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热激诱导Jurkat细胞中主要组织相容性复合物Ⅱ类转录激活因子基因和人白细胞抗原的表达

中国医学科学院学报 2009年第6期31卷 746-750页

作者：晏丽程谟斌张业沈珝琲中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的检测热激对Jurkat细胞中主要组织相容性复合物Ⅱ类转录激活因子(CⅡTA)的表达,及其对下游人类白细胞抗原(HLA-DR)表达的影响。方法采用实时RT-PCR检测42℃热激和干扰素-γ(IFN-γ)作用前后Jurkat细胞中CⅡTA mRNA的变化。采用Wester... 详细信息

目的检测热激对Jurkat细胞中主要组织相容性复合物Ⅱ类转录激活因子(CⅡTA)的表达,及其对下游人类白细胞抗原(HLA-DR)表达的影响。方法采用实时RT-PCR检测42℃热激和干扰素-γ(IFN-γ)作用前后Jurkat细胞中CⅡTA mRNA的变化。采用Western blot检测热激和IFN-γ作用前后Jurkat细胞中CⅡTA蛋白的表达变化。采用流式细胞仪荧光分析热激前后Jurkat细胞表面HLA-DR的表达。结果在Jurkat细胞中,热激可诱导CⅡTAmRNA和蛋白的表达,而IFN-γ处理后无明显变化。与正常Jurkat细胞相比,热激后HLA-DR在Jurkat细胞表面的抗原浓度明显增加(P<0.01)。结论热诱导Jurkat细胞中CⅡTA和HLA-DR先后表达增高。提示热激可能在免疫基因表达缺陷的细胞中,重建相关基因的功能,为肿瘤热疗提供新的依据。

关键词：热激 Jurkat细胞主要组织相容性复合物Ⅱ类转录激活因子人白细胞抗原

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PIH1D1对染色质重塑复合物SNF5亚基降解的影响

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中国医学科学院学报 2009年第6期31卷 756-759页

作者：翟妞张业沈珝琲中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的探讨PIH1D1对其结合蛋白SNF5的稳定性的影响。方法通过蛋白合成抑制剂环己酰亚胺(CHX)和蛋白酶体抑制剂MG132抑制作用找到SNF5的降解路径,而后转染PIH1D1真核表达质粒,探讨其对SNF5稳定性的影响。结果得到CHX和MG132的最佳作用浓度;... 详细信息

目的探讨PIH1D1对其结合蛋白SNF5的稳定性的影响。方法通过蛋白合成抑制剂环己酰亚胺(CHX)和蛋白酶体抑制剂MG132抑制作用找到SNF5的降解路径,而后转染PIH1D1真核表达质粒,探讨其对SNF5稳定性的影响。结果得到CHX和MG132的最佳作用浓度;SNF5通过蛋白酶体依赖的途径降解;PIH1D1抑制SNF5的降解,从而稳定SNF5。结论PIH1D1可能通过阻断蛋白酶体依赖途径,抑制SWI/SNF染色质重塑复合物SNF5亚基的降解,从而起到稳定SNF5的作用。

关键词： SWI/SNF染色质重塑复合物 SNF5 PIH1D1 蛋白酶体依赖降解

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人精子肌动蛋白样蛋白7a蛋白在大肠杆菌系统的表达纯化及多克隆抗体制备

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细胞与分子免疫学杂志 2013年第5期29卷 507-510页

作者：付俊缪时英宋伟中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室生物化学与分子生物学系北京100005

目的在大肠杆菌系统表达并纯化人精子肌动蛋白样蛋白7a(ACTL7a)的N段(1-70),制备兔抗ACTL7a多克隆抗体。方法构建重组表达质粒pGEX-6p-1-ACTL7a(1-70),以重组质粒转化*** BL21(DE3),筛选阳性重组菌,IPTG诱导目的蛋白表达,通过镍离子金... 详细信息

目的在大肠杆菌系统表达并纯化人精子肌动蛋白样蛋白7a(ACTL7a)的N段(1-70),制备兔抗ACTL7a多克隆抗体。方法构建重组表达质粒pGEX-6p-1-ACTL7a(1-70),以重组质粒转化*** BL21(DE3),筛选阳性重组菌,IPTG诱导目的蛋白表达,通过镍离子金属螯合树脂和谷胱甘肽琼脂糖凝胶4B树脂两次亲和纯化和分子筛分离目的蛋白;以表达的ACTL7a(1-70)蛋白免疫新西兰大白兔,制备抗ACTL7a的多克隆抗体。ELISA检测抗体效价,Western blot法鉴定抗体特异性,免疫荧光组织化学技术检测ACTL7a在曲精小管细胞的表达。结果经IPTG诱导,在大肠杆菌中表达出目的蛋白ACTL7a(1-70),纯化后免疫新西兰大白兔,成功获得抗血清。血清效价达到1:160000以上,且具有良好的特异性。结论成功构建了ACTL7a基因的原核表达载体,并在大肠杆菌中诱导表达,经纯化获得高纯度的目的蛋白;制备出兔抗ACTL7a抗体,效价及特异性均良好。

