检索结果-内蒙古大学图书馆

中国实验血液学杂志 2017年第4期25卷 1172-1177页

作者：孙晨光陈明阮峥韩睿钦王文天王芳胡晓实验血液学国家重点实验室中国医学科学院协和医学院血液学研究所血液病医院天津300020 医学分子生物学国家重点实验室中国医学科学院协和医学院基础医学研究所北京100005

目的:利用斑马鱼造血发育模型探索microRNA-191(miR-191)对髓系造血分化的调控。方法:将miR-191和对照(cel-miR-67)通过显微注射斑马鱼受精卵,收集发育到10 s、24 hpf、36 hpf和48 hpf的胚胎,分别提取对照及实验组胚胎的RNA,利用荧光定... 详细信息

目的:利用斑马鱼造血发育模型探索microRNA-191(miR-191)对髓系造血分化的调控。方法:将miR-191和对照(cel-miR-67)通过显微注射斑马鱼受精卵,收集发育到10 s、24 hpf、36 hpf和48 hpf的胚胎,分别提取对照及实验组胚胎的RNA,利用荧光定量qRT-PCR比较斑马鱼胚胎红系细胞分化标记基因(gata1,scl,hbbe3,lmo2)和粒-单系细胞分化标记基因(pu.1,L-plastin,mpx,cebpα)的表达水平;选取24 hpf胚胎进行上述基因的整胚原位杂交,比较注射miR-191对髓系分化标记基因的原位时空表达的影响。结果:通过分子克隆及T7 RNA聚合酶体外转录成功制备了斑马鱼红系、粒-单系细胞分化标记基因的RNA探针且特异性良好;与注射对照的受精卵相比较,荧光定量qRT-PCR检测发现,注射miR-191的24 hpf和36 hpf斑马鱼胚胎整体中髓系分化基因的水平均有微弱的上调趋势;而发育10 s的胚胎中髓系基因mpx的mRNA表达出现10-20倍的显著上调;整胚原位杂交结果发现24 hpf的胚胎中髓系特异基因L-plastin的原位表达有所上调。结论:本研究建立了斑马鱼受精卵显微注射技术及分析胚胎髓系分化基因表达的两种方法;miR-191对斑马鱼胚胎髓系分化调控功能的研究结果显示,该miRNA可能参与调控粒-单核系和红系分化,其对髓系基因mpx表达调控的分子机制及相应功能有待进一步的研究。

关键词：斑马鱼模型 miR-191 髓系造血

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

自然衰老C57BL/6J雄性小鼠肝脏的定量与乙酰化修饰蛋白质组学特征

引用

中国医学科学院学报 2021年第5期43卷 696-705页

作者：柳江枫杨晔宏武乐杨俊涛中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005 南开大学统计与数据科学学院天津300071

目的获取自然衰老C57BL/6J雄性小鼠肝脏的蛋白质组学与乙酰化修饰蛋白质组学特征。方法采用串联质谱标签标记定量与液相色谱-串联质谱联用技术,获取生理状况下2月龄与18月龄C57BL/6J雄性小鼠肝脏的蛋白质组学与乙酰化修饰蛋白质组学数据... 详细信息

目的获取自然衰老C57BL/6J雄性小鼠肝脏的蛋白质组学与乙酰化修饰蛋白质组学特征。方法采用串联质谱标签标记定量与液相色谱-串联质谱联用技术,获取生理状况下2月龄与18月龄C57BL/6J雄性小鼠肝脏的蛋白质组学与乙酰化修饰蛋白质组学数据,开展生物信息学分析。结果蛋白质组学共定量4712个蛋白质,其中,年轻、年老小鼠中有195个差异表达蛋白质;乙酰化修饰蛋白质组学共定量4818个位点,对应1367个蛋白质,其中,年轻、年老小鼠中有113个表达位点有差异,对应76个蛋白质。衰老相关的上调蛋白质主要与脂肪酸代谢、环氧合酶P450途径、药物分解代谢、有机羟基化合物代谢、花生四烯酸代谢等生物学过程相关,下调蛋白质主要与基因沉默、核小体组装、蛋白质异源四聚、干扰素反应、蛋白质-DNA复合物组装等生物学过程相关。伴随衰老上调的乙酰化修饰位点所在蛋白质主要与辅因子代谢、小分子分解代谢、磷酸核糖代谢、核糖核苷酸代谢、嘌呤代谢等生物学过程相关,含下调乙酰化位点的蛋白质主要与含硫化合物代谢、未折叠蛋白反应、氨基酸代谢等生物学过程相关。结论本研究客观展示了自然衰老C57BL/6J雄性小鼠肝脏的定量和乙酰化修饰蛋白质组学特征,为衰老相关机制探索和干预研究提供了可资参考的数据集。

