检索结果-内蒙古大学图书馆

中华男科学杂志 2011年第11期17卷 966-972页

作者：郭新张艳敏漆正宇秦洁崔光辉桂耀庭蔡志明北京大学深圳医院男性生殖和遗传广东省重点实验室广东深圳518036 深圳北京大学香港科技大学医学中心广东深圳518036

目的:探讨小鼠诱导性多能干细胞IP14D-1是否具备诱导性原始生殖细胞(induced primordial germcells,iPGCs)分化潜能,以及特异基因表达变化及可能机制。方法:未分化IP14D-1培养扩增,分化形成诱导性拟胚体(induced embryoid bodies,iEBs)... 详细信息

目的:探讨小鼠诱导性多能干细胞IP14D-1是否具备诱导性原始生殖细胞(induced primordial germcells,iPGCs)分化潜能,以及特异基因表达变化及可能机制。方法:未分化IP14D-1培养扩增,分化形成诱导性拟胚体(induced embryoid bodies,iEBs)。RT-PCR和免疫荧光分别检测4、7、9 d的iEBs中Lin28、Blimp1、Stra8和Mvh的表达变化和蛋白定位情况。结果:未分化IP14D-1同小鼠胚胎干细胞(mouse embryonic stem cells,mESCs)相同,Lin28表达较弱,Blimp1表达相对较强,Mvh和Stra8也在这两种细胞及其相应iEBs和EBs中表达,但均无明显差别。IP14D-1分化形成的iEBs从4 d生长到7 d时,Lin28表达逐渐增强,到9 d时表现为下降,Blimp1表达则随着iEB生长时间延长而逐渐降低。结论:建立了IP14D-1和相应拟胚体(iEBs)的完善、稳定的培养及分化体系;未分化IP14D-1与mESCs在Lin28、Blimp1、Mvh和Stra8表达方面无明显差别;iEB和EBs的Mvh和Stra8表达也无明显差别。IP14D-1及iEBs具有iPGCs分化潜能,且可能是7 d的iEBs内iPGCs分化数量较多,之后进入iPGCs分化的Lin28低表达时期。

关键词：诱导性多能干细胞原始生殖细胞 Lin28 Blimp1 小鼠

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Lin28调节小鼠胚胎干细胞向原始生殖细胞分化

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中国男科学杂志 2011年第8期25卷 3-8页

作者：郭新张艳敏漆正宇秦洁崔光辉桂耀庭蔡志明男性生殖和遗传广东省重点实验室北京大学深圳医院深圳518036 深圳北京大学香港科技大学医学中心

目的探讨小鼠胚胎干细胞（mouse embryonic stem cells，mESCs）向原始生殖细胞（primordial germcells，PGCs）分化过程中特异基因表达变化及可能机制。方法mESCs分化形成拟胚体（embryoid bodies，EBS），不同浓度atRA（1uM，2uM，5u... 详细信息

目的探讨小鼠胚胎干细胞（mouse embryonic stem cells，mESCs）向原始生殖细胞（primordial germcells，PGCs）分化过程中特异基因表达变化及可能机制。方法mESCs分化形成拟胚体（embryoid bodies，EBS），不同浓度atRA（1uM，2uM，5uM）持续诱导EBS16h、2d和5d，RT—PCR、和免疫荧光分别检测Lin28和Blimpl以及相应蛋白的表达变化。结果atRA诱导16h的EBs其Lin28mRNA表达量较高，随着诱导时间延长而逐渐降低，Blimpl则无明显变化。WB结果显示EBs的Lin28蛋白表达随诱导时间延长逐渐减弱，而Blimpl蛋白表达逐渐增强。免疫荧光显示Lin28和Blimpl阳性信号均定位于细胞胞浆，其变化特点与WB结果相一致。结论EBs经atRA诱导后可影响Lin28的表达，Lin28和Blimpl的变化并不协调，其蛋白表达随着诱导会随之发生变化。atRA诱导可能使PGCs分化的Lin28低水平表达时期提前出现。

关键词：小鼠胚胎干细胞生殖细胞

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Y染色体及其微缺失与男性不育:过去、现在与将来

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中华男科学杂志 2010年第5期16卷 387-394页

作者：蔡志明北京大学深圳医院男性生殖与遗传广东省重点实验室深圳北京大学香港科技大学医学中心泌尿外科研究所广东深圳518036

由遗传缺陷所引起的精子发生障碍是男性不育的一个重要病因。一直以来,Y染色体被认为缺乏重要的功能基因。直到睾丸决定基因的发现,Y染色体的研究才重新得到重视。Y染色体的成功测序揭开了Y染色体的真实结构和Y染色体微缺失的分子基础。... 详细信息

