检索结果-内蒙古大学图书馆

中国生物制品学杂志 2018年第3期31卷 282-286页

作者：张也李华杨婷岳磊谢天宏龙润乡罗芳宇杨蓉何鑫谢忠平中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗工程技术研究中心云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的筛选氯仿抽提纯化柯萨奇病毒A组16型(Coxsakievirus A 16,CA16)的最优条件。方法根据《中国药典》三部(2015版)的相关要求,选择病毒感染性滴度、残余蛋白、残余牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)、残余卡那霉素及残余氯仿含... 详细信息

目的筛选氯仿抽提纯化柯萨奇病毒A组16型(Coxsakievirus A 16,CA16)的最优条件。方法根据《中国药典》三部(2015版)的相关要求,选择病毒感染性滴度、残余蛋白、残余牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)、残余卡那霉素及残余氯仿含量等指标,分析氯仿抽提的不同条件及超滤浓缩对纯化产物质量指标的影响。将CA16浓缩病毒液与氯仿按不同体积比进行一抽多洗纯化,分析不同比例氯仿对纯化效果的影响;将CA16超滤浓缩病毒液分别用不同浓度的PBS洗涤,以评价不同离子浓度的PBS洗涤对纯化病毒纯化液质量指标的影响。结果不同浓度的PBS洗涤液、病毒液与氯仿体积比对纯化液病毒感染性滴度均无明显影响,病毒回收率平均为81.7%;随着PBS洗涤次数的增多,洗液中的杂蛋白逐渐减少,氯仿比例及PBS离子浓度对蛋白去除率影响不明显,蛋白去除率均大于82%(82.69%~93.6%),平均去除率88.37%;不同氯仿比例、不同PBS浓度及不同洗涤次数对残余卡那霉素含量无明显影响,结果均低于30 ng/mL,经超滤浓缩后,其含量低于3.0 ng/mL;氯仿抽提纯化残余BSA的去除率可达68.87%,若结合超滤浓缩工艺,残余BSA的去除率可达94.74%;超滤浓缩后纯化病毒液残余氯仿去除率可达98%以上,最终纯化液残余氯仿含量小于6μg/mL。结论氯仿抽提方法结合超滤浓缩可得到符合要求的CA16病毒实验性疫苗。

关键词：柯萨奇病毒A组16型氯仿抽提疫苗质量控制

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甲型肝炎病毒疫苗株H2株的连续传代及其基因稳定性

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中华实验和临床病毒学杂志 2018年第1期32卷 80-84页

作者：王东宝曹晗郑勇史小军马忠飞段颖融邓燕孙明波北京协和医学院中国医学科学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

目的分析甲型肝炎减毒活疫苗H2株（hepatitis A virus H2 live attenuated vaccine strain）毒种H2M20K7（K7）经连续传代后病毒基因的遗传稳定性.方法将H2株毒种K7用细胞工厂在人二倍体细胞KMB17中进行连续传代后,收获不同代次的病毒... 详细信息

目的分析甲型肝炎减毒活疫苗H2株（hepatitis A virus H2 live attenuated vaccine strain）毒种H2M20K7（K7）经连续传代后病毒基因的遗传稳定性.方法将H2株毒种K7用细胞工厂在人二倍体细胞KMB17中进行连续传代后,收获不同代次的病毒,提取病毒RNA,用二代高通量深度测序方法,测定不同代次病毒（K7,K10,Kll,K13,K15,K18）的全基因序列,对比分析病毒的基因变异率,同时对病毒的感染性滴度进行检测和对比.结果 H2M20K7主代毒种经连续传代后,不同代次病毒的全基因序列总体变异率较低,非同义突变率小于0.58％,基因结构稳定;在5＇NCR非编码区域的基因突变率＜0.1％;在VP1/2 A、2C毒力位点区域突变率小于0.01％;不同代次病毒的感染性滴度维持在7.76～ 8.50 lgCCID50/ml之间,P值为0.981差异无统计学意义.结论 H2M20K7主代毒种、工作毒种、疫苗批病毒及经过连续传代后的各代次病毒基因结构稳定;在5＇NCR非编码区未发生明显突变,毒力相关位点VP1/2 A、2B、2C等关键位点的基因均为减毒特征,变异率极低,未引起病毒毒力特征改变.病毒感染性稳定且符合要求,具有较好的遗传稳定性.