关键词：衰老小鼠肝脏蛋白质组学乙酰化修饰

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

红系细胞中Cre重组酶介导的位点特异性片段交换(英文)

引用

Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2003年第10期35卷 947-951页

作者：李兴国严皓珩刘德培郝德龙梁植权北京100005 中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室中国医学科学院基础医学研究所

Cre介导的片段交换技术利用重组酶Cre的位点特异性重组特性 ,在基因组的特定位点进行靶片段与目的片段的交换。运用互为反向的Lox位点 ,在鼠红白血病MEL细胞中进行靶载体的整合和交换载体的交换 ,探讨在特定的染色质环境下红系特异性顺... 详细信息

Cre介导的片段交换技术利用重组酶Cre的位点特异性重组特性 ,在基因组的特定位点进行靶片段与目的片段的交换。运用互为反向的Lox位点 ,在鼠红白血病MEL细胞中进行靶载体的整合和交换载体的交换 ,探讨在特定的染色质环境下红系特异性顺式作用元件的功能。电穿孔转染MEL细胞后从含有潮霉素 (hygromycin)的选择性半固体培养基中挑取MEL细胞单克隆 ,通过PCR和Southern杂交鉴定整合完整性和拷贝数 ,获得三种整合有靶载体p1L HyTk L1 β EGFP neo的细胞株A ,B和D。交换载体pL1 HS2 1L(含有 732 bp的人β 珠蛋白基因簇 5′DNaseI高敏位点 2核心片段 )和Cre表达载体pBS185共转染细胞株A ,9 (1,3 二羟 2丙氧甲基 )鸟嘌呤 (gancyclovir)负筛选后挑取单细胞克隆A HS。PCR检测显示HS2片段以反方向进行了交换。流式细胞仪分析显示平均的荧光细胞百分比 (2 .4 2 % )低于未交换的细胞株A (35 .94 % )。A HS中EGFP的低表达可能是处于非容许方向的HS2片段出现方向依赖性基因沉默所致。

关键词：染色体整合位点特异性重组 Cre/Lox 珠蛋白基因基因沉默

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

自然衰老小鼠肝脏与血清的非靶向代谢组学特征

引用

中国医学科学院学报 2021年第4期43卷 536-544页

目的检测自然衰老小鼠肝脏与血清的代谢组学改变情况。方法取10只2月龄小鼠与10只18月龄小鼠,分离生理条件下的肝脏和血清做样本制备,采用液相色谱-串联质谱技术做代谢物鉴定与定量,对过滤后的高质量数据做整体分析、差异筛选和差异代... 详细信息

目的检测自然衰老小鼠肝脏与血清的代谢组学改变情况。方法取10只2月龄小鼠与10只18月龄小鼠,分离生理条件下的肝脏和血清做样本制备,采用液相色谱-串联质谱技术做代谢物鉴定与定量,对过滤后的高质量数据做整体分析、差异筛选和差异代谢物功能分析。结果质谱负离子和正离子模式在小鼠肝脏分别鉴定到242和399个代谢物,在小鼠血清分别鉴定到265和230个代谢物,年轻与年老小鼠代谢组的整体区分较小。衰老肝脏鉴定的上调代谢物涉及核黄素代谢、糖代谢和花生四烯酸代谢等通路,下调代谢物涉及嘧啶代谢、嘌呤代谢、甘油磷脂代谢、谷胱甘肽代谢和烟酰胺代谢。血清中伴随衰老改变的代谢物与多种核酸代谢相关途径相关,如嘧啶代谢、嘌呤代谢、一碳单位池、氨糖及核糖代谢等途径。结论衰老小鼠肝脏及血清可能存在核酸代谢通路紊乱,本研究为衰老相关机制研究及干预途径选择提供了数据支持。

