检索结果-内蒙古大学图书馆

癌症 2006年第4期25卷 438-442页

作者：马朋曹同涛顾国峰赵翔杜宇国张页滨州医学院生物学教研室山东滨州256603 中国科学院生态环境研究中心北京100085 北京大学医学部细胞生物学系北京100083

背景与目的:紫花茄(SolanumindicumL.)是一种有抗炎和治疗跌打损伤作用的传统中草药,含有丰富的结构独特的薯蓣皂甙,即紫花茄皂甙。我们的研究结果已证实,数种合成紫花茄皂甙有强抗肿瘤效果。本研究探讨合成紫花茄皂甙Ⅰ("-D-木吡... 详细信息

背景与目的:紫花茄(SolanumindicumL.)是一种有抗炎和治疗跌打损伤作用的传统中草药,含有丰富的结构独特的薯蓣皂甙,即紫花茄皂甙。我们的研究结果已证实,数种合成紫花茄皂甙有强抗肿瘤效果。本研究探讨合成紫花茄皂甙Ⅰ("-D-木吡喃糖基-(1→3)-[#-L-鼠李吡喃糖基-(1→2)]-"-D-半乳吡喃糖基薯蓣苷)的抗肿瘤机制。方法:以不同浓度紫花茄皂甙处理人肝癌细胞Bel-7402后,用酸性磷酸酶(acidphosphataseassay,APA)法测定增殖抑制率和IC50。用结晶紫染色显微镜观察细胞的形态学变化。用蛋白免疫印迹法检测凋亡过程中相关蛋白的变化。结果:紫花茄皂甙对Bel-7402细胞有明显的增殖抑制作用,在皂甙Ⅰ作用72h后的IC50为4.20μg/ml。光学显微镜下可见细胞密度降低,胞质中出现膜泡等形态学变化。蛋白免疫印迹检测结果显示,紫花茄皂甙Ⅰ作用后细胞质中的细胞色素c含量明显增加,Caspase-3被激活,细胞内的poly(ADR-ribose)polymerase(PARP)蛋白被剪切。结论:紫花茄皂甙对人肝癌细胞的增殖抑制呈浓度相关性,且通过线粒体依赖性通路诱导肿瘤细胞凋亡。

关键词：紫花茄紫花茄皂甙肝肿瘤 Bel-7402细胞株凋亡

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辐射损伤对HRAD17基因转染不同类型细胞的影响

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中华放射医学与防护杂志 2006年第1期26卷 3-5页

作者：钱鑫韩云孙艳杨业鹏朱应葆北京大学第三医院中心实验室细胞与分子生物学室 100083 北京大学第三医院基础医学院放射医学教研室

目的探讨HRAD17在DNA辐射损伤修复及辐射诱导的凋亡中的作用。方法利用基因转染技术,对小鼠成纤维细胞NIH3T3和人宫颈癌HeLa细胞均分别转染pDOR-neo载体,pDOR-HRAD17s(正义)和pDOR-HRAD17a(反义)质粒,G418筛选获得阳性克隆。转染后各组... 详细信息

目的探讨HRAD17在DNA辐射损伤修复及辐射诱导的凋亡中的作用。方法利用基因转染技术,对小鼠成纤维细胞NIH3T3和人宫颈癌HeLa细胞均分别转染pDOR-neo载体,pDOR-HRAD17s(正义)和pDOR-HRAD17a(反义)质粒,G418筛选获得阳性克隆。转染后各组细胞去血清培养48 h同步化后给予60Coγ射线10 Gy照射,吸收剂量率为2.54 Gy/min,加入完全培养基继续培养,并于0、61、2、14、36和48 h收集固定细胞,碘化丙啶(PI)避光染色后,流式细胞仪检测细胞DNA量。结果在辐射损伤后,转染正义HRAD17的成纤维细胞主要发生G1/S期阻滞,转染正义HRAD17的肿瘤细胞主要发生G2/M期阻滞;转染正义HRAD17的细胞凋亡比例降低,转染反义HRAD17的细胞凋亡比例升高。结论HRAD17同时参与细胞周期G1/S和G2/M期阻滞,并抑制辐射损伤诱导的细胞凋亡。

