检索结果-内蒙古大学图书馆

蚌埠医科大学学报 2025年第1期50卷 6-13页

作者：彭石娟王小满高琴陈厚早蚌埠医科大学卫生管理学院安徽蚌埠233030 蚌埠医科大学基础医学院生理学教研室安徽蚌埠233030 蚌埠医科大学心脑血管疾病基础与临床重点实验室安徽蚌埠233030 中国医学科学院基础医学研究所暨北京协和医学院生物化学与分子生物学系重大疾病共性机制研究国家重点实验室北京100005

心血管疾病(CVD)是全球的主要死因,早期预测对CVD.预防、诊断和治疗至关重要。二十世纪末,研究者根据不同权重将多种危险因素组成风险评分来预测CVD风险,以便确定最有可能从预防性干预措施中获益的人群,为一些国家带来重大利益。然而,... 详细信息

心血管疾病(CVD)是全球的主要死因,早期预测对CVD.预防、诊断和治疗至关重要。二十世纪末,研究者根据不同权重将多种危险因素组成风险评分来预测CVD风险,以便确定最有可能从预防性干预措施中获益的人群,为一些国家带来重大利益。然而,传统的风险模型通常无法捕捉危险因素之间的非线性关系。人工智能(AI)技术,特别是监督式机器学习和深度学习,为CVD预测提供了新视角和工具。近几年,基于电子病历、多模态影像等临床数据和衰老大数据可以准确地预测CVD的发病和死亡风险,因此,本文将从传统评分、基于AI的临床数据和衰老大数据的CVD预测模型研究现状分别进行阐述,为促进AI结合CVD提供思路。

关键词：心血管疾病人工智能预测模型衰老生物学年龄

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双三体胚胎干细胞的增殖与分化特征分析

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中国细胞生物学学报 2021年第5期43卷 922-931页

作者：张美丽肖蓉贾玉艳黄粤中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

该文旨在研究双三体胚胎干细胞(embryonic stem cells,ESCs)在细胞增殖、分化以及畸胎瘤形成等方面的特征,揭示非整倍体与肿瘤发生之间的关系。首先建立了两株常染色体双三体的小鼠ESC株系,通过微阵列比较基因组杂交(array comparative ... 详细信息

该文旨在研究双三体胚胎干细胞(embryonic stem cells,ESCs)在细胞增殖、分化以及畸胎瘤形成等方面的特征,揭示非整倍体与肿瘤发生之间的关系。首先建立了两株常染色体双三体的小鼠ESC株系,通过微阵列比较基因组杂交(array comparative genomic hybridization,array CGH)和荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)实验对双三体ESC株系进行了染色体拷贝数分析和核型鉴定;通过绘制细胞生长曲线检测了双三体ESCs的增殖能力;通过流式细胞术检测了双三体ESCs的细胞周期和细胞凋亡情况;采用细胞克隆形成实验分析了双三体ESCs的克隆形成效率;通过实时荧光定量PCR和免疫荧光染色实验检测了双三体ESCs中多能干细胞标志物的表达;通过撤掉培养体系中的白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor,LIF)诱导分化和进行拟胚体(embryoid body,EB)形成实验检测了双三体ESCs的分化能力;通过重度联合免疫缺陷(severe combined immunodeficiency,SCID)小鼠皮下接种细胞实验分析了双三体ESCs的畸胎瘤形成能力和体内分化能力。结果显示,这两株双三体细胞分别是3号与6号染色体双三体并伴有Y染色体丢失的ESCs(DTs-3+6),以及6号与8号染色体双三体的ESCs(DTs-6+8)。双三体ESCs表现出相对于野生型细胞较强的生长增殖能力和OCT4、SOX2、NANOG等多能干细胞标志物的高表达。当培养液中不添加LIF时,野生型细胞基本完全走向分化,而双三体细胞形成许多未分化或部分分化的克隆,碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AP)染色阳性。在EB分化早期,双三体细胞中Fgf5、T、Foxa2等三胚层标志物的表达水平较野生型细胞明显降低,分化滞后。当被接种到SCID小鼠皮下后,双三体ESCs形成畸胎瘤的能力较野生型细胞增强,畸胎瘤中包含大量未分化区域。因此,双三体ESCs的生长增殖能力增强,它通过限制细胞分化能力而促进畸胎瘤形成。双三体ESCs是研究非整倍体在肿瘤发生发展过程中作用的重要模型。

