检索结果-内蒙古大学图书馆

基础医学与临床 2012年第2期32卷 133-137页

作者：曲学彬曾洋刘星霞赵春华中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所组织工程中心北京100005

目的探讨骨髓Sca-1+间充质干细胞(BMSCs)在迟发型超敏反应(DTH)小鼠中的免疫调控作用。方法 BALB/c小鼠随机分为对照组及MSCs注射组。注射组于0、2及6 d腹腔注射Sca-1+BMSCs,对照组注射0.9%氯化钠注射液。所有小鼠在7和14 d时分别于背... 详细信息

目的探讨骨髓Sca-1+间充质干细胞(BMSCs)在迟发型超敏反应(DTH)小鼠中的免疫调控作用。方法 BALB/c小鼠随机分为对照组及MSCs注射组。注射组于0、2及6 d腹腔注射Sca-1+BMSCs,对照组注射0.9%氯化钠注射液。所有小鼠在7和14 d时分别于背部皮下与足跖注射C57BL/6小鼠脾细胞。24 h后用千分尺测量小鼠足跖的肿胀,ELISA法测外周血细胞因子及FACS法测脾脏免疫细胞比例。结果注射组小鼠足跖的肿胀程度[(0.368±0.126)mm]显著轻于对照组[(0.731±0.111)mm,P<0.01]。注射组外周血中IL-10和TGF-β含量显著高于对照组(P<0.05);而IL-12和TNF-α水平显著低于对照组(P<0.05)。注射组小鼠脾脏调节型T细胞和树突细胞的比例均明显高于对照组(P<0.05)。结论 BMSC通过上调抑炎因子和调节型免疫细胞的数量而减轻DTH小鼠的免疫反应。

关键词：间充质干细胞迟发型超敏反应免疫反应

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体外诱导人羊膜上皮细胞分化为胰岛素分泌细胞的研究

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中国应用生理学杂志 2012年第2期28卷 139-143,I0002页

作者：赵玉洁方宁陈代雄余丽梅喻皇飞赵春华遵义医学院附属医院贵州省细胞工程重点实验室贵州遵义563003 中国医学科学院基础医学研究所组织工程中心北京100005

目的:通过体外诱导分化实验,探讨人羊膜上皮细胞(hAECs)向胰岛素分泌细胞(ISCs)分化的能力。方法:采用胰蛋白酶消化法从人羊膜组织分离提取hAECs,用流式细胞仪和免疫细胞化学法进行鉴定。取第3代hAECs在含尼克酰胺和N2补充物的无血清培... 详细信息

目的:通过体外诱导分化实验,探讨人羊膜上皮细胞(hAECs)向胰岛素分泌细胞(ISCs)分化的能力。方法:采用胰蛋白酶消化法从人羊膜组织分离提取hAECs,用流式细胞仪和免疫细胞化学法进行鉴定。取第3代hAECs在含尼克酰胺和N2补充物的无血清培养基中诱导培养,分别于诱导不同时间采用免疫细胞化学法检测胰岛素和β2微球蛋白的表达,采用放射免疫法检测上清液中胰岛素含量,采用RT-PCR检测胰岛素mRNA和胰十二指肠同源异型盒因子-1(PDX-1)mRNA的表达。结果:①hAECs高表达CD29、CD73、CD166和CK19;②hAECs诱导组第7、142、1天胰岛素阳性细胞百分率分别为74.00%±1.73%、75.33%±1.15%和75.67%±0.58%,而对照组未见胰岛素阳性细胞;③hAECs诱导组第7、14、21天培养物上清液中胰岛素含量分别达(328.47±3.22)μIU/ml、(332.26±1.22)μIU/ml和(329.68±2.57)μIU/ml,均显著高于对照组(P均<0.01);④hAECs诱导前后均有PDX-1 mRNA和β2微球蛋白表达,胰岛素mRNA表达仅见于诱导组。结论:hAECs能分化为ISCs,在Ⅰ型糖尿病细胞移植治疗方面具有潜在应用前景。

关键词：人羊膜上皮细胞胰岛素分泌细胞诱导分化

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人羊膜上皮细胞在大鼠受损肝组织中分化为肝细胞

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基础医学与临床 2012年第9期32卷 998-1003页

作者：宫黎明方宁陈代雄万卫红章涛余丽梅赵春华遵义医学院附属医院贵州省细胞工程重点实验室贵州遵义563003 中国医学科学院基础医学研究所组织工程中心北京100005

目的探讨人羊膜上皮细胞在大鼠损伤肝原位植活及向肝细胞分化。方法用胰蛋白酶消化法从羊膜组织中分离人羊膜上皮细胞(hAECs),用流式细胞术和免疫荧光染色进行表型分析和细胞鉴定。腹腔注射D-氨基半乳糖溶液建立大鼠肝损伤模型,随机分为... 详细信息

