检索结果-内蒙古大学图书馆

中华微生物学和免疫学杂志 2021年第7期41卷 538-544页

作者：吴雪伶赵翔孟淑芳中国食品药品检定研究院生物制品检定所细胞资源保藏研究中心卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

目的建立复制型慢病毒(replication competent lentivirus,RCL)VSV-G qPCR检测方法,并进行方法学性能验证及初步应用。方法以慢病毒载体包膜VSV-G基因为目标序列,建立荧光定量PCR检测方法,并对方法的专属性、线性、扩增效率、精密度、... 详细信息

目的建立复制型慢病毒(replication competent lentivirus,RCL)VSV-G qPCR检测方法,并进行方法学性能验证及初步应用。方法以慢病毒载体包膜VSV-G基因为目标序列,建立荧光定量PCR检测方法,并对方法的专属性、线性、扩增效率、精密度、准确度、线性范围、检测限、定量限及耐用性进行验证。利用所建立的方法进行CAR-T细胞、慢病毒载体生产终末细胞及慢病毒载体收获液样品的初步应用性研究。结果建立的VSV-G荧光定量PCR法,专属性较好,对293T细胞、PBMC细胞及C8166细胞均无特异性扩增,线性范围为1×10^(2)拷贝/test~1×10^(9)拷贝/test,R2能够达到0.998以上,扩增效率在93%~98%之间,精密度RSD<12%,准确度回收率为85%~106%,最低检出限和最低定量限分别为5拷贝/test和40拷贝/test。另外,该方法的耐用性较好。各项验证结果均表明该方法能够满足检测的要求。利用该方法对54批样品(包括CAR-T细胞、慢病毒载体及载体生产终末细胞)进行RCL C8166细胞培养法的终点检测,结果显示54批样品均为阴性。结论成功建立了VSV-G实时荧光定量PCR法,各项验证参数均可满足检测要求,该方法的应用将进一步提高慢病毒载体相关产品的安全性。

关键词：复制型慢病毒 VSV-G 嵌合抗原受体T细胞(CAR-T细胞)

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糖基化基因修饰对重组蛋白表达及活性的影响

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中国生物制品学杂志 2018年第9期31卷 1029-1035,1039页

作者：周小菊纳涛马宁宁袁宝珠沈阳药科大学无涯学院辽宁沈阳110016 中国食品药品检定研究院生物制品检定所细胞保藏研究中心卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

蛋白质翻译后修饰是蛋白质结构及功能成熟过程中的重要组成部分,其中的一种重要的翻译后修饰为蛋白质糖基化。许多影响细胞、组织、器官乃至生命的内源性蛋白或外源性重组蛋白(如治疗性重组蛋白或单克隆抗体),在细胞内成熟过程中几乎均... 详细信息

蛋白质翻译后修饰是蛋白质结构及功能成熟过程中的重要组成部分,其中的一种重要的翻译后修饰为蛋白质糖基化。许多影响细胞、组织、器官乃至生命的内源性蛋白或外源性重组蛋白(如治疗性重组蛋白或单克隆抗体),在细胞内成熟过程中几乎均会发生蛋白质糖基化修饰,而糖基化修饰的质和量的差异,可能会影响相关蛋白的表达水平、结构及功能。随着治疗性重组蛋白的需求和应用的不断发展,已出现了以改造治疗性重组蛋白为目的的蛋白质糖基化工程技术。该技术主要通过改变用于表达重组蛋白的宿主细胞中参与糖基化修饰的关键酶蛋白(糖苷酶及糖基转移酶),来影响重组蛋白的糖基化,从而改变重组蛋白的表达水平、结构及功能。本文介绍了重组蛋白糖基化修饰的类型及其生物学作用,重组蛋白糖基化修饰改造的策略,其中重点介绍了改变糖基化相关酶蛋白基因的活性的策略,经证明目前该糖基化工程策略是影响重组蛋白的表达及活性十分有效的方式。

关键词：重组蛋白翻译后修饰糖基化修饰活性

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基于吲哚胺2,3-双加氧酶1活性评价人间充质干细胞免疫调控功能的吸光光度法的建立及优化

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中国生物制品学杂志 2016年第9期29卷 954-960页

作者：纳涛王盼刘静张可华袁宝珠中国食品药品检定研究院生物制品检定所细胞保藏及研究中心卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

目的建立一种基于吲哚胺2,3-双加氧酶1(indoleamine 2,3-dioxygenase 1,IDO1)的活性快速评价人间充质干细胞(human mesenchymal stem cells,h MSCs)免疫调控功能的吸光光度法,并进行优化。方法以含干扰素γ(interferonγ,IFNγ)的完全... 详细信息

