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Ferumoxide标记Flk1^+CD31^-CD34^-人骨髓间充质干细胞及其在食蟹猴脑内移植示踪观察

中国医学科学院学报 2008年第5期30卷 559-563,I0002页

作者：冯铭王任直朱华张楠王常郡魏俊吉卢姗李秦尹晓明韩钦马文斌秦川赵春华安沂华孔燕国中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院神经外科北京100730 中国医学科学院北京协和医学院实验动物研究所病理室北京100021 煤炭总医院神经外科北京100018 中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所组织工程中心北京100730 北京神经外科研究所神经干细胞室北京100050

目的探讨Ferumoxide-PLL标记Flk1+CD31-CD34-人骨髓间充质干细胞(hBMSC)的方法及其在食蟹猴脑实质内移植活体示踪的可行性。方法采用Ferumoxide-PLL标记hBMSC,台盼蓝染色、普鲁士蓝染色和透射电镜扫描鉴定标记效率及细胞活力。体外磁共... 详细信息

目的探讨Ferumoxide-PLL标记Flk1+CD31-CD34-人骨髓间充质干细胞(hBMSC)的方法及其在食蟹猴脑实质内移植活体示踪的可行性。方法采用Ferumoxide-PLL标记hBMSC,台盼蓝染色、普鲁士蓝染色和透射电镜扫描鉴定标记效率及细胞活力。体外磁共振成像(MRI)分别扫描标记和未标记细胞,计算T2*的弛豫时间和弛豫率(R2*)变化。通过立体定向手术将标记的hBMSC移植入食蟹猴右侧基底节区,采用MRI扫描活体示踪细胞。采用免疫组织化学、普鲁士蓝和HE染色对脑组织切片进行干细胞存活、分化及病理学研究。结果Ferumoxide-PLL标记hBMSC效率为96%,普鲁士蓝染色、电镜可显示标记hBMSC细胞质内铁颗粒。1×106和5×105两组Ferumoxide-PLL标记细胞的T2*的弛豫时间分别为68.86和79.88ms,而未标记细胞分别为12.71和15.24ms。标记细胞的R2*分别为78.68和65.61/s,分别是未标记细胞(14.52和12.52/s)的5.4和5.2倍。移植后3周MRI扫描T2WI仍可发现hBMSC呈明显的低信号。病理及免疫荧光结果显示hBMSCs在移植区大量存活,移植区有大量新生血管,但未见hBMSC向神经细胞分化。结论Ferumoxide-PLL可高效标记hBMSC,能显著增加其MRI图像对比度。MRI可活体示踪干细胞。移植入食蟹猴脑内的hBMSC可大量存活并促进新生血管形成。

关键词：超顺磁性氧化铁间充质干细胞细胞移植磁共振成像食蟹猴

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成骨诱导或干扰素γ预处理对胎儿骨髓源Flk-1^+间充质干细胞免疫活性的调节

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中国组织工程研究与临床康复 2008年第43期12卷 8529-8534页

作者：张斌刘瑞朱希山豆晓伟刘星霞陈媛赵春华中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院组织工程研究中心北京市100005

背景:骨髓间充质干细胞在修复异基因组织最终分化为特定细胞后,理论上会因MHC及共刺激分子上调而引起组织排斥,但实际上并没有发生排斥反应。推测骨髓间充质干细胞在异基因组织分化诱导及炎性因子微环境作用下,有可能分化成一种仍具有... 详细信息