关键词：甲肝病毒H2株基因稳定性二代高通量全基因测序核苷酸序列

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树鼩肺成纤维细胞的分离、鉴定和传代培养

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实验动物与比较医学 2019年第2期39卷 105-110页

作者：王文广匡德宣陆彩霞罕园园李娜仝品芬孙晓梅代解杰中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所树鼩种质资源中心云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南省眼科疾病防治研究重点实验室中国医学科学院医学生物学研究所实验树鼩标准化与应用研究省创新团队昆明650118

目的建立适用于树鼩肺成纤维细胞的分离、鉴定和传代培养方法。方法分别采用组织块贴壁培养法和胰酶消化法,分离培养新生树鼩肺成纤维细胞,通过倒置显微镜观察细胞生长情况,用波形蛋白(Vimentin)对分离的成纤维细胞进行免疫荧光鉴定;传... 详细信息

目的建立适用于树鼩肺成纤维细胞的分离、鉴定和传代培养方法。方法分别采用组织块贴壁培养法和胰酶消化法,分离培养新生树鼩肺成纤维细胞,通过倒置显微镜观察细胞生长情况,用波形蛋白(Vimentin)对分离的成纤维细胞进行免疫荧光鉴定;传代培养并开展冻存复苏实验,采用MTS法绘制细胞生长曲线,以人胚肺二倍体成纤维细胞(KMB-17)作对照。结果通过组织块贴壁培养法和胰酶消化法均可获取树鼩肺成纤维细胞,细胞主要呈现梭形,波形蛋白免疫荧光鉴定普遍呈阳性,与KMB-17一致。树鼩肺成纤维细胞可连续传代4～5次,经冻存复苏后细胞仍能保持活力,以5×10~4细胞/mL的密度传代,细胞可在3 d左右进入对数生长期。结论组织块贴壁培养法和胰酶消化法均可有效获取树鼩的肺成纤维细胞,可为肺部相关疾病的体外研究提供实验材料。

关键词：树鼩肺成纤维细胞鉴定传代培养

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人用疫苗及生产用细胞中猪圆环病毒PCR检测方法的建立及验证

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中国生物制品学杂志 2018年第5期31卷 543-546,551页

作者：钱兴丽任芳芳宋彩花段男李娅娴陈巍赵勇袁梅李亚东俞建昆杨晓蕾洪超中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所质量检定室云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的建立人用疫苗及生产用细胞中猪圆环病毒1型(porcine circovirus 1,PCV1)和2型(PCV2)PCR检测方法,并进行验证。方法参照Gen Bank中登录的PCV1(KC447455)和PCV2(AY578327)序列,全基因组合成PCV1和PCV2基因序列,以合成的PCV1和PCV2全基因组序列DNA为模板,进行PCR扩增,对PCR反应中的退火温度进行优化。对优化后的PCR方法进行灵敏度和特异性验证,并用该方法检测疫苗生产用细胞KMB_(17)、Vero工作种子批、脊髓灰质炎减毒活疫苗(oral poliomyelitis vaccine,OPV)收获液、冻干甲型肝炎减毒活疫苗(freeze-dried hepatitis A vaccine,f HAV)成品、肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)灭活疫苗收获液及成品、Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(inactivated poliomyelitis vaccine prepared with Sabin strain,SIPV)收获液及成品的PCV1和PCV2。结果优化后的退火温度为63℃,建立的PCR方法最低可检测出10^(-1)fg/μL的目的基因,仅对PCV基因组DNA能扩增出特异性条带。用该方法检测生产用细胞KMB_(17)及Vero工作种子批、OPV收获液、f HAV成品、EV71灭活疫苗收获液及成品、SIPV收获液及成品,均未检出PCV1和PCV2。结论成功建立了生产用细胞种子、疫苗收获液及成品中PCV的PCR检测方法,该方法具有较高的灵敏度和较强的特异性,能够用于本所生物制品生产用细胞种子、疫苗收获液及成品中PCV污染的检测,从而提高生物制品的安全性。

关键词：疫苗细胞猪圆环病毒聚合酶链式反应

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MPTP诱导树鼩帕金森疾病模型行为学检测方法研究

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实验动物与比较医学 2019年第1期39卷 9-14页

作者：张志成宋庆凯黎晓慧李娜黄鑫袁圆王璇李明学代解杰昆明医科大学昆明650500 中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所树鼩种质资源中心云南省重大传染病疫苗研发重点实验室中国医学科学院医学生物学研究所实验树鼩标准化与应用研究省创新团队昆明650118

目的建立树鼩急性帕金森疾病(PD)模型,对Catwalk、FPA检测系统作为评价PD行为学的方法进行研究。方法选取14只成年、健康的普通级滇缅树鼩,随机分为模型组(n=10)和对照组(n=4),1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)药物腹腔注射建立急... 详细信息

