学会科学年会

作者：李艳艳禹文海杨凤梅刘权陈丽雄王俊斌马进徐鸿界杨亚平赵远和占龙中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

目的对肺炎死亡的恒河猴肺脏采样进行病原菌分离、培养、鉴定及药敏试验,确诊引发肺炎的病原菌及药物敏感性,指导疾病诊疗、预防和临床用药.方法解剖柜条件下解剖死亡猴,分别采集肉眼病变明显和正常肺组织,用灭菌接种环在肺切面部位采... 详细信息

目的对肺炎死亡的恒河猴肺脏采样进行病原菌分离、培养、鉴定及药敏试验,确诊引发肺炎的病原菌及药物敏感性,指导疾病诊疗、预防和临床用药.方法解剖柜条件下解剖死亡猴,分别采集肉眼病变明显和正常肺组织,用灭菌接种环在肺切面部位采样,接种在SS琼脂培养基进行培养,培养时间24 h 观察细菌生长情况,进行生化鉴定和8 种药敏试验.结果菌落呈白色或乳白色、圆形、湿润、不透明,进一步分离培养,经梅里埃微生物生化鉴定,确定该细菌为阴沟肠杆菌,ID：99.9％,T：0.71,ID 编码3 5 0 7 4 7 5 3 3 1 1;药敏试验表明该菌对氨苄西林,头孢呋辛中等敏感;对诺氟沙星、阿米卡星、庆大霉素、头孢曲松、头孢哌酮,头孢噻肟敏感.结论引起该恒河猴肺炎的病原菌为阴沟肠杆菌,头孢哌酮,头孢噻肟等药物可作为治疗临床用药.

关键词：阴沟肠杆菌恒河猴分离鉴定药敏试验

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恶性疟原虫动物模型及基因编辑研究进展

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实验动物与比较医学 2019年第1期39卷 65-71页

作者：匡德宣王文广孙晓梅代解杰中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所树鼩种质资源中心云南省重大传染病疫苗研发重点实验室中国医学科学院医学生物学研究所实验树鼩标准化与应用研究省创新团队

恶性疟原虫是人体疟疾的病原体,恶性疟原虫动物模型是研究人疟原虫感染、慢性致病机制、药物评价和人疟原虫疫苗研制的重要实验材料。迄今为至,恶性疟原虫动物模型研究主要涉及非人灵长类、免疫缺陷小鼠、转基因技术以及CRISPR/Cas9系... 详细信息

恶性疟原虫是人体疟疾的病原体,恶性疟原虫动物模型是研究人疟原虫感染、慢性致病机制、药物评价和人疟原虫疫苗研制的重要实验材料。迄今为至,恶性疟原虫动物模型研究主要涉及非人灵长类、免疫缺陷小鼠、转基因技术以及CRISPR/Cas9系统等领域。本文对恶性疟原虫体内外感染动物模型及基因编辑研究做总结分析,为今后恶性疟原虫动物模型建立及基因编辑研究提供参考。

关键词：恶性疟原虫体外感染体内感染基因编辑

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树鼩在生物医学研究中的优势与挑战

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实验动物与比较医学 2019年第1期39卷 3-8页

作者：贾杰代解杰中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所实验树鼩标准化与应用研究省创新团队云南省重大传染病疫苗研发重点实验室

动物模型是研究人类疾病发生机制和药物筛选及有效性和安全性评价的重要手段。随着分子生物学技术的发展及对疾病分子遗传机制研究的深入,啮齿类动物与人类遗传背景、生理及代谢特征等方面的差异使得啮齿类动物很难体现人类疾病的复杂症... 详细信息

动物模型是研究人类疾病发生机制和药物筛选及有效性和安全性评价的重要手段。随着分子生物学技术的发展及对疾病分子遗传机制研究的深入,啮齿类动物与人类遗传背景、生理及代谢特征等方面的差异使得啮齿类动物很难体现人类疾病的复杂症状,在生命科学研究中的局限性日益突出。灵长类动物在进化上与人类更为接近,其生物学特性与人类非常相似,在生命科学研究中有着不可替代的作用,但目前灵长类动物遗传操作困难、研究周期长、成本高。树鼩是一种在进化上比啮齿类更为接近灵长类的小型哺乳动物,其神经功能障碍和感染性疾病等多个系统的关键因子和信号通路与人有保守和独特的特征,同时与灵长类动物比较,具有易饲养、繁殖快、研究成本低等优点,目前已越来越多地应用于生物医学研究领域。本文基于树鼩在生理代谢过程和组织解剖结构方面的特点,分析其在生物医学研究中的优势与面临的问题。

