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中华风湿病学杂志 2014年第12期18卷 798-801页

作者：王立韩钦孔芳陈华师天燕章丽娜李永哲张烜张奉春赵春华中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院风湿免疫科 100730 中国医学科学院北京协和医学院基础所组织工程中心

目的评价骨髓间充质干细胞（BM-MSC）移植对难治型PBC患者的免疫调节作用.方法对10例对熊去氧胆酸（UDCA）生化应答不良的难治型PBC患者行BM-MSC移植后,以配对样本t检验方法评价观察治疗后第1、3、6、12个月的外周血细胞因子及淋巴细... 详细信息

目的评价骨髓间充质干细胞（BM-MSC）移植对难治型PBC患者的免疫调节作用.方法对10例对熊去氧胆酸（UDCA）生化应答不良的难治型PBC患者行BM-MSC移植后,以配对样本t检验方法评价观察治疗后第1、3、6、12个月的外周血细胞因子及淋巴细胞亚群的变化.结果 ①经BM-MSC移植,受试者外周血CD8^＋T细胞比例下降[治疗前（16.8±2.4）％与治疗3个月时（11.2±1.9）％,t=3.04,P=0.014;治疗前（16.8±2.4）％与治疗6个月时（10.1±1.7）％,t=4.79,P=0.001],差异有统计学意义;②BM-MSC移植治疗后,CD4^＋CD25^＋Foxp3^＋T细胞比例升高[治疗前（0.44±0.11）％与治疗6个月时（1.23±0.25）％,t=-2.711,P=0.030],差异有统计学意义;③BM-MSC移植治疗可使受试者外周血IL-10浓度升高[治疗前（1.83±0.23） pg/ml与治疗3个月时（2.67±0.28） pg/ml,t=-4.062,P=0.004],差异有统计学意义.结论 BM-MSC可能通过下调PBC患者外周血CD8^＋T细胞,上调CD4^＋CD25^＋Foxp3^＋T细胞和升高外周血IL-10浓度来实现对PBC患者的体内免疫调节作用.

关键词：肝硬化,胆汁性间质干细胞细胞因子类淋巴细胞亚群 @@

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原发性胆汁性肝硬化骨髓间充质干细胞的功能研究

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中华风湿病学杂志 2014年第11期18卷 726-729页

作者：王立韩钦孔芳陈华李永哲张奉春赵春华中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院风湿免疫科 100032 中国医学科学院北京协和医学院基础所组织工程中心

目的研究PBC患者的骨髓间充质干细胞（BM-MSC）在生长与外分泌功能方面是否存在异常.方法取PBC患者及健康对照的新鲜骨髓,体外提取并扩增BM-MSC,以统计学t检验方法比较其在生长情况和分泌细胞因子情况方面的差异.结果 ①PBC患者BM-MS... 详细信息

目的研究PBC患者的骨髓间充质干细胞（BM-MSC）在生长与外分泌功能方面是否存在异常.方法取PBC患者及健康对照的新鲜骨髓,体外提取并扩增BM-MSC,以统计学t检验方法比较其在生长情况和分泌细胞因子情况方面的差异.结果 ①PBC患者BM-MSC的生长情况与对照组比较差异无统计学意义;②除TGF-β1在PBC患者BM-MSC上清平均水平低于对照组外[（2.6±1.9）与（8.2±6.7） ng/ml,t=-3.641,P=0.001],PBC患者与对照组的BM-MSC在细胞因子分泌功能方面基本一致;③对照组第5代以内的BM-MSC不同代次之间在细胞因子分泌方面功能基本相同,仅在IL-10[原代与第3代（18.5±5.0）与（12.4±3.1） pg/ml,t=2.368,P=0.045]、肝细胞生长因子[原代与第2代（0.21±0.07）与（0.35±0.08） ng/ml,t=-2.874,P=0.021]水平有小范围波动.结论 PBC患者的BM-MSC在生长情况及细胞因子分泌功能方面,除TGF-β1水平略低外,与对照比较差异无统计学意义.对照组MSC第2代细胞可能更适合治疗PBC.

