检索结果-内蒙古大学图书馆

中国真菌学杂志 2011年第5期6卷 261-266页

作者：赵作涛李丽丽王晓阳万喆陈伟李若瑜北京大学第一医院皮肤性病科北京大学真菌和真菌病研究中心北京100034

目的应用反向线点杂交技术(reverse line blot hybridization,RLB)快速鉴定临床常见的曲霉属和毛霉目真菌。方法收集我院真菌和真菌病研究中心保存的5种曲霉菌(烟曲霉、黄曲霉、黑曲霉、土曲霉、构巢曲霉)和7种毛霉目真菌(冻土毛霉菌、... 详细信息

目的应用反向线点杂交技术(reverse line blot hybridization,RLB)快速鉴定临床常见的曲霉属和毛霉目真菌。方法收集我院真菌和真菌病研究中心保存的5种曲霉菌(烟曲霉、黄曲霉、黑曲霉、土曲霉、构巢曲霉)和7种毛霉目真菌(冻土毛霉菌、总状毛霉菌、卷枝毛霉菌、少根根霉、小孢根霉、微小根毛霉、伞状犁头霉),共计98株菌株。利用真菌通用引物ITS1和ITS4对菌株进行PCR扩增,用12个真菌种特异性探针与扩增后产物进行反向线点杂交。将RLB结果与真菌传统形态学鉴定结果、ITS区DNA测序结果进行比较。结果 RLB可以正确鉴定98株实验菌株,与形态学方法和ITS区测序方法鉴定结果100%一致,种特异性探针之间未见交叉杂交,显示出该方法的高度敏感性和特异性。8株阴性对照菌株(白念珠菌、茄病镰刀菌、尖端赛多孢、马尔尼菲青霉、疣状瓶霉、棒曲霉、日本曲霉以及雅致小克银汉霉),使用RLB方法无法鉴定。通过烟曲霉基因组DNA浓度10倍倍比稀释法验证RLB的敏感性为1.8×10-3 ng/μL。结论 RLB技术为实验室早期快速诊断、鉴定临床常见的曲霉属和毛霉目真菌提供参考。

关键词：曲霉毛霉 PCR 反向线点杂交

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我国代表地区须癣毛癣菌复合体的分子鉴定与分型研究

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中国真菌学杂志 2011年第2期6卷 70-76页

作者：胡小平万喆王晓红李若瑜北京大学第一医院皮肤性病科真菌室北京大学真菌和真菌病研究中心北京100034

目的对我国代表地区的须癣毛癣菌菌株进行分子再鉴定和分型研究。方法选取我国南北方8个省市地区经表型鉴定的须癣毛癣菌菌株47株,通过再培养形态观察、生理试验;PCR扩增核糖体DNA(rDNA)的内转录间隔区(ITS)和核糖体大亚基(LSU)D1-D2区... 详细信息

目的对我国代表地区的须癣毛癣菌菌株进行分子再鉴定和分型研究。方法选取我国南北方8个省市地区经表型鉴定的须癣毛癣菌菌株47株,通过再培养形态观察、生理试验;PCR扩增核糖体DNA(rDNA)的内转录间隔区(ITS)和核糖体大亚基(LSU)D1-D2区,测序后利用数据库进行序列比对,对须癣毛癣菌复合体进行再鉴定;PCR扩增rDNA非转录间隔区(NTS)的三个串联重复亚单位S0、S1和S2区,进行种内分型,并比较不同部位来源菌株型别的差异性。结果我国南北方8个省市地区47株须癣毛癣菌中3株鉴定为断发毛癣菌,6株鉴定为无性型苯海姆节皮菌,其余均鉴定为万博节皮菌中的亲人型趾间毛癣菌;三对不同引物扩增38株趾间型毛癣菌和2株苯海姆节皮菌NTS区,共产生28种特征性带型。带型和菌株来源及发生部位无相关性。结论我国分离自人类须癣毛癣菌复合体的主要组成菌种为趾间毛癣菌;ITS区结合LSU D1-D2区测序有助于鉴定须癣毛癣菌复合体至种水平;NTS区的三个串联重复亚单位所产生的特征性指纹图提供了一种快速、稳定的分子生物学种内分型方法,可应用于趾间毛癣菌感染的流行病学研究。

