检索结果-内蒙古大学图书馆

突触黏附分子NECL4对大脑皮质Ca^2+-CaMKII-CDC42信号通路的影响

基础医学与临床 2020年第7期40卷 929-933页

作者：胡耕刘枭舒鹏程彭小忠中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院生物化学与分子生物学系医学分子生物学国家重点实验室医学灵长类研究中心神经科学中心北京100005 中国医学科学院医学生物学研究所云南昆明650118

目的探究突触黏附分子NECL4对Ca^2+-CaMKII-CDC42信号通路和树突棘数量的影响。方法以Necl4全身性敲除小鼠为研究对象,对8周龄的Necl4野生(WT)及敲除(KO)小鼠脑组织进行高尔基染色,对大脑皮质第Ⅱ/Ⅲ层椎体神经元二级树突上树突棘密度... 详细信息

目的探究突触黏附分子NECL4对Ca^2+-CaMKII-CDC42信号通路和树突棘数量的影响。方法以Necl4全身性敲除小鼠为研究对象,对8周龄的Necl4野生(WT)及敲除(KO)小鼠脑组织进行高尔基染色,对大脑皮质第Ⅱ/Ⅲ层椎体神经元二级树突上树突棘密度进行统计。通过Western blot和RT-qPCR实验对Ca^2+-CaMKII信号通路及其下游信号分子的蛋白和mRNA表达水平进行检测,包括CDC42、Rac1、RhoA、H-Ras、ERK等信号蛋白。结果高尔基染色结果显示,Necl4敲除小鼠大脑皮质第Ⅱ/Ⅲ层椎体神经元二级树突上树突棘数量与野生型小鼠相比减少(P<0.01)。Western blot实验结果显示CaMKIIα(P<0.05)及phospho-CaMKIIα(Thr286)(P<0.05)在Necl4敲除小鼠中表达降低,CaMKIIα的下游信号分子CDC42的mRNA水平(P<0.05)和蛋白水平(P<0.05)在Necl4敲除小鼠中均表达降低。结论NECL4通过Ca^2+-CaMKII-CDC42信号通路对小鼠大脑皮质树突棘数量进行调控。

关键词： NECL4 树突棘 CaMKIIα CDC42 ERK

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靶向沉默TrkB基因对结肠癌细胞SW620失巢凋亡水平的影响

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天津医药 2019年第6期47卷 561-565页

作者：祁麟齐春胜肖波中国医学科学院北京协和医学院血液病医院血液学研究所 300020 天津医科大学基础医学院免疫学系

目的在结肠癌细胞SW620中靶向沉默神经营养因子酪氨酸激酶受体B(TrkB)基因以探讨其对肿瘤细胞的失巢凋亡水平的影响。方法构建TrkB慢病毒干扰载体,使用TrkB-shRNA慢病毒感染SW620细胞,利用实时定量PCR和Westernblot法分别检测TrkB基因在... 详细信息

目的在结肠癌细胞SW620中靶向沉默神经营养因子酪氨酸激酶受体B(TrkB)基因以探讨其对肿瘤细胞的失巢凋亡水平的影响。方法构建TrkB慢病毒干扰载体,使用TrkB-shRNA慢病毒感染SW620细胞,利用实时定量PCR和Westernblot法分别检测TrkB基因在mRNA和蛋白水平表达量的变化;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测下调TrkB基因表达后贴壁和悬浮生长状态下细胞失巢凋亡率的变化。结果成功构建TrkB-shRNA慢病毒干扰载体,获得SW620-iTrkB稳定感染细胞系。与SW620-iLuc对照组相比,转染SW620-iTrkB细胞中TrkB基因的mRNA和蛋白相对表达水平均降低(P<0.05)。不同生长状态和不同转染质粒转染均对SW620-iTrkB细胞的失巢凋亡水平有影响,存在交互效应(P<0.05)。与贴壁状态相比,悬浮状态下SW620-iLuc组和SW620-iTrkB组细胞凋亡率均明显上升(P<0.05);在悬浮状态下,SW620-iTrkB组细胞凋亡率明显高于SW620-iLuc组(P<0.05)。结论慢病毒载体介导的TrkB-shRNA能在结肠癌细胞SW620中产生特异性的基因沉默效应,显著增加细胞的失巢凋亡水平。