关键词：非整倍体双三体胚胎干细胞增殖分化畸胎瘤

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RNA靶向的CRISPR/CasRx系统在小鼠精原细胞系GC1-spg中的应用

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基础医学与临床 2021年第5期41卷 653-660页

作者：李梦真柳俊邹定峰缪时英王琳芳宋伟李凯中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的探究CRISPR/CasRx介导的RNA水平的基因敲降在小鼠精原细胞系GC1-spg的应用。方法利用同源重组的方法构建EF1a core ***表达质粒(CasRx-gRNA)和***、***、*** 3种荧光蛋白表达质粒。在人胚肾细胞系HEK-293T内瞬时转染3种荧光蛋白表... 详细信息

目的探究CRISPR/CasRx介导的RNA水平的基因敲降在小鼠精原细胞系GC1-spg的应用。方法利用同源重组的方法构建EF1a core ***表达质粒(CasRx-gRNA)和***、***、*** 3种荧光蛋白表达质粒。在人胚肾细胞系HEK-293T内瞬时转染3种荧光蛋白表达质粒和CasRx-gRNA表达质粒,通过荧光强度、Western blot检测外源基因(荧光蛋白、EGFP和mCherry)的敲降情况。在HEK-293T细胞内转染CasRx-gRNA,通过q-PCR检测内源基因mRNA和lncRNA干扰后的表达水平。在小鼠精原细胞系GC1内瞬时转染外源基因egfp、mCherry和CasRx-gRNA表达质粒并通过以上方法检测外源基因(荧光蛋白)沉默效率。结果成功构建了CasRx-gRNA和3种荧光蛋白表达质粒。在HEK-293T细胞内CRISPR/CasRx介导的RNA干扰外源基因(egfp、mCherry)和内源基因(mRNA、lncRNA)后,表达水平均显著下调(P<0.01)。在小鼠精原细胞系GC1内验证CRISPR/CasRx系统,可有效和特异敲降外源基因egfp、mCherry。结论CRISPR/CasRx系统能够在GC1-spg细胞中发挥有效和特异的敲降作用,为雄性生殖发育的研究提供新的基因沉默工具。

关键词： CRISPR/CasRx RNA 敲降 GC1-spg

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人胚胎肾细胞系HEK293中的翻译调控

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基础医学与临床 2021年第5期41卷 630-635页

作者：柳满任悦高玉风王芳余佳中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的探讨人胚胎肾细胞系HEK293中的翻译调控。方法通过Polysome profiling结合Western blot实验检测并验证HEK293细胞中mRNA的翻译活性;通过针对RPL10A和RPS17两种核糖体蛋白的RNA免疫共沉淀、建库测序(RIP-seq)及生物信息学分析,获得参... 详细信息

目的探讨人胚胎肾细胞系HEK293中的翻译调控。方法通过Polysome profiling结合Western blot实验检测并验证HEK293细胞中mRNA的翻译活性;通过针对RPL10A和RPS17两种核糖体蛋白的RNA免疫共沉淀、建库测序(RIP-seq)及生物信息学分析,获得参与HEK293细胞蛋白质合成调控的相关分子。结果在两种核糖体蛋白的RNA免疫共沉淀实验富集的分子中共有129种基因,其中93.8%为蛋白质编码基因;且功能与RNA剪接、分解代谢、MAPK信号通路、染色体定位、RNA转运等相关。结论通过针对核糖体蛋白的RNA免疫共沉淀可以获得HEK293细胞中活跃翻译的mRNA。

关键词：人胚胎肾细胞系293 Polysome profiling RNA结合蛋白免疫共沉淀

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细菌外膜蛋白BamA突变体构建及位点运动性分析

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军事医学 2022年第9期46卷 677-681页

作者：王媛李志慧魏倩董国福储引娣王长振军事科学院军事医学研究院辐射医学研究所北京100850 中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院病原学系医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的构建细菌外膜β桶状蛋白组装机器(BAM)核心组分BamA点突变原核表达载体,获得特定位点突变BamA蛋白,并分析该蛋白多肽易位相关(POTRA)结构域上G313位点运动特性。方法利用重叠延伸PCR(SOE-PCR)将BamA蛋白第690和700位天然半胱氨酸(C... 详细信息