关键词：须癣毛癣菌复合体 rDNA内转录间隔区核糖体大亚基D1-D2区 rDNA非转录间隔区

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应用CLSI M38-A2方案测定须癣毛癣菌对抗真菌药物敏感性

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中国真菌学杂志 2011年第3期6卷 149-153页

作者：胡小平万喆李若瑜北京大学第一医院皮肤性病科真菌室北京大学真菌和真菌病研究中心北京100034

目的对我国代表地区须癣毛癣菌临床分离株作抗真菌药物敏感性测定,进一步验证CLSI的M38-A2方案。方法选取我国南北方8个省市地区经表型和分子生物学鉴定的趾间型毛癣菌38株和苯海姆节皮菌6株,采用M38-A2方案测定氟康唑、伊曲康唑、伏立... 详细信息

目的对我国代表地区须癣毛癣菌临床分离株作抗真菌药物敏感性测定,进一步验证CLSI的M38-A2方案。方法选取我国南北方8个省市地区经表型和分子生物学鉴定的趾间型毛癣菌38株和苯海姆节皮菌6株,采用M38-A2方案测定氟康唑、伊曲康唑、伏立康唑、特比萘芬、灰黄霉素、联苯苄唑、环吡酮胺和阿莫罗芬等8种常见抗真菌药物的最小抑菌浓度（minimal inhibitory concentration,MIC）。结果氟康唑、伊曲康唑、伏立康唑、特比萘芬、灰黄霉素、联苯苄唑、环吡酮胺和阿莫罗芬对趾间型毛癣菌株的MIC值（μg/mL）范围分别为0.25~32、0.031 2~1、0.015 6~0.062 5、0.000 937~0.00781、0.062 5~1、0.031 2~2、1~2、0.007 81~0.062 5;对苯海姆节皮菌株的MIC值（μg/mL）范围分别为≥64、2、0.25~0.5、0.000 937~0.003 81、1、2~4、1~2、0.031 2~0.062 5。不同抗真菌药物对趾间型毛癣菌及苯海姆节皮菌的药敏有明显差别（P〈0.001）;趾间型毛癣菌和苯海姆节皮菌对伊曲康唑、灰黄霉素、环吡酮胺、伏立康唑和氟康唑的药敏差异有统计学意义,对特比萘芬、阿莫罗芬和联苯苄唑的药敏差异无统计学意义。结论趾间型毛癣菌和苯海姆节皮菌之间对伊曲康唑、灰黄霉素、环吡酮胺、伏立康唑和氟康唑的药敏有明显差异。M38-A2方案有较好的重复性和稳定性,适合用来体外测定须癣毛癣菌对抗真菌药物的敏感性。

关键词：须癣毛癣菌药敏试验 M38-A2方案

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曲霉生物膜的形成过程与结构特征

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中国真菌学杂志 2011年第2期6卷 93-97页

作者：李丽娟陈伟许辉万喆李若瑜刘伟北京大学第一医院皮肤性病科真菌室北京大学真菌和真菌病研究中心北京100034

目的研究曲霉生物膜的形成过程和结构特征。方法我们利用一个曲霉生物膜体外模型研究其形成过程和结构特征。将200μL浓度为1×105孢子/mL的受试曲霉(烟曲霉AF293,黄曲霉BMU03940,土曲霉BMU00802,黑曲霉BMU04689)的孢子悬液加到24... 详细信息

目的研究曲霉生物膜的形成过程和结构特征。方法我们利用一个曲霉生物膜体外模型研究其形成过程和结构特征。将200μL浓度为1×105孢子/mL的受试曲霉(烟曲霉AF293,黄曲霉BMU03940,土曲霉BMU00802,黑曲霉BMU04689)的孢子悬液加到24孔组织培养板中的无菌塑料细胞培养盖玻片上,37℃孵育不同时间(0、2、4、8、10、12、16、18、24、48、72 h),加入25μmol/L的FUN-1室温避光染色后,用波长488 nm激光激发,通过共聚焦激光扫描显微镜观察曲霉生物膜的形成过程;再用波长为488 nm和633 nm激光同时激发,将两个波长下的图像叠加后观察曲霉生物膜的活力;利用XYZ轴成像观察其结构特征。在上述不同的时间点用钙荧光白染色后,用波长为405 nm的紫外光激发,观察曲霉生物膜细胞外基质的产生。结果烟曲霉AF293在第4 h即开始有散在的孢子黏附于盖玻片上;8 h时孢子开始萌芽,10～12 h菌丝延长形成单细胞层;16～20 h菌丝缠绕形成多层立体结构;24 h形成一个具有复杂的三维立体结构特征的多细胞菌落,菌丝有序排列,细胞外基质弥散的分布在菌丝的周围;48～72 h生物膜逐渐成熟。成熟的烟曲霉生物膜是由细胞外基质包裹的有序排列的菌丝形成的复杂立体结构。黄曲霉BMU03940、土曲霉BMU00802、黑曲霉BMU04689与烟曲霉AF293有类似的生物膜发育阶段,包括黏附、孢子萌芽、菌丝延长、菌丝有序排列形成三维立体结构。结论烟曲霉、黄曲霉、土曲霉和黑曲霉在体外都能形成典型的生物膜,它的形成过程和结构特征与其他真菌生物膜类似。