关键词：树鼩动物模型生物医学

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树鼩Mfsd2a基因的克隆分析和不同组织表达量的检测

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实验动物与比较医学 2019年第3期39卷 178-186页

作者：王文广匡德宣李娜陆彩霞罕园园仝品芬孙晓梅代解杰中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所树鼩种质资源中心云南省重大传染病疫苗研发重点实验室中国医学科学院医学生物学研究所实验树鼩标准化与应用研究省创新团队

目的对树鼩主要促进因子超家族成员2a(Mfsd2a)基因进行克隆、测序和生物信息学分析,并定量检测其组织表达量。方法从树鼩脑和脊髓中提取总RNA,RT-PCR扩增Mfsd2a基因片段,测序后利用生物信息学软件对其序列特征、系统进化、编码蛋白的结... 详细信息

目的对树鼩主要促进因子超家族成员2a(Mfsd2a)基因进行克隆、测序和生物信息学分析,并定量检测其组织表达量。方法从树鼩脑和脊髓中提取总RNA,RT-PCR扩增Mfsd2a基因片段,测序后利用生物信息学软件对其序列特征、系统进化、编码蛋白的结构和理化性质进行分析;以树鼩β-actin为内参,qPCR检测树鼩Mfsd2a基因在不同组织中的表达情况。结果克隆获得Mfsd2a基因片段全长1 796 bp,与NCBI上公布的树鼩Mfsd2a基因预测序列高度一致,比对显示其与MFS转运蛋白超家族同源。其编码区全长1 464 bp,编码488个氨基酸。预测结果显示树鼩Mfsd2a蛋白具有明显的疏水性区域,无信号肽,二级结构元件由α螺旋、β折叠、无规卷曲和延伸链组成。OCTOPUS分析发现Mfsd2a存在12个跨膜结构,修饰结构预测发现Mfsd2a蛋白存在两处N糖基化位点,亚细胞定位发现其可能主要分布于细胞膜和内质网。qPCR检测树鼩不同组织的Mfsd2a表达,结果显示各组织均有表达,在大脑、脊髓中的表达水平相对较高。结论成功克隆了树鼩Mfsd2a基因,建立了该基因表达定量检测方法,为今后利用树鼩神经系统疾病模型深入开展Mfsd2a基因功能研究提供了理论和技术支持。

关键词：树鼩主要促进因子超家族成员2a(Mfsd2a) 克隆分析表达

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柯萨奇病毒A组16型cDNA感染性克隆的构建

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中国生物制品学杂志 2018年第1期31卷 14-17,23页

作者：李嘉祺李洪哲郑惠文宁若彤范海涛杨泽宁胡雅洁刘龙丁中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的构建柯萨奇病毒A组16型(coxsackievirus A16,CA16)c DNA感染性克隆。方法提取CA16基因组RNA,经RT-PCR得到基因组全长c DNA,插入至TOPO-XL-PCR载体,获得CA16全长c DNA克隆。采用T7聚合酶系统将线性基因组c DNA体外转录出病毒基因组R... 详细信息

目的构建柯萨奇病毒A组16型(coxsackievirus A16,CA16)c DNA感染性克隆。方法提取CA16基因组RNA,经RT-PCR得到基因组全长c DNA,插入至TOPO-XL-PCR载体,获得CA16全长c DNA克隆。采用T7聚合酶系统将线性基因组c DNA体外转录出病毒基因组RNA,纯化后转染Vero细胞,获得拯救病毒。通过RT-PCR、基因测序及免疫荧光法对拯救病毒进行鉴定,并对拯救病毒与母本病毒的增殖特性进行比较。结果病毒基因组RNA转染Vero细胞后48 h,可见典型的肠道病毒致细胞病变。拯救病毒经RT-PCR、基因测序和免疫荧光鉴定为CA16,且与母本野生型病毒增殖特性基本一致。结论成功构建了具有感染性的CA16全长c DNA克隆,为研究CA16基因功能和研发CA16新型疫苗奠定了基础。