关键词：肝硬化,胆汁性间充质干细胞细胞因子

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BRCA2对乳腺癌癌症干细胞的影响及其机制研究

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医学研究杂志 2015年第3期44卷 56-60页

作者：张军红杨晶王春华袁芳李青李静赵春华河北省邢台市眼科医院/河北省眼病治疗中心/河北省眼科研究所 054000 河北医科大学生理学教研室 050017 贵阳医学院附属医院骨科 550004 组织工程中心中国医学科学院基础医学研究所/北京协和医学院基础学院细胞生物学系100005

目的探讨乳腺癌易感基因2(breast cancer suscepbility gene 2,BRCA2)对上皮型乳腺癌癌症干细胞的影响及从Notch信号角度分析其机制。方法利用本实验室前期建立的反转录病毒干扰载体p MSCVneo/e GFP-U6构建BRCA2的载体,合成慢病毒颗粒,... 详细信息

目的探讨乳腺癌易感基因2(breast cancer suscepbility gene 2,BRCA2)对上皮型乳腺癌癌症干细胞的影响及从Notch信号角度分析其机制。方法利用本实验室前期建立的反转录病毒干扰载体p MSCVneo/e GFP-U6构建BRCA2的载体,合成慢病毒颗粒,转染上皮型乳腺癌细胞系MCF7细胞。筛选出单克隆细胞后,利用Western blot法检测MCF7细胞中干扰BRCA2的效果。球形成试验分析干扰BRCA2后对MCF7上皮型乳腺癌干细胞的影响。克隆形成试验分析BRCA2下调后对MCF7上皮型乳腺癌干细胞增殖能力的影响。Western blot法检测乳腺癌癌症干细胞自我更新因子Notch1和Notch4在干扰BRCA2的上皮型乳腺癌中的影响。结果干扰BRCA2的反转录病毒载体和对照载体测序正确,可以合成反转录病毒。Western blot法发现干扰BRCA2的上皮型乳腺癌细胞系MCF7细胞中BRCA2的表达较对照细胞显著下调。球形成试验结果显示干扰BRCA2的上皮型乳腺癌细胞系MCF7细胞球形成数量较对照细胞显著增加。克隆形成试验结果显示干扰BRCA2的上皮型乳腺癌细胞系MCF7细胞克隆形成能力较对照细胞显著增加。Western blot法检测结果显示干扰BRCA2的上皮型乳腺癌细胞系MCF7细胞中Notch1的表达较对照细胞显著上调,未在对照和干扰BRCA2的MCF7细胞中检测到Notch4的表达。结论BRCA2沉默的上皮型乳腺癌细胞系MCF7细胞可通过上调Notch1表达使其形成癌症干细胞的能力增加。

关键词： BRCA2 乳腺癌癌症干细胞 Notch1

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干细胞分化的表观遗传调控

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遵义医科大学学报 2014年第5期37卷 463-469页

作者：赵春华毛晓晶韩钦中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院组织工程中心

干细胞具有自我更新能力和多谱系细胞分化能力,在基础医学和临床应用中有极大研究意义。以胚胎干细胞为模型,近年来干细胞分化的表观遗传调控已成为研究热点。染色质结构的表观遗传调控,比如DNA甲基化、翻译后组蛋白修饰,对于胚胎发育... 详细信息

干细胞具有自我更新能力和多谱系细胞分化能力,在基础医学和临床应用中有极大研究意义。以胚胎干细胞为模型,近年来干细胞分化的表观遗传调控已成为研究热点。染色质结构的表观遗传调控,比如DNA甲基化、翻译后组蛋白修饰,对于胚胎发育时基因的激活和抑制非常关键。本文综述了干细胞多潜能性维持和干细胞分化的表观遗传机制及其一些表观遗传修饰之间的联系。

关键词：干细胞细胞分化表观遗传

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人羊膜间充质干细胞对大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎的疗效及免疫调节作用

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免疫学杂志 2014年第1期30卷 6-12页

作者：方宁李丹余丽梅章涛赵春华陈代雄遵义医学院附属医院贵州省细胞工程重点实验室 563003 中国医学科学院基础医学研究所组织工程中心北京100005

目的探讨人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)对大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型的治疗效应和免疫调节作用。方法分离、培养hAMSCs,流式细胞术(FCM)检测其免疫表型;用豚鼠脊髓匀浆+完全弗氏佐剂+百日咳毒素复制大鼠EAE模型;模型动物随机... 详细信息