关键词：曲霉生物膜结构特征

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烟曲霉pbs2基因在热应激与胞壁应激的双重应激中的作用

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中国真菌学杂志 2011年第4期6卷 199-202页

作者：阳芳刘伟万喆季雅娟李若瑜北京大学第一医院皮肤性病科北京大学真菌和真菌病研究中心北京100034

目的通过研究烟曲霉对细胞壁合成干扰物质及棘白菌素类药物的敏感性、烟曲霉在受热应激后HOG通路成分的表达变化探讨pbs2基因在热应激和胞壁应激的双重应激中的作用。方法烟曲霉野生株AF293和pbs2突变株在含钙荧光白(Calcofluor white,C... 详细信息

目的通过研究烟曲霉对细胞壁合成干扰物质及棘白菌素类药物的敏感性、烟曲霉在受热应激后HOG通路成分的表达变化探讨pbs2基因在热应激和胞壁应激的双重应激中的作用。方法烟曲霉野生株AF293和pbs2突变株在含钙荧光白(Calcofluor white,CFW),刚果红(Congo red,CR)和十二烷基硫酸钠(Sodium dodecylsulfate,SDS)的葡萄糖酵母浸液琼脂(Yeast Agar Glucose,YAG)上生长,观察其对上述3种细胞壁合成干扰物质的敏感性。微量液基稀释法检测烟曲霉对米卡芬净和卡泊芬净的敏感性。实时荧光定量PCR法分析AF293受到热刺激前后菌体pbs2和hog1的RNA含量变化。结果 50℃培养时pbs2突变株对胞壁合成干扰物质的敏感性较野生株AF293增强,600μg/mL CFW,400μg/mL CR及100μg/mLSDS完全抑制pbs2突变株生长,不能完全抑制AF293的生长;在37℃培养时,AF293和pbs2突变株敏感性没有差异。50℃培养时,卡泊芬净和米卡芬净对AF293和pbs2突变株的最低有效浓度(Minimum effective concentration,MEC)均为0.25μg/mL,但pbs2突变株在药物浓度为0.5μg/mL作用时生长完全受抑制,而野生株仍生长;在35℃和42℃培养时,AF293和pbs2突变株对两种药物的敏感性没有差异,MEC均为0.5μg/mL。50℃热应激后,AF293的pbs2和hog1的RNA表达量分别下降至37℃时的3%和13%;pbs2突变株的hog1降至应激前的35%。结论烟曲霉受热应激和胞壁应激的双重应激时,pbs2基因参与细胞适应反应,发挥保护作用。

关键词： pbs2 烟曲霉热应激胞壁刺激

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膀胱造瘘术后尿道念珠菌感染1例

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中国真菌学杂志 2011年第2期6卷 105-106页

作者：刘伟陈伟万喆李若瑜北京大学第一医院皮肤性病科北京大学真菌和真菌病研究中心北京100034

白念珠菌是临床上最常见的病原真菌,常引起黏膜、皮肤的感染如念珠菌性龟头包皮炎、口腔黏膜念珠菌感染,以及深部的侵袭性念珠菌感染如念珠菌血症等,由白念珠菌感染引起的尿道炎并不常见。我们在工作中遇到1例实施膀胱造瘘术后发生的尿... 详细信息

白念珠菌是临床上最常见的病原真菌,常引起黏膜、皮肤的感染如念珠菌性龟头包皮炎、口腔黏膜念珠菌感染,以及深部的侵袭性念珠菌感染如念珠菌血症等,由白念珠菌感染引起的尿道炎并不常见。我们在工作中遇到1例实施膀胱造瘘术后发生的尿道念珠菌感染,现报告如下。1病例资料男性,54岁,因＂尿道分泌物并疼痛1个月余＂,于2010年4月26日就诊于我科。