关键词： HRAD17 辐射损伤细胞周期凋亡基因转染类型

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γ-干扰素对大鼠胚胎基底前脑及隔区核团胆碱能神经元分化的影响

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神经解剖学杂志 2006年第1期22卷 81-84页

作者：罗艳红安林广西右江民族医学院生物化学与分子生物学教研室百色533000 北京大学医学部细胞生物学系北京100083

为了研究γ-干扰素(IFNγ)对大鼠胚胎基底前脑及隔区核团胆碱能神经元分化的作用,采用免疫组织化学方法对胆碱能神经元的特异性标记酶-胆碱乙酰基转移酶(ChAT)进行染色,ChAT阳性细胞的数量反映了胆碱能神经元的数量,并用14C-乙酰CoA作... 详细信息

为了研究γ-干扰素(IFNγ)对大鼠胚胎基底前脑及隔区核团胆碱能神经元分化的作用,采用免疫组织化学方法对胆碱能神经元的特异性标记酶-胆碱乙酰基转移酶(ChAT)进行染色,ChAT阳性细胞的数量反映了胆碱能神经元的数量,并用14C-乙酰CoA作底物来检测ChAT活性。结果显示,IFNγ处理过的实验组,ChAT阳性细胞数量显著增加,ChAT活性也增加,这种增加被大鼠抗小鼠IFNγ单克隆抗体(Ab-IFNγ)完全拮抗。采用流式细胞术对细胞周期进行分析,细胞周期及细胞百分率无明显改变。用MAP2标记神经细胞,神经细胞数基本未增加。以上结果提示:IFNγ不能促进基底前脑和隔区神经元增殖,胆碱能神经元表达增加不是因为神经元数目增加而是分化的结果。

关键词： γ-干扰素(IFNγ) 胆碱能神经元分化增殖

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量子点对体外培养细胞影响的实验观察

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宁夏医学院学报 2006年第6期28卷 474-475,489页

作者：赵承军唐军民唐岩李枫田利明沙印林宁夏医学院组织学与胚胎学教研室银川750004 北京大学医学部基础医学院组织学与胚胎学系北京100083 北京大学基础医学院生物物理学系单分子与纳米生物学实验室北京100083

目的观察量子点(QDs)对体外培养细胞的影响。方法选用小鼠巨噬细胞、人肝癌Bel-7402细胞株进行体外培养并实验,设空白对照组和5个剂量实验组,QDs终浓度为3.125、6.25、12.5、25和50μg/mL,采用MTT法观察QDs作用体外培养细胞后细胞成活情... 详细信息

目的观察量子点(QDs)对体外培养细胞的影响。方法选用小鼠巨噬细胞、人肝癌Bel-7402细胞株进行体外培养并实验,设空白对照组和5个剂量实验组,QDs终浓度为3.125、6.25、12.5、25和50μg/mL,采用MTT法观察QDs作用体外培养细胞后细胞成活情况,于酶标仪上测定OD值,并以均数进行F检验。结果量子点浓度小于6.25μg/mL时,实验组与对照组OD值比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论量子点在一定剂量内不影响体外培养细胞的生长。

关键词：量子点小鼠巨噬细胞人肝癌细胞Bel-7402 MTT法

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转录因子SP1在人肝细胞癌相关基因LAPTM4B启动子区中的调控研究

转录因子SP1在人肝细胞癌相关基因LAPTM4B启动子区中的调控研究

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第四届中国肿瘤学术大会暨第五届海峡两岸肿瘤学术会议

作者：张青云薛世林周柔丽北京大学临床肿瘤学院北京市肿瘤医院检验科北京大学临床肿瘤学院北京市肿瘤医院检验科北京大学基础医学院细胞生物学教研室

原发性肝细胞癌是一种世界性的常见恶性肿瘤,死亡率高,预后极差,其发生发展机制尚不十分清楚。阐明肝癌的发病原因,发生和发展的分子机理对于肝癌的防治和预后具有重要的意义。溶酶体相关4次跨膜蛋白质B（lysosome- associated protein ... 详细信息