目的建立一种基于吲哚胺2,3-双加氧酶1(indoleamine 2,3-dioxygenase 1,IDO1)的活性快速评价人间充质干细胞(human mesenchymal stem cells,h MSCs)免疫调控功能的吸光光度法,并进行优化。方法以含干扰素γ(interferonγ,IFNγ)的完全培养基激活hMSCs,收集hMSCs培养上清,与三氯乙酸(trichloroacetic acid,TCA)和对二甲氨基苯甲醛(paradimethylaminobenzaldehyde,PDAB)反应,检测A492值,通过标准曲线计算样品中色氨酸代谢产物犬尿氨酸(kynurenine)的含量,以反映h MSCs所分泌IDO1的酶代谢活性,并对方法中的培养体系(6、12、24、48、96孔板)、IFNγ处理时间(4、8、12、24 h)、培养基使用量(150、200、250、300、350、400、450及500μl)及IFNγ作用浓度(0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、5.0及10.0 ng/ml)进行优化。同时验证方法的特异性,并检测样品保存条件及液氮冻存后不同复苏时间对kynurenine浓度的影响。采用优化后的方法分析不同来源、不同代次的hMSCs分泌IDO1的能力。结果确定最佳检测条件为:培养体系为48孔体系,IFNγ处理时间为24 h,培养基使用体积为200μl,IFNγ作用浓度为10.0 ng/ml。该方法可特异性检测IDO1的活性;除常温外,其他样品保存条件对检测结果影响较小;液氮冻存后复苏24 h可检测到与冻存前水平相当的kynurenine。该方法可有效判断不同供体来源的hMSCs在分泌IDO1功能上的差异。结论该方法可快速、特异、稳定地检测hMSCs分泌IDO1的水平,且操作简便,可用于快速评价h MSCs的免疫调控功能。

关键词：吲哚胺2,3-双加氧酶1 间充质干细胞免疫调控功能吸光光度法犬尿氨酸

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昆虫细胞分类技术的应用与发展

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国际生物制品学杂志 2016年第2期39卷 82-86页

作者：孙立影张占东李媛媛孟淑芳北京生物制品研究所有限责任公司第七研究室 101111 中国食品药品检定研究院生物制品检定所细胞资源保藏研究中心“卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室” 北京100050

昆虫细胞杆状病毒表达系统作为四大表达系统之一，已经被广泛应用于生物制药领域，作为该表达系统的支撑基础，昆虫细胞开始成为继哺乳动物细胞之后的另一种新型细胞基质，在疫苗及生物技术产品领域得到开发应用。然而，昆虫细胞与哺乳... 详细信息

昆虫细胞杆状病毒表达系统作为四大表达系统之一，已经被广泛应用于生物制药领域，作为该表达系统的支撑基础，昆虫细胞开始成为继哺乳动物细胞之后的另一种新型细胞基质，在疫苗及生物技术产品领域得到开发应用。然而，昆虫细胞与哺乳动物细胞在细胞特性等方面存在显著差异，建立适合昆虫细胞特性的质量控制方法已经成为生物制药领域必须要解决的问题。此文仅就昆虫细胞鉴定方法研究进展做一综述，为开发及建立昆虫细胞个性化鉴别方法提供参考。

关键词：昆虫细胞基质分类法

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生产用细胞基质中猪细小病毒污染检测方法的建立及应用

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中华微生物学和免疫学杂志 2015年第4期35卷 127-132页

作者：吴雪伶樊金萍冯建平赵翔孟淑芳中国食品药品检定研究院生物制品检定所细胞资源保藏研究中心、卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

目的：建立生产用细胞基质中猪细小病毒（ porcine parvovirus，PPV）污染的检测方法，并进行方法学性能验证分析及初步应用。方法针对编码非结构蛋白NS1保守序列设计引物和探针，建立荧光定量PCR方法，对方法的线性、精密度、最低检出... 详细信息

目的：建立生产用细胞基质中猪细小病毒（ porcine parvovirus，PPV）污染的检测方法，并进行方法学性能验证分析及初步应用。方法针对编码非结构蛋白NS1保守序列设计引物和探针，建立荧光定量PCR方法，对方法的线性、精密度、最低检出限等参数进行验证，并分析待测样品对试验的干扰。将PPV毒种感染ST细胞，制备病毒。以ST细胞为敏感细胞，建立PPV ST细胞感染性试验，并将ST细胞感染试验与荧光定量PCR法相结合，建立ST细胞感染-PCR法，分析感染-PCR方法的灵敏度。利用所建立的方法进行生产用细胞样本的初步应用研究。结果 PPV荧光定量PCR法的特异性较好，与其他种属的细小病毒、猴SV40病毒及其他猪源病毒无明显的交叉反应，在109～104拷贝／μl范围内线性较好，R2达到0．98以上，灵敏度为1×10^4拷贝／μl，试验内和试验间的Ct的精密度均＜5％，试验内病毒定量拷贝数的精密度为5％～15％，试验间为30％～40％，最低感染性病毒滴度检测限为1CCID50／ml。待测细胞样品成分对病毒检测无明显的干扰性。 ST细胞感染-PCR法的灵敏度为0．01CCID50／ml。利用荧光定量PCR法对22份细胞样品进行检测，结果均为阴性。结论成功建立了PPV荧光定量PCR检测法及ST细胞感染-PCR法，能够用于细胞中PPV的检测，有助于进一步提高生产用或治疗用细胞的安全性。