目的建立树鼩急性帕金森疾病(PD)模型,对Catwalk、FPA检测系统作为评价PD行为学的方法进行研究。方法选取14只成年、健康的普通级滇缅树鼩,随机分为模型组(n=10)和对照组(n=4),1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)药物腹腔注射建立急性PD模型,对照组注射等体积0.9%氯化钠溶液。结果成功建立树鼩急性PD模型。建模1d后,与对照组树鼩相比,模型组树鼩空间利用指数下降、低运动性出现次数(BLM)指数显著升高(P均<0.001),表明模型组空间利用能力受损、活动度下降;模型组右前爪(RF)、左前爪(LF)最大接触面积减少,RF、LF和右后爪(RH)爪印最大接触面积平均压力,以及RF、RH、LF爪印平均压力及四肢平均力量均下降(P均<0.05),反映了树副肌肉僵硬度升高,可以作为PD步态分析的定量指标;0~15 Hz(TI1)震颤显著增强(P<0.01),能较好模拟PD患者静止性震颤的临床表现。结论MPTP致树鼩急性PD模型能较好模拟PD早期的临床表现。Catwalk、FDA检测系统可提供系统、客观、可靠的PD行为学数据。

关键词：帕金森疾病树鼩 1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP) 动物模型行为学 Catwalk步态分析系统 FPA分析系统

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肠道病毒71型灭活疫苗灭活验证超速离心条件的优化

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中国生物制品学杂志 2018年第2期31卷 192-194,199页

作者：赵恒袁梅严皎王云飞杨佳蒋国润史磊冯凯杨晓蕾洪超中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所质量检定室云南昆明650118 云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的优化肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)灭活疫苗灭活验证超速离心条件,为EV71灭活疫苗灭活验证样品的处理提供实验依据。方法在不同转速(45 000、40 000、35 000、30 000、25 000 r/min)和时间(120、90、60、30 min)条件下对EV71... 详细信息

目的优化肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)灭活疫苗灭活验证超速离心条件,为EV71灭活疫苗灭活验证样品的处理提供实验依据。方法在不同转速(45 000、40 000、35 000、30 000、25 000 r/min)和时间(120、90、60、30 min)条件下对EV71收获液进行超速离心,检测离心前和离心后病毒液的滴度,计算回收率,比较不同条件下离心前后病毒回收效果。结果在转速相同或离心时间相同的条件下,EV71的沉淀效果与离心时间或离心转速呈正相关(R^2从0.77和0.88分别增大到0.99),其中,当离心转速超过40 000 r/min时,不同离心时间下病毒的回收率均在90%以上,当离心时间为120 min,离心转速为45 000 r/min时,病毒的沉淀效果最好,回收率最高,达98%。综合离心时间因素,选择离心条件为45 000 r/min-60 min较适宜(回收率为97%),与45 000 r/min-120 min相比,差异无统计学意义(P>0.05);如将时间减为45 000 r/min-30 min,与其他3组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 EV71的沉淀效果与离心转速和离心时间呈正相关,即随着离心转速增大和离心时间的延长,病毒的沉淀效果越好、回收率越高。

关键词：肠道病毒71型超速离心回收率

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CA16感染树鼩肺成纤维细胞模型的建立及其受体SCARB2的表达

CA16感染树鼩肺成纤维细胞模型的建立及其受体SCARB2的表达

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第十五届中国实验动物科学年会

作者：王文广匡德宣李娜陆彩霞罕园园仝品芬孙晓梅代解杰中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所树鼩种质资源中心云南省重大传染病疫苗研发重点实验室中国医学科学院医学生物学研究所实验树鼩标准化与应用研究省创新团队

目的探讨建立CA16感染树鼩肺成纤维细胞(tree shrew lung fibroblasts,TSLF)实验模型的可行性。方法用肠道病毒CA16感染TSLF,以人肺成纤维细胞(KMB-17)作对照,镜下观察细胞病变情况,间接免疫荧光实验观察病毒蛋白和感染相关受体SCARB2... 详细信息

目的探讨建立CA16感染树鼩肺成纤维细胞(tree shrew lung fibroblasts,TSLF)实验模型的可行性。方法用肠道病毒CA16感染TSLF,以人肺成纤维细胞(KMB-17)作对照,镜下观察细胞病变情况,间接免疫荧光实验观察病毒蛋白和感染相关受体SCARB2蛋白的表达情况,探针法实时荧光定量PCR检测病毒载量,以β-Actin作内参染料法实时荧光定量PCR检测受体SCARB2基因的相对表达量,结合基因序列比对,分析其与感染的相关性。结果 CA16感染TSLF,可引起明显的细胞病变,免疫荧光实验可见病毒和受体SCARB2蛋白,以100TCID50/105 cells的比例感染TSLF可在48 h左右病毒载量达到最高,SCARB2基因有与感染相关的高表达,而其基因序列也与人有较高同源性。结论 CA16可感染TSLF,树鼩SCARB2可参与感染。