由遗传缺陷所引起的精子发生障碍是男性不育的一个重要病因。一直以来,Y染色体被认为缺乏重要的功能基因。直到睾丸决定基因的发现,Y染色体的研究才重新得到重视。Y染色体的成功测序揭开了Y染色体的真实结构和Y染色体微缺失的分子基础。在Y染色体上的220个基因中,位于AZF区的16个编码基因或基因家族与男性生殖与发育相关。至今,在Y染色体AZF区已发现至少12种缺失。Y染色体上大量的同源序列与回文结构所致非等位的同源性重组是Y染色体微缺失发生的分子基础。Y染色体微缺失是已知的导致男性不育的最主要的分子遗传病因,临床上常使用PCR扩增Y染色体特异的序列标记位点来进行检测。基因组学时代的到来为男性不育的研究带来革命性的工具与方法,有利于加深对Y染色体缺失发生机制的了解,进一步明确Y染色体基因的功能以及相互之间的联系,为基因治疗奠定基础。

关键词： Y染色体男性不育缺失序列标签位点无精子因子

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小鼠胚胎干细胞来源的心肌细胞系的建立

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基础医学与临床 2009年第9期29卷 916-919页

作者：秦洁薛兆英郭新桂耀庭余振东蔡志明北京大学深圳医院男性生殖与遗传广东省重点实验室深圳北京大学香港科技大学医学中心广东深圳518036 北京大学第一医院北京100034

目的建立模拟细胞微环境、促进细胞分化的三维培养体系,以体外诱导和培养小鼠胚胎干细胞（mES-D3）来源的心肌细胞。方法将mES细胞通过悬浮培养获得拟胚体（EBs）后转入Matrigel^TM Matrix3D培养体系中培养。用形态学观察计数收缩集落... 详细信息

目的建立模拟细胞微环境、促进细胞分化的三维培养体系,以体外诱导和培养小鼠胚胎干细胞（mES-D3）来源的心肌细胞。方法将mES细胞通过悬浮培养获得拟胚体（EBs）后转入Matrigel^TM Matrix3D培养体系中培养。用形态学观察计数收缩集落的数量和频率;用免疫组织化学和RT-PCR检测心肌细胞分化相关基因的表达。结果在MatrigelTM中培养5 d左右,可观察到自发节律收缩的EBs,频率约为40~50次/min;继续培养3 d左右,频率约为80-90次/min;到45 d左右大部分集落最终收缩。分化为心肌细胞所表达的特异性蛋白cTnT、Desmin和Actin表达呈阳性,并表达心肌特异性基因cTnT、NKX2E、GATA-4和MLC-2v。结论mES细胞来源的EBs在MatrigelTM培养体系中能够分化为心肌细胞,籍此我们建立了一株细胞系。

关键词：小鼠胚胎干细胞(mES) 拟胚体(EBs) 分化心肌细胞

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LIN28在膀胱癌和膀胱癌细胞系中的表达及意义

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临床泌尿外科杂志 2011年第8期26卷 589-593页

作者：郭新张艳敏孙亮周亮王勇漆正宇秦洁李贤新陈静桂耀庭蔡志明男性生殖和遗传广东省重点实验室北京大学深圳医院深圳518036 深圳北京大学香港科技大学医学中心

目的:探讨LIN28在膀胱癌组织和细胞系中表达情况,以及与microRNA初级Let-7g(pri-Let-7g)之间关系,推测其可能临床意义及对肿瘤进展的影响。方法:采用常规RT-PCR、miRNA转录、免疫荧光和免疫组化方法,检测LIN28 mRNA和pri-Let-7g表达,以... 详细信息

目的:探讨LIN28在膀胱癌组织和细胞系中表达情况,以及与microRNA初级Let-7g(pri-Let-7g)之间关系,推测其可能临床意义及对肿瘤进展的影响。方法:采用常规RT-PCR、miRNA转录、免疫荧光和免疫组化方法,检测LIN28 mRNA和pri-Let-7g表达,以及LIN28蛋白表达定位。结果:2例膀胱癌细胞系均表达LIN28 mRNA,T24表达较强,免疫荧光显示这两个细胞系均表达LIN28蛋白,阳性部位位于细胞胞质,T24荧光强度强于5637。所选10例膀胱癌和相应癌旁组织均表达LIN28 mRNA,二者并无明显不同,与临床分级也无明确关系。免疫组化显示癌组织LIN28表达阳性并定位于胞质,而癌旁正常组织LIN28表达为阴性。此外,两个细胞系pri-Let-7g表达较强,而癌和癌旁组织的pri-Let-7g表达强度无明显差异,需进一步检测其成熟Let-7g在这些组织中是否存在不同,以明确这些miRNA是否发生生物合成的转录后阻断。结论:明确T24和5637两个膀胱癌细胞系均可作为研究LIN28、Let-7与其相应靶基因关系的体外实验模型。尽管并不确定膀胱癌和癌旁组织LIN28、Let-7g表达强度与临床分级是否相关,但至少明确LIN28/LIN28在膀胱癌中表达,为探讨LIN28和Let-7在泌尿系统来源的其他恶性肿瘤中的作用提供借鉴和实验依据。

