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中国免疫学杂志 2024年第1期40卷 168-173,177页

作者：马宾孟麟戎卓娜赵传科寿成超北京大学临床肿瘤学院北京大学肿瘤医院暨北京市肿瘤防治研究所生物化学与分子生物学研究室恶性肿瘤发病机制及转化研究教育部重点实验室北京100142

目的:制备TREM2特异性单克隆抗体并对其特异性、亲和力及在免疫学检测中的应用进行鉴定,为TREM2的抗体药物研发奠定基础。方法:表达并纯化TREM2胞外段GST融合蛋白,用其作为抗原免疫小鼠,筛选抗血清效价较高的小鼠,经过细胞融合和单克隆... 详细信息

目的:制备TREM2特异性单克隆抗体并对其特异性、亲和力及在免疫学检测中的应用进行鉴定,为TREM2的抗体药物研发奠定基础。方法:表达并纯化TREM2胞外段GST融合蛋白,用其作为抗原免疫小鼠,筛选抗血清效价较高的小鼠,经过细胞融合和单克隆筛选,制备TREM2的特异性单克隆抗体。对获得的单克隆抗体的特异性、亲和力及其在免疫学实验中的应用进行检测。结果:获得了29株TREM2单克隆抗体,其中的24株可与TREM2特异性结合;29株单抗与TREM2结合的EC50均在nmol以上;它们可分别在Western blot、免疫沉淀、流式细胞术和免疫荧光中用于对TREM2的特异检测。结论:成功制备并获得了亲和力高、特异性好的抗TREM2单克隆抗体,为TREM2靶点的成药性抗体开发奠定了基础。

关键词： TREM2 单克隆抗体制备鉴定

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异柠檬酸脱氢酶1在肿瘤发生发展中的作用

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生理科学进展 2020年第3期51卷 223-228页

作者：杜晓娟寿成超北京大学临床肿瘤学院北京大学肿瘤医院暨北京市肿瘤防治研究所生物化学与分子生物学研究室恶性肿瘤发病机制及转化研究教育部重点实验室北京100142

异柠檬酸脱氢酶1(IDH1)在包括谷氨酰胺代谢、磷脂代谢、脂肪合成、胰岛素分泌及细胞活性氧调节等生命活动过程中发挥重要作用。近年来的研究发现,IDH1表达水平的变化及132位氨基酸的突变与许多肿瘤,如脑胶质瘤、肺癌等的发生发展密切相... 详细信息

异柠檬酸脱氢酶1(IDH1)在包括谷氨酰胺代谢、磷脂代谢、脂肪合成、胰岛素分泌及细胞活性氧调节等生命活动过程中发挥重要作用。近年来的研究发现,IDH1表达水平的变化及132位氨基酸的突变与许多肿瘤,如脑胶质瘤、肺癌等的发生发展密切相关。本文将就IDH1的结构与功能、IDH1与肿瘤特别是与肺癌的关系及相关作用机制等的研究进展进行综述,以期为肺癌辅助诊断生物标志物及药物治疗靶点的开发提供新的思路。

关键词： IDH1 糖代谢肿瘤肺癌

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THBS2特异性单克隆抗体的制备与鉴定

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中国免疫学杂志 2020年第5期36卷 588-593页

作者：王冰肖克源孟麟寿成超北京大学临床肿瘤学院北京大学肿瘤医院暨北京市肿瘤防治研究所生物化学与分子生物学研究室恶性肿瘤发病机制及转化研究教育部重点实验室北京100142 山西省长治市人民医院肿瘤内科长治046000

目的:制备THBS2特异性单克隆抗体并鉴定其特性,为临床应用奠定基础。方法:表达并纯化THBS2不同截断体片段的GST融合蛋白,经小鼠免疫、细胞融合及筛选,制备THBS2特异性单克隆抗体,然后对获得的单抗亲和力和特异性及在不同免疫学实验中的... 详细信息

目的:制备THBS2特异性单克隆抗体并鉴定其特性,为临床应用奠定基础。方法:表达并纯化THBS2不同截断体片段的GST融合蛋白,经小鼠免疫、细胞融合及筛选,制备THBS2特异性单克隆抗体,然后对获得的单抗亲和力和特异性及在不同免疫学实验中的应用进行鉴定,最后采用免疫沉淀法对36例胰腺癌患者及20例正常人血清THBS2进行检测。结果:获得了10株杂交瘤细胞株,均能稳定分泌抗体;10株单抗经ELISA、Western blot和免疫沉淀证实均能特异性识别人THBS2,且发现THBS2在胰腺癌患者血清中的表达水平显著高于正常人(P<0.0001)。结论:成功制备获得了亲和力高、特异性好的抗人THBS2单克隆抗体,为血清THBS2的检测奠定了基础。