目的探讨人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)对大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型的治疗效应和免疫调节作用。方法分离、培养hAMSCs,流式细胞术(FCM)检测其免疫表型;用豚鼠脊髓匀浆+完全弗氏佐剂+百日咳毒素复制大鼠EAE模型;模型动物随机分为正常对照组、模型组、培养基组、hAMSCs治疗组和泼尼松治疗组,每组6只。hAMSCs治疗组经双侧侧脑室移植5×105个hAMSCs;采用Kono评分法动态观察行为学变化;采用HE染色、免疫荧光染色观察脑和脊髓病理改变以及hAMSCs在脑和脊髓内的分布;采用FCM检测外周血淋巴细胞亚群,采用流式微球阵列法(CBA)检测血浆细胞因子的含量。结果 hAMSCs治疗后EAE大鼠行为学评分逐渐减低(P<0.01),脑和脊髓炎性细胞浸润减轻。hAMSCs移植第3周,大鼠脑和脊髓组织可见较多人细胞核抗原阳性细胞即hAMSCs存活;与模型组和培养基组相比,hAMSCs治疗组外周血Treg、Th2、Tc1、Tc2淋巴细胞百分比明显升高(P<0.01或P<0.05),而Th17细胞显著减少(P<0.01);血浆Th2型细胞因子IL-4和IL-10含量升高(P<0.05或P<0.01),而Th1型细胞因子IL-2和IFN-γ含量降低(P<0.05或P<0.01)。结论 hAMSCs能改善大鼠EAE的神经功能,减轻神经组织的免疫损伤,其机制可能主要与上调FoxP3+Treg细胞和下调Th17细胞有关。

关键词：人羊膜间充质干细胞实验性自身免疫性脑脊髓炎免疫调节大鼠

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骨髓间充质干细胞抑制CD4^+初始T细胞体外分化为Th17细胞

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基础医学与临床 2014年第9期34卷 1179-1183页

作者：曲学彬刘星霞韩晶晶姚瑞芹赵春华徐州医学院基础学院生物学系江苏徐州221009 中国医学科学院基础医学研究所组织工程中心北京100005 徐州医学院临床学院神经内科江苏徐州221002

目的探讨骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)对辅助T细胞17(Th17)体外分化的免疫调控作用。方法小鼠CD4+初始T(nave T)细胞与小鼠BM-MSCs共培养,诱导分化3 d后流式细胞术检测CD4+IL-17+Th17的生成比率,ELISA法检测培养上清中IL-17的浓度,qRT-... 详细信息

目的探讨骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)对辅助T细胞17(Th17)体外分化的免疫调控作用。方法小鼠CD4+初始T(nave T)细胞与小鼠BM-MSCs共培养,诱导分化3 d后流式细胞术检测CD4+IL-17+Th17的生成比率,ELISA法检测培养上清中IL-17的浓度,qRT-PCR及Western blot检测Th17特异转录因子Rorγt的表达水平。共培养体系中加入IL-10和PGE2中和抗体后检测Th17的分化率。结果小鼠BM-MSCs分泌高水平细胞因子TGF-β和IL-6。共培养组CD4+IL-17+Th17的生成率(2.5%±1.5%)和IL-17浓度(23±3 ng/L)均显著低于无BM-MSCs对照组(分别为17.8%±4.2%和268±27 ng/L,P<0.05),且转录因子Rorγt的表达量也明显降低。共培养组IL-10和PGE2浓度随诱导天数的增加而逐渐上升,显著高于同期对照组(P<0.05)。共培养体系中加入IL-10或PGE2中和抗体后,显著提升CD4+IL-17+Th17的生成率(从2.0%±0.5%提高到11.8%±2.5%,P<0.05),提高IL-17分泌水平(从24±4 ng/L上升到123±25 ng/L,P<0.05),增强Rorγt的表达量。联合使用两种中和抗体能进一步提高Th17的分化生成率。结论虽然BM-MSCs分泌高水平的Th17分化所需的细胞因子TGF-β和IL-6,但BM-MSCs却抑制Th17的体外分化,其抑制机制可能与IL-10和PGE2有关。