背景:骨髓间充质干细胞在修复异基因组织最终分化为特定细胞后,理论上会因MHC及共刺激分子上调而引起组织排斥,但实际上并没有发生排斥反应。推测骨髓间充质干细胞在异基因组织分化诱导及炎性因子微环境作用下,有可能分化成一种仍具有免疫调节活性的终末细胞,不被机体的免疫识别系统清除掉。目的:在体外运用成骨诱导及干扰素γ预处理来模拟体内组织分化及炎性因子微环境,观察在此作用下胎儿骨髓源Flk-1+间充质干细胞是否能够保持其在自然条件下所呈现的免疫学活性。设计、时间及地点:细胞学体外对照观察,于2007-09/2008-05在北京协和医学院基础学院完成。材料:2例骨髓样品取自流产胎儿,由北京回龙冠妇产医院提供。外周血样品取自15~35岁健康志愿者,由北京三○七医院提供。地塞米松等诱导因子和干扰素γ为美国Sigma公司产品。方法:Ficoll法分离胎儿骨髓单个核细胞,取白环层以上细胞,以1×106/cm2密度接种,贴壁法纯化,采用阴性分选法去除CD45+、GlyA+和CD34+细胞,分离扩增得到Flk-1+骨髓间充质干细胞。以淋巴细胞分离液梯度离心分离外周血单个核细胞,用于混合淋巴细胞培养实验及有丝分裂原刺激的淋巴细胞增殖实验。主要观察指标:流式细胞仪鉴定细胞表型,用成骨、成脂、成软骨和成内皮诱导液检测其分化潜能,成骨诱导或干扰素γ预处理后细胞表面抗原表达、对淋巴细胞增殖及活化抗原CD69、CD25表达的影响,对白细胞介素10和转化生长因子β分泌水平的影响。结果:光镜下骨髓来源的间充质干细胞为成纤维细胞样贴壁生长,均高表达Flk-1,同时高表达黏附分子CD29、CD44、CD105,造血细胞标志CD34、CD45呈阴性;可向成骨、成脂肪、成软骨和成内皮方向分化;低表达MHC-Ⅰ类分子,不表达MHC-Ⅱ类分子,成骨诱导能上调MHC-Ⅰ表达,干扰素γ预处理可上调MHC-Ⅱ表达。骨髓源Flk-1+间充质干细胞经成骨诱导7d或干扰素γ预处理48h后,仍呈低免疫原性,不激发异基因淋巴细胞增殖,抑制植物血凝素刺激的淋巴细胞增殖效果明显增强(t=2.57,P<0.05),可进一步抑制CD69和CD25的表达,ELISA检测显示其培养上清分泌白细胞介素10水平增强(t=2.66,P<0.05),但分泌转化生长因子β水平经成骨诱导后无明显变化,干扰素γ预处理后则明显升高。结论:经成骨诱导或干扰素γ预处理后,骨髓源Flk-1+间充质干细胞仍能保持低免疫原性,且免疫调节活性进一步提高。

关键词：骨髓间充质干细胞成骨干扰素γ 免疫调节活性

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鼠乳腺干细胞研究进展

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国际肿瘤学杂志 2008年第5期35卷 323-326页

作者：豆晓伟(综述) 刘瑞(综述) 薛社普(审校) 赵春华(审校) 中国协和医科大学中国医学科学院组织工程中心细胞生物学系北京100005

乳腺干细胞是乳腺组织内可以自我更新的细胞亚群，具有分化成导管、腺泡和肌上皮细胞的能力。近年来，多个实验室通过不同的方法确认乳腺干细胞，包括细胞表面标记Sea-1、Hoechst溢出实验、CD24、CD31^-CD45^-Ter119^-CD24^＋CD29^hi等... 详细信息

乳腺干细胞是乳腺组织内可以自我更新的细胞亚群，具有分化成导管、腺泡和肌上皮细胞的能力。近年来，多个实验室通过不同的方法确认乳腺干细胞，包括细胞表面标记Sea-1、Hoechst溢出实验、CD24、CD31^-CD45^-Ter119^-CD24^＋CD29^hi等，为阐明乳腺干细胞的自我更新机制，设计有效的乳腺癌治疗方法提供了新的工具。

关键词：干细胞乳腺动物

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全身照射对小鼠骨髓间充质干细胞细胞衰老相关指标的影响

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中国实验血液学杂志 2008年第6期16卷 1387-1391页