关键词： THBS2 胰腺癌单克隆抗体制备鉴定

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DNA免疫技术制备人CLDN18.2单克隆抗体

DNA免疫技术制备人CLDN18.2单克隆抗体

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中国肿瘤标志物学术大会暨第十五届肿瘤标志物青年科学家论坛

作者：戎卓娜赵传科寿成超北京大学临床肿瘤学院北京大学肿瘤医院暨北京市肿瘤防治研究所生物化学与分子生物学研究室恶性肿瘤发病机制及转化研究教育部重点实验室

目的：应用DNA 免疫技术制备CLDN18.2 特异性单克隆抗体并对其特性和在免疫检测中的应用进行鉴定，为CLDN18.2 的抗体药物研发奠定基础.方法：将体内转染试剂和pcDNA3.1-CLDN18.2 质粒在体外混合后经尾静脉注射免疫小鼠两次，用细胞ELI... 详细信息

目的：应用DNA 免疫技术制备CLDN18.2 特异性单克隆抗体并对其特性和在免疫检测中的应用进行鉴定，为CLDN18.2 的抗体药物研发奠定基础.方法：将体内转染试剂和pcDNA3.1-CLDN18.2 质粒在体外混合后经尾静脉注射免疫小鼠两次，用细胞ELISA 筛选效价较高的小鼠经过杂交瘤融合技术和单克隆筛选，制备CLDN18.2 的特异性单克隆抗体.

关键词： CLDN18.2 DNA免疫单克隆抗体

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IDH1单克隆抗体的制备及表位鉴定和双抗体夹心ELISA的建立

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中国免疫学杂志 2019年第12期35卷 1482-1486页

作者：杜晓娟孟麟孙天一寿成超北京大学临床肿瘤学院北京大学肿瘤医院暨北京市肿瘤防治研究所生物化学与分子生物学研究室恶性肿瘤发病机制及转化研究教育部重点实验室北京100142

目的:制备抗异柠檬酸脱氢酶1(IDH1)单克隆抗体,并确定其识别IDH1的表位区域,在此基础上建立双抗体夹心ELISA法,为检测人外周血IDH1蛋白奠定基础。方法:用原核表达的IDH1-GST蛋白免疫Balb/c小鼠,经常规细胞融合技术和ELISA筛选获得抗IDH... 详细信息

目的:制备抗异柠檬酸脱氢酶1(IDH1)单克隆抗体,并确定其识别IDH1的表位区域,在此基础上建立双抗体夹心ELISA法,为检测人外周血IDH1蛋白奠定基础。方法:用原核表达的IDH1-GST蛋白免疫Balb/c小鼠,经常规细胞融合技术和ELISA筛选获得抗IDH1的单抗克隆。构建并表达IDH1的不同截短体融合蛋白,用Western blot和ELISA检测不同单抗与不同截短体蛋白的反应。通过双抗体夹心ELISA进行两两配对,获得有较好检测效果的配对抗体。结果:通过GSTIDH1和GST蛋白的ELISA双筛和Western blot的进一步鉴定,获得了8株抗IDH1的单克隆抗体,分别命名为1H8、4H7、5C8、7C3、7E12、13F6、16B11和16H7;5C8和7C3抗体识别的抗原表位位于IDH1 119~197位氨基酸;4H7的识别表位位于197~211位氨基酸,7E12和16B11的识别表位位于211~314位氨基酸,1H8和16H7的识别表位位于314~329位氨基酸,13F6的识别表位位于314~415位氨基酸。在双抗体夹心配对实验中,1H8包被抗体,4H7作为检测抗体,可获得相对较高的检测敏感性。结论:制备获得了8株抗IDH1特异性单克隆并鉴定了各自的抗原表位识别区域,初步建立了ELISA双抗体夹心检测法,为后续外周血中IDH1的检测奠定了基础。

关键词： IDH1 单克隆抗体抗原表位双抗体夹心ELISA

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中药X水上清的抑瘤生长作用及有关机制研究

中药X水上清的抑瘤生长作用及有关机制研究

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全国肿瘤病因学和肿瘤流行病学学术会议

作者：余钿田曲立科赵传科韩勇寿成超 100142 北京北京大学临床肿瘤学院北京肿瘤医院暨北京市肿瘤防治研究所生物化学与分子生物学研究室恶性肿瘤发病机制及转化研究教育部重点实验室