关键词：膀胱癌 LIN28 Let-7

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Plac8l1在小鼠精子发生过程中的表达特征研究

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重庆医科大学学报 2018年第3期43卷 410-413页

作者：王慧英张蕊张瑾昌文林首都医科大学附属北京世纪坛医院妇产科北京100038 男性生殖与遗传广东省和深圳市重点实验室北京大学深圳医院泌尿外科研究所深圳北京大学香港科技大学医学中心深圳518036

目的:探讨Plac8l1(placenta-specific 8 like 1)基因在小鼠睾丸组织的表达特征,及其与精子发生的相关性。方法:经生物信息学方法初步筛选到一个睾丸特异性表达候选基因Plac8l1,并推测其可能与小鼠精子发生相关;采用半定量RT-PCR和实时定... 详细信息

目的:探讨Plac8l1(placenta-specific 8 like 1)基因在小鼠睾丸组织的表达特征,及其与精子发生的相关性。方法:经生物信息学方法初步筛选到一个睾丸特异性表达候选基因Plac8l1,并推测其可能与小鼠精子发生相关;采用半定量RT-PCR和实时定量RT-PCR对Plac8l1表达的时空特异进行了研究;应用原位杂交技术对Plac8l1 m RNA在成年小鼠睾丸中的细胞类群表达特征进行初步研究;通过构建过表达PLAC8L1-EGFP重组蛋白质粒及生物信息学分析进行亚细胞定位研究与功能预测。结果:(1)Plac8l1是1个睾丸特异性转录基因。(2)在成年小鼠,Plac8l1只在睾丸和附睾组织发生特异性转录,而且睾丸中的表达水平明显高于附睾[睾丸vs.附睾=[(1.000±0.000)vs.(0.036±0.018),P=0.000]。(3)随着小鼠精子发生的起始,睾丸中Plac8l1转录水平逐渐升高(P=0.000)。(4)m RNA原位杂交结果显示Plac8l1 m RNA主要定位在成年小鼠睾丸中的间质细胞和精母细胞。(5)经生物信息学分析,PLAC8L1也有着一个类似于PLAC8的功能域,过表达重组蛋白显示PLAC8L1在细胞膜上聚集。结论:Plac8l1是1个睾丸特异性基因,可能与精子发生过程中的精母细胞分化相关;PLAC8L1具有1个富含半胱氨酸的PLAC8结构域,这一结构域可能介导了PLAC8L1在细胞膜上聚集并与其他蛋白相互作用,并可能在精母细胞分化中发挥重要作用。

关键词：睾丸特异性基因 Plac8l1 精子发生睾丸小鼠

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小鼠睾丸支持细胞的分离培养

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黑龙江畜牧兽医 2017年第7期 37-39,294,295页

作者：邓琼张增吴勇王玥深圳市龙华区人民医院泌尿外科广东深圳518109 深圳市男性生殖与遗传重点实验室/北京大学深圳医院/深圳北京大学香港科技大学医学中心广东深圳518036 北京大学深圳医院超声影像科广东深圳518036

为了分离小鼠睾丸支持细胞并进行鉴定,试验采用胶原酶、透明质酸酶和胰蛋白酶分步消化法分离小鼠睾丸支持细胞,用细胞免疫荧光染色鉴定细胞。结果表明:在分离培养的细胞中,支持细胞占培养细胞的95%以上。说明试验成功分离和鉴定了小鼠... 详细信息

为了分离小鼠睾丸支持细胞并进行鉴定,试验采用胶原酶、透明质酸酶和胰蛋白酶分步消化法分离小鼠睾丸支持细胞,用细胞免疫荧光染色鉴定细胞。结果表明:在分离培养的细胞中,支持细胞占培养细胞的95%以上。说明试验成功分离和鉴定了小鼠睾丸支持细胞。

关键词：小鼠睾丸支持细胞分离培养

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尿液膀胱肿瘤标志物的研究进展

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国际泌尿系统杂志 2012年第5期32卷 655-658页