关键词：衰老小鼠肝脏血清非靶向代谢组学

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

微RNA-21在肝细胞癌中的表达及其靶基因研究

引用

中华实验外科杂志 2009年第8期26卷 964-966页

作者：刘长征蔡磊刘卫杨克恭何小东陈松森中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室 100005 北京协和医院

目的探讨微RNA（miRNA）．21在肝细胞癌中的表达特征及其功能，筛选并鉴定miRNA-21可能调控的靶基因。方法用PAGE／Northern blot方法分析miRNA-21在10例肝细胞癌患者组织标本中的表达特征，并在3种肝癌细胞株中加以验证。用生物信息学... 详细信息

目的探讨微RNA（miRNA）．21在肝细胞癌中的表达特征及其功能，筛选并鉴定miRNA-21可能调控的靶基因。方法用PAGE／Northern blot方法分析miRNA-21在10例肝细胞癌患者组织标本中的表达特征，并在3种肝癌细胞株中加以验证。用生物信息学分析预测miRNA-21可能的靶基因，通过逆转录一聚合酶链反应（RT—PCR）方法克隆靶基因的调控区序列，利用荧光素酶双报告基因系统筛选，并通过Western blot、流式细胞仪在蛋白质水平进行分析验证。用体外细胞侵袭实验分析miRNA-21与肝癌细胞侵袭能力的关系。结果miRNA-21在10例肝细胞癌患者中均表达上调，与癌旁组织比较，表达量增加10倍以上。在3种肝癌细胞株中也得到相似的结果。筛选并确认了RECK为miRNA-21的调控靶基因之一。抑制miRNA-21的表达可明显降低肝癌细胞的侵袭。结论miRNA-21在肝细胞癌中表达失控，通过抑制RECK表达促进肿瘤细胞侵袭。

关键词：癌,肝细胞 miRNA RECK 侵袭

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

miR-16促进Neuro2a细胞的凋亡

引用

基础医学与临床 2011年第7期31卷 762-766页

作者：刘畅刘伟王明阴彬袁建刚中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005 北京协和医学院基础学院解剖与组织胚胎学系北京100005

目的检测过表达miR-16对小鼠Neuro2a细胞周期和凋亡的影响,探讨miR-16在肿瘤发病过程中的可能机制。方法构建能够在细胞中过表达miR-16的真核表达载体pcDNA3.1-miR-16,利用Real-time PCR验证了表达载体的过表达效应。应用pcDNA3.1-miR... 详细信息

目的检测过表达miR-16对小鼠Neuro2a细胞周期和凋亡的影响,探讨miR-16在肿瘤发病过程中的可能机制。方法构建能够在细胞中过表达miR-16的真核表达载体pcDNA3.1-miR-16,利用Real-time PCR验证了表达载体的过表达效应。应用pcDNA3.1-miR-16载体转染Neuro2a细胞,利用流式细胞术和TUNEL法检测Neuro2a细胞周期及凋亡改变情况。结果转染过表达pcDNA3.1-miR-16载体后,成熟的miR-16表达与对照组相比明显升高(P<0.05)。在Neuro2a细胞中过表达miR-16后,用流式细胞术检测发现,Neuro2a细胞周期未见明显改变,与对照组相比,凋亡细胞数量有显著增加;进一步通过TUNEL法验证,发现miR-16的过表达能够促进Neuro2a的细胞凋亡。结论过表达miR-16能够显著促进Neuro2a细胞凋亡而对细胞周期并无影响,提示miR-16可能对肿瘤治疗起作用。

关键词： miR-16 Neuro2a细胞细胞周期凋亡肿瘤

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

神经因素对缺血肢体血管生成和骨骼肌肌纤维重塑的影响

引用

中华医学杂志 2015年第8期95卷 601-605页

作者：刁永鹏郭李龙连利珊闫盛陈厚早李拥军中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院血管外科 100730 中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室