目的构建细菌外膜β桶状蛋白组装机器(BAM)核心组分BamA点突变原核表达载体,获得特定位点突变BamA蛋白,并分析该蛋白多肽易位相关(POTRA)结构域上G313位点运动特性。方法利用重叠延伸PCR(SOE-PCR)将BamA蛋白第690和700位天然半胱氨酸(C)突变为丝氨酸(S),将POTRA结构域上第313位氨基酸由甘氨酸(G)突为C,构建含BamA-C690S-C700S-G313C突变的原核表达载体pET22b-Strep-BamA。异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导突变蛋白表达后,利用Strep-Tactin Sepharose柱亲和层析方法对突变体蛋白进行纯化。甲烷硫代磺酸(MTSL)标记所得纯化蛋白的半胱氨酸后,进行电子顺磁共振(EPR)波谱检测,通过EPR波谱拟合获得旋转相关时间τ_(c),分析G313C氨基酸位点的运动特性。结果构建了BamA-C690S-C700S-G313C突变体原核表达载体,实现了突变体蛋白有效表达和纯化。G313C位点EPR波谱为单成分运动状态波谱,其τc值为(2.30±0.03)ns。结论该研究建立了BamA点突变原核表达和蛋白纯化方法,并获得BamA蛋白G313C运动性特征参数,为进一步研究BamA蛋白在外膜蛋白整合过程中的结构机制提供了数据。

关键词：细菌外膜蛋白质类 BamA 突变定点自旋标记-电子顺磁共振运动性

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小鼠出生后早期心脏成纤维细胞数量及性状变化研究

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中国比较医学杂志 2021年第5期31卷 28-35页

作者：刘维静聂宇廉虹王玉瑶山西医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室太原030001 中国医学科学院北京协和医学院国家心血管病中心阜外医院心血管疾病国家重点实验室北京100037

目的心脏成纤维细胞占心脏细胞数量的50%以上,在心脏生理病理过程中发挥重要作用。小鼠出生后7 d是心脏失去再生能力的时间转折点,本研究着眼于研究心脏成纤维细胞在小鼠出生后早期数量及性状的变化情况,为心肌再生机制研究提供基础性... 详细信息

目的心脏成纤维细胞占心脏细胞数量的50%以上,在心脏生理病理过程中发挥重要作用。小鼠出生后7 d是心脏失去再生能力的时间转折点,本研究着眼于研究心脏成纤维细胞在小鼠出生后早期数量及性状的变化情况,为心肌再生机制研究提供基础性实验数据。方法出生1 d和7 d的C57小鼠进行心尖切除手术(Apex resection,AR),体视镜拍照及HE染色观察心尖处切口,21 d后观察再生情况;分离出生后1 d和7 d的C57小鼠心脏组织,称取心脏湿重比较重量差异,病理切片进行HE染色观察两个时间点的心脏病理结构,免疫荧光染色观察1 d和7 d心脏组织中成纤维细胞数量变化;为了更加准确定量心脏成纤维细胞的数量变化,我们利用成纤维细胞表面标志物胸腺细胞分化抗原1(Thymocyte differentiation antigen 1,Thy1)通过流式分选技术对心脏组织细胞悬液进行心肌成纤维细胞的分选,比较1 d和7 d小鼠心脏组织中心肌成纤维细胞比例;为了验证心脏成纤维细胞性状是否发生变化,我们分离1 d和7 d小鼠心脏成纤维细胞,分析成纤维细胞的特异性标志物Thy1、成纤维细胞特异性蛋白(Fibroblast-specific protein 1,Fsp-1)、骨膜蛋白(Periostin)、血小板衍生生长因子受体α(plateletderived growth factor receptorα,Pdgfrα)、Ⅰ型胶原α1(Collagen alpha-1,Col1a1)、转录因子21(Transcription factor 21,Tcf21)在m RNA水平的表达变化情况。结果出生1 d的小鼠心尖切除手术后21 d可以完全再生(再生率为86.67%),而7 d小鼠手术后不能完全再生(再生率为0);小鼠出生后7 d心脏组织平均比1 d心脏湿重重13.13mg(3.11倍)(1 d:(6.22±0.19),7 d:(19.35±0.56),P<0.0001;n=6)。心脏成纤维细胞免疫荧光染色证明,7 d心脏成纤维细胞数量明显高于1 d心脏;流式细胞分选证明小鼠出生后7 d心脏组织中心肌成纤维细胞占总细胞比例比出生后1 d时高2.9%(1.38倍)(1 d:(7.7±0.74),7 d:(10.6±0.95),P=0.029;n=3);在成纤维细胞转录水平,成纤维细胞标志蛋白Thy1、Fsp-1、Periostin在小鼠出生后7 d表达高于出生后1 d的成纤维细胞(Thy1:1 d:(1.01±0.12),7 d:(2.71±0.27),P=0.0288;Fsp-1:1 d:(1.04±0.27),7 d:(5.28±0.10),P=0.0046;Periostin:1d:(0.91±0.01),7 d:(1.13±0.05),P=0.0119;n=3),而Pdgfrα、Col1a1、Tcf21三种成纤维细胞标志蛋白表达则低于出生后1 d的小鼠心脏中的成纤维细胞(Pdgfrα:1 d L:(1.09±0.04),7 d:(0.62±0.01),P=0.0068;Col1a1:1d:(1.00±0.09),7 d:(0.57±0.02),P=0.0433;Tcf21:1 d:(1.00±0.03),7 d:(0.54±0.02),P=0.0054;n=3),证明出生后1 d到7 d的过程中心脏成纤维细胞性状发生了变化。结论小鼠出生后早期(1 d和7 d)心脏成纤维细胞的比例和性状均发生了明显变化,为研究哺乳动物心肌再生能力的丢失的机制研究提供一定的线索。