关键词： CA16 树鼩肺成纤维细胞感染 SCARB2

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树鼩在生物医学研究中的优势与挑战

树鼩在生物医学研究中的优势与挑战

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第十五届中国实验动物科学年会

作者：贾杰代解杰中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所实验树鼩标准化与应用研究省创新团队云南省重大传染病疫苗研发重点实验室

动物模型是研究人类疾病发生机制和药物筛选及有效性和安全性评价的重要手段。随着分子生物学技术的发展及对疾病分子遗传机制研究的深入,啮齿类动物与人类遗传背景、生理及代谢特征等方面的差异使得其很难体现人类疾病的复杂症状,在生... 详细信息

动物模型是研究人类疾病发生机制和药物筛选及有效性和安全性评价的重要手段。随着分子生物学技术的发展及对疾病分子遗传机制研究的深入,啮齿类动物与人类遗传背景、生理及代谢特征等方面的差异使得其很难体现人类疾病的复杂症状,在生命科学研究中的局限性日益突出。灵长类动物在进化上与人类更为接近,其生物学特性与人类非常相似,在生命科学研究中有着不可替代的作用,但目前灵长类动物遗传操作困难、研究周期长、成本高。树鼩是一种在进化上比啮齿类更为接近灵长类的小型哺乳动物,其神经功能障碍和感染性疾病等多个系统的关键因子和信号通路与人有保守和独特的特征,同时与灵长类动物比较,具有易饲养、繁殖快、研究成本低等优点,目前已越来越多地应用于生物医学研究领域。本文基于树鼩在生理代谢过程和组织解剖结构方面特点,分析其在生物医学研究中的优势与面临的问题。

关键词：树鼩动物模型生物医学

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树鼩在生物医学研究中的优势与挑战

树鼩在生物医学研究中的优势与挑战

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第十五届中国实验动物学会科学年会

作者：贾杰代解杰中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所实验树鼩标准化与应用研究省创新团队云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

动物模型是研究人类疾病发生机制和药物筛选及有效性和安全性评价的重要手段。随着分子生物学技术的发展及对疾病分子遗传机制研究的深入，啮齿类动物与人类遗传背景、生理及代谢特征等方面的差异使得其很难体现人类疾病的复杂症状，在... 详细信息

动物模型是研究人类疾病发生机制和药物筛选及有效性和安全性评价的重要手段。随着分子生物学技术的发展及对疾病分子遗传机制研究的深入，啮齿类动物与人类遗传背景、生理及代谢特征等方面的差异使得其很难体现人类疾病的复杂症状，在生命科学研究中的局限性日益突出。灵长类动物在进化上与人类更为接近，其生物学特性与人类非常相似，在生命科学研究中有着不可替代的作用，但目前灵长类动物遗传操作困难、研究周期长、成本高。树鼩是一种在进化上比啮齿类更为接近灵长类的小型哺乳动物，其神经功能障碍和感染性疾病等多个系统的关键因子和信号通路与人有保守和独特的特征，同时与灵长类动物比较，具有易饲养、繁殖快、研究成本低等优点，目前已越来越多地应用于生物医学研究领域。本文基于树鼩在生理代谢过程和组织解剖结构方面特点，分析其在生物医学研究中的优势与面临的问题。

关键词：树鼩动物模型生物医学

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甲型肝炎疫苗免疫效果影响因素的分析

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中国生物制品学杂志 2018年第11期31卷 1283-1285,1289页

作者：罗佳孙强明昆明医科大学云南昆明650500 中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

甲型肝炎疫苗以其卓越的免疫原性、安全性及免疫持久性,被公认为预防甲型肝炎流行的重要措施。绝大多数人接种甲型肝炎疫苗后均能产生很好的保护效果,但不同人群的反应并不均一,呈多样性。出现上述情况的原因复杂,影响因素众多。掌握有... 详细信息

甲型肝炎疫苗以其卓越的免疫原性、安全性及免疫持久性,被公认为预防甲型肝炎流行的重要措施。绝大多数人接种甲型肝炎疫苗后均能产生很好的保护效果,但不同人群的反应并不均一,呈多样性。出现上述情况的原因复杂,影响因素众多。掌握有关影响因素对实现接种的群体化或个体化,使不同群体获得成功免疫具有重大意义。基于此,本文从甲型肝炎疫苗类型、佐剂、免疫接种对象个体差异、疾病因素、免疫策略等方面,对甲型肝炎疫苗免疫效果的影响因素作一综述。

关键词：甲型肝炎疫苗免疫效果佐剂影响因素

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