检索结果-内蒙古大学图书馆

微生物与感染 2015年第3期10卷 147-153页

作者：魏建春崔晓云吴娜安静首都医科大学基础医学院病原生物学系微生物学教研室北京100069

本研究旨在制备和鉴定小鼠抗Ⅱ型登革病毒（DENV‐2）10种蛋白的抗体，为后续相关研究提供实验材料。利用真核表达载体pReceiver构建DENV‐210种蛋白的重组质粒，提取质粒 DNA ，肌内注射免疫小鼠，共免疫4次。末次免疫后2周取小鼠血清... 详细信息

本研究旨在制备和鉴定小鼠抗Ⅱ型登革病毒（DENV‐2）10种蛋白的抗体，为后续相关研究提供实验材料。利用真核表达载体pReceiver构建DENV‐210种蛋白的重组质粒，提取质粒 DNA ，肌内注射免疫小鼠，共免疫4次。末次免疫后2周取小鼠血清，利用DENV‐2感染的Vero细胞和DENV‐2各蛋白的稳定表达细胞，通过酶联免疫吸附试验（ELISA）、间接免疫荧光法（IFA）和蛋白免疫印迹法评价免疫效果，分析抗体的特点。DNA免疫小鼠后获得抗DENV‐210种蛋白的抗血清，抗体效价波动于1∶400～1∶16127之间，以抗E蛋白抗体效价最高，达1∶16127，而抗NS3、NS4b、NS5蛋白抗体效价较低，仅为1∶400。利用DENV‐2感染的Vero细胞和稳定表达病毒蛋白的EAhy926细胞进行IFA染色，抗DENV‐2各蛋白的抗血清均可特异性识别DENV‐2抗原。蛋白免疫印迹结果显示，抗E、NS1、NS4b和NS5蛋白抗体能识别热变性蛋白，其他抗血清未呈现阳性反应条带。本研究提示，DNA免疫小鼠所获得的抗DENV‐2各蛋白抗体能特异性识别自然感染或模拟自然感染状态下的DENV‐2蛋白，可为后续相关研究提供工具，也表明DNA免疫法可作为抗体制备的一种策略。

关键词：登革病毒结构蛋白非结构蛋白抗体 EAhy926细胞

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寨卡病毒RNA恒温快速扩增检测方法的建立

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病毒学报 2020年第4期36卷 610-616页

作者：朱禹李阿茜刘洋李乃哲余东阳李川李建东王世文李德新梁米芳柳燕安徽医科大学基础医学院微生物学教研室合肥230032 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京102206

2015年以来,寨卡病毒(Zika virus,ZIKV)感染被报告和小头症之间存有关联,已有多个国家和地区报告ZIKV感染证据,我国持续面对ZIKV输入风险。为发展适用于现场的快速高效的ZIKV核酸检测方法,选取ZIKV NS1片段保守区设计特异性引物探针,经... 详细信息

2015年以来,寨卡病毒(Zika virus,ZIKV)感染被报告和小头症之间存有关联,已有多个国家和地区报告ZIKV感染证据,我国持续面对ZIKV输入风险。为发展适用于现场的快速高效的ZIKV核酸检测方法,选取ZIKV NS1片段保守区设计特异性引物探针,经优化建立了多种功能蛋白介导的ZIKV RNA恒温快速扩增检测方法。利用所制备的ZIKV NS1片段体外转录RNA作为参考品,并与实时荧光定量RT-PCR检测结果进行比较。同时利用ZIKV细胞培养物中加入健康人血清制备的模拟临床标本进行初步验证。结果显示,建立的RNA恒温快速扩增检测方法可100%检出100拷贝/μL体外转录RNA,可在15 min以内判读,大大低于PCR的常规检测时间;用该方法检测其他相关病毒,无交叉反应。病毒滴度在(104~107 PFU/mL)之间的模拟临床病人标本可达到100%检出。本研究建立的ZIKV RNA恒温扩增快速检测方法快速、灵敏、特异,适用于ZIKV现场应急检测,为ZIKV的防控提供了重要的技术支撑。

关键词：寨卡病毒(ZIKV) RNA恒温快速扩增核酸检测

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肠道病毒A组71型在人脐静脉血管内皮细胞中的增殖及对细胞骨架的影响

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微生物学免疫学进展 2016年第3期44卷 8-13页

作者：严文莉朱俊萍安静首都医科大学基础医学院病原生物学系微生物学教研室北京100069

目的研究肠道病毒A组71型(Enterovirus group A type 71,EV-A71)在人脐静脉血管内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)中的增殖及对细胞骨架造成的影响,初步探讨其与病毒血症发生的关系。方法采用qRT-PCR技术及免疫... 详细信息