作者：马杰王宏兰李静史明霞李炳宗陈斌胡建立赵春华孙慧郑州大学第一附属医院血液科河南郑州450052 中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所组织工程研究中心北京100005 昆明医学院第一附属医院血液科苏州大学附属第二医院血液科

为了探讨小鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMMSCs)在放射损伤后细胞衰老(cellular senescence)的细胞和分子水平相关指标的变化,本研究采用全身照射(total body irradiation,TBI)小鼠模型,观察4 Gy TBI后4周内不同时间点小鼠BMMSCs的形态学和衰老相关β-半乳糖苷酶(senescence-associatedβ-galactosidase,SA-β-gal)的变化,用流式细胞术分析TBI对BMMSCs细胞周期分布的影响,用实时定量RT-PCR检测细胞衰老相关基因p16INK4a、p21Cip1/Waf1、p53和TGF-β1在TBI前后的表达变化。结果显示,4 Gy TBI后4周内小鼠BMMSC的形态和SA-β-gal的表达无明显变化,也未出现细胞衰老相关的细胞周期阻滞和衰老相关基因表达增高。结论:小鼠BMMSCs在4 Gy TBI后近期内未出现细胞衰老相关的分子水平的改变。

关键词：全身照射骨髓间充质干细胞细胞衰老

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组织工程化人工皮肤研究的新进展

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中国组织工程研究 2007年第6期11卷 1145-1148页

作者：朱希山曾丽芬赵春华中国医学科学院中国协和医科大学组织工程中心中国医学科学院中国协和医科大学组织工程中心北京市100005

目的:回顾组织工程化人工皮肤替代物的优缺点,展望其未来发展的趋势。资料来源:应用计算机检索Pubmed数据库2003-01/2006-08相关组织工程化人工皮肤替代物方面的文献,检索词“tissue engineering skin substitutes”,限定文献语言种类为... 详细信息

目的:回顾组织工程化人工皮肤替代物的优缺点,展望其未来发展的趋势。资料来源:应用计算机检索Pubmed数据库2003-01/2006-08相关组织工程化人工皮肤替代物方面的文献,检索词“tissue engineering skin substitutes”,限定文献语言种类为English;同时计算机检索CNKI2000-01/2006-08相关组织工程化人工皮肤替代物方面的文献,检索词“组织工程化人工皮肤替代物”,并限定文献的语言种类为中文。资料选择:对资料进行初审,选取包括组织工程化人工皮肤替代物的文献,开始查找全文。纳入标准:与组织工程化人工皮肤相关的表皮、真皮及双层皮肤替代物的文献。排除标准:综述文献或重复的研究类文章。资料提炼:共检索到144篇关于组织工程化人工皮肤替代物的文献,最终纳入39篇符合标准的文献。资料综合:组织工程是再生医学研究的热点,人工皮肤是组织工程迄今为止最成功的产品之一,现已广泛应用于临床。本文从自体或异体培养的表皮片真皮替代物及含有表皮和真皮双层结构的皮肤替代物等方面对该领域的最新研究现状进行综述,并探讨了相应组织工程皮肤的应用情况,分析了组织工程化人工皮肤目前存在的问题及未来应用前景。结论:随着种子细胞和支架材料等的不断完善,组织工程化人工皮肤替代物的基础研究和临床应用的未来前景将会更加丰富和广泛。

关键词：组织工程皮肤皮肤替代物综述文献

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病理性瘢痕治疗进展

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中华烧伤杂志 2007年第5期23卷 392-395页

作者：朱希山赵春华北京协和医学院中国医学科学院组织工程研究中心 100005

增生性瘢痕和瘢痕疙瘩是创面愈合过程失控后的不同表达产物，虽然胶原等细胞外间质的过度沉积是两者的共同特点，但它们的生长特点和临床特征明显不同。增生性瘢痕高出皮肤表面但损伤局限在原范围，常在损伤后的4周内出现并随着时间的... 详细信息