关键词：猪细小病毒荧光定量PCR ST细胞感染性试验感染-PCR

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STR图谱法从疫苗成品中鉴别生产用人源细胞株的研究

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药物分析杂志 2015年第10期35卷 1721-1728页

作者：吴雪伶赵龙樊金萍曹守春孟淑芳中国食品药品检定研究院生物制品检定所细胞资源保藏研究中心卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050 内蒙古包头市肿瘤医院包头014030

目的:探讨采用短串联重复序列(STR)图谱分析法检测人二倍体细胞生产的疫苗成品,判定生产所用细胞基质种类的可能性,为疫苗的质量控制及监测等环节提供参考。方法:研究用疫苗均以人二倍体细胞为生产基质,品种包括水痘减毒活疫苗、甲肝减... 详细信息

目的:探讨采用短串联重复序列(STR)图谱分析法检测人二倍体细胞生产的疫苗成品,判定生产所用细胞基质种类的可能性,为疫苗的质量控制及监测等环节提供参考。方法:研究用疫苗均以人二倍体细胞为生产基质,品种包括水痘减毒活疫苗、甲肝减毒活疫苗、麻疹风疹联合减毒活疫苗、甲肝灭活疫苗、狂犬灭活疫苗,分别来自11个厂家共22批。其中甲肝灭活疫苗均经过纯化,且均以甲醛为灭活剂。狂犬灭活疫苗来自2个厂家,1家疫苗采用了柱层析纯化工艺,2家疫苗均以β-丙内酯为病毒灭活剂。首先提取疫苗成品中的DNA,然后采用STR图谱分析方法对DNA进行检测,并对所获得的指纹图谱与标准图谱数据进行比对,判定生产所用细胞的正确性。结果:对减毒活疫苗进行检测可准确地判定生产用细胞的种类,结果显示8家疫苗生产企业中1家使用了错误的细胞。在对灭活疫苗的检测中,无柱层析纯化工艺的狂犬灭活疫苗可得到良好的STR数据,且比对结果正确。经柱层析的狂犬灭活疫苗经酚抽提法提取的DNA检测可获得STR信号,尽管Penta E位点信号缺失也可判定出生产所用的细胞基质种类及正确性。含有铝佐剂的甲肝灭活疫苗检测均未获得STR图谱数据。进一步对2种病毒灭活剂进行初步分析,结果显示:利用β-丙内酯进行病毒灭活,对疫苗中STR检测存在干扰,甲醛灭活对检测无明显影响。结论:利用STR图谱分析法能够直接从人二倍体细胞生产的减毒活疫苗和不含铝佐剂的灭活疫苗中鉴别生产所用的细胞基质种类,可为疫苗生产的质量控制及监测等环节提供参考。

关键词：短串联重复序列(STR) STR图谱减毒活疫苗灭活疫苗生产质量控制细胞基质鉴别

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北京地区居民收入水平影响因素的卫生经济学分析

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中国老年保健医学 2012年第6期10卷 22-26页

作者：郭玮杨一歌杨充霖蒋景媛孙飞杨泽中国食品药品检定研究院生物制品检定所 10050 首都师范大学管理学院 100048 卫生部北京医院卫生部老年医学研究所 100730

目的研究社会、人口和常见慢性疾病等因素对北京城、乡居民的人均收入水平的影响。方法在北京市1998年健康普查数据的基础上,运用多元线性回归、卡方检验和ANOVA分析方法对北京城、乡居民的人均收入水平的影响因素进行分析。结果经多元... 详细信息