关键词：骨髓间充质干细胞初始T细胞辅助T细胞17

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间充质干细胞系统：解析机体免疫调控和代谢平衡

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中国实验血液学杂志 2013年第2期21卷 263-267页

作者：赵春华北京协和医学院、中国医学科学院基础医学研究所组织工程中心协和医院北京100000

间充质干细胞由于其独特的生物学特性和临床应用潜能,一直是干细胞研究的热点。这里,我首次提出间充质干细胞系统新概念:自胚胎发育早期,经历整个生长发育全过程的不同胚层、多个发育阶段,将亚全能间充质干细胞到不同等级分化潜能间充质... 详细信息

间充质干细胞由于其独特的生物学特性和临床应用潜能,一直是干细胞研究的热点。这里,我首次提出间充质干细胞系统新概念:自胚胎发育早期,经历整个生长发育全过程的不同胚层、多个发育阶段,将亚全能间充质干细胞到不同等级分化潜能间充质干/祖细胞群体统称为MSC系统。MSC系统的确立具有重要意义:(1)赋予了MSC三大重要生物学特征,即干细胞自身特性、组织微环境功能及免疫调控功能;(2)平衡机体免疫与组织代谢;(3)提供高效转化为临床安全有效的组织特异性干细胞。总之,该系统很好的解释了间充质干细胞的异质性,同时丰富了我们之前提出的亚全能干细胞理论,为研究人员更好的理解间充质干细胞提供了深厚的理论平台。

关键词：干细胞间充质干细胞间充质干细胞系统

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人胚胎干细胞向成纤维细胞分化方法的专家共识

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中华医学杂志 2014年第40期94卷 3130-3134页

作者：傅歆邓旭亮李盛林刘鹤欧阳宏伟彭双清肖苒邹晓晖俞光岩曹彤中国医学科学院整形外科医院研究中心北京100144 北京大学口腔医学院特诊科中心实验室儿童口腔科口腔颌面外科浙江大学医学院组织工程中心军事医学科学院疾病预防控制研究所浙江大学医学院附属第一医院中心实验室新加坡国立大学口腔医学院口腔科学系干细胞实验室

人胚胎干细胞（ESC）是一类从囊胚期的人胚胎内细胞团中分离所得的，具有体外自我更新稳定性并维持正常核型和发育多能性，甚至参与整个个体发育的高度未分化干细胞［1］。利用人ESC或由其分化而成的人体细胞、组织或器官来测试各种生... 详细信息

人胚胎干细胞（ESC）是一类从囊胚期的人胚胎内细胞团中分离所得的，具有体外自我更新稳定性并维持正常核型和发育多能性，甚至参与整个个体发育的高度未分化干细胞［1］。利用人ESC或由其分化而成的人体细胞、组织或器官来测试各种生物医用材料、食品及药物对人体的毒理特性或药效，较运用动物或永生化细胞更能反映人体真实的状况。因此，人ESC及其分化的细胞有望发展成为一种崭新的生物安全性检测和药物筛选模型［2］。目前多数研究仍用永生化细胞系或原代培养细胞进行生物材料的安全性评价［3-4］，分别存在核型异常或批次差异大等缺点。人ESC来源的成纤维细胞（ ES-F ）具有来源稳定，核型正常以及容易标准化等优点［5-6］，有望成为生物安全性评价体系的新模型［7］。规范人ESC向成纤维细胞分化方法是保证生物安全性检测评价模型可靠性的关键。为此，科技部国际科技合作重点项目“创建基于人胚干细胞的预测健康安全新体系”的项目组专家经反复讨论，制定了“人胚胎干细胞向成纤维细胞分化方法的专家共识”（以下简称“共识”），旨在规范人ES-F的分化方法，提高人ES-F的纯度，保证分化方法的可重复性，使其更系统、规范和有效地应用于临床和生物安全性评价体系中。

关键词：人胚胎干细胞成纤维细胞细胞分化专家生物医用材料药物筛选模型永生化细胞系安全性检测

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骨形成蛋白-4对小鼠诱导性多能干细胞牙向分化能力的影响

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中华老年口腔医学杂志 2014年第5期12卷 257-261页