目的：我们在前期研究中发现中药X的总提取物具有良好的抑瘤活性，进一步分离提取发现其水上清部分可能是中药X抑瘤的主要活性组分.本研究旨在探讨水上清的抑瘤生长作用及有关抗肿瘤机制.方法：①验证水上清抑瘤活性：通过对26株肿瘤细... 详细信息

目的：我们在前期研究中发现中药X的总提取物具有良好的抑瘤活性，进一步分离提取发现其水上清部分可能是中药X抑瘤的主要活性组分.本研究旨在探讨水上清的抑瘤生长作用及有关抗肿瘤机制.方法：①验证水上清抑瘤活性：通过对26株肿瘤细胞系进行MTT筛选以及动物实验，明确水上清的抑瘤活性.②表型实验：通过细胞周期流式检测和Annexin V-PI双染实验判断水上清是否通过促进凋亡或周期阻滞实现对肿瘤细胞的生长抑制.③机制研究：分别选择三株有效和无效细胞进行表达谱芯片分析，在此基础上通过western-blot、免疫荧光、流式等实验，明确水上清发挥抗肿瘤效果的可能机制.结果：①体内和体外实验发现水上清在多种肿瘤细胞系中具有较好的抑瘤活性;②通过初步表型实验发现水上清作用24h可引起细胞周期阻滞，而随着作用时间延长可导致自噬和凋亡现象出现;③经表达谱芯片结果分析及有关的实验研究表明，中药X水上清可导致细胞内氧化型/还原型谷胱甘肽失衡，进而使Erk持续磷酸化，并激活ATM/ATR/chk1通路发挥周期阻滞作用(S期阻滞/24h)，随着作用时间增长(48h以后)促进细胞死亡，从而达到抗肿瘤疗效.结论：中药X的水上清具有良好的抑瘤活性，其机制与导致细胞内氧化型/还原型谷胱甘肽失衡、最终引起DNA损伤及细胞周期阻滞有关.

关键词：中药X 水上清肿瘤抑制机制

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猪鼻支原体促进肿瘤细胞侵袭转移的机制研究

猪鼻支原体促进肿瘤细胞侵袭转移的机制研究

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全国肿瘤病因学和肿瘤流行病学学术会议

作者：段红英曲立科寿成超 100142 北京北京大学临床肿瘤学院北京肿瘤医院暨北京市肿瘤防治研究所生物化学与分子生物学研究室恶性肿瘤发病机制及转化研究教育部重点实验室

目的：我室近期研究结果表明猪鼻支原体以及其表面膜抗原p37均能提高胃癌细胞的体外迁移和侵袭能力,促进荷瘤C57BL/6小鼠肿瘤的肺转移,本研究拟对其相关机制进行探讨.方法：利用GST-pull down联合MODI-TOF质谱分析寻找细胞表面介导猪鼻... 详细信息

目的：我室近期研究结果表明猪鼻支原体以及其表面膜抗原p37均能提高胃癌细胞的体外迁移和侵袭能力,促进荷瘤C57BL/6小鼠肿瘤的肺转移,本研究拟对其相关机制进行探讨.方法：利用GST-pull down联合MODI-TOF质谱分析寻找细胞表面介导猪鼻支原体感染的受体分子、采用中和抗体预先孵育来封闭靶蛋白结合表位、通过iRNA抑制靶基因的表达、Transwell实验检测细胞迁移、基因表达谱芯片分析筛选差异表达基因、用Western blot用检测NF-κB p65的活性及EMT相关分子的表达.结果：猪鼻支原体通过其表面膜抗原p37的介导感染肿瘤细胞,p37蛋白或抗p37抗体均可以阻断猪鼻支原体进入细胞.采用GST-pull down联合MODI-TOF质谱分析发现,细胞表面受体分子X蛋白介导猪鼻支原体与细胞的结合, p37与X蛋白可以相互作用,X蛋白在介导猪鼻支原体及p37与细胞结合并引起细胞迁移能力增强中发挥重要作用.猪鼻支原体感染肿瘤细胞后可激活NF-κB信号通路,p65第536位丝氨酸磷酸化明显增强,入核增多,并可使细胞发生上皮间质转化(EMT),用NF-κB p65抑制剂可逆转支原体感染所引起的细胞迁移增强及EMT现象.结论：猪鼻支原体通过细胞表面X蛋白介导感染细胞,并通过激活NF-κB p65信号通路,增强细胞的迁移侵袭能力并促进细胞发生EMT.