原发性肝细胞癌是一种世界性的常见恶性肿瘤,死亡率高,预后极差,其发生发展机制尚不十分清楚。阐明肝癌的发病原因,发生和发展的分子机理对于肝癌的防治和预后具有重要的意义。溶酶体相关4次跨膜蛋白质B（lysosome- associated protein transmembrane 4 beta,LAPTM4B）是由北大医学部周柔丽教授等通过荧光差异显示技术筛选出的一条在成人正常肝中表达很低而在绝大多数肝癌组织中表达高度上调的cDNA片段,并克隆了其全长cDNA的新基因。它定位于染色体8q22．1,具有7个外显子,6个内含子,cDNA 全长2245个核苷酸。以前的研究表明LAPTM4B是一个潜在的原癌基因,它的过表达与肿瘤形成和肝癌的进展相关,可能是肝癌进展到一定阶段的一个重要分子遗传学标志。因此希望对LAPTM4B的转录调控进行研究,从调控该基因表达的上游基因的角度了解其生物学功能以及其在肿瘤发生中的作用。目的:研究在LAPTM4B基因启动子区起重要作用的转录调控因子,为进一步揭示LAPTM4B在肝癌高表达的机制提供理论基础。方法:采用报告基因重组体转染LAPTM4B 高表达的肝癌相关细胞系HepG2细胞和荧光素酶活性测定的方法确定LAPTM4B的核心启动子区;应用凝胶阻滞电泳的方法验证在LAPTM4B核心启动子区起调控作用的转录因子及其特异性。结果:应用LAPTM4B基因6种不同长度的启动子报告基因重组体,转染肝癌细胞系HepG2,荧光素酶活性比较发现位于转录起始点上游558bp的一段DNA（PF3）的启动活性最强,这表明在这段序列中存在着重要的转录因子结合位点。通过检索Object-oriented Transcription Fac— tors Database数据库发现此段启动子序列中含有多种潜在的转录因子结合位点,其中包括一个SPI结合位点。应用凝胶阻滞电泳（electrophoretic mobility shift assay）的方法证明人肝细胞癌细胞系HepG2及SMMC7721细胞核提取物均能与包含SP1结合位点的寡核苷酸探针结合,并且这种结合可以被相应50倍或者100倍非标记探针竞争抑制。结论:位于转录起始点上游558bp的一段DNA（PF3）是LAPTM4B基因的核心启动子;转录因子SP1参与了LAPTM4B基因启动子区的转录调节,可能与LAPTM4B在肝癌的高表达相关。

关键词： LAPTM4B 核心启动子凝胶阻滞电泳转录因子SP1

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LAPTM4B新基因多态性与胃癌易感性的关系

LAPTM4B新基因多态性与胃癌易感性的关系

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第四届中国肿瘤学术大会暨第五届海峡两岸肿瘤学术会议

作者：张青云刘晔钱娜周柔丽北京大学临床肿瘤学院北京市肿瘤医院检验科北京大学临床肿瘤学院北京市肿瘤医院检验科北京大学临床肿瘤学院北京市肿瘤医院检验科北京大学基础医学院细胞生物学教研室

溶酶体相关4次跨膜蛋白质β(lysosome-associ- ated protein transmembrane 4 beta,LAPTM4 β)是由北大医学部周柔丽教授等通过荧光差异显示技术筛选出的一条在成人正常肝中表达很低而在绝大多数肝癌组织中表达高度上调的cDNA片段,并克... 详细信息

