检索结果-内蒙古大学图书馆

中国生物制品学杂志 2025年第1期38卷 89-95页

作者：赵永美孟明耀李金美宋泽鑫周艳杨武李鸿钧中国医学科学院、北京协和医学院医学生物学研究所、云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118 昆明医科大学云南昆明650500 昆明医科大学附属延安医院云南省肿瘤免疫防治重点实验室云南昆明650051

目的比较4种人脐带间充质干细胞来源外泌体(exosomes derived from human umbilical cord mesenchymal stem cells,HUCMSCs-Exos)的提取方法,以期获得简便、高效、经济的外泌体提取方法。方法传代培养人脐带间充质干细胞(human umbilica... 详细信息

目的比较4种人脐带间充质干细胞来源外泌体(exosomes derived from human umbilical cord mesenchymal stem cells,HUCMSCs-Exos)的提取方法,以期获得简便、高效、经济的外泌体提取方法。方法传代培养人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,HUC-MSCs),镜下观察细胞形态,并检测细胞增殖能力、特异性表面抗原表达水平及多向分化潜能。分别采用超速离心法、聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)沉淀法、蔗糖沉淀法和Total Exosome Isolation试剂盒法(简称试剂盒法)4种方法提取HUC-MSCs培养上清液中的hucMSCs-Exos,透射电子显微镜观察外泌体形态,纳米颗粒跟踪分析(nanoparticle tracking analysis,NTA)技术检测外泌体浓度及颗粒大小,BCA法检测外泌体总蛋白浓度,Western blot法检测外泌体特异性标志蛋白水平。结果传代培养的HUC-MSCs于镜下观察呈长梭形,漩涡贴壁生长,且细胞增殖速度较快;高表达MSCs特异性表面抗原CD73和CD90,极低表达造血干细胞表面标记物CD34和CD45;具有向脂肪及成骨分化的潜能。4种方法均可提取获得HUCMSCs-Exos,除试剂盒法外,其他3种方法提取的外泌体均呈茶托样双层膜结构且边界清晰;试剂盒法提取外泌体的总蛋白浓度及颗粒浓度均明显高于其他3种方法(F=35.18,P均<0.01);4种方法提取的外泌体均能表达特异性标志物CD63和CD81,除蔗糖沉淀法提取外泌体不表达CD9外,其他方法提取的外泌体均表达CD9。结论4种方法均能提取获得外泌体,其中超速离心法提取外泌体质量稳定;试剂盒法提取外泌体的产量较高,且更省时、更便捷;PEG沉淀法及蔗糖沉淀法提取外泌体的纯度更高。可根据不同的生产需求,选择合适的外泌体分离技术。

关键词：外泌体提取人脐带间充质干细胞

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多聚胞嘧啶结合蛋白PCBP1在轮状病毒复制中的作用研究

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中国病毒病杂志 2022年第1期12卷 15-20页

作者：纳璐唐娅娅周艳鲁辰星刘军营肖琳李鸿钧中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650018

目的初步研究多聚胞嘧啶结合蛋白[poly (C)-binding protein, PCBP]1在轮状病毒复制过程中的作用和调控机制。方法构建携带有PCBP1基因的真核表达质粒pcDNA3.1-PCBP1,合成针对PCBP1的siRNA。通过转染pcDNA3.1-PCBP1和筛选出能够下调PCBP... 详细信息

目的初步研究多聚胞嘧啶结合蛋白[poly (C)-binding protein, PCBP]1在轮状病毒复制过程中的作用和调控机制。方法构建携带有PCBP1基因的真核表达质粒pcDNA3.1-PCBP1,合成针对PCBP1的siRNA。通过转染pcDNA3.1-PCBP1和筛选出能够下调PCBP1基因的siRNA后,在MA104细胞中分别上调和下调PCBP1的表达,通过免疫荧光分析PCBP1对轮状病毒复制的作用。结果成功构建pcDNA3.1-PCBP真核表达质粒并且能在MA104细胞中过表达,通过免疫荧光发现上调PCBP1的表达水平后能够促进轮状病毒蛋白的表达,下调PCBP1后,病毒的复制减弱。结论初步证明PCBP1可促进轮状病毒复制,其具体的作用机制还有待进一步研究。

关键词：多聚胞嘧啶结合蛋白(PCBP1) 轮状病毒真核表达质粒 siRNA 病毒复制

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壮族人群ERAP基因多态性与脊灰疫苗序贯免疫诱导的抗体应答的相关性分析

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昆明医科大学学报 2023年第7期44卷 22-28页

作者：师雨晗李菁刘舒媛赵婷杨净思史荔梁疆莉中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所/云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118 云南农业大学农学与生物技术学院云南昆明650201