目的研究社会、人口和常见慢性疾病等因素对北京城、乡居民的人均收入水平的影响。方法在北京市1998年健康普查数据的基础上,运用多元线性回归、卡方检验和ANOVA分析方法对北京城、乡居民的人均收入水平的影响因素进行分析。结果经多元回归分析,总体上阐明,与北京地区居民收入显著相关(P<0.05)的变量共有6个,分别为城乡,职业,文化水平,家庭人口总数,糖尿病和肥胖。再按收入水平分层,经卡方检验显示,所有组别的收入水平在城、乡居民之间均有显著差别,且呈现随收入水平增高,乡村居民人数比例递减(%)的趋势。慢性疾病中糖尿病与所有组别的收入水平均显著相关(P<0.05)。肥胖与中低收入水平显著相关(P<0.05),且随收入水平升高呈现患病率下降的趋势。除中低收入组外,家庭家庭人口总数与其他收入水平组均显著相关(P<0.05),且有小家庭(≤3人)比例(%)随收入水平增高而增加的趋势。经ANOVA分析,城乡、职业、文化水平、糖尿病、家庭人口总数、年龄、及婚姻状态的不同,其收入水平也会有显著的不同(P<0.05)。结论 1998年北京城、乡居民影响收入水平的因素可能与糖尿病、肥胖、城乡、职业、文化水平、家庭人口总数有关,与高血压、婚姻、年龄、性别无关。

关键词：人均收入计量分析影响因素北京居民

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重组人血清白蛋白-干扰素α2a融合蛋白质控方法与质量标准的建立

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药物分析杂志 2011年第9期31卷 1750-1753页

作者：裴德宁李响韩春梅饶春明中国药品生物制品检定所重组技术产品室卫生部生物技术产品检定及标准化重点实验室北京100050

目的:建立重组人血清白蛋白-干扰素α2a融合蛋白(rHSA-IFNα2a)的质控方法和质量标准。方法:分别使用抗HSA抗体和抗IFNα2a抗体、采用免疫印迹法对成品进行鉴别试验,采用WISH细胞病变抑制法测定成品和原液的生物学活性,原液以胰蛋白酶... 详细信息

目的:建立重组人血清白蛋白-干扰素α2a融合蛋白(rHSA-IFNα2a)的质控方法和质量标准。方法:分别使用抗HSA抗体和抗IFNα2a抗体、采用免疫印迹法对成品进行鉴别试验,采用WISH细胞病变抑制法测定成品和原液的生物学活性,原液以胰蛋白酶酶切后,用HPLC分析肽图,其余项目按2010年版中国药典(三部)的规定进行检测。结果:样品与抗HSA抗体和抗IFNα2a抗体均呈阳性反应,比活性>1.5×105 ***-1,其肽图与参考品的一致,其余项目均符合2010年版中国药典(三部)的规定,根据检测结果建立了rHSA-IFNα2a的质量标准。结论:建立的质控方法和质量标准可以保证rHSA-IFNα2a的安全、有效和质量可控,可以用于rHSA-IFNα2a的常规检定。

关键词：重组人血清白蛋白干扰素α2a 融合蛋白质控方法质量标准

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流感疫苗与格林-巴利综合征

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中国生物制品学杂志 2010年第11期23卷 1267-1270页

作者：刘东辉吴星王军志汪兴太美国马塞诸塞公共卫生部实验科学局中国药品生物制品检定所北京100050

格林-巴利综合征(Guillan-Barré syndrome,GBS)是微生物(细菌和病毒等)感染或其他因素诱导所致的针对外周神经系统脱髓鞘炎的自身免疫反应。大范围接种H1N1流感疫苗所致严重GBS已引起人们对流感疫苗罕见不良反应的关注。本文就GBS... 详细信息

格林-巴利综合征(Guillan-Barré syndrome,GBS)是微生物(细菌和病毒等)感染或其他因素诱导所致的针对外周神经系统脱髓鞘炎的自身免疫反应。大范围接种H1N1流感疫苗所致严重GBS已引起人们对流感疫苗罕见不良反应的关注。本文就GBS的历史、临床特征、研究现状、与流感疫苗的相关性、流感疫苗接种的意义及其不良反应监控等作一综述。

关键词：流感疫苗格林-巴利综合征流感病毒

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流感疫苗中血凝素定量检测方法的评价

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中华微生物学和免疫学杂志 2010年第1期30卷 85-88页

作者：袁力勇宋颖丽李长贵黎旭光中国药品生物制品检定所北京100050 武汉生物制品研究所加拿大卫生部生物制品质量研究中心

流感病毒分为甲、乙、丙三型，其中甲、乙型流感病毒的基因组均含8个节段，丙型流感病毒含7个节段。甲、乙型流感病毒的8个基因节段分别编码血凝素（HA）、神经氨酸酶（NA）、核蛋白（NP）、基质蛋白（M）、三种多聚酶蛋白（PB1、PB2、P... 详细信息

流感病毒分为甲、乙、丙三型，其中甲、乙型流感病毒的基因组均含8个节段，丙型流感病毒含7个节段。甲、乙型流感病毒的8个基因节段分别编码血凝素（HA）、神经氨酸酶（NA）、核蛋白（NP）、基质蛋白（M）、三种多聚酶蛋白（PB1、PB2、PA）和非结构蛋白（NS）。

关键词：定量检测方法血凝素流感疫苗乙型流感病毒神经氨酸酶非结构蛋白基质蛋白基因组

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