目的研究肠道病毒A组71型(Enterovirus group A type 71,EV-A71)在人脐静脉血管内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)中的增殖及对细胞骨架造成的影响,初步探讨其与病毒血症发生的关系。方法采用qRT-PCR技术及免疫荧光技术检测EV-A71在HUVECs中的复制和增殖,用免疫荧光双染色技术观察三种细胞骨架在EV-A71感染后的变化。结果 EV-A71能够有效感染HUVECs,且感染后24 h在细胞内复制达到高峰。病毒感染后微丝骨架完全解聚,微管骨架排列方式发生改变,而中间纤维结构模糊不清;同时检测到微管及中间纤维与病毒抗原共存。结论 EV-A71可以感染HUVECs并在其内有效复制增殖,同时诱导HUVECs三种细胞骨架发生改变,提示细胞骨架可能参与EV-A71感染HUVECs的过程。

关键词：肠道病毒A组71型感染血管内皮细胞细胞骨架

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恶性横纹肌样瘤(MRT)的起源研究——高变异率HeLa细胞致裸鼠产生MRT的实验研究

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Acta Genetica Sinica 2000年第12期27卷 1057-1071,T002页

作者：张德礼黄高升李六金何旭玉夏耕田高步先白晓鸿刘尚高北京大学医学部第四军医大学基础部病理学教研室第四军医大学动物保健品研制中心毒理学研究室西安710032 中国农业大学动物医学院传染病微生物学教研室北京100094

：HeLa细胞KB株、X株、NM20／X株、H株的染色体众数依次为60±3（超二倍体）、62±3（超二倍体）、68±3（超二倍体和亚四倍体）和78±2（亚四倍体），所占比率分别为72%～76%，69%，52%和40%。在纯化3代的肿瘤阴性对... 详细信息

：HeLa细胞KB株、X株、NM20／X株、H株的染色体众数依次为60±3（超二倍体）、62±3（超二倍体）、68±3（超二倍体和亚四倍体）和78±2（亚四倍体），所占比率分别为72%～76%，69%，52%和40%。在纯化3代的肿瘤阴性对照二倍体猫肾（染色体众数38所占比率80%）和犬肾原代细胞皮下接种裸鼠的致癌／致瘤率分别为0%（0／22）和0%（0／10），X株HeLa细胞冻融裂解物皮下接种裸鼠产生进行性缩小肿瘤的比率为20%（1／5）的前提下，HeLa细胞KB株、X株、NM20／X株皮下接种裸鼠产生进行性生长恶性肿瘤的比率分别为100%（10／10），100%（25／25）和100%（5／5），H株细胞皮下接种裸鼠产生恶性肿瘤的比率为50%（5／10）。其中，只有HeLa细胞KB株10～11代（染色体结构畸变率高达20%，出现18%双着丝点和2%断片）以超高数量接种的1组4只裸鼠（0.17ml 12.75×107／鼠）才均形成MRT，特别是从染色体众数不同的3株HeLa细胞中筛选出致瘤性强的X株，连传20代后皮下接种裸鼠形成低分化肿瘤，定名为NM20／X株0代，其染色体众数因经裸鼠体内传代选育而明显增大（染色体众数为68±3，所占比率为52%），实体瘤手术切除后体外连传11代，再皮下接种裸鼠均形成MRT（5／5），但要求完形活细胞接种量要大（5～12×107／鼠），肿瘤产生?

关键词：恶性横纹肌样瘤 HeLa细胞高变异率

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我国不同基因型水痘-带状疱疹病毒流行毒株gE基因序列分析

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病毒学报 2013年第2期29卷 112-118页

作者：江龙凤甘霖李珊山冯艳艳姜薇段亚平陈敬贤王明丽安徽医科大学微生物学教研室合肥市230032 吉林大学白求恩第一医院皮肤科长春市130021 新疆维吾尔自治区人民医院皮肤科乌鲁木齐830000 北京大学附属第三医院皮肤科北京市100191 西藏大学医学院基础部拉萨850000 哥伦比亚大学病理与细胞生物学教研室纽约市10032

为进一步了解我国不同地区流行的水痘—带状疱疹病毒(VZV)病毒株的基因型分布和分析代表性病毒株gE基因序列。于2010年12月至2011年6月期间,收集来自北京市、长春市、拉萨市和乌鲁木齐市4个地区水痘和带状疱疹患者的疱疹液拭子和皮肤痂... 详细信息