目的分析内质网氨肽酶(endoplasmic reticulum aminopeptidases,ERAP)基因多态性与脊髓灰质炎疫苗序贯免疫诱导的中和抗体应答的相关性。方法选取243名来自广西壮族自治区并完成2剂灭活脊髓灰质炎疫苗和1剂二价口服脊髓灰质炎减毒疫... 详细信息

目的分析内质网氨肽酶(endoplasmic reticulum aminopeptidases,ERAP)基因多态性与脊髓灰质炎疫苗序贯免疫诱导的中和抗体应答的相关性。方法选取243名来自广西壮族自治区并完成2剂灭活脊髓灰质炎疫苗和1剂二价口服脊髓灰质炎减毒疫苗接种的壮族受试者,检测免前和基础免疫28 d血清中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型脊髓灰质炎中和抗体水平,采用TaqMan探针基因分型法对单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)进行分型。共选择8个SNP位点,6个ERAP1基因(rs27037、rs27044、rs30187、rs26618、rs26653、rs3734016)和2个ERAP2基因(rs2549782、rs2248374),计算各SNPs的等位基因和基因型频率,分析各SNPs与各型抗体应答的相关性。结果在Ⅰ型脊髓灰质炎抗体应答中,携带rs2549782-G和rs2248374-A等位基因个体抗体几何平均滴度(geometric mean titer,GMT)低于携带rs2549782-T和rs2248374-G等位基因个体[均为(11.590±1.979) vs (11.950±1.895),P=0.031];rs2549782基因型GT和rs2248374基因型AG诱导的中和抗体低于rs2549782基因型TT和rs2248374基因型GG[均为(11.741±0.141) vs (12.378±0.157),P=0.045]。结论 ERAP2基因多态性可能影响脊髓灰质炎疫苗诱导的抗体水平。

关键词：内质网氨肽酶单核苷酸多态性脊髓灰质炎疫苗抗体几何平均滴度

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腺苷酸环化酶毒素的生物特性及其在百日咳疫苗中的潜在应用

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中国生物制品学杂志 2021年第12期34卷 1516-1519页

作者：张学(综述) 江文文(审校) 中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

腺苷酸环化酶毒素(adenylate cyclase toxin,ACT)是百日咳杆菌分泌的重要毒力因子之一,可通过削弱吞噬细胞、中性粒细胞和T细胞等免疫细胞的杀菌能力来协助百日咳杆菌逃避宿主免疫系统的攻击。虽然ACT是一种具有腺苷酸环化酶活性和溶血... 详细信息

腺苷酸环化酶毒素(adenylate cyclase toxin,ACT)是百日咳杆菌分泌的重要毒力因子之一,可通过削弱吞噬细胞、中性粒细胞和T细胞等免疫细胞的杀菌能力来协助百日咳杆菌逃避宿主免疫系统的攻击。虽然ACT是一种具有腺苷酸环化酶活性和溶血素活性的毒性蛋白,但可通过基因技术方法去除其毒力因素,成为无细胞百日咳(acel-l ular pertussis,aP)疫苗的一种潜在保护性抗原和佐剂。本文就ACT的生物特性及其在aP疫苗中的潜在应用作一综述。

关键词：腺苷酸环化酶毒素生物特性百日咳疫苗免疫原性佐剂

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单纯疱疹病毒2型衣壳支架蛋白ICP35原核表达载体的构建及其表达特性分析

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微生物与感染 2022年第1期17卷 9-17页

作者：王建斌李雪琦王丽春吴化叶程继帅牟唐维李琦涵中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

本研究旨在构建单纯疱疹病毒2型(herpes simplex virus type 2,HSV-2)衣壳支架蛋白ICP35的原核表达载体,并分析其在HSV-2增殖中的表达特性。以HSV-2基因组DNA为模板,采用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增HSV-2 ICP35的编码基因UL26.5,并克隆至原核表达载体pET-32a(+),转化大肠埃希菌BL21(DE3)进行诱导表达,将纯化的重组ICP35免疫家兔后获得抗体,采用免疫荧光检测ICP35在HSV-2增殖中的表达特性。结果显示,HSV-2 UL26.5基因的PCR产物大小约为1065 bp,原核表达重组蛋白的相对分子质量约为6.3×10^(4),免疫家兔的血清抗体可特异性识别HSV-2 ICP35。免疫荧光检测结果显示,HSV-2 ICP35可在感染后8 h出现于细胞核周围,12 h表达量进一步增加并向细胞核内聚集,16 h后在细胞核、细胞质内均可检测到聚集成斑点状的衣壳支架蛋白。结果表明,HSV-2 ICP35原核表达载体的成功构建及对其在HSV-2增殖中表达特性的分析,将为研究UL26.5基因的功能、蛋白相互作用、病毒与宿主的相互作用及筛选药物靶标等奠定基础。