关键词：念珠菌尿道感染膀胱造瘘

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伊曲康唑联合特比萘芬治疗孢子丝菌病疗效及其对病原真菌体外抗菌活性研究

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中国真菌学杂志 2011年第1期6卷 5-9页

作者：王爱平高那刘伟万喆陈伟涂平李若瑜北京大学第一医院皮肤性病科北京大学真菌和真菌病研究中心北京100034

目的初步探讨伊曲康唑和特比萘芬联合治疗孢子丝菌病的疗效,评价两药体外联合对申克孢子丝菌菌丝相和酵母相的抗菌活性。方法口服伊曲康唑200 mg/d和特比萘芬250 mg/d治疗孢子丝菌病;体外联合药敏试验采用棋盘微量稀释法,计算分数抑菌浓... 详细信息

目的初步探讨伊曲康唑和特比萘芬联合治疗孢子丝菌病的疗效,评价两药体外联合对申克孢子丝菌菌丝相和酵母相的抗菌活性。方法口服伊曲康唑200 mg/d和特比萘芬250 mg/d治疗孢子丝菌病;体外联合药敏试验采用棋盘微量稀释法,计算分数抑菌浓度(FIC)指数判定两药相互作用具有协同、拮抗或无关作用。结果伊曲康唑和特比萘芬联合成功治愈3例经伊曲康唑治疗无效的孢子丝菌病患者。两药体外联合对申克孢子丝菌菌丝相具有75%的协同作用,对酵母相为70%(P=0.50)。结论初步研究显示伊曲康唑和特比萘芬联合治疗孢子丝菌病有效安全,体外联合药敏试验显示两药具有较高的协同作用。

关键词：孢子丝菌病伊曲康唑特比萘芬申克孢子丝菌菌丝相酵母相联合药敏协同作用

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烟曲霉再鉴定、标准化CSP分型及体外药物敏感性

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中国真菌学杂志 2011年第6期6卷 328-331,336页

作者：高露娟余进李若瑜北京大学第一医院皮肤性病科真菌和真菌病研究中心北京100034

目的了解烟曲霉复合体临床株菌种分布,经典烟曲霉临床株CSP基因型及对常见抗真菌药物敏感性状况。方法菌株来源:北京大学真菌和真菌病研究中心保存分离自125名患者的162株烟曲霉复合体菌株。通过形态学,最高生长温度及分子生物学测序分... 详细信息

目的了解烟曲霉复合体临床株菌种分布,经典烟曲霉临床株CSP基因型及对常见抗真菌药物敏感性状况。方法菌株来源:北京大学真菌和真菌病研究中心保存分离自125名患者的162株烟曲霉复合体菌株。通过形态学,最高生长温度及分子生物学测序分步鉴定;对CSP基因进行扩增、测序,采用国际化命名体系进行CSP分型;采用微量液基稀释法测定经典烟曲霉对伊曲康唑(ITC)、两性霉素B(AMB)、伏立康唑(VRC)及卡泊芬净(CAS)的敏感性。结果所有烟曲霉复合体菌株均为经典烟曲霉;共分为16个CSP基因型,最常见为t04A、t03和t01;分离自4名患者的13株菌对ITC的MICs≥4μg/mL,其中2株菌AMB和VRC的MICs分别为4μg/mL和16μg/mL。CAS的MECs最高为4μg/mL,仅1株。结论未检出烟曲霉相关新种;经典烟曲霉临床株共16个CSP基因型,分布与国际研究结果基本一致,其中5个为新型。我国经典烟曲霉临床株ITC耐药率为3.2%,个别菌株AMB,VRC和CAS耐药。

关键词：烟曲霉复合体经典烟曲霉鉴定 CSP分型体外药敏试验

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烟曲霉抗原Asp f16 HLA-A~* 0201限制性的CD8^+ CTL抗原表位生物信息学预测与实验室鉴定