关键词：猪鼻支原体肿瘤侵袭转移分子机制

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Naa10p通过与PA28β相互作用下调28S蛋白酶体活性并增强肿瘤细胞集落形成能力

Naa10p通过与PA28β相互作用下调28S蛋白酶体活性并增强肿瘤细胞...

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全国肿瘤病因学和肿瘤流行病学学术会议

作者：闵力徐慧玉曾妍曲立科寿成超 100142北京北京大学临床肿瘤学院北京肿瘤医院暨北京市肿瘤防治研究所生物化学与分子生物学研究室恶性肿瘤发病机制及转化研究教育部重点实验室

目的：28S蛋白酶体参与多种癌基因与抑癌基因产物的成熟过程，与肿瘤发生有着重要关联，而Naa10p (N端α位乙酰转移酶)蛋白在多种肿瘤中过表达并在结直肠癌中具有预后不良的临床意义;本室在前期研究中发现Naa10p与28S蛋白酶体的重要激... 详细信息

目的：28S蛋白酶体参与多种癌基因与抑癌基因产物的成熟过程，与肿瘤发生有着重要关联，而Naa10p (N端α位乙酰转移酶)蛋白在多种肿瘤中过表达并在结直肠癌中具有预后不良的临床意义;本室在前期研究中发现Naa10p与28S蛋白酶体的重要激活亚基PA28β有可能存在潜在的相互作用，而Naa10p与PA28β之间的关联迄今未见报道，研究Naa10p与28S蛋白酶体的关联及其生理生化意义将有助于我们加深对肿瘤发生机制的理解。方法：通过免疫沉淀、GST-pulldown、干扰表达等不同方法检测Naa10p与28S蛋白酶体激活亚基PA28β及PA28α间是否存在直接或相互作用;在细胞内及细胞外的不同体系中检测Naa10p及乙酰化酶活性缺失突变的Naa10p (R82A)对28S蛋白酶体活性的影响;检测Naa10p及PA28β单独或同时过表达对肿瘤细胞内蛋白酶体活性的影响及平板集落形成能力。结果：Naa10p可以与外源性PA28β相互作用，也可以与内源性PA28β、PA28α相互作用;Naa10p与PA28β直接相互作用，而与PA28α的相互作用则依赖于PA28β;Naa10p过表达后细胞内28S蛋白酶体活性减弱，干扰Naa10p后28S蛋白酶体活性增强;Naa10p也能下调纯化蛋白体系中28S蛋白酶体活性，酶活性缺失突变不影响Naa10p对蛋白酶体活性的下调功能。过表达PA28β时RKO细胞蛋白酶体活性增强而集落形成能力减弱，同时过表达Naa10p则降低蛋白酶体活性并增强了集落形成能力。结论：Naa10p通过与PA28β直接相互作用减弱28S蛋白酶体活性，这种调节不依赖于其乙酰化活性;Naa10p与PA28β共同调节肿瘤细胞的蛋白酶体活性及集落形成能力。

关键词： Naa10p PA28β 28S蛋白酶体活性集落形成

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PRL-3与RAP1蛋白相互作用并激活NF-κB信号通路

PRL-3与RAP1蛋白相互作用并激活NF-κB信号通路

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全国肿瘤病因学和肿瘤流行病学学术会议

作者：廉沈沂孟麟宋倩曲立科寿成超 100142 北京北京大学临床肿瘤学院北京肿瘤医院暨北京市肿瘤防治研究所生物化学与分子生物学研究室恶性肿瘤发病机制及转化研究教育部重点实验室

目的：酪氨酸磷酸酶PRL-3与肿瘤发生发展具有密切关系.研究表明PRL-3可通过促进肿瘤细胞的迁移侵袭从而参与肿瘤远处转移的过程,但具体机制尚不明确.方法和结果：利用酵母双杂交发现端粒相关RAP1是PRL-3的潜在相互作用分子.通过免疫沉淀... 详细信息