关键词：受体蛋白质酪氨酸激酶类失巢凋亡基因沉默肿瘤转移 shRNA

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人胚胎干细胞RNA的细胞质和细胞核内的定位

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基础医学与临床 2020年第6期40卷 765-770页

作者：周凡琦冯文新谭普文马艳妮王栋余佳中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005 河南地矿职业学院河南郑州450000 南方医科大学基础学院生物信息系广东广州510000

目的探讨人胚胎干细胞(hESCs)中RNA细胞核和细胞质内分布信息。方法分离hESCs细胞质与细胞核后提取RNA并测序,生物信息学分析核和质中RNA定位特点,并使用RT-qPCR实验技术验证RNA的定位。结果 hESCs细胞质中RNA种类及其特异定位的RNA均... 详细信息

目的探讨人胚胎干细胞(hESCs)中RNA细胞核和细胞质内分布信息。方法分离hESCs细胞质与细胞核后提取RNA并测序,生物信息学分析核和质中RNA定位特点,并使用RT-qPCR实验技术验证RNA的定位。结果 hESCs细胞质中RNA种类及其特异定位的RNA均多于细胞核,其中特异性定位在细胞质中的RNA有2 952个,细胞核中634个。结论描绘hESCs中RNA细胞核和细胞质定位图谱,鉴定了多个特异定位在细胞核与细胞质的RNA。

关键词：人胚胎干细胞 RNA定位

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Cas9稳定表达的人肝胆癌细胞株的建立

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中华肿瘤杂志 2018年第8期40卷 572-579页

作者：左春霞卞晓翠杨振丽冯海凉周芳颖刘玉琴中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院病理学系 100005

目的建立Cas9蛋白稳定表达的人肝胆癌细胞株，并验证Cas9的基因编辑活性，以便利用CRISPR/Cas9系统开展肝胆细胞基因编辑的研究。方法在人肝癌细胞（Huh7、PLC/PRF/5、HepG2、Hep3b、SK-HEP-1和Li-7）、人胆管癌细胞（RBE）和人胆囊癌... 详细信息

目的建立Cas9蛋白稳定表达的人肝胆癌细胞株，并验证Cas9的基因编辑活性，以便利用CRISPR/Cas9系统开展肝胆细胞基因编辑的研究。方法在人肝癌细胞（Huh7、PLC/PRF/5、HepG2、Hep3b、SK-HEP-1和Li-7）、人胆管癌细胞（RBE）和人胆囊癌细胞（GBC-SD）中，分别感染Cas9表达质粒pLv-EF1α-Cas9-Flag-Neo、pLv-EF1α-Cas9-Flag-Puro和Cas9m1.1，挑选单细胞克隆培养扩增。提取基因组DNA和总蛋白后，通过基因组聚合酶链反应（PCR）和Western blot验证Cas9的稳定表达。选取其中3个细胞株并感染Lv-EF1α-mCherry，流式细胞术分选出mCherry阳性的细胞，再通过慢病毒感染靶向mCherry基因的向导RNA，细胞扩增后，通过基因组PCR、荧光显微镜下观察和流式细胞术检测mCherry被敲除的情况。结果筛选到100个Cas9稳定表达的人肝胆癌细胞株，其中表达Cas9-Neo的细胞35株，表达Cas9-Puro的细胞25株，表达突变型Cas9的细胞40株。建立了3株mCherry稳定表达的细胞系Huh7-mCas9-M、PLC/PRF/5-Cas9-M和SK-HEP-1-Cas9-M。基因组PCR和测序显示，同时感染2种gRNA的细胞基因组内存在mCherry片段缺失。荧光显微镜下，同时感染2种gRNA的细胞可以观察到mCherry－EGFP＋细胞。流式细胞仪检测结果显示，mCherry－EGFP＋细胞占0.3%～93.6%。结论成功建立了100个Cas9稳定表达的人肝胆癌细胞株，其中的Cas9蛋白具有基因编辑活性。

关键词：肝细胞癌胆管癌胆囊肿瘤基因编辑 CRISPR/Cas9 细胞株

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捕获和连接探针PCR与巢氏PCR检测疟原虫效果的比较

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中国病原生物学杂志 2020年第6期15卷 682-684,707页