溶酶体相关4次跨膜蛋白质β(lysosome-associ- ated protein transmembrane 4 beta,LAPTM4 β)是由北大医学部周柔丽教授等通过荧光差异显示技术筛选出的一条在成人正常肝中表达很低而在绝大多数肝癌组织中表达高度上调的cDNA片段,并克隆了其全长cDNA的新基因。它定位于染色体8q22．1,具有7个外显子,6个内含子,cDNA 全长2245个核苷酸。其存在两种等位基因:LAPTM4B*1和 LAPTM4 β*2。二者的区别在于第一外显子5’UTR内一段19bp的序列。LAPTM4 β·1 只有一个19bp序列,而 LAPTM4 β*2有两个并紧密串连。研究表明肝癌中*2／2型的频率显著高于正常人群。由于LAPTM4 β在正常胃组织表达水平低,在胃癌组织中高表达,它的基因型与胃癌易感性的关系尚不清楚。因此,本实验的目的:探讨LAPTM4 β新基因多态性与胃癌易感性的关系。方法:以病例对照研究的方法,利用基于特异性引物的PCR对350例正常人和214例胃癌患者进行LAPTM4 β基因分型,用x2检验用于检测胃癌组和对照组基因型频率和其它参数分布分析。结果: LAPTM4 β的*2等位基因频率在胃癌组中为33．88％,而对照组为24．14％,较对照组显著增高(P<0．001)。基因型分布在胃癌组和对照组间差异显著(P=0．023)。*1／2和*2／2基因携带者患胃癌的危险性分别是*1／1的1．189倍(95％CI: 1．273—2．601)与2．387倍(95％CI:1．195—4．767)。LAPTM4 β基因型分布与患者年龄,胃癌的病理类型,分化程度,临床分期以及HBV感染等无明显关系。结论:LAPTM4 β基因多态性与胃癌易感性相关,*2等位基因可能是胃癌发生的危险因素。

关键词：胃癌 LAPTM4 β 基因多态性易感性

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一个新的原癌基因编码的四次穿膜蛋白质LAPTM4β——肿瘤治疗中的新靶标

一个新的原癌基因编码的四次穿膜蛋白质LAPTM4β——肿瘤治疗中的...

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第八届海内外生命科学论坛

作者：周柔丽邵根泽刘歆荣魏渲辉彭聪何静刘军建张青云张页林明金月英张莎芮静安北京大学基础医学院细胞生物学教研室(北京) 北京大学临床肿瘤学院免疫室(北京) 北京协和医院(西院)外科(北京)

LAPTM4β(lysosome-associated protein transmembrane 4 beta)是本室近年发现并克隆的一个新的原癌基因.编码两个功能相互拮抗的蛋白质:LAPTM4β-35和LAPTM4β-***4β-35在来自于单层柱状上皮的恶性肿瘤,如人肝癌、乳腺癌、胃癌、肺癌... 详细信息

LAPTM4β(lysosome-associated protein transmembrane 4 beta)是本室近年发现并克隆的一个新的原癌基因.编码两个功能相互拮抗的蛋白质:LAPTM4β-35和LAPTM4β-***4β-35在来自于单层柱状上皮的恶性肿瘤,如人肝癌、乳腺癌、胃癌、肺癌、结肠癌等表达上调.Northern及Western Blot分析分别在mRNA及蛋白质水平证明LAPTM4β在绝大多数人肝癌组织显著高表达,其表达上调的幅度与分化状态负相关.转染实验证明,LAPTM4β-35过表达促进细胞的恶性转化,包括增殖加速、失控,成瘤,迁移及侵袭增强;而LAPTM4β-24过表达的细胞则丧失克隆形成能力并走向凋亡.提示阻遏LAPTM4β-35的表达和上调LAPTM4β-24的表达对某些肿瘤可以作为基因治疗的目标.LAPTM4β-35过表达还可活化其他原癌基因,例如早期即刻反应基因,c-myc、c-fos、c-jun;并上调这些基因编码的转录因子调控的增殖调节蛋白,如cyclin D1和cyclin E.再者,LAPTM4β-35在肝癌细胞存在于质膜、胞内体及溶酶体,并且是细胞增殖调控信号分子的一个组装平台:LAPTM4β-35可与EGF受体及细胞外基质成分层粘连蛋白的α6β1整合素受体相结合,参与EGF及层粘连蛋白基质所启动的信号转导,并涉及PI3K-AKT,FAK-MAPK等信号途径,指明明增殖相关的信号分子的受体可在质膜中通过LAPTM4β蛋白而整合.同时提示LAPTM4β-35参与的上述信号转导途径可能成为抗肿瘤药物设计的靶标.此外,针对LAPTM4β第二胞外区表位的抗体,LAPTM4β-EC2-pAb,可显著抑制肝癌细胞系的增殖.指明针对该表位的人源化单链抗体作为抗肿瘤药物的可能性.总之,LAPTM4β的发现、克隆和功能研究为针对肝癌的基因治疗、药物设计和抗体治疗开拓了新的途径.