关键词： ACTL7a 原核表达多克隆抗体

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microRNAs在血液细胞分化及相关肿瘤中的作用

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中国医学科学院学报 2007年第3期29卷 425-429页

作者：杨桂花王芳张俊武中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

microRNAs（miRNAs）是一类普遍存在的长度约为21-25个核苷酸的小分子RNA，通过与靶mRNA3^＋端非编码区互补结合在转录后水平抑制靶基因的表达。血细胞形成是一个包括多个基因有序的开启和关闭，复杂而又精密的调控过程，调控异常会导... 详细信息

microRNAs（miRNAs）是一类普遍存在的长度约为21-25个核苷酸的小分子RNA，通过与靶mRNA3^＋端非编码区互补结合在转录后水平抑制靶基因的表达。血细胞形成是一个包括多个基因有序的开启和关闭，复杂而又精密的调控过程，调控异常会导致各种血液病的发生。miRNA参与了造血调控并与某些血液系统肿瘤的发生相关。

关键词： miRNAs 血细胞分化血液系统肿瘤

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复杂疾病遗传分析的现状、问题和展望

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中国医学科学院学报 2009年第6期31卷 661-663页

作者：方福德中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

本文评述了复杂疾病遗传分析的现状和存在的主要问题,提出了一些解决问题的意见与建议,并对该领域未来发展方向和趋势作了展望。

关键词：复杂疾病遗传分析问题与建议展望

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组蛋白赖氨酸甲基转移酶Setd7促进Ngn1基因的表达

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中国医学科学院学报 2009年第6期31卷 692-695页

作者：戴津泼张业沈珝琲中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的构建小鼠组蛋白赖氨酸甲基转移酶Setd7真核表达载体并初步探讨其对神经细胞分化的影响。方法采用基因工程技术,克隆小鼠Setd7基因并将其插入真核表达载体pCMV-3tag-6中,之后转染HEK293T细胞,West-ern blot验证其表达;利用实时荧光定... 详细信息

目的构建小鼠组蛋白赖氨酸甲基转移酶Setd7真核表达载体并初步探讨其对神经细胞分化的影响。方法采用基因工程技术,克隆小鼠Setd7基因并将其插入真核表达载体pCMV-3tag-6中,之后转染HEK293T细胞,West-ern blot验证其表达;利用实时荧光定量PCR技术检测在神经分化模型(全反式维甲酸诱导P19神经分化)中,Setd7对神经分化关键基因Ngn1的调控;利用双荧光素酶报告系统检测Setd7对Ngn1启动子活性的影响;构建小鼠Setd7siRNA干扰质粒,利用实时荧光定量PCR技术检测其抑制效果以及对Ngn1mRNA表达的影响。结果成功构建了小鼠Setd7基因的真核表达载体,可在HEK293T细胞中有效表达;Setd7可促进Ngn1mRNA表达;Setd7能够促进Ngn1启动子活性;降低Setd7抑制Ngn1mRNA表达。结论组蛋白赖氨酸甲基转移酶Setd7能够促进神经分化关键基因Ngn1的转录。

关键词： Setd7 神经分化 Ngn1

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基于蛋白质跨外膜自转运系统的细菌细胞表面蛋白展示技术研究进展

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微生物学报 2022年第2期62卷 458-475页

作者：蔡锟储引娣黄丕英韦良婉范恩国中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院病原学系医学分子生物学国家重点实验室北京100005

革兰氏阴性菌Ⅴ型分泌系统是细菌病原蛋白分泌的主要途径之一,可分为Ⅴa–eⅤ5个亚型,其中Ⅴa型(即经典的单体自转运蛋白)是细菌毒力和黏附因子向细胞外分泌的重要工具,其在内膜Sec易位子和外膜BAM蛋白复合体的协助下,通过2个连续的跨... 详细信息