目的：酪氨酸磷酸酶PRL-3与肿瘤发生发展具有密切关系.研究表明PRL-3可通过促进肿瘤细胞的迁移侵袭从而参与肿瘤远处转移的过程,但具体机制尚不明确.方法和结果：利用酵母双杂交发现端粒相关RAP1是PRL-3的潜在相互作用分子.通过免疫沉淀和GST pull down的方法,证明PRL-3与端粒相关蛋白RAP1在细胞内存在直接相互作用.通过免疫荧光间接染色的方法,发现PRL-3高表达可促进端粒相关蛋白RAP1从核浆向胞浆的转位;利用SiRNA干扰PRL-3可逆转RAP1的胞浆转位.对170例结肠癌组织标本进行免疫组化染色,发现PRL-3的表达与RAP1的胞浆分布明显正相关(p=0.01).为进一步探讨PRL-3引起端粒相关蛋白RAP1胞浆转位的机制,我们利用mRNA芯片对PRL-3参与的信号通路进行系统分析,结果提示PRL-3参与肿瘤发生发展的多个途径,其中包括NF-κB信号通路.文献报道激活NF-κB信号通路可导致端粒相关蛋白RAP1的胞浆转位.因此,我们利用Real-Time PCR和shRNA干扰的方法,发现PRL-3可通过上调RAP1蛋白的mRNA水平激活NF-κB信号通路下游靶基因,同时对不同肿瘤细胞系的mRNA水平检测发现PRL-3与RAP1蛋白的mRNA水平正相关,干扰P65蛋白的表达可降低PRL-3导致的RAP1上调.结论：酪氨酸磷酸酶PRL-3与端粒相关蛋白RAP1相互作用,并通过促进RAP1蛋白的胞浆转位,激活P65磷酸化和NF-κB信号通路的下游靶基因的表达.反之,PRL-3通过P65蛋白上调RAP1表达.

关键词： PRL-3 RAP1 相互作用 NF-κB 激活

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IKBKE磷酸化并抑制FOX03a的转录活性

IKBKE磷酸化并抑制FOX03a的转录活性

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全国肿瘤病因学和肿瘤流行病学学术会议

作者：田巍 Jianping Guo Shaokun Shu Yu Xin Jin Q.Cheng 寿成超 100142 北京北京大学临床肿瘤学院北京肿瘤医院暨北京市肿瘤防治研究所生物化学与分子生物学研究室恶性肿瘤发病机制及转化研究教育部重点实验室 100142 北京北京大学临床肿瘤学院北京肿瘤医院暨北京市肿瘤防治研究所生物化学与分子生物学研究室恶性肿瘤发病机制及转化研究教育部重点实验室 Department of Molecular On Department of Molecular Oncology H.Lee Moffitt Cancer Center Tampa Florida United States of Amer

目的：我们前期结果发现IKBKE能够直接激活***可能通过Akt和其他途径影响FOXO3a,进而影响下游基因的转录.本研究就IKBKE对FOXO3a的作用机制进行研究并观察其对肿瘤发生的影响.方法：利用荧光素酶报告基因和CHIP实验检测IKBKE对FOXO3a的... 详细信息

目的：我们前期结果发现IKBKE能够直接激活***可能通过Akt和其他途径影响FOXO3a,进而影响下游基因的转录.本研究就IKBKE对FOXO3a的作用机制进行研究并观察其对肿瘤发生的影响.方法：利用荧光素酶报告基因和CHIP实验检测IKBKE对FOXO3a的转录活性的影响,通过对FOXO3a的磷酸化位点进行突变、构建截短体作为底物进行体外激酶实验确定IKBKE磷酸化FOXO3a的具体位点.通过基因过表达和Western blot检测FOXO3a的蛋白降解.间接免疫荧光观察活化型IKBKE通过FOXO3a介导的核浆转位,通过caspase 3/7活性和TUNEL实验检测IKBKE磷酸化FOXO3a对肿瘤细胞凋亡的影响.结果：IKBKE磷酸化FOXO3a抑制其转录活性和DNA结合能力.对FOXO3a的Akt作用位点Ser32,Ser253和Ser351进行突变,IKBKE的上述效应依然存在.IKBKE磷酸化FOXO3a不依赖于***不仅可以通过Akt磷酸化FOXO3a,也可以直接磷酸化FOXO3a-S644导致FOXO3a核浆转位并失去转录活性.IKBKE通过磷酸化Ser644促进FOXO3a降解,抑制FOXO3a诱导的细胞凋亡.结论：IKBKE不仅通过激活Akt磷酸化FOXO3a,还能够直接磷酸化FOXO3a-Ser644抑制FOXO3a的活性.IKBKE通过该方式诱导FOXO3a的降解以及核浆转位,从而抑制FOXO3a的细胞内功能.

关键词： IKBKE 肿瘤 FOXO3a Akt

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