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解剖学报 2012年第6期43卷 756-761页

作者：程媛牛苗苗马博唐岩李枫战军北京大学基础医学院组织学与胚胎学教研室北京100191

目的制备细胞分选蛋白家族成员细胞分选蛋白17(SNX17)的多克隆抗体,为深入研究SNX17奠定基础。方法 PCR扩增编码人SNX17C端270个氨基酸的cDNA片段,DNA重组入原核表达载体pGEX-4T-1和pMal-C2x,转化大肠杆菌BL-21(DE3)菌株,异丙基-β-D-... 详细信息

目的制备细胞分选蛋白家族成员细胞分选蛋白17(SNX17)的多克隆抗体,为深入研究SNX17奠定基础。方法 PCR扩增编码人SNX17C端270个氨基酸的cDNA片段,DNA重组入原核表达载体pGEX-4T-1和pMal-C2x,转化大肠杆菌BL-21(DE3)菌株,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导分别表达GST-SNX17C端和MBP-SNX17C端融合蛋白。采用电泳纯化的GST-SNX17C端融合蛋白于第1天,第28天,第42天3次免疫新西兰白兔。采用亲和层析和分子筛纯化的MBP-SNX17C端融合蛋白,酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清中多克隆抗体的效价,于第56天取兔全血,析出血清,纯化IgG。免疫印迹法检测SNX17兔多克隆抗体的有效性和特异性,免疫印迹法检测小鼠30种器官中SNX17的表达。结果成功构建了pGEX-4T-1/SNX17C端和pMal-C2x/SNX17C端的表达质粒,成功诱导表达纯化了GST-SNX17C端和MBP-SNX17C端融合蛋白,纯化后的IgG可识别COS-7细胞中外源转入的GFP-SNX17,并与GFP抗体识别的条带在同一位置上,通过SNX17C端多克隆抗体检测了SNX17在小鼠子宫、卵巢和乳腺中表达高而在睾丸、前列腺和输精管中表达低。结论成功制备特异而有效的兔抗人SNX17C端多克隆抗体,此抗体可用于免疫印迹法分析,初步确定了SNX17在小鼠器官中的表达谱。

关键词：细胞分选蛋白17 蛋白纯化多克隆抗体免疫印迹法小鼠新西兰大白兔

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红毛五加多糖对人乳腺癌细胞系MDA-MB-231增殖和核转录因子p53、c-myc蛋白表达的影响

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解剖学报 2012年第3期43卷 387-392页

作者：程媛战军唐岩李枫唐军民北京大学基础医学院组织学与胚胎学教研室北京100191

目的探讨红毛五加多糖(AGP)对人乳腺癌细胞系MDA-MB-231增殖以及对细胞核转录因子p53、c-myc表达的影响。方法在DMEM培养基内加入不同浓度AGP(0.15625、0.3125、0.625、1.25、2.5 g/L)体外培养人乳腺癌细胞系MDA-MB-231 1d、3d、5d、7d... 详细信息

目的探讨红毛五加多糖(AGP)对人乳腺癌细胞系MDA-MB-231增殖以及对细胞核转录因子p53、c-myc表达的影响。方法在DMEM培养基内加入不同浓度AGP(0.15625、0.3125、0.625、1.25、2.5 g/L)体外培养人乳腺癌细胞系MDA-MB-231 1d、3d、5d、7d后,用细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒WST-1测定人乳腺癌细胞的增殖,倒置显微镜观察其形态变化;用免疫荧光法、免疫印迹法检测人乳腺癌细胞凋亡相关蛋白p53、c-myc的表达。结果 WST-1法显示,不同浓度AGP作用3d、5d、7d后对人乳腺癌细胞系MDA-MB-231的增殖具有抑制作用,与阴性对照组相比差异有显著性(P<0.05);抑制率与AGP剂量、作用时间呈依赖性。免疫荧光法及免疫印迹法显示,AGP作用于人乳腺癌细胞系MDA-MB-231后,其细胞的c-myc表达明显减弱,并向细胞质内聚集;而免疫印迹法显示p53表达显著增强。结论 AGP具有抑制人乳腺癌细胞系MDA-MB-231增殖的作用,这可能与AGP下调c-myc表达、上调p53表达有关。

关键词：红毛五加多糖乳腺癌细胞株MDA-MB-231 c—myc p53 WST-1 免疫荧光法免疫印迹法人

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SARS患者脾内IL-6I、FN-β和IP-10的免疫组织化学观察及定量分析