目的评价神经因素对缺血肢体血管生成和骨骼肌肌纤维重塑的影响.方法 54只小鼠按随机数字表法分为正常对照组（n=6）、单纯缺血组（n=24）和缺血＋去神经支配组（n=24）.分别建立单纯后肢缺血模型和后肢缺血＋去神经支配模型,在术后第7... 详细信息

目的评价神经因素对缺血肢体血管生成和骨骼肌肌纤维重塑的影响.方法 54只小鼠按随机数字表法分为正常对照组（n=6）、单纯缺血组（n=24）和缺血＋去神经支配组（n=24）.分别建立单纯后肢缺血模型和后肢缺血＋去神经支配模型,在术后第7、14、21和28天取患肢腓肠肌.对3组腓肠肌标本进行HE染色,CD31和PCNA免疫组化染色,酶联免疫吸附剂测定法（ELISA）检测神经生长因子（NGF）和血管内皮生长因子（VEGF）表达.结果术后第7天,缺血＋去神经支配组的患肢缺血程度评估1～4级的比例高于单纯缺血组（33.4％比16.6％）,而0级的比例低于单纯缺血组（16.7％比33.3％）,两组总体差异有统计学意义（χ^2 =7.94,P =0.047）.术后第28天缺血＋去神经支配组与单纯缺血组相比,其内皮细胞增殖指数[（2.4±0.4）％比（5.7±1.0）％,P=0.000]、毛细血管密度[（0.44±0.05）比（0.61 ±0.07）,P=0.000]、NGF表达量[（6.71±0.94）pg/ml比（8.36±0.77） pg/ml,P=0.008]和VEGF表达量[（11.32±1.56） pg/ml比（15.13 ±2.93）pg/ml,P=0.018]均明显降低.术后第28天,缺血＋去神经支配组的腓肠肌Ⅱ型肌纤维比例[（84.9±3.8）％]明显高于单纯缺血组[（78.8±1.8）％,P=0.008].结论神经因素在缺血肢体血管生成和维持骨骼肌肌纤维类型上具有重要作用,但相关的分子调控机制仍需进一步研究.

关键词：肢体缺血去神经支配血管生成肌纤维类型

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

CD3ε和5-氟尿嘧啶在T淋巴细胞凋亡中的协同作用及P53的表达

引用

中华医学杂志 2003年第22期83卷 1962-1967页

作者：程宏刘彦信张锦春刘士廉郑德先中国协和医科大学基础医学院中国医学科学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的　研究CD3ε分子与化疗药物 5 氟尿嘧啶 (5 FU)在T淋巴细胞凋亡中的协同作用及P5 3的表达 ,为探索T淋巴细胞凋亡的分子机制打下基础 ,为相关肿瘤的治疗提供新的实验依据。方法　培养人T淋巴白血病细胞株JK ,转染了突变的CD3εITAM... 详细信息

目的　研究CD3ε分子与化疗药物 5 氟尿嘧啶 (5 FU)在T淋巴细胞凋亡中的协同作用及P5 3的表达 ,为探索T淋巴细胞凋亡的分子机制打下基础 ,为相关肿瘤的治疗提供新的实验依据。方法　培养人T淋巴白血病细胞株JK ,转染了突变的CD3εITAM的TJK及T3JK细胞株。用CD3ε特异的单克隆抗体 (2 0 0 μg/ml)和 /或 5 FU(2 5 μg/ml)刺激不同的T淋巴细胞诱导细胞凋亡 ,用噻唑蓝比色法检测细胞存活率 ,并计算细胞死亡率 ;用瞬时转染野生型或突变型P5 3表达质粒的方法和Western印迹检测P5 3蛋白质的表达 ,分析其在T淋巴细胞凋亡中的作用。结果　在CD3ε和 5 FU分别诱导T淋巴细胞凋亡过程中 ,均伴随着P5 3蛋白质表达增加 ;两者联合使用使T淋巴细胞凋亡和P5 3蛋白质表达显著增加 ;P5 3过表达可明显增加T淋巴细胞对 5 FU的敏感性。结论　抗CD3ε抗体和 5 FU联合作用可显著提高P5 3蛋白质表达 ,两者在T淋巴细胞凋亡中具有协同效应。