作者：林祖锐周耀武孙晓东徐艳春陈梦妮郑直云南省寄生虫病防治所云南省疟疾研究中心云南省虫媒传染病防控研究重点实验室云南省虫媒传染病防控关键技术创新团队(培育)面向东南亚热带病国际科技人才教育培训基地云南普洱665000 中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院

目的了解捕获与连接探针PCR(CLIP-PCR)对疟原虫的确认诊断效果。方法云南省疟疾诊断参比实验室提供的血涂片镜检阴性和阳性者滤纸血样各70份,分别进行盲法CLIP-PCR和巢氏PCR检测,以巢氏PCR为金标准评价CLIP-PCR的检测效果及检测耗时,血... 详细信息

目的了解捕获与连接探针PCR(CLIP-PCR)对疟原虫的确认诊断效果。方法云南省疟疾诊断参比实验室提供的血涂片镜检阴性和阳性者滤纸血样各70份,分别进行盲法CLIP-PCR和巢氏PCR检测,以巢氏PCR为金标准评价CLIP-PCR的检测效果及检测耗时,血样梯度稀释后测定CLIP-PCR最低检出阈值。结果检测140份血样,2种PCR检出假阳性和假阴性各1例,CLIP-PCR检测疟原虫的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值和诊断准确度均为98.57%,kappa值为0.97;CLIP-PCR耗时13.91 h,较巢氏PCR耗时23.47 h缩短40.73%;梯度稀释后重复检测8次,≥3.2个虫/μl血检出率100%,0.32个虫/μl血检出率50%。结论CLIP-PCR检测疟原虫效果与巢氏PCR相同,重复性良好,更适用于大规模人群筛查。

关键词：疟原虫捕获与结合探针PCR 巢氏PCR 检测评价

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人脑组织库建设的意义与国内外进展

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重庆医科大学学报 2019年第4期44卷 547-550页

作者：马超包爱民严小新中国医学科学院基础医学研究所/北京协和医学院基础学院人体解剖与组织胚胎学系北京100005 浙江大学神经研究所杭州310058 中南大学基础医学院人体解剖学与神经生物学系长沙410013

人脑组织库收集死后和活检的人体神经组织材料、采集捐献者生前疾病和生活信息,支撑对健康和疾病人脑组织的观察与研究。在西方发达国家,人脑组织库建设受到高度重视,形成了以临床列队为重点的大规模脑库,推动了对人脑形态与功能、发育... 详细信息

人脑组织库收集死后和活检的人体神经组织材料、采集捐献者生前疾病和生活信息,支撑对健康和疾病人脑组织的观察与研究。在西方发达国家,人脑组织库建设受到高度重视,形成了以临床列队为重点的大规模脑库,推动了对人脑形态与功能、发育与老化及许多神经精神疾患疾病机制的探索,正在逐步揭示人脑正常活动机制并引领神经系统疾病预防和治疗的方向。我国人脑组织库建设尚待推动。本文介绍人脑组织库建设的意义及国外人脑组织库的基本情况,同时也对我国人脑组织库建设现状进行考察与思考。

关键词：人脑组织库神经精神疾病

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双能量CT碘图定量参数联合CT征象建模在诊断肺癌病理亚型中的价值

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中华放射学杂志 2018年第11期52卷 823-828页

作者：徐晓莉隋昕钟巍徐燕王子兴宋兰黄耀王晓金征宇宋伟中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院放射科 100730 中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院呼吸科 100730 中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院

目的探讨双能量CT（DECT）碘图相关定量参数联合CT征象建模鉴别肺癌病理亚型的应用价值。方法2015年12月至2016年10月前瞻性连续纳入疑似肺癌患者162例，于手术前或活检前行双能量CT动脉期扫描，110例患者明确肺癌病理组织分型。评估11... 详细信息