关键词：溶酶体相关四次穿膜蛋白质β(LAPTM4β) 原癌基因肝癌基因治疗信号转导药物靶标抗体治疗

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层黏连蛋白与其α6整合素受体对人肝癌细胞表型的调控作用

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中华肿瘤杂志 2003年第1期25卷 31-35页

作者：吕天敬张青云周柔丽北京大学基础医学院细胞生物学与遗传学系 100083 北京市临床肿瘤学院北京市肿瘤防治研究所免疫室 100034

目的利用自制的抗整合素α6亚基胞外区的单克隆抗体(IA6ED McAb)研究人肝癌细胞表面α6整合素胞外区对人肝癌细胞系BEL-7402黏附、铺展的影响以及在控制细胞增殖与分化中的作用。方法以层黏连蛋白(LN)、纤黏连蛋白(FN)、Matrigel分别作... 详细信息

目的利用自制的抗整合素α6亚基胞外区的单克隆抗体(IA6ED McAb)研究人肝癌细胞表面α6整合素胞外区对人肝癌细胞系BEL-7402黏附、铺展的影响以及在控制细胞增殖与分化中的作用。方法以层黏连蛋白(LN)、纤黏连蛋白(FN)、Matrigel分别作为细胞外基质,检测IA6EDMcAb对人肝癌细胞系BEL-7402细胞在不同基质上的黏附、铺展的影响;以MTT法检测McAb对BEL-7402细胞存活或增殖的影响;以明胶酶谱法检测McAb对BEL-7402细胞分泌基质金属蛋白酶(MMPs)的影响;以微粒子免疫吸附法检测对AFP分泌的影响。结果LN可以明显促进BEL-7402细胞AFP及MMPs的分泌;IA6ED McAb的封阻不但可以特异性抑制BEL-7402细胞在LN上的黏附及铺展,而且对BEL-7402细胞以LN为基质的存活或增殖、去分化及异常分化表型有非常显著的抑制作用。结论人肝癌BEL-7402细胞的增殖、分化表型受LN及整合素α6的调节。人肝癌组织细胞外基质成分中LN及细胞表面整合素α6的过表达,可以增强肝癌细胞的去分化及异常分化表型;而用IA6ED McAb阻断LN与肝癌细胞表面α6β1整合素受体的相互作用,可以逆转其去分化及异常分化表型,从而可能降低癌细胞的转移潜能。

关键词：肝癌层黏连蛋白 α6整合素受体单克隆抗体细胞分化

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梅毒密螺旋体Tp47重组蛋白的表达及其应用

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中国公共卫生 2003年第2期19卷 145-146页

作者：张瑞芬庄辉蒋志彬王薇媛张正杜珩刘学恩董庆鸣王小红北京大学基础医学院微生物学教研室北京100083 中国药品生物制品研究所北京大学医院

目的　在大肠埃希菌中表达梅毒密螺旋体 (Treponemapallidum ,Tp)Tp47重组蛋白 ,用其建立诊断梅毒的酶联免疫法 (enzymeimmunoassay ,EIA)。方法　应用聚合酶链反应法 (PCR)从Tp全基因组中扩增目的片段Tp47,并将其克隆到表达载体 pET -... 详细信息