关键词：单纯疱疹病毒2型衣壳支架蛋白ICP35 UL26.5 原核表达载体表达特性

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抗片形吸虫病疫苗的研究进展

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中国生物制品学杂志 2024年第4期37卷 497-504页

作者：李慈怀(综述) 陈凤孙强明(审校) 大理大学公共卫生学院云南大理671000 云南省大理白族自治州血吸虫病防治研究所云南大理671000 中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

片形吸虫病是由片形吸虫感染引起的人畜共患病,该病会引发机体的急慢性损伤,严重危害畜牧业发展,造成极大经济损失,目前用于治疗片形吸虫病的药物单一,且有耐药性产生,因此,急需更经济、可行的方式对家畜片形吸虫进行防治,以减少或避免... 详细信息

片形吸虫病是由片形吸虫感染引起的人畜共患病,该病会引发机体的急慢性损伤,严重危害畜牧业发展,造成极大经济损失,目前用于治疗片形吸虫病的药物单一,且有耐药性产生,因此,急需更经济、可行的方式对家畜片形吸虫进行防治,以减少或避免人畜患病。疫苗是一种经济、有效的预防病原体感染的手段,有可能在片形吸虫病的预防中起到重要作用。本文就片形吸虫的抗原免疫应答机制及其疫苗研发现状作一综述,以期为片形吸虫病的防治提供科学参考和理论依据。

关键词：片形吸虫病危害疫苗

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一株埃可病毒16型510/YN/CHN/2010的全基因组分析

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中国病原生物学杂志 2021年第11期16卷 1239-1243页

作者：郭伟许丹菡冯昌增张名鲁明朱海莲保国红马绍辉中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南昆明650118 云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南省第一人医院

目的分析一株埃可病毒16型(Echovirus 16,E16)云南分离株510/YN/CHN/2010全基因组序列及其遗传特性。方法设计针对E16的引物,提取病毒RNA,RT-PCR扩增病毒目的基因并测序,利用BioEdit 7.2.3、MEGA 7.0和Simplot 3.5.1软件分析其全基因组... 详细信息

目的分析一株埃可病毒16型(Echovirus 16,E16)云南分离株510/YN/CHN/2010全基因组序列及其遗传特性。方法设计针对E16的引物,提取病毒RNA,RT-PCR扩增病毒目的基因并测序,利用BioEdit 7.2.3、MEGA 7.0和Simplot 3.5.1软件分析其全基因组。结果E16510/YN/CHN/2010全基因组核苷酸序列全长7432 nt,是编码含2196个氨基酸的多聚蛋白。其全VP1和全基因组与原型株Harrington的核苷酸和氨基酸同源性分别为80.68%、49.33%和81.26%、97.26%。与其他埃可病毒原型株的全基因组核苷酸和氨基酸同源性分别为75.72%~88.44%和83.01%~87.65%。系统进化分析将E16分为3个基因型,分离株510/YN/CHN/2010和其他中国分离株均属于B基因型。重组分析显示,510/YN/CHN/2010株可能在非结构编码区的P2段重组。结论510/YN/CHN/2010分离株为E16 B基因型,可能为重组株。

关键词：埃可病毒16型全基因组测序重组分析进化分析

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2022年昆明市407例手足口病病例病原学监测分析

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中国病毒病杂志 2024年第1期14卷 71-76页

作者：李丽张倩马绍辉张磊昆明市妇幼保健院检验科云南昆明650031 昆明市儿童医院检验科云南昆明650100 中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的了解2022年云南省昆明市手足口病病例的病原构成,为手足口病的预防和控制提供科学依据。方法收集2022年6―9月昆明市儿童医院诊断为手足口病患儿的407份粪便样品,采用巢式反转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase cha... 详细信息

目的了解2022年云南省昆明市手足口病病例的病原构成,为手足口病的预防和控制提供科学依据。方法收集2022年6―9月昆明市儿童医院诊断为手足口病患儿的407份粪便样品,采用巢式反转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)方法对粪便样品进行肠道病毒核酸检测,利用通用肠道病毒引物扩增其VP1区基因并测序,采用SPSS 11.5,肠道病毒定型和Mega 6.0等软件分析数据。结果407份粪便样品中,肠道病毒阳性检出率为74.69%(304/407),有13种肠道病毒被检测到,其中,柯萨奇病毒A组6型(coxsackievirus A6,CVA6)所占比例最高,达42.43%(129/304),其次是CVA16(35.53%,108/304)、CVA5(11.84%,36/304)、CVA12(2.30%,7/304)、CVA2(1.97%,6/304)、CVA10(1.31%,4/304),CVA4、柯萨奇病毒B组5型(coxsackievirus B5,CVB5)和埃可病毒11型(echovirus 11,E11)均各占0.99%(3/304),CVB2占0.66%(2/304),CVA8、E3和肠道病毒A组71型(enterovirus A71,EV-A71)均各占0.33%(1/304)。其中CVA6和CVA16分别属于B1a和D3a基因型。结论2022年昆明市儿童医院手足口病由13种肠道病毒引起,其中CVA6和CVA16为优势病原体并属于中国流行株。