增生性瘢痕和瘢痕疙瘩是创面愈合过程失控后的不同表达产物，虽然胶原等细胞外间质的过度沉积是两者的共同特点，但它们的生长特点和临床特征明显不同。增生性瘢痕高出皮肤表面但损伤局限在原范围，常在损伤后的4周内出现并随着时间的推移自行消退，伴有组织挛缩，手术切除后大多数不会复发，胶原分布均匀且细小规则；瘢痕疙瘩高出皮肤表面并向周围增生扩展超出其基底，出现时间晚且不能自行消退，手术切除后常会复发，胶原分布紊乱且粗大呈波浪形。瘢痕的类型、首次治疗是否正确，直接影响着其后续治疗和康复。

关键词：瘢痕治疗病理性增生性瘢痕手术切除后瘢痕疙瘩皮肤表面自行消退细胞外间质

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骨髓间充质干细胞治疗大鼠缺血性脑卒中的实验研究

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中华医学杂志 2007年第3期87卷 184-189页

作者：魏俊吉曾立芬樊晓彤王裕马文斌李桂林窦万臣张振兴栗世方冯铭韩钦李照建张子衡康军孔燕国王任直赵春华中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院神经外科 100730 中国医学科学院中国协和医科大学组织工程中心

目的研究骨髓间充质干细胞(BMSC)对大鼠缺血性脑卒中的治疗作用及治疗机制。方法采集人志愿者骨髓,密度梯度离心法分离、培养 BMSC;建立大脑中动脉栓塞缺血2 h 再灌注大鼠模型,根据神经损伤评分将符合标准的60只脑缺血模型大鼠随机分为... 详细信息

目的研究骨髓间充质干细胞(BMSC)对大鼠缺血性脑卒中的治疗作用及治疗机制。方法采集人志愿者骨髓,密度梯度离心法分离、培养 BMSC;建立大脑中动脉栓塞缺血2 h 再灌注大鼠模型,根据神经损伤评分将符合标准的60只脑缺血模型大鼠随机分为治疗组(BMSC 移植组,48只)和对照组(D-Hanks 液注射组,12只),24 h 后在脑缺血边缘区皮层分别注射 hBMSC 悬液和 D-Hanks 液;移植后第4天开始进行粘贴物移除实验、转棒实验及 Morris 水迷宫实验的循环测试至第32天;治疗组分别在移植后1、2、3及4周分批次处死大鼠,通过免疫荧光技术动态追踪 BMSC 并检测细胞的迁移和分化。结果移植后第1、2周细胞大量存活并向病灶迁移,第3周细胞存活数量明显减少,第4周存活细胞极少;hBMSC 在大鼠脑内没有明确表达微管相关蛋白(MAP)2、胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)和半乳糖脑苷脂(GalC)等神经细胞的特异蛋白。治疗后1周水迷宫平均逃逸时间,治疗组为(69±10)s,对照组为(120±0)s,P<0.05,至第4周两组差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后第10天转棒实验(10 r/min)平均潜伏期,治疗组为(167±18)s,对照组为(37±19)s,P<0.05,至实验终期差异仍有统计学意义。治疗后第13天粘贴物移除实验平均潜伏期,治疗组为(33±8)s,对照组为(84±13)s,P<0.05,至实验终期差异仍有统计学意义。结论 BMSC 脑内移植可以显著改善脑缺血大鼠神经功能的恢复;移植细胞在大鼠脑内可以向病灶周围迁移,但是细胞存活有一定时限性;BMSC 在大鼠脑内没有明确分化为经细胞。

关键词：骨髓干细胞移植脑卒中大脑中动脉梗塞细胞分化

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Dicer基因干扰对乳腺癌细胞MCF-7的影响

Dicer基因干扰对乳腺癌细胞MCF-7的影响

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第四届全国肿瘤学进展学术会议

作者：卜晔路春华边春景王金华杨卓曾丽芬赵春华北京协和医学院基础学院组织工程中心北京东单三条五号 100005

Dicer属于RNaseⅢ家族成员,是参与microRNA合成的重要蛋白质。细胞质中的pre-miRNA在Dicer酶的作用下剪切成21-25 nt的双链成熟的miRNA，miRNA与靶基因mRNA的3UTR不完全互补配对,从而阻断该基因的翻译过程。MicroRNA参与细胞周期和细胞... 详细信息