目的　在大肠埃希菌中表达梅毒密螺旋体 (Treponemapallidum ,Tp)Tp47重组蛋白 ,用其建立诊断梅毒的酶联免疫法 (enzymeimmunoassay ,EIA)。方法　应用聚合酶链反应法 (PCR)从Tp全基因组中扩增目的片段Tp47,并将其克隆到表达载体 pET - 3 0a中 ,构建重组质粒pET - 3 0a -Tp47。在大肠埃希菌中表达重组蛋白Tp47,亲和层析柱纯化 ,建立EIA法 ,检测血清中抗 -Tp抗体。结果　获得了Tp47基因重组蛋白的高效表达 ,该重组蛋白存在于细菌上清中 ,占全菌体蛋白 12 %左右 ,分子量约 3 9kDa。蛋白印迹法 (westernblot,WB)显示 ,Tp47重组蛋白具有良好的抗原性。用Tp47重组蛋白建立EIA法 ,检测 11份梅毒血凝试验阳性和 2 8份阴性血清 ,灵敏度为 10 0 % (11/ 11) ,特异性为 96 4% (2 7/ 2 8)。

关键词：梅毒密螺旋体 Tp47 重组蛋白应用梅毒诊断酶联免疫试验

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常温下一次性和间断肝门阻断对肝损伤的对比研究及还原型谷胱甘肽的保护作用

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中华肝胆外科杂志 2003年第11期9卷 678-680页

作者：周立芮静安周柔丽彭学敏王少斌陈曙光曲强赵玉沛中国医学科学院北京协和医院基本外科北京市100032 北京大学基础医学院细胞生物学教研室北京市100083

目的对比常温下一次性和间断人肝血流阻断法所致肝损伤,并探讨还原型谷胱甘肽的保护作用。方法 SD大鼠32只,按人肝血流阻断方式及是否应用还原型谷胱甘肽(GSH)分为4组,即一次性阻断加和不加GSH(CP和CA)组及间断阻断加和不加GSH(IP和IA)... 详细信息

目的对比常温下一次性和间断人肝血流阻断法所致肝损伤,并探讨还原型谷胱甘肽的保护作用。方法 SD大鼠32只,按人肝血流阻断方式及是否应用还原型谷胱甘肽(GSH)分为4组,即一次性阻断加和不加GSH(CP和CA)组及间断阻断加和不加GSH(IP和IA)组,每组8只。CP和CA组持续阻断肝门40min,IP和IA组阻断2个20min并间隔5min,再灌注时间为60min。观察指标为肝组织丙二醛(MDA)和铜/锌超氧化物歧化酶(Cu/Zn SOD)含量,血ALT和AST活性及肝组织光镜和电镜观察。结果组内比较,阻断后血ALT及AST活性较阻断前明显增高,差异有显著意义(P<0.05),MDA和Cu/zn SOD含量则无显著性差异(P>0.05)。再灌注后各值较阻断前均有显著性差异(P<0.05)。组间比较,CP与IP及CA与IA组间各观察值差异均无显著意义(P>0.05)。而再灌注后CP与CA组、IP和IA组比较均有显著性差异(P<0.05)。形态学上,各组阻断后均有细胞损伤表现,再灌注后有所恢复,其中CP和IP组肝细胞结构基本恢复正常,而CA和IA组仍有部分细胞呈空泡变性。各组各时点均未出现不可复性损伤。结论常温下一次性和间断阻断肝门40min均可导致可复性肝损伤,其程度无明显差异。此时限内一次性阻断是肝切除术中适宜的阻断方法。术中应用GSH对其有明显的对抗作用,可能成为一种新的保护方法。

关键词：常温一次性肝门阻断间断性肝门阻断肝损伤还原型谷胱甘肽肝保护

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