目的探讨人羊膜上皮细胞在大鼠损伤肝原位植活及向肝细胞分化。方法用胰蛋白酶消化法从羊膜组织中分离人羊膜上皮细胞(hAECs),用流式细胞术和免疫荧光染色进行表型分析和细胞鉴定。腹腔注射D-氨基半乳糖溶液建立大鼠肝损伤模型,随机分为hAECs移植组和对照组,每组20只。造模后24 h用微量注射器于肝左、中、右叶3点分别移植L-DMEM悬浮的hAECs悬液50μL(约1×106个细胞),对照组注射等量L-DMEM。于移植后48 h、1、2和4周处死各实验组5只大鼠,取肝脏制备冰冻切片,用免疫荧光双染色检查hAECs在受损肝原位的植活、分布及其向肝细胞分化的标志物表达。结果 1)FCM分析和免疫荧光染色结果显示,所分离的hAECs表达CD29、CD166及CK19,几乎不表达CD44、CD80、CD86、HLA-DR及波形蛋白;2)免疫荧光双染色结果显示,hAECs移植后1周主要定植于肝小叶且表达AFP,至2周表达CK18,至4周表达Alb。结论 hAECs在大鼠受损肝组织中能被植活且可分化为肝细胞,提示hAECs移植在临床肝病的治疗方面可能具有潜在应用价值。

关键词：人羊膜上皮细胞移植分化肝细胞肝损伤

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脑源性神经营养因子对脑梗死大鼠神经细胞凋亡及Bcl-2、Bax蛋白表达的影响

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中国微侵袭神经外科杂志 2012年第11期17卷 514-517页

作者：关健戴建武佟伟民杜世伟王任直中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院神经外科 100730 中国科学院遗传与发育生物学研究所组织工程研究实验室北京100101 中国医学科学院基础医学研究所实验动物中心北京100730

目的探讨侧脑室内立体定向注射脑源性神经营养因子(BDNF)对脑梗死大鼠神经细胞凋亡及Bcl-2、Bax蛋白表达的影响。方法 32只SD大鼠成功制作大脑中动脉闭塞模型,随机分为BDNF组(n=16)和对照组(n=16),在两组大鼠侧脑室内分别注射10μl BDN... 详细信息

目的探讨侧脑室内立体定向注射脑源性神经营养因子(BDNF)对脑梗死大鼠神经细胞凋亡及Bcl-2、Bax蛋白表达的影响。方法 32只SD大鼠成功制作大脑中动脉闭塞模型,随机分为BDNF组(n=16)和对照组(n=16),在两组大鼠侧脑室内分别注射10μl BDNF溶液(0.5μmol)和10μl磷酸盐缓冲液(PBS液)。注射2周后,2组大鼠分别行神经功能严重性评分(mNSS)及梗死面积测定,应用免疫组化染色、Western blot分析脑组织Bcl-2、Bax蛋白的表达,Tunel检测细胞凋亡。结果与对照组比较,BDNF组脑梗死面积缩小,神经细胞凋亡数少,Bax蛋白表达低,Bcl-2蛋白表达高,短期内神经功能恢复好,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论 BDNF可能通过调节Bcl-2、Bax蛋白表达,减少神经细胞凋亡,改善脑缺血大鼠的功能。

关键词：梗塞大脑中动脉神经营养因子脑源性细胞凋亡模型动物大鼠

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慢性粒细胞白血病肿瘤干细胞的免疫调节功能

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基础医学与临床 2011年第4期31卷 404-408页

作者：王椋曲学彬赵春华中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院组织工程中心北京100005

目的研究慢性粒细胞白血病(CML)骨髓来源的肿瘤干细胞的免疫学特征,比较其与正常人来源的间充质干细胞(MSC)是否存在免疫功能的异常。方法分离正常人和CML患者骨髓中的MSC,MLR法检测其对T细胞增殖的影响,流式细胞术检测其对T细胞周期、... 详细信息

目的研究慢性粒细胞白血病(CML)骨髓来源的肿瘤干细胞的免疫学特征,比较其与正常人来源的间充质干细胞(MSC)是否存在免疫功能的异常。方法分离正常人和CML患者骨髓中的MSC,MLR法检测其对T细胞增殖的影响,流式细胞术检测其对T细胞周期、凋亡的作用情况。结果 CML和正常志愿者骨髓来源的MSC的细胞形态和表型没有差异,CML患者来源的MSC抑制T细胞增殖能力和抑制T细胞停留在G0/G1期的作用均减弱(CML MSC组74.5%±1.2%,BMSC组94.0%±1.9%,P<0.05),CML患者抑制T细胞凋亡的作用增强(CMLMSC组8.36%±1.31%,BMSC组14.10%±0.65%,P<0.05)。结论 CML患者骨髓来源的MSC存在明显的免疫调节功能缺陷,如果使用CML患者自体的MSC移植治疗可能不是一种很好的选择,对于CML患者最好是选用异基因的MSC移植。