关键词：柯萨奇病毒A组16型感染性克隆病毒拯救

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1型单纯疱疹病毒疫苗的研究进展

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中国生物制品学杂志 2018年第4期31卷 445-448页

作者：徐兴丽李琦涵中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

1型单纯疱疹病毒(herpes simplex virus type 1,HSV-1)感染可导致口唇疱疹、生殖器疱疹、脑炎等症状,并可长期潜伏于神经系统。目前尚无干预手段能有效预防疱疹病毒原发感染以及控制疱疹病毒潜伏感染和复发性感染。疫苗依然被认为是控... 详细信息

1型单纯疱疹病毒(herpes simplex virus type 1,HSV-1)感染可导致口唇疱疹、生殖器疱疹、脑炎等症状,并可长期潜伏于神经系统。目前尚无干预手段能有效预防疱疹病毒原发感染以及控制疱疹病毒潜伏感染和复发性感染。疫苗依然被认为是控制病毒感染的理想方式。本文就HSV-1疫苗的研究进展作一综述。

关键词： 1型单纯疱疹病毒疫苗

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肠道病毒71型鼠源性中和单克隆抗体的制备

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中国生物制品学杂志 2018年第3期31卷 257-261页

作者：朱文兵严丽蔚巩蔚张雪梅吴忠香徐婧雯宋杰董少忠中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的制备肠道病毒71型(enterovirus A 71,EV71)鼠源性中和单克隆抗体。方法以灭活EV71病毒液为免疫原免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术获得抗EV71单克隆抗体;ELISA法检测抗体的特征,获得具有高效结合性的单克隆抗体;SDS-PAGE和Western blo... 详细信息

目的制备肠道病毒71型(enterovirus A 71,EV71)鼠源性中和单克隆抗体。方法以灭活EV71病毒液为免疫原免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术获得抗EV71单克隆抗体;ELISA法检测抗体的特征,获得具有高效结合性的单克隆抗体;SDS-PAGE和Western blot法鉴定Protein A纯化的抗体;通过体外和体内中和试验鉴定抗体的中和特性。结果得到3株针对EV71 VP1的高效结合性单克隆抗体15H7、15G7和6G2,且15H7经中和试验证明具有较强的中和活性。结论成功制备了EV71鼠源性中和单克隆抗体,其在小鼠体内能成功地抑制病毒增殖。

关键词：肠道病毒71型单克隆抗体中和作用

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Ⅱ型登革病毒前膜抗体对该病毒在THP-1细胞中复制能力的影响

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中国生物制品学杂志 2018年第2期31卷 125-128页

作者：姜黎明杨佳佳罗佳叶超文送娇孙强明中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的探讨Ⅱ型登革病毒(dengue virusⅡ,DENVⅡ)前膜(presynaptic membrane,prM)抗体对DENVⅡ在THP-1细胞中复制能力的影响。方法采用不同稀释度(1/4~1/16 384)的DENVⅡanti-pr M单克隆抗体分别与不同MOI的DENVⅡ(MOI分别为3、0.75及0.19)复合感染THP-1细胞。建立DENVⅡ荧光定量PCR检测标准曲线,检测THP-1细胞培养上清液的病毒拷贝数。结果 DENVⅡ按MOI=3感染THP-1细胞,当prM稀释度为1/16和1/16 384时诱发THP-1细胞产生病毒的载量较高,prM稀释度为1/64和1/256时抑制病毒生长;DENVⅡ按MOI=0.75感染THP-1细胞,当prM稀释度1/16时可诱发更高浓度病毒载量;DENVⅡ按MOI=0.19感染THP-1细胞时,不会诱导产生高浓度的病毒载量。结论中浓度pr M抗体可抑制DENVⅡ在THP-1细胞中的复制能力,而高及低浓度prM抗体可促进DENVⅡ在THP-1细胞中的复制能力。

关键词： Ⅱ型登革病毒前膜抗体 THP-1细胞复制能力

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