目的探讨双能量CT（DECT）碘图相关定量参数联合CT征象建模鉴别肺癌病理亚型的应用价值。方法2015年12月至2016年10月前瞻性连续纳入疑似肺癌患者162例，于手术前或活检前行双能量CT动脉期扫描，110例患者明确肺癌病理组织分型。评估110例肺癌的CT形态学特征，并测量病变碘图相关定量参数（碘浓度、碘比值）。比较不同肺癌亚型之间CT征象及碘图相关定量参数的差异。对定性资料采用χ2检验分析，组间两两比较采用Kruskal-Wallis秩和检验。对满足正态分布的定量参数采用单因素方差分析，对不满足正态分布者或等级资料采用Kruskal-Wallis秩和检验分析。以CT征象与CT征象联合碘图相关定量参数分别构建多项式logistic回归模型，评价其诊断肺癌亚型的准确性。结果110例肺癌中，腺癌48例，鳞癌36例，小细胞肺癌26例。3种肺癌亚型的CT征象评估中，病变直径、分布、毛刺征、胸膜牵拉征、血管受累、淋巴结融合征、纵隔侵犯及病变强化特征差异有统计学意义（P〈0.05）。鳞癌[（5.73±3.67）cm]和小细胞肺癌[（6.08±4.39）cm]直径均大于腺癌[（3.75±2.80）cm]，差异有统计学意义（H=13.806，P〈0.05）；分布上，腺癌多为周围型（31例），鳞癌（26例）和小细胞肺癌（21例）多为中央型；相对于小细胞肺癌（13例），腺癌多见毛刺征（44例）；相对于鳞癌（10例）和小细胞肺癌（5例），腺癌多见胸膜牵拉征（36例）；相对于腺癌（15例），小细胞肺癌多伴血管受累（19例）；相对于腺癌（3例）和鳞癌（4例），小细胞肺癌多见淋巴结融合征（15例）；相对于腺癌（7例），小细胞肺癌多侵犯纵隔（13例）；相对于鳞癌（6例），小细胞肺癌多强化均匀（10例）；余各组间CT征象差异无统计学意义。碘浓度及碘比值在不同肺癌亚型中差异有统计学意义（H=16.817，20.338，P〈0.001）。腺癌及鳞癌碘浓度分别为（1.50±0.80）、（1.40±0.40）mg/ml，均高于小细胞肺癌[（1.20±0.40）mg/ml]；腺癌及鳞癌碘比值分别为（16.10±7.02）%、（15.05±4.62）%，均高于小细胞肺癌[（11.55±3.15）%]，腺癌与鳞癌碘图相关定量参数差异无统计学意义。CT征象模型总体诊断准确率为69.1%，CT征象联合碘图定量参数诊断准确率为80.9%。结论双源CT双能量碘图定量参数在肺腺癌、鳞癌与小细胞肺癌中有明显差异，其联合CT征象可提高诊断肺癌亚型的准确性。

关键词：肺肿瘤体层摄影术,X线计算机诊断

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肺癌与肺良性疾病特异血清免疫炎性蛋白质N-糖基化修饰差异

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基础医学与临床 2020年第8期40卷 1096-1102页

作者：杜钰莹王悦赖治臻田志新李智立中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院生物物理及结构生物学系北京100005 同济大学化学科学与工程学院上海市化学品分析风险评估与控制重点实验室上海200092

目的探索肺癌与肺良性疾病特异血清免疫炎性蛋白质N-糖基化修饰差异。方法应用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(native-PAGE)从肺腺癌和慢性肺炎患者血清中分离得到一组疾病特异的血清免疫炎性蛋白质复合物(IIRPCs),经胶内酶解、石墨相氮化碳... 详细信息

目的探索肺癌与肺良性疾病特异血清免疫炎性蛋白质N-糖基化修饰差异。方法应用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(native-PAGE)从肺腺癌和慢性肺炎患者血清中分离得到一组疾病特异的血清免疫炎性蛋白质复合物(IIRPCs),经胶内酶解、石墨相氮化碳富集分离得到完整糖肽。应用高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)技术,结合GPSeeker数据库检索软件进行糖肽鉴定。结果共鉴定了来自12种蛋白质的89种糖肽,其中21种仅与肺良性疾病相关,38种仅与肺癌相关。89种糖肽中包括63种糖型,其中10种为肺良性疾病特有糖型,21种为肺癌特有糖型。两种疾病的特有糖型在其结构和连接位点上均存在差异。结论发现了两种疾病血清特异免疫炎性蛋白质N-糖基化修饰的差异,为糖基化修饰在慢性疾病的诊断、预后评估和分子机制等方面的研究提供了新视角。