关键词：慢性粒细胞白血病间充质干细胞免疫调节

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人骨髓间充质干细胞抵抗化疗性DNA损伤

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解剖学报 2011年第4期42卷 503-508页

作者：梁伟李静赵春华章静波安徽医科大学第一附属医院妇产科合肥230022 北京协和医学院基础医学研究所组织工程中心北京100005

目的探讨人骨髓间充质干细胞(BMSCs)耐受化疗药物损伤的作用机制。方法分离培养人BMSCs;用免疫荧光等方法检测体外培养的BMSCs对3种化疗药物顺铂、长春新碱和喜树碱处理后的反应;分析凋亡诱导基因家族p53和p73的表达情况。结果与敏感的... 详细信息

目的探讨人骨髓间充质干细胞(BMSCs)耐受化疗药物损伤的作用机制。方法分离培养人BMSCs;用免疫荧光等方法检测体外培养的BMSCs对3种化疗药物顺铂、长春新碱和喜树碱处理后的反应;分析凋亡诱导基因家族p53和p73的表达情况。结果与敏感的肿瘤细胞系K562相比,体外培养BMSCs对3种化疗药物有较高的耐受性;临床剂量的化疗药物处理后,细胞的表型、增殖和分化及衰老指标均无改变;与敏感的肿瘤细胞系K562相比,亚凋亡剂量化疗药物的处理导致BMSCs内出现与凋亡诱导无关的p53表达增高;BMSCs内p73的表达量明显低于K562细胞系,且药物的处理未能改变其表达水。结论体外培养的BMSCs能耐受多种化疗药物的促凋亡作用并在药物处理结束后仍保持其干细胞的特性;BMSCs的抗损伤状态可能与细胞内低水平的p73表达量有关;p73蛋白可能在BMSCs抗损伤调节中具有重要的作用。

关键词：骨髓间充质干细胞化疗抵抗免疫荧光

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干扰p73基因对脂肪间充质干细胞向神经细胞分化的影响

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安徽医科大学学报 2011年第12期46卷 1260-1263页

作者：梁伟夏海龙李静赵春华安徽医科大学第一附属医院细胞治疗与组织工程中心合肥230022 清华大学北京协和医学院组织工程中心北京100005

目的研究抑制p73蛋白的表达,对体外培养的脂肪来源间充质干细胞向骨、脂肪和神经细胞方向分化的影响。方法①流式细胞仪研究抑制p73的表达对人脂肪源间充质干细胞免疫表型影响;②体外转染的脂肪间充质干细胞向成骨和脂肪方向诱导,观察抑... 详细信息

目的研究抑制p73蛋白的表达,对体外培养的脂肪来源间充质干细胞向骨、脂肪和神经细胞方向分化的影响。方法①流式细胞仪研究抑制p73的表达对人脂肪源间充质干细胞免疫表型影响;②体外转染的脂肪间充质干细胞向成骨和脂肪方向诱导,观察抑制p73的表达对其分化能力的影响;③体外诱导脂肪间充质干细胞神经细胞分化,实时定量PCR分析抑制p73的表达对其向神经细胞分化的影响。结果抑制p73的表达,对脂肪间充质干细胞的免疫表型以及成骨和成脂分化无明显影响,但影响细胞在体外向神经细胞分化的能力。结论 p53家族蛋白成员p73在脂肪间充质干细胞体外向神经细胞的分化的过程中起重要的作用。

关键词：脂肪源间充质干细胞神经细胞分化 p73 神经分化

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非病毒诱导体系高效诱导脐带来源间充质干细胞向胰岛细胞分化

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中国医学科学院学报 2011年第6期33卷 675-678,I0017页

作者：李晶朱莉赵春华中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所组织工程研究中心北京100005

目的探讨非病毒法诱导脐带来源间充质干细胞(UC-MSC)向胰岛素分泌细胞分化的可行性,为胰岛细胞移植治疗糖尿病提供临床移植数量级的细胞。方法从人脐带分离间充质干细胞,体外分阶段诱导分化为胰岛细胞。采用RT-PCR方法比较胰岛细胞分化... 详细信息