为进一步了解我国不同地区流行的水痘—带状疱疹病毒(VZV)病毒株的基因型分布和分析代表性病毒株gE基因序列。于2010年12月至2011年6月期间,收集来自北京市、长春市、拉萨市和乌鲁木齐市4个地区水痘和带状疱疹患者的疱疹液拭子和皮肤痂片,共计18份。用单个核苷酸多态性(SNP)谱的方法确定病毒株的基因型。然后采用聚合酶链反应(PCR)方法扩增gE基因的全长片段,并进行测序分析。SNP分析显示18个病毒株的基因型共为4种,其中有7株属于clade2遗传支,1株属于clade3遗传支,4株为clade5遗传支。另有6株病毒兼有不同遗传支的特征,按照目前国际通用的分型方法不能归属于任何明确的遗传支。对不同病毒株gE基因序列分析,除了发现3个国外已有报道的1个同义突变(T660C)和2个反义突变(C119T、C1606A),还发现了3个新的反义突变(C56T、C1109T和C917A)和4个同义突变(C54T、T1075C、T816C和G279A)。首次在我国新疆自治区发现了clade5遗传支的VZV,在长春市还发现了目前尚未能分型的6株病毒。对部分病毒株gE基因序列分析,在gE的e1和c1抗原表位的编码区内中检出1个新型反义突变(C917A),需要进一步研究该突变对该病毒免疫原性和致病性的影响。

关键词：水痘-带状疱疹病毒基因型 gE糖蛋白单个核苷酸多态性同义突变反义突变

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在《医学微生物学》教学中探讨医患关系

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继续医学教育 2016年第11期30卷 84-85页

作者：安静朱俊萍陈辉首都医科大学基础医学院病原生物学系微生物学教研室北京100069

在医学教育中应加强人文教育已成为共识。作为医学学科的一个重要分支,微生物学的研究发展对医患关系产生相当的影响出乎很多人的意料。其核心是因为科学技术的进步造成医学的工具化从而影响医生与患者之间的密切与稳定的关系。同时,微... 详细信息

在医学教育中应加强人文教育已成为共识。作为医学学科的一个重要分支,微生物学的研究发展对医患关系产生相当的影响出乎很多人的意料。其核心是因为科学技术的进步造成医学的工具化从而影响医生与患者之间的密切与稳定的关系。同时,微生物领域中的一些悬而未决的问题也影响着患者对医生的信任。甚至,由于抗生素的使用带来的利弊也在一定程度上左右着医患关系的发展。在医学微生物教学过程适当进行医患关系的探讨,有利于医学生提高人文素养,正确认识医患关系,理性看待医患矛盾。

关键词：医学微生物学教学医患关系

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中国人α1型干扰素基因新变种的cDNA序列测定及其表达

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同济医科大学学报 1999年第1期28卷 4-6页

作者：王晶朱千政陈秀珠陈望秋侯云德武汉同济医科大学基础医学院微生物学教研室北京军事医学科学院微生物流行病研究所中国预防医学科学院病毒学研究所

为了逐步阐明中国人ＩＦＮ－α基因结构与功能的特点，将从一中国汉族正常胎儿肝细胞染色体ＤＮＡ中获得的一组ＰＣＲ克隆产物（ＰＣＲＡ０１、ＰＣＲＡ０２）分别进行核苷酸序列测定。结果表明，以上两次ＰＣＲ产物序列完全相同，它们... 详细信息

为了逐步阐明中国人ＩＦＮ－α基因结构与功能的特点，将从一中国汉族正常胎儿肝细胞染色体ＤＮＡ中获得的一组ＰＣＲ克隆产物（ＰＣＲＡ０１、ＰＣＲＡ０２）分别进行核苷酸序列测定。结果表明，以上两次ＰＣＲ产物序列完全相同，它们与过去分离的ＩＦＮ－α１和ＩＦＮ－αＤ基因之间的氨基酸序列差异小于１％，为ＩＦＮ－α１基因的不同变种。ＰＣＲＡ０１、ＰＣＲＡ０２开放读码框架完全相同，与ＩＦＮ－α１和ＩＦＮ－αＤ基因相比较，其第２９９位为Ｔ，与其相应编码的第１００位氨基酸为Ｖａｌ。该基因为继黎孟枫等１９９１年所分离的ＩＦＮ－α１Ｃ基因之后所发现的又一中国人α１型干扰素基因新变种——ＩＦＮ－α１／１００Ｖ，建议命名为ＩＦＮ－α１ｄ基因。将该基因克隆于原核表达载体ＰＢＶ２２０，测定其抗病毒活性为２．４×１０７Ｕ／Ｌ。

关键词： IFN-α1变种序列分析原核表达

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登革病毒包膜蛋白的原核表达及免疫原性研究

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微生物与感染 2014年第3期9卷 152-156页

作者：房树玉吴艳花崔晓云范东瀛安静首都医科大学基础医学院病原生物学系微生物学教研室北京100069

登革病毒感染引起的登革热和登革出血热/登革休克综合征是目前流行最为广泛的虫媒病毒病,但其发病机制不明,也无疫苗和特异性抗病毒药物用于防治。登革病毒包膜蛋白(E蛋白)在病毒致病和免疫过程中发挥重要作用。本研究构建了登革病毒2型... 详细信息