Dicer属于RNaseⅢ家族成员,是参与microRNA合成的重要蛋白质。细胞质中的pre-miRNA在Dicer酶的作用下剪切成21-25 nt的双链成熟的miRNA，miRNA与靶基因mRNA的3<''>UTR不完全互补配对,从而阻断该基因的翻译过程。MicroRNA参与细胞周期和细胞增殖,通过RNA干扰抑制Dicer基因,从而影响miRNA的合成,本文探讨了此方法对乳腺癌细胞MCF-7的影响,为提高药物疗效提供理论指导。

关键词： Dicer酶 siRNA microRNA 细胞周期药物敏感性乳腺癌细胞MCF-7

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BRCA2和P53联合干扰对乳腺癌变过程的影响

BRCA2和P53联合干扰对乳腺癌变过程的影响

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第四届全国肿瘤学进展学术会议

作者：豆晓伟路春华周虹刘瑞张斌史丹李静赵春华北京协和医学院基础学院组织工程研究中心北京东单三条五号 100005 北京协和医学院基础学院组织工程中心北京东单三条五号 100005

BRCA2和P53在乳腺癌发生中有重要作用。BRCA2基因敲除鼠并没有导致乳腺癌的发生,而BRCA2和P53联合敲除鼠可有乳腺肿瘤发生。本试验目的是分析BRCA2和P53联合作用对乳腺癌变过程的影响。

关键词： p53 BRCA2 RNA干扰乳腺癌细胞乳腺癌变过程

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预扩张动脉岛状皮瓣移植修复面部缺损20例

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中国组织工程研究与临床康复 2007年第16期11卷 3138-3139页

作者：朱希山唐胜建杨彪炳赵春华中国协和医科大学中国医学科学院组织工程中心北京市100005 潍坊医学院整形外科医院山东省潍坊市261041

目的:观察利用预扩张的动脉岛状皮瓣移植修复面部缺损的术后效果。方法:选择1997-01/2004-09在潍坊医学院整形外科研究所行预扩张动脉岛状皮瓣移植修复面部缺损的患者20例,患者均知情同意。所有患者均采用2期手术:Ⅰ期手术对面部缺损或... 详细信息

目的:观察利用预扩张的动脉岛状皮瓣移植修复面部缺损的术后效果。方法:选择1997-01/2004-09在潍坊医学院整形外科研究所行预扩张动脉岛状皮瓣移植修复面部缺损的患者20例,患者均知情同意。所有患者均采用2期手术:Ⅰ期手术对面部缺损或组织畸形的患者行扩张器植入术,按照病损情况酌情植入合适的扩张器,按要求定期注水扩张;Ⅱ期将扩张的皮肤岛状皮瓣转移修复缺损或进行器官再造。皮瓣大小2.5cm×3.5cm-5.0cm×7.5cm,血管蒂最长12.5cm。术后定期随访。结果:20例患者全部进入结果分析,无脱落。20例患者随访6-24个月,其中随访时间≥6个月,<12个月4例;≥12个月,<18个月7例;≥18个月,<24个月9例。患者经Ⅰ期扩张器植入术,Ⅱ期将扩张的皮肤行转移修复病变切除后皮肤缺损或器官再造,皮瓣愈合良好,瘢痕相对较小且无组织器官移位现象,达到功能恢复、外形改善的效果。结论:预扩张岛状皮瓣可提供面积较大的皮瓣供区和较长的血管蒂以增加皮瓣旋转的角度和灵活性,使面颈部缺损修复达到更接近正常的效果。

关键词：皮肤移植外科皮瓣组织扩展面部损伤

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