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解剖学报 2009年第3期40卷 458-462页

作者：陈丽唐军民战军唐岩李枫任彩霞梅芳北京大学基础医学院组织学与胚胎学教研室

目的通过对严重急性呼吸综合征（SARS）患者脾内白细胞介素6（IL-6）,干扰素β（IFN-β）和干扰素γ诱导蛋白10（IP-10）的免疫组织化学结果分析,深入探讨SARS患者脾组织的病理变化及其发病机制。方法通过免疫组织化学技术观察6例SARS... 详细信息

目的通过对严重急性呼吸综合征（SARS）患者脾内白细胞介素6（IL-6）,干扰素β（IFN-β）和干扰素γ诱导蛋白10（IP-10）的免疫组织化学结果分析,深入探讨SARS患者脾组织的病理变化及其发病机制。方法通过免疫组织化学技术观察6例SARS死亡患者脾和6例意外死亡者正常脾组织细胞内IL-6、IFN-β和IP-10的表达情况,并进行图像分析。结果SARS患者脾红髓内含大量IL-6阳性细胞,阳性产物呈团块状分布于细胞质和细胞核。图像分析结果显示,SARS患者脾红髓内IL-6阳性细胞的平均吸光度值（AA）与正常对照组比较,有显著性差异（P〈0.05）;SARS患者脾红髓内阳性细胞的细胞核、细胞质呈IFN-β阳性,阳性产物呈棕黄色团块状,图像分析结果显示,SARS患者脾组织内IFN-β阳性细胞的AA值与正常对照组比较,有显著性差异（P〈0.05）;SARS患者脾红髓内含大量IP-10阳性细胞,阳性产物呈棕黄色团块状,分布于细胞核和细胞质。图像分析结果显示,SARS患者脾组织内IP-10阳性细胞的AA值与正常对照组比较,有显著性差异（P〈0.05）。3种细胞因子在SARS患者残存的脾白髓内均呈阴性。结论SARS患者脾内细胞的IL-6、IFN-β和IP-10反应均相对增强,提示SARS患者脾组织的病理性损伤以及免疫功能缺陷可能与上述促炎症因子、免疫抑制因子及趋化因子的相对增多有关。

关键词：严重急性呼吸综合征白细胞介素6 干扰素β 干扰素γ诱导蛋白10 脾免疫组织化学人

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人早期胚中CD20阳性细胞的免疫组织化学定位

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解剖学报 2007年第2期38卷 238-240页

作者：刘影唐军民唐岩常昕莹李枫北京大学基础医学院组织学与胚胎学教研室北京100083

目的探索CD20阳性细胞在人早期胚中的分布及意义。方法用免疫组织化学SP法对10例6—7周人早期胚内CD20阳性细胞进行定位观察。结果 ***20阳性细胞局限于人早期胚肝内；2．在人胚肝内，CD20阳性颗粒主要局限于B细胞的细胞核内，呈不均... 详细信息

目的探索CD20阳性细胞在人早期胚中的分布及意义。方法用免疫组织化学SP法对10例6—7周人早期胚内CD20阳性细胞进行定位观察。结果 ***20阳性细胞局限于人早期胚肝内；2．在人胚肝内，CD20阳性颗粒主要局限于B细胞的细胞核内，呈不均质的颗粒状分布，细胞质和细胞膜呈阴性反应。结论在人早期胚内，CD20定位于肝内的B细胞，并分布在细胞核内；该研究结果为深入探讨CD20阳性细胞的功能和作用机制提供了重要线索。

关键词： CD20 B细胞免疫组织化学人早期胚

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人肝癌细胞RNA电转染至未成熟树突状细胞的扫描电镜观察

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解剖学报 2007年第3期38卷 334-338页

作者：战军唐军民唐岩北京大学基础医学院组织学与胚胎学教研室北京100083

目的观察电转染人肝癌细胞RNA前后未成熟树突状细胞(imDCs)的表面形态学变化。方法取人外周血,纯化获取单核细胞后诱导其成为imDCs,然后通过电转染方法将人肝癌细胞RNA导入其内;用7种特异性抗体的免疫细胞化学技术对电转染前后的树突状... 详细信息

目的观察电转染人肝癌细胞RNA前后未成熟树突状细胞(imDCs)的表面形态学变化。方法取人外周血,纯化获取单核细胞后诱导其成为imDCs,然后通过电转染方法将人肝癌细胞RNA导入其内;用7种特异性抗体的免疫细胞化学技术对电转染前后的树突状细胞鉴定后,进行扫描电镜观察。结果电转染人肝癌细胞RNA后imDCs内TERT表达显著增加,其他分子表达无显著改变。电转染前,imDCs多呈圆形、椭圆形或不规则形,体积较单核细胞大,但大小不均,在细胞表面可见长短不一的微绒毛,或/和许多泡状、面纱状或云朵状细胞突起;电转染后,可在imDCs表面见到由于电转染所造成的孔,并有一定数量的细胞融合和细胞死亡,但绝大多数细胞可恢复至正常结构状态。结论电转染打孔可为外源物质(如肝癌细胞RNA或其他肿瘤细胞RNA)导入细胞内提供可行性,并为进一步利用imDCs制作肿瘤疫苗,开展肿瘤的生物治疗提供一种可行方案。