关键词： CD3ε 5-氟尿嘧啶 T淋巴细胞凋亡协同作用 P53 表达单克隆抗体

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

腾冲嗜热厌氧菌新型变旋酶的表达、纯化及晶体分析

引用

中国医学科学院学报 2009年第6期31卷 696-701页

作者：武岚钱忠付俊缪时英王琳芳中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005 中国科学院北京基因组研究所北京101318

目的纯化腾冲嗜热厌氧菌新型变旋酶TTE1925,用于晶体生长和三维结构分析。方法将tte1925基因克隆至原核表达载体pGEX-6P-1中,将菌落PCR和测序鉴定正确的重组质粒转化***21(DE 3)后获得表达菌株。该菌株经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导... 详细信息

目的纯化腾冲嗜热厌氧菌新型变旋酶TTE1925,用于晶体生长和三维结构分析。方法将tte1925基因克隆至原核表达载体pGEX-6P-1中,将菌落PCR和测序鉴定正确的重组质粒转化***21(DE 3)后获得表达菌株。该菌株经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导高效表达出带有谷胱甘肽S转移酶标签的可溶性融合蛋白,经过GlutathioneSepharoseTM4B亲和层析、Resource Q 6 mL离子交换层析和10/300 superdex 200分子筛层析纯化后,得到目的蛋白TTE1925。结果纯化后蛋白的纯度达到99%以上。蛋白采用悬滴气相扩散法得到衍射至1.9的棒状晶体。结论成功制备了高纯度TTE1925蛋白,获得TTE1925蛋白质晶体,为进一步解析变旋酶的三维结构及其生物学功能分子机制研究奠定了基础。

关键词：腾冲菌 TTE1925 半乳糖变旋酶原核表达蛋白质纯化结晶

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

主动免疫肌动蛋白样蛋白7a蛋白引起小鼠睾丸曲细精管的损伤

引用

中国医学科学院学报 2013年第6期35卷 595-600页

作者：付俊宗书东缪时英宋伟中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院生物化学与分子生物学系医学分子生物学国家重点实验室北京100005 国家人口和计划生育委员会科学技术研究所生殖生理学实验室北京100081

目的原核表达并纯化全长的人精子肌动蛋白样蛋白7a(ACTL7a)蛋白,检测主动免疫ACTL7a产生抗精子抗体后小鼠睾丸的损伤情况。方法构建重组表达质粒pET30a-ACTL7a,以重组质粒转化*** Rosseta(DE3),异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导目的蛋白表... 详细信息

目的原核表达并纯化全长的人精子肌动蛋白样蛋白7a(ACTL7a)蛋白,检测主动免疫ACTL7a产生抗精子抗体后小鼠睾丸的损伤情况。方法构建重组表达质粒pET30a-ACTL7a,以重组质粒转化*** Rosseta(DE3),异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导目的蛋白表达,通过镍离子金属螯合树脂纯化和SDS-PAGE切胶分离目的蛋白,溶胶后以表达的ACTL7a蛋白免疫ICR小鼠。ELISA检测抗体效价,PAS染色检测主动免疫后曲细精管的发育。结果经IPTG诱导,在大肠杆菌中表达出目的蛋白ACTL7a,纯化后免疫ICR小鼠,经PAS染色发现主动免疫ACTL7a的小鼠其睾丸曲细精管出现生精细胞脱落、核凝聚、生精细胞缺如、生精细胞退化等异常的管腔。结论成功构建了ACTL7a基因全长的原核表达载体,经诱导表达和纯化获得高纯度的目的蛋白。发现ACTL7a蛋白主动免疫ICR小鼠产生抗精子抗体后,小鼠睾丸的曲细精管发生严重损伤。

关键词：肌动蛋白样蛋白7a 表达纯化主动免疫抗精子抗体

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：