关键词：疾病特异蛋白质疾病特异糖肽疾病特异糖型肺疾病

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环孢素A和他克莫司治疗特发性膜性肾病的有效性及安全性比较：网状Meta分析

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中国医学科学院学报 2018年第1期40卷 41-51页

作者：徐平何雨荻于泽铭罗凯谢怀娅邹佩美顾潇王诗蕊蔡建芳许群李航李学旺中国医学科学院北京协和医学院北京100730 中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础医学院流行病与卫生统计学系北京100005 中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院肾内科北京100730

目的采用网状Meta分析的方法对他克莫司与环孢素A治疗特发性膜性肾病(IMN)的疗效与安全性进行对比分析。方法依据PRISMA,检索Pub Med、Embase、Cochrane CENTRAL、万方数据库、中国知网、维普数据库,并根据以往相关综述和荟萃分析所引... 详细信息

目的采用网状Meta分析的方法对他克莫司与环孢素A治疗特发性膜性肾病(IMN)的疗效与安全性进行对比分析。方法依据PRISMA,检索Pub Med、Embase、Cochrane CENTRAL、万方数据库、中国知网、维普数据库,并根据以往相关综述和荟萃分析所引用的参考文献进一步检索随机对照试验。采用R3.3.1软件Meta 4.5.0包和Gemtc 0.8.1包对纳入的研究文献进行网状荟萃分析。结果与他克莫司相比,环孢素A在治疗成人IMN时的完全缓解率(RR=0.98,95%CI:0.70~1.40)或总缓解率(RR=1.00,95%CI:0.90~1.20)差异均无统计学意义。两者在肝功能受损(RR=1.40,95%CI:0.52~4.00)、感染(RR=0.75,95%CI:0.18~3.10)、胃肠道症状(RR=2.1,95%CI:0.36~28.00)等常见不良反应方面差异均无统计学意义。结论环孢素A与他克莫司治疗成人IMN的缓解率及安全性相当。

关键词：特发性膜性肾病环孢素A 他克莫司网状荟萃分析

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一种可诱发高滴度的针对人乳头瘤病毒HPV16,HPV52,HPV58中和抗体反应的HPV16嵌合病毒样颗粒疫苗的研究

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病毒学报 2018年第4期34卷 505-514页

作者：陈雪王志荣刘洪洋张婷许雪梅中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院

人乳头瘤病毒（Human papillomavirus,HPV）主要衣壳蛋白L1病毒样颗粒（VLP）主要诱发型别特异性中和抗体,增加L1VLP型别虽可扩大保护范围,但疫苗生产成本显著增加。HPV16,HPV52及HPV58是我国的主要高危型别。本文将HPV58次要衣壳蛋白L2... 详细信息

人乳头瘤病毒（Human papillomavirus,HPV）主要衣壳蛋白L1病毒样颗粒（VLP）主要诱发型别特异性中和抗体,增加L1VLP型别虽可扩大保护范围,但疫苗生产成本显著增加。HPV16,HPV52及HPV58是我国的主要高危型别。本文将HPV58次要衣壳蛋白L2aa.16-37多肽（与HPV52L2aa.16-37序列相同）插入HPV16L1的h4-βJ coil区,利用昆虫表达体系构建获得16L1h4-58dEVLP,协同人用佐剂氢氧化铝和单磷酰脂质A（Alum-MPL）免疫小鼠。活性检测结果显示16L1h4-58dE VLP免疫血清可中和17种HPV假病毒中的16种,其中针对HPV16的平均中和抗体滴度最高（滴度,76 800）,与HPV16L1VLP对照组的相当（P〉0.05）;重要的是,针对HPV58及HPV52的平均中和抗体滴度均大于103（分别为4 050和1 725）;另外,还可中等滴度中和HPV45（550）,HPV18（506）,HPV33（500）,HPV39（463）,HPV68（431）,HPV6（300）,HPV57（150）,HPV11（125）及较低滴度的中和HPV2/HPV27（40）,HPV35（38）,HPV5（25）,HPV31（13）,但对HPV59没有中和活性。因此,以本研究构建16L1h4-58dE VLP进行广谱HPV疫苗的研究,可望降低疫苗成本,具有应用前景。

关键词：人乳头瘤病毒(HPV) 嵌合病毒样颗粒 HPV58L2多肽交叉中和抗体广谱疫苗

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