关键词：小鼠心脏成纤维细胞流式细胞分析术成纤维细胞性状

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市售中药饮片DNA条形码鉴定研究

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药学学报 2021年第3期56卷 879-889页

作者：辛天怡娄千郝利军李冉郡林余霖许文杰马婷玉林烨暄董一昕蒋澄宇宋经元中国医学科学院、北京协和医学院药用植物研究所国家中医药管理局中药资源保护重点研究室北京100193 西南交通大学生命科学与工程学院四川成都610031 中国医学科学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京协和医学院基础学院生物化学系北京100005 中药资源教育部工程研究中心北京100193

中药材DNA条形码分子鉴定法指导原则已纳入《中国药典》,但目前尚缺乏应用于中药饮片的系统性研究。本研究共收集212份市售中药饮片,包含根及根茎、果实种子、全草、花、叶、皮、茎木等不同入药部位,验证中药材DNA条形码分子鉴定法对中... 详细信息

中药材DNA条形码分子鉴定法指导原则已纳入《中国药典》,但目前尚缺乏应用于中药饮片的系统性研究。本研究共收集212份市售中药饮片,包含根及根茎、果实种子、全草、花、叶、皮、茎木等不同入药部位,验证中药材DNA条形码分子鉴定法对中药饮片基原物种鉴定的适用性和准确性。结果表明,共有161份样本成功获得DNA条形码序列,占收集中药饮片样本量的75.9%,其余样本基因组DNA降解,无法获得扩增产物。实验所得DNA条形码序列分析结果如下:138份饮片为《中国药典》(2020年版)收载相应药材的基原物种,占获得序列样本数的85.7%;14份样本分析结果中包含《中国药典》收载相应药材的基原物种以及同属近缘物种,经过形态学鉴定,其中8份为正品,3份掺有伪品,3份缺少鉴别特征,不能确定基原;7份样本为混伪品;另有2份样本检出掺伪现象。本研究证实中药材DNA条形码分子鉴定法能有效检出市售中药饮片的掺伪/混伪现象,可用于市售中药饮片的基原物种鉴定,值得在中药饮片加工生产企业及药品监督检验管理机构推广,同时有助于促进中药学研究的跨学科交流,共同挖掘中药作用靶点和药效机制,推动个性化精准医疗及"精准药物研发"。

关键词：中药饮片 DNA条形码 ITS2 psbA-trnH 分子鉴定市场监控

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非剥脱性激光治疗痤疮的研究进展

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中华医学美学美容杂志 2024年第2期30卷 195-198页

作者：张鑫刘宇甄曾荣中国医学科学院、北京协和医学院、皮肤病医院激光科南京210042 南京医科大学附属江宁医院皮肤科南京211100 江苏省皮肤性病分子生物学重点实验室南京210042 云南省中医医院皮肤科昆明650021

痤疮是一种毛囊皮脂腺单位受累的慢性炎症性皮肤病,外用和口服药物是治疗痤疮的常规方案,激光治疗痤疮逐渐证实为一种有效的治疗方法。激光治疗的作用机制主要包括光热作用、光化学反应、诱导转化生长因子-β表达等,发挥抑制皮脂分泌、... 详细信息