关键词：电转染肝癌细胞RNA 未成熟树突状细胞扫描电镜人

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巨噬细胞条件培养液对原代培养小鼠成肌细胞生长的影响

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解剖学报 2007年第3期38卷 320-324页

作者：舒丹毅唐军民唐岩李枫北京大学基础医学院组织学胚胎学教研室北京100083

目的观察小鼠巨噬细胞条件培养液对小鼠成肌细胞生长的影响。方法小鼠腹腔内连续3d注射肌匀浆和淀粉混合物,然后分离小鼠腹腔巨噬细胞,在无血清培养液中培养48h后收集上清。取生后5d小鼠的成肌细胞,在含10%血清的DMEM/F12培养液中培养36... 详细信息

目的观察小鼠巨噬细胞条件培养液对小鼠成肌细胞生长的影响。方法小鼠腹腔内连续3d注射肌匀浆和淀粉混合物,然后分离小鼠腹腔巨噬细胞,在无血清培养液中培养48h后收集上清。取生后5d小鼠的成肌细胞,在含10%血清的DMEM/F12培养液中培养36-48h后,将血清浓度降低至0.5%。将巨噬细胞培养上清加入低浓度血清培养的成肌细胞中,作用72h后收集细胞,通过Wright染色、LDH细胞化学和免疫细胞化学方法观察成肌细胞的生长情况。结果巨噬细胞条件培养液能够在低浓度血清的条件下维持成肌细胞的正常形态和活性,并促进成肌细胞增殖。实验组LDH阳性细胞与对照组相比,其平均吸光度与积分吸光度均存在极显著性差异(分别为P<0.001和P<0.000 1)。免疫细胞化学显示,实验组desmin阳性细胞数明显多于对照组。结论巨噬细胞条件培养液中含有促进小鼠成肌细胞生长的因子。

关键词：巨噬细胞成肌细胞体外培养免疫细胞化学小鼠

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严重急性呼吸综合征患者肾内免疫细胞的免疫组织化学观察

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解剖学报 2008年第2期39卷 227-230页

作者：任彩霞唐军民唐岩李枫毕振伍战军北京大学基础医学院组织学与胚胎学教研室北京100083

目的探讨严重急性呼吸综合征(SARS)患者肾内免疫细胞的免疫组织化学变化并对其作用进行分析。方法应用免疫组织化学方法显示6例SARS死亡患者和3例意外死亡者肾内免疫细胞,进行其形态观察,并采用图像分析系统进行定量分析。结果6例SARS... 详细信息

目的探讨严重急性呼吸综合征(SARS)患者肾内免疫细胞的免疫组织化学变化并对其作用进行分析。方法应用免疫组织化学方法显示6例SARS死亡患者和3例意外死亡者肾内免疫细胞,进行其形态观察,并采用图像分析系统进行定量分析。结果6例SARS患者肾内CD68+单核/巨噬细胞显著增多(P<0.05),CD3+T细胞、CD20+B细胞和S-100+树突状细胞与对照组无差别(P>0.05)。结论SARS患者肾内单核/巨噬细胞为主要免疫应答细胞,提示单核/巨噬细胞在SARS肾病变中起着重要作用。而T细胞、B细胞以及树突状细胞可能受到SARS冠状病毒的攻击,其功能可能遭到破坏。

关键词：严重急性呼吸综合征(SARS) 肾免疫细胞免疫组织化学人

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SARS患者脾树突状细胞和巨噬细胞的免疫组织化学观察

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解剖学报 2007年第2期38卷 200-204页

作者：战军唐军民唐岩李枫梅芳王国涛顾江北京大学基础医学院组织学与胚胎学教研室北京100083

目的对严重急性呼吸综合征(SARS)患者脾树突状细胞、巨噬细胞数量和巨噬细胞大小进行定量分析,为SARS的病理变化和发病机制的探讨提供证据。方法通过免疫组织化学技术对6例SARS死亡患者脾和6例意外死亡者正常脾S-100+、CD68+、HLA-DR+、... 详细信息