作者：刘丽王红雷陈增力金岩北京军区总医院口腔科博士主治医师北京100700 北京军区总医院263临床部主管技师北京101149 第四军医大学口腔医学院组织工程中心教授陕西710032

目的:探讨骨形成蛋白-4(BMP4,bone morphogenetic protein-4)对小鼠诱导性多能干细胞(iPS,induced pluripotent stem cell)牙向分化能力的影响。方法:成釉细胞无血清条件培养液(ASF-CM)中分别加入BMP4(ASF-BMP4)和Noggin(ASF-Noggin),定向诱导小鼠iPS细胞向牙源性细胞转化,观察诱导后细胞形态改变,细胞免疫荧光及RT-PCR检测AMBN、AMGN、CK14、DMP-1、DSPP的表达。结果:免疫荧光染色结果显示:iPS细胞经ASF-BMP4诱导后AMBN、AMGN、CK14、DMP-1、DSPP表达阳性。RT-PCR结果显示:诱导iPS细胞14d后,与ASF-CM组相比,ASF-BMP4组AMBN、DMP-1、DSPP表达显著增高,ASF-Noggin组AMBN、DMP-1、DSPP表达明显降低。结论:BMP4能促进小鼠iPS细胞向成釉细胞谱系和成牙本质细胞谱系分化,而Noggin抑制iPS细胞的分化。

关键词：诱导性多能干细胞牙齿再生骨形成蛋白-4

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乳腺干细胞培养基的建立及有效性验证

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中国组织工程研究 2014年第10期18卷 1585-1590页

作者：张军红杨晶豆晓伟王春华李青赵春华中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院组织工程中心细胞生物学系北京市100051 河北省邢台市眼科医院河北省眼病治疗中心河北省眼科研究所病理科河北省邢台市054000 河北医科大学生理学教研室河北省石家庄市050017 河北省邢台市眼科医院河北省眼病治疗中心河北省眼科研究所耳鼻喉科河北省邢台市054000 贵阳医学院附属医院骨科贵州省贵阳市550004

背景:干细胞培养基,尤其是乳腺干细胞培养基现阶段尚无有效的制备方法。目的:利用Sca-1+乳腺细胞验证自制乳腺干细胞培养基的有效性。方法:用BM培养基培养乳腺器官样小体,6 d后以免疫荧光方法监测成纤维细胞Sca-1和vimentin的表达。筛选... 详细信息

背景:干细胞培养基,尤其是乳腺干细胞培养基现阶段尚无有效的制备方法。目的:利用Sca-1+乳腺细胞验证自制乳腺干细胞培养基的有效性。方法:用BM培养基培养乳腺器官样小体,6 d后以免疫荧光方法监测成纤维细胞Sca-1和vimentin的表达。筛选出MaECM培养基,培养乳腺细胞6 d后,免疫磁珠筛选Sca-1+和Sca-1-细胞群,流式细胞术分析Sca-1阳性细胞的纯度,1×104 Sca-1+或Sca-1-细胞种植在4只鼠双侧乳腺脂肪垫上,6-8周后取出乳腺脂肪垫,以卡红整体染色和苏木精-伊红染色分析长出乳腺的结构数量。结果与结论:乳腺器官样小体用BM培养基培养6 d后,检测到大量Sca-1和vimentin阳性的成纤维细胞,说明BM培养基不适合分离Sca-1+乳腺干细胞。筛选出的MaECM培养基能够抑制成纤维的生长。磁珠筛选后,流式细胞术检测Sca-1+细胞在Sca-1+和Sca-1-细胞群的纯度分别是92%和5%。移植实验显示在8个种植Sca-1+细胞的脂肪垫生长出6个乳腺结构;而在8个种植Sca-1-细胞的脂肪垫中除1只鼠死亡,其余脂肪垫中均未长出乳腺结构。提示MaECM培养基适用于培养鼠乳腺干细胞。

关键词：干细胞培养乳腺干细胞成纤维细胞 Sca-1 乳腺干细胞培养基国家重大科学研究计划(973)资助项目 863项目

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