目的探讨非病毒法诱导脐带来源间充质干细胞(UC-MSC)向胰岛素分泌细胞分化的可行性,为胰岛细胞移植治疗糖尿病提供临床移植数量级的细胞。方法从人脐带分离间充质干细胞,体外分阶段诱导分化为胰岛细胞。采用RT-PCR方法比较胰岛细胞分化过程中转录因子foxa2、sox17、pdx1、ngn3、pax4、insulin和glut-2在诱导组和非诱导组中的表达水平;免疫荧光染色方法检测胰岛素和C-肽在诱导终末阶段细胞中的表达定位;酶联免疫吸附实验(ELISA)检测胰岛素及C-肽的分泌以及细胞对葡萄糖刺激的反应性。结果诱导第1阶段末,诱导后细胞foxa2和sox17的表达明显高于未诱导细胞(P均<0.05);诱导第2阶段末,诱导细胞pdx1、ngn3和pax4的表达明显高于未诱导细胞(P均<0.05);诱导第3阶段末,诱导细胞的insulin和glut-2表达明显高于未诱导细胞(P均<0.05)。免疫荧光染色结果显示,胰岛素和C-肽均表达于诱导终末分化阶段的细胞,效率可达90%以上。ELISA检测结果显示,诱导第3阶段末细胞胰岛素总量为(346.3 739±32.5 149)μU/ml,明显高于未诱导细胞的(17.69±1.46)μU/ml(P<0.01);诱导后细胞置于5.5 mmol/L葡萄糖环境检测到的基础C-肽释放量为(195.10±8.88)pmol/L/h(P<0.01),细胞置于22 mmol/L葡萄糖环境测定葡萄糖刺激C-肽释放量达到(340.99±7.91)pmol/L/h(P<0.01)。结论以UC-MSC作为种子细胞,采用体外非病毒诱导体系获得的分化终末阶段细胞是具有胰岛素分泌功能的成熟胰岛细胞。

关键词：脐带间充质干细胞胰岛细胞转录因子

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microRNA-21可调控Flk1+间充质干细胞的迁移

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基础医学与临床 2011年第4期31卷 355-359页

作者：王世华黄姗边春景赵春华中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所组织工程研究中心北京100005

目的用microRNA-21抑制剂转染Flk1+间充质干细胞(MSC),探讨microRNA-21对Flk1+MSC(MSC)迁移的影响。方法在脂质体介导下用microRNA-21抑制剂瞬时转染Flk1+MSC,用Transwell技术检测细胞迁移,用Real-time PCR技术检测micro-RNA的表达。结果与对照组相比,实验组中microRNA-21表达明显下调,实验组细胞在12、16和20 h迁移率分别是对照组的77.5%、71.3%和69.8%。结论 microRNA-21可调控Flk1+MSC的迁移。

关键词： microRNA-21 间充质干细胞迁移

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移植骨髓间充质干细胞对大鼠脑梗死后神经元凋亡的影响

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协和医学杂志 2011年第1期2卷 19-23页

作者：包新杰魏俊吉冯铭卢珊赵春华王任直中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院神经外科北京100730 中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所组织工程中心北京100730

目的探讨移植骨髓间充质干细胞(bone marrow-derived mesenchymal stemcells,BMSCs)治疗大鼠脑梗死及其减轻半暗带神经元的凋亡作用。方法采集成人志愿者骨髓,分离培养BMSCs;线栓法建立大鼠大脑中动脉栓塞(middle cerebral artery occlu... 详细信息

目的探讨移植骨髓间充质干细胞(bone marrow-derived mesenchymal stemcells,BMSCs)治疗大鼠脑梗死及其减轻半暗带神经元的凋亡作用。方法采集成人志愿者骨髓,分离培养BMSCs;线栓法建立大鼠大脑中动脉栓塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)2h再灌注脑梗死模型;建模后第3天分别立体定向脑内移植5×105BMSCs和等量生理盐水,改良神经功能损害评分(modified neurological severity scores,mNSS)观察神经功能恢复;建模后第14天TUNEL法检测梗死周边神经细胞凋亡;建模后第28天免疫荧光染色检测梗死周边神经元的存活;采用依红-苏木素染色评估梗死体积。结果治疗组和对照组比较,梗死周边TUNEL阳性细胞显著减少(P=0.017),而神经元核抗原(neuronal nuclei antigen,NeuN)阳性细胞显著增多(P=0.015);同时,BMSCs可显著降低MCAO大鼠的相对梗死体积(P=0.041);mNSS评分显示,从MCAO后第14天开始,治疗组评分均显著低于对照组(P<0.05)。结论脑梗死急性期移植BMSCs可显著减少半暗带神经元凋亡,缩小梗死范围,有效促进神经功能的恢复。

关键词：脑梗死间充质干细胞神经元凋亡

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