痤疮是一种毛囊皮脂腺单位受累的慢性炎症性皮肤病,外用和口服药物是治疗痤疮的常规方案,激光治疗痤疮逐渐证实为一种有效的治疗方法。激光治疗的作用机制主要包括光热作用、光化学反应、诱导转化生长因子-β表达等,发挥抑制皮脂分泌、杀灭痤疮丙酸杆菌和减轻炎症和瘢痕形成的作用。目前,非剥脱性激光是治疗痤疮常用的激光治疗方式,包括多种不同波长的激光器。由于激光技术的种类繁多,如何制定合理的激光治疗方案改善痤疮症状有一定的难度。

关键词：非剥脱性激光痤疮治疗研究进展激光美容发展前景

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维持人胚胎干细胞多能性顺式作用元件的筛选

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基础医学与临床 2021年第5期41卷 636-640页

作者：孙梦瑶刘思琪周凡琦马艳妮余佳中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的在人胚胎干细胞(hESCs)中建立一种可行的CRISPR文库筛选方法,筛选参与维持hESCs多能性的顺式作用元件。方法将诱导型Cas9蛋白表达元件插入hESC基因组中,构建诱导型Cas9稳定表达株(iCas9-hESC)。通过分析已发表的hESCs中的染色质互... 详细信息

目的在人胚胎干细胞(hESCs)中建立一种可行的CRISPR文库筛选方法,筛选参与维持hESCs多能性的顺式作用元件。方法将诱导型Cas9蛋白表达元件插入hESC基因组中,构建诱导型Cas9稳定表达株(iCas9-hESC)。通过分析已发表的hESCs中的染色质互作信息,确定可能参与多能性基因调控的顺式作用元件,并以此来构建双gRNA CRISPR敲除文库。使用CIRSPR文库在低感染复数情况下感染iCas9-hESC,诱导Cas9蛋白表达,对细胞进行基因编辑。以OCT4的表达水平作为衡量多能性的标准,对基因编辑后的细胞进行OCT4的流式抗体染色与分析,确定顺式元件敲除后是否影响到hESC的多能性。结果成功构建iCas9-hESC,且该细胞仍保持多能性状态。构建顺式元件的CRISPR敲除文库,成功感染目的细胞。对文库感染后的细胞进行OCT4表达水平的流式分析,发现基因编辑后的细胞确实存在多能性下降的部分群体。结论建立了在hESC中通过CRISPR文库筛选参与维持多能性顺式作用元件的可行性方案。

关键词：人胚胎干细胞多能性顺式元件 CRISPR文库

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利用CRISPR/PITCH系统构建表达CSDE1-EGFP的B16细胞株

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基础医学与临床 2021年第3期41卷 318-324页

作者：刘孟雨周雅博黄波吕家迪中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院免疫学系医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的用新型CRISPR/PITCH系统构建表达CSDE1-EGFP的小鼠黑色素瘤B16细胞株,分选出低表达CSDE1与高表达CSDE1的B16细胞株,并进行功能探讨。方法用微同源介导的末端连接(MMEJ)方法将增强型绿色荧光蛋白(EGFP)编码序列插入到CSDE1基因最后... 详细信息

目的用新型CRISPR/PITCH系统构建表达CSDE1-EGFP的小鼠黑色素瘤B16细胞株,分选出低表达CSDE1与高表达CSDE1的B16细胞株,并进行功能探讨。方法用微同源介导的末端连接(MMEJ)方法将增强型绿色荧光蛋白(EGFP)编码序列插入到CSDE1基因最后一个外显子上;用流式细胞测量术、PCR、免疫荧光及活细胞成像来检测CSDE1-EGFP是否插入成功,检验EGFP的荧光强弱与CSDE1的表达高低是否一致;用Transwell小室法、小鼠荷瘤模型实验观察低表达CSDE1与高表达CSDE1的B16细胞株之间的功能差异。结果分选出低表达CSDE1与高表达CSDE1的B16细胞株,检测出EGFP表达强弱与CSDE1表达高低一致。观察到CSDE1蛋白表达量不同的B16细胞株在功能上有所差异。结论为研究CSDE1在其他肿瘤细胞内的动态定位以及因表达量不同而产生的功能差异,新型CRISPR/PITCH系统提供了快速有效的直观方法。

关键词： CRISPR/PITCH系统 CSDE1 微同源末端连接(MMEJ) 增强型绿色荧光蛋白(EGFP)

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