关键词：手足口病病原学肠道病毒柯萨奇病毒A组6型柯萨奇病毒A组16型系统发育

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2016年云南省埃可病毒7型分离株K1641/YN/CHN/2016全基因组序列分析

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中国病毒病杂志 2022年第1期12卷 42-46页

作者：张名许丹菡冯昌增郭伟王晓辉何陆涛马绍辉中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的对2016年云南省埃可病毒7型(echovirus 7,E-7)的分离株K1641/YN/CHN/2016(简称K1641)进行全基因组序列测定并分析其分子变异和遗传进化特性。方法利用KMB17细胞分离病毒,提取病毒RNA,进行RT-PCR,并测序拼接获得全基因组序列。利用... 详细信息

目的对2016年云南省埃可病毒7型(echovirus 7,E-7)的分离株K1641/YN/CHN/2016(简称K1641)进行全基因组序列测定并分析其分子变异和遗传进化特性。方法利用KMB17细胞分离病毒,提取病毒RNA,进行RT-PCR,并测序拼接获得全基因组序列。利用Mega 5、Geneious Basic 5.4.1和SimPlot 3.5.1等软件分析全基因组序列。结果获得的K1641株全基因组序列长度为7 428 bp,编码含2 193个氨基酸的多聚蛋白。K1641全基因组核苷酸和氨基酸同源性与中国分离株40/Longyou/ZJ最为同源,分别为95.9%和98.9%;而与其他中国E-7流行株VP1的核苷酸和氨基酸同源性分别为95.1%~99.7%和82.5%~99.3%;与原型株VP1的核苷酸和氨基酸同源性为78.4%和93.1%。K1641与其他E-7毒株的各区段核苷酸一致性和氨基酸同源性分别为73.5%~97.3%和85.3%~100.0%,K1641与40/Longyou/ZJ的各区段核苷酸一致性和氨基酸同源性均超过90.0%,并且,氨基酸的同源性要高于核苷酸一致性。基于E-7全长VP1序列的种系进化分析,可分为8个簇,本次分离株K1641与2013中国分离株40/Longyou/ZJ关系较近,属于进化树上的一个分支。进行相似性分析,在位置350~600,与E-6/RO-24-9-79(LS451294)显示出99%的高相似性;其他位置与中国分离株40/Longyou/ZJ有较高(>92%)的相似性。结论 K1641分离株为E-7,与E-6/RO-24-9-79株可能存在重组事件发生,对E-7遗传特性研究具有参考意义。

关键词：埃可病毒7型全基因组序列分型种系发生

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柯萨奇病毒B组1型TaqMan一步法荧光定量 RT-PCR检测方法的建立

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中国病毒病杂志 2022年第1期12卷 26-30页

作者：许丹菡张名冯昌增郭伟何秀莲张光贤禇嘉祐杨昭庆马绍辉中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的建立柯萨奇病毒B组1型(coxsackievirus B1,CV-B1)特异的TaqMan一步法荧光定量RT-PCR检测方法。方法根据CV-B1的VP1序列,设计特异性引物和TaqMan探针。将目的基因插入pMD19;载体,在DH5α感受态细胞中扩增,体外转录后获得RNA标准品... 详细信息

目的建立柯萨奇病毒B组1型(coxsackievirus B1,CV-B1)特异的TaqMan一步法荧光定量RT-PCR检测方法。方法根据CV-B1的VP1序列,设计特异性引物和TaqMan探针。将目的基因插入pMD19;载体,在DH5α感受态细胞中扩增,体外转录后获得RNA标准品,建立标准曲线。并对检测方法的灵敏度、特异性、重复性进行评价。结果该方法在10^(2)-10^(11)拷贝/μl的模板范围内具有良好的线性关系(R^(2)=1.000),扩增效率E=107.5%。灵敏度达1×10^(2)拷贝/μl,只对CV-B1有特异性扩增曲线,且重复性较好。结论建立的实时荧光定量RT-PCR方法具有较高的灵敏度、特异性和重复性,可作为CV-B1的快速检测和绝对定量分析。

关键词：柯萨奇病毒B组1型 TaqMan 实时荧光定量PCR 分子诊断

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