作者：李家强(综述) 唐爱发(审校) 深圳北京大学深圳医院深圳北京大学香港科技大学医学中心广东省男性生殖与遗传重点实验室广东518036

膀胱癌是我国泌尿系统最常见的恶性肿瘤，其术前诊断和术后监测的金标准仍是尿脱落细胞学和膀胱镜检查。现在美国食品药品局（FDA）批准并上市了6种膀胱肿瘤标志物作为膀胱镜的辅助检查用于膀胱癌的监测。一些有较高敏感性和特异性的尿... 详细信息

膀胱癌是我国泌尿系统最常见的恶性肿瘤，其术前诊断和术后监测的金标准仍是尿脱落细胞学和膀胱镜检查。现在美国食品药品局（FDA）批准并上市了6种膀胱肿瘤标志物作为膀胱镜的辅助检查用于膀胱癌的监测。一些有较高敏感性和特异性的尿液肿瘤标志物仍在研究当中。本文就尿液膀胱肿瘤标志物的研究进展作一综述。

关键词：膀胱肿瘤肿瘤标记生物学

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FAM64A在肾癌发生发展中的分子机制

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安徽医科大学学报 2019年第9期54卷 1360-1365页

作者：张洋李维清王燕毛龙毅周颖琛员海超桂耀庭李贤新欧龙华史本涛安徽医科大学北京大学深圳医院临床学院深圳518000 北京大学深圳医院泌尿外科深圳518000 广东省男性生殖与遗传重点实验室深圳518000 深圳北京大学香港科技大学医学中心深圳518000 深圳孙逸仙心血管医院特诊科深圳518000 深圳市第二人民医院深圳518000

目的探讨FAM64A在肾癌(RCC)组织中异常表达对RCC细胞生长的影响及与患者病理分期及预后的关系。方法实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测RCC组织和细胞系中FAM64A的表达水平;并通过χ^2检验分析了肿瘤基因组图谱(TCGA)数据库510例RCC病例中FAM... 详细信息

目的探讨FAM64A在肾癌(RCC)组织中异常表达对RCC细胞生长的影响及与患者病理分期及预后的关系。方法实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测RCC组织和细胞系中FAM64A的表达水平;并通过χ^2检验分析了肿瘤基因组图谱(TCGA)数据库510例RCC病例中FAM64A水平与患者病理特征及预后的相关性。通过细胞增殖实验CCK-8和Western blot方法检测了FAM64A对RCC细胞增殖和周期及相关标志分子的影响。结果 FAM64A在RCC组织中的表达量明显高于其配对癌旁组织( P <0.05);通过对TCGA数据库中FAM64A数据分析显示FAM64A的表达量与患者的性别、肿瘤分级及预后有明显的相关性,但与患者的年龄无明显相关性。FAM64A的沉默可降低RCC细胞周期蛋白B1(Cyclin B1)的表达,延迟细胞G 2期向M期转换,进而减慢细胞生长。结论 FAM64A在RCC中表达明显上调,可能通过调控Cyclin B1参与RCC的发生。

关键词： FAM64A Cyclin B1 肾癌细胞增殖细胞周期

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基因敲除技术在睾丸功能研究中的应用

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中国男科学杂志 2010年第7期24卷 65-67页

作者：王朝亮唐爱发张巧霞蔡志明北京大学深圳医院广东省男性生殖与遗传重点实验室深圳北京大学香港科技大学医学中心泌尿外科研究所深圳518036

基因敲除（gene ***）是基因打靶的一种方法，是根据DNA同源重组的原理而设计的一项技术。通过DNA分子的同源重组，特异性地在基因组的某个位点引入预定的突变，进而获得基因型发生了改变的基因打靶小鼠，以研究目的基因的体内功能或相... 详细信息

基因敲除（gene ***）是基因打靶的一种方法，是根据DNA同源重组的原理而设计的一项技术。通过DNA分子的同源重组，特异性地在基因组的某个位点引入预定的突变，进而获得基因型发生了改变的基因打靶小鼠，以研究目的基因的体内功能或相关疾病的致病机制。睾丸的主要功能是产生精子和分泌睾酮，在睾丸发育过程中，任何基因的突变或者是酶、蛋白质的缺失都会对睾丸的正常功能造成一定的影响，导致雄激素浓度、精子数目、精子形态、精子活动力等指标异常，进而影响男性的生育能力。近年来，在国内外的研究中，

关键词：基因敲除技术睾丸功能 DNA同源重组应用基因打靶精子数目 DNA分子精子活动力

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