登革病毒感染引起的登革热和登革出血热/登革休克综合征是目前流行最为广泛的虫媒病毒病,但其发病机制不明,也无疫苗和特异性抗病毒药物用于防治。登革病毒包膜蛋白(E蛋白)在病毒致病和免疫过程中发挥重要作用。本研究构建了登革病毒2型E蛋白基因的重组质粒E/pGEX-6P-1,并优化表达条件,获得登革病毒E蛋白的高效可溶性表达;用谷胱甘肽琼脂糖凝胶4B亲和层析柱纯化,获得纯度较高的蛋白。该蛋白具有较好的免疫原性,免疫小鼠后可获得高效价抗体。本研究为进一步了解登革病毒E蛋白的功能及其在相关疾病中的应用奠定了基础。

关键词：登革病毒包膜蛋白原核表达免疫原性

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寨卡病毒动物感染模型的建立及应用

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国际药学研究杂志 2018年第9期45卷 645-650页

作者：闫赟政黄敏王全军钟武大连医科大学基础医学院微生物学教研室大连116044 军事科学院军事医学研究院毒物药物研究所抗毒药物与毒理学国家重点实验室北京100850

寨卡病毒与新生儿小头畸形、格林-巴利综合征等严重神经系统疾病密切相关。作为一种新发、突发传染病,寨卡病毒动物感染模型成为当前研究热点。动物感染模型的建立对于病毒致病机制研究、病原-宿主相互作用研究有重要意义,更是药物和疫... 详细信息

寨卡病毒与新生儿小头畸形、格林-巴利综合征等严重神经系统疾病密切相关。作为一种新发、突发传染病,寨卡病毒动物感染模型成为当前研究热点。动物感染模型的建立对于病毒致病机制研究、病原-宿主相互作用研究有重要意义,更是药物和疫苗研发所不可或缺的重要环节。本文基于寨卡病毒感染所致的不同疾病和不良结局,主要围绕致死性感染模型、神经系统损伤模型以及生殖系统损伤模型,对现有寨卡病毒动物感染模型及其应用进行综述。

关键词：寨卡病毒动物感染模型模型应用

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MEK1/2抑制剂U0126抑制肠道病毒71型的复制

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中国生物化学与分子生物学报 2010年第6期26卷 538-545页

作者：王波丁丽新邓娟张浩朱萌易婷刘静徐萍鲁凤民彭宜红北京大学医学部病原生物学系北京100191 京市疾病预防控制中心传染病地方病控制所北京100013 南昌大学医学院微生物学教研室南昌330006 北京大学天然药物及仿生药物国家重点实验室北京100191

为了揭示肠道病毒71型(enterovirus71,EV71)的复制与宿主细胞Raf/MEK/ERK信号通路(简称ERK通路)的相互关系,本研究应用临床诊断为手足口病的患儿疱疹液,通过易感细胞分离培养、RT-PCR及序列测定,以及Western印迹技术等方法,成功分离到E... 详细信息

为了揭示肠道病毒71型(enterovirus71,EV71)的复制与宿主细胞Raf/MEK/ERK信号通路(简称ERK通路)的相互关系,本研究应用临床诊断为手足口病的患儿疱疹液,通过易感细胞分离培养、RT-PCR及序列测定,以及Western印迹技术等方法,成功分离到EV71临床株.进一步用该分离株感染易感细胞,通过观察宿主细胞p-ERK1/2蛋白磷酸化水平、病毒特异性衣壳蛋白VP1水平、病毒半数组织培养感染量(50%tissue culture infectious dose,TCID50),以及感染细胞的CPE等指标,以期揭示ERK通路在EV71复制的作用.结果表明,EV71的复制可引起细胞ERK通路的活化;而用MEK1/2特异性的抑制剂U0126预先抑制ERK通路的活化,可显著地降低受染细胞上清液中的病毒的感染滴度(以TCID50表示)、受染细胞中EV71VP1蛋白水平、受染细胞中EV71核酸水平,以及受染细胞的细胞病变效应(cytopathic effect,CPE).提示ERK信号通路的活化对EV71的复制具有重要的作用.本研究为进一步阐明EV71在宿主细胞内的复制机制、寻找新型抗病毒靶标等研究奠定了良好的基础.

关键词：肠道病毒71型半数组织培养感染量 MEK1/2特异性抑制剂U0126 细胞外信号调节激酶通路衣壳蛋白VP1

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