目的对严重急性呼吸综合征(SARS)患者脾树突状细胞、巨噬细胞数量和巨噬细胞大小进行定量分析,为SARS的病理变化和发病机制的探讨提供证据。方法通过免疫组织化学技术对6例SARS死亡患者脾和6例意外死亡者正常脾S-100+、CD68+、HLA-DR+、CD83+细胞的分布进行观察,并采用图像分析系统对阳性细胞数量或体积进行分析。结果SARS死亡患者脾内白髓中S-100+树突状细胞数较正常平均减少80.49%,有的甚至完全消失;脾红髓中CD68+巨噬细胞数量较正常平均减少39.48%,体积是正常平均值的2.21倍。脾白髓中HLA-DR+抗原呈递细胞明显减少。SARS死亡患者脾与正常脾中均无CD83+成熟树突状细胞。结论SARS患者免疫系统中抗原呈递系统遭到严重破坏,支持SARS是一种病毒性免疫缺陷病。SARS病毒不能引发树突状细胞成熟。巨噬细胞的体积增大处于激活状态,提示巨噬细胞在SARS发病机制中起一定作用。

关键词：严重急性呼吸综合征(SARS) 树突状细胞巨噬细胞免疫组织化学脾人

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整体显示大鼠骨骼和软骨的复合染色法

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解剖学报 2006年第1期37卷 117-119页

作者：赵荧张栩胤北京大学基础医学院组织学与胚胎学教研室北京100083

目的探讨显示不同时期大鼠（胎鼠、仔鼠、近成年鼠）骨骼和软骨的复合染色方法。方法将大鼠整体标本去除皮肤、皮下脂肪组织及内脏，固定于95％酒精；丙酮脱脂；0．1％茜素红S和0．15％-0．3％阿利新蓝染骨骼和软骨；0．5％。2％氢氧化... 详细信息

目的探讨显示不同时期大鼠（胎鼠、仔鼠、近成年鼠）骨骼和软骨的复合染色方法。方法将大鼠整体标本去除皮肤、皮下脂肪组织及内脏，固定于95％酒精；丙酮脱脂；0．1％茜素红S和0．15％-0．3％阿利新蓝染骨骼和软骨；0．5％。2％氢氧化钾溶液分色和透明。结果含钙骨骼呈玫瑰红色，软骨呈蓝色，其他组织均为无色透明状。结论去除皮肤、皮下脂肪组织及内脏的整体大鼠标本采用茜素红S和阿利新蓝复合染色法，可使骨和软骨获得最佳染色效果。

关键词：骨骼软骨茜素红S 阿利新蓝复合染色大鼠

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硒对氧化偶氮甲烷所致大鼠结肠癌形成过程中垂体远侧部促肾上腺皮质激素阳性细胞的影响

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解剖学报 2008年第4期39卷 493-497页

作者：孙红亚唐军民唐岩甄昱扬州大学医学院组织学与胚胎学教研室扬州225001 北京大学基础医学院组织学与胚胎学教研室北京100083

目的观察硒对致癌剂氧化偶氮甲烷(AOM)所致大鼠结肠癌形成过程中,垂体远侧部ACTH阳性细胞的影响。方法随机将20只3周龄SPF级断乳雄性SD大鼠分为正常对照组、实验对照组、致癌剂前补硒组、致癌剂后补硒组。用AOM(15mg/kg)每周腹腔注射,连... 详细信息

目的观察硒对致癌剂氧化偶氮甲烷(AOM)所致大鼠结肠癌形成过程中,垂体远侧部ACTH阳性细胞的影响。方法随机将20只3周龄SPF级断乳雄性SD大鼠分为正常对照组、实验对照组、致癌剂前补硒组、致癌剂后补硒组。用AOM(15mg/kg)每周腹腔注射,连续2周,诱导大鼠结肠癌形成。亚硒酸钠(Na2SeO3)水溶液(4mg/L)分别在AOM前、后干预,并持续至实验结束。各组均于34周后取大鼠垂体,用免疫组织化学SP法,观察垂体远侧部ACTH阳性细胞的形态结构及免疫组织化学反应强度,并进行图像分析。结果亚甲基蓝染色光镜下观察,可见AOM腹腔注射的大鼠结肠黏膜出现异常隐窝(AC)和异常隐窝灶(ACF)。免疫组织化学法显示,实验对照组大鼠垂体远侧部ACTH阳性细胞与正常对照组比较,阳性反应显著性增强(P<0.01);硒干预的各组与实验对照组相比,ACTH阳性细胞的阳性反应进一步增强(P<0.01)。结论硒可增强AOM所致大鼠结肠癌形成过程中垂体远侧部ACTH阳性细胞的功能。

关键词：结肠癌亚硒酸钠 ACTH阳性细胞垂体氧化偶氮甲烷免疫组织化学大鼠

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