革兰氏阴性菌Ⅴ型分泌系统是细菌病原蛋白分泌的主要途径之一,可分为Ⅴa–eⅤ5个亚型,其中Ⅴa型(即经典的单体自转运蛋白)是细菌毒力和黏附因子向细胞外分泌的重要工具,其在内膜Sec易位子和外膜BAM蛋白复合体的协助下,通过2个连续的跨膜步骤介导蛋白质穿过阴性菌的内外膜。据信Ⅴa型是目前已知蛋白质跨膜转运时最简单的分泌途径,故该蛋白质分泌系统作为一种生物工程手段被认为是进行外源蛋白细菌细胞表面展示的理想系统。本文概括了目前已知的自转运蛋白的种类、结构域组成及其可能的分泌机理,总结基于自转运蛋白构建细菌细胞表面展示系统的生物工程应用,特别是其在疫苗研发领域的最新研究进展,并探讨了其在病原体检测方面的潜在应用,以期深入拓展该分泌系统在生物工程方面的应用。

关键词：自转运蛋白细菌细胞表面蛋白展示蛋白质分泌活疫苗生物工程技术

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应用原位双膜法快速筛选人Flt3配体甲醇酵母高表达转化子

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生物化学与生物物理进展 2002年第2期29卷 307-310页

作者：张艳丽陈松森杨克恭狄旭熊安琪张友鸿中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

原位双膜法是一种基于免疫原理的快速筛选高表达甲醇酵母转化子的方法 ,即首先将固体培养基上的菌落转印至醋酸纤维素薄膜上 ,再利用硝酸纤维素薄膜原位捕获穿过醋酸纤维素薄膜的菌落外泌蛋白 ,然后用免疫方法检测与硝酸纤维素薄膜结合... 详细信息

原位双膜法是一种基于免疫原理的快速筛选高表达甲醇酵母转化子的方法 ,即首先将固体培养基上的菌落转印至醋酸纤维素薄膜上 ,再利用硝酸纤维素薄膜原位捕获穿过醋酸纤维素薄膜的菌落外泌蛋白 ,然后用免疫方法检测与硝酸纤维素薄膜结合的蛋白 .利用此法筛选到人Flt3配体 (hFL)的甲醇酵母高表达转化子 ,液体诱导表达量约 2 0mg L .ELISA结果证明 ,原位双膜法所得的菌落染色强度与该菌落液体诱导表达水平正相关 .蛋白质印迹结果显示 ,培养上清在 2 5ku处有明显杂交条带 ,而对照组杂交呈阴性 ,且表达量随诱导天数增加 .原位双膜法是一种良好的筛选方法 ,可以快捷、准确地筛选高表达酵母转化子 .

关键词：原位双膜法人Flt3配体甲醇酵母高表达转化子表达巴斯德毕赤酵母

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连接介导PCR及其在体内足迹研究中的应用

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生物化学与生物物理进展 1997年第3期24卷 224-227页

作者：纪新军刘德培梁植权中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

连接介导聚合酶链反应是以连接反应为基础的单侧PCR技术 ,首先在DNA片段的一端连接上一个公共连接子 ,而后在这个连接子与另一个DNA序列特异的引物间扩增 .Vent聚合酶的使用 ,延伸产物捕获及连接子标记选择策略的采用 ,大大提高了连接... 详细信息

连接介导聚合酶链反应是以连接反应为基础的单侧PCR技术 ,首先在DNA片段的一端连接上一个公共连接子 ,而后在这个连接子与另一个DNA序列特异的引物间扩增 .Vent聚合酶的使用 ,延伸产物捕获及连接子标记选择策略的采用 ,大大提高了连接介导聚合酶链反应的敏感性 .

关键词：连接介导PCR 连接子体内足迹法聚合酶链反应

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RRM RNA结合蛋白的结构与功能

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生物化学与生物物理进展 1999年第4期26卷 305-307页

作者：杜光伟周严袁建刚强伯勤中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

ＲＲＭＲＮＡ结合蛋白是一类含一个或数个ＲＲＭ结构域及附属结构域的ＲＮＡ结合蛋白，参与ＲＮＡ前体的剪接、ＲＮＡ的细胞定位、ＲＮＡ的稳定性等多种转录后调控过程．在ＲＲＭ基序中含有许多保守... 详细信息

ＲＲＭＲＮＡ结合蛋白是一类含一个或数个ＲＲＭ结构域及附属结构域的ＲＮＡ结合蛋白，参与ＲＮＡ前体的剪接、ＲＮＡ的细胞定位、ＲＮＡ的稳定性等多种转录后调控过程．在ＲＲＭ基序中含有许多保守的氨基酸以保证对ＲＮＡ的结合活性，但是这一家族的不同蛋白质却能特异地结合各种不同的ＲＮＡ分子．ＲＲＭＲＮＡ

关键词：转录后调控 RNA结合蛋白 RRM基序

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