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中国真菌学杂志 2011年第2期6卷 87-92页

作者：赵作涛孙铮万喆朱平李若瑜北京大学第一医院皮肤性病科北京大学真菌和真菌病研究中心北京100034 北京大学第一医院血液科北京100034

目的预测与鉴定烟曲霉抗原Asp f16的HLA-A*0201限制性CD8+细胞毒性T细胞(CTL)抗原表位。方法以国人常见的HLA-A*0201位点为靶点,依据生物信息学软件扫描烟曲霉特异性抗原Asp f16的全部427个氨基酸序列。使用HLA-A*0201转基因小鼠制备骨... 详细信息

目的预测与鉴定烟曲霉抗原Asp f16的HLA-A*0201限制性CD8+细胞毒性T细胞(CTL)抗原表位。方法以国人常见的HLA-A*0201位点为靶点,依据生物信息学软件扫描烟曲霉特异性抗原Asp f16的全部427个氨基酸序列。使用HLA-A*0201转基因小鼠制备骨髓来源的树突状细胞(DC)和CTL。流式细胞仪技术检测DC表面MHC II类抗原,CD80,CD86和CD11c的表达来验证其是否成熟。ELISPOT试验检测烟曲霉抗原多肽特异性CTL产生的细胞因子IFN-γ。四聚体(Tetramer)试验证实烟曲霉特异性CTL与抗原肽,HLA-A*0201分子复合体的亲和性。结果根据与MHC I类分子结合的半衰期评分,选择了3个HLA-A*0201限制性抗原表位。流式细胞仪分析示成熟DC高表达HLA II类抗原,CD80,CD86和CD11c。Tetramer试验证实烟曲霉特异性T细胞受体与抗原肽,HLA-A*0201分子复合体的高亲和性。ELISPOT实验结果表明烟曲霉抗原肽体外可以活化CD8+CTL,被负载了抗原肽的DC刺激活化后可以产生IFN-γ。结论本研究成功鉴定烟曲霉抗原Asp f16的HLA-A*0201限制性CD8+CTL表位,可作为疫苗设计的候选表位,为进一步研发新型抗烟曲霉疫苗提供参考。

关键词：烟曲霉 Asp f16 抗原表位树突状细胞细胞毒性T细胞

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伊曲康唑联合特比萘芬治疗孢子丝菌病疗效及其对病原真菌体外抗菌活性研究

伊曲康唑联合特比萘芬治疗孢子丝菌病疗效及其对病原真菌体外抗菌...

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2011全国中西医结合皮肤性病学术会议

作者：王爱平高那刘伟万喆陈伟涂平李若瑜北京大学第一医院皮肤性病科北京大学真菌和真菌病研究中心

目的初步探讨伊曲康唑和特比萘芬联合治疗孢子丝菌病的疗效,评价两药体外联合对申克孢子丝菌菌丝相和酵母相的抗菌活性。方法口服伊曲康唑200mg/d和特比萘芬250mg/d治疗孢子丝菌病;体外联合药敏试验采用棋盘微量稀释法,计算分数抑菌浓度... 详细信息

目的初步探讨伊曲康唑和特比萘芬联合治疗孢子丝菌病的疗效,评价两药体外联合对申克孢子丝菌菌丝相和酵母相的抗菌活性。方法口服伊曲康唑200mg/d和特比萘芬250mg/d治疗孢子丝菌病;体外联合药敏试验采用棋盘微量稀释法,计算分数抑菌浓度(FIC)指数判定两药相互作用具有协同、拈抗或无关作用(FIC的确定为联合用药时各药的MIC值分别除以单独用药时MIC值的商的和,表示为FIC=MICA联合/MICA单独+MICB联合/MICB单独。相互作用解释为:FIC≤0.5有协同作用;FIC>4有拮抗作用;0.5病患者,经过伊曲康唑和特比萘芬联合治疗12～14周后治愈。伊曲康唑对申克孢子丝菌菌丝相的MIC值范围为4～32μg/mL,GM值为14.93μg/mL;对酵母相分别为1～8μg/mL和1.69μg/mL,菌丝相与酵母相GM值比较差异具有显著统计学意义(Z=3.925,P=0.000)。特比萘芬对申克孢子丝菌菌丝相的MIC值范围为0.06～0.25μg/mL,GM值为0.13μg/mL;对酵母相分别为0.06～0.25μg/mL和0.11μg/mL,菌丝相与酵母相GM值比较差异无统计学意义(Z=1.532,P=0.1 25)。伊曲康唑与特比萘芬联合时对菌丝相75%(15/20)有协同作用,25%(5/20)为无关;对酵母相70%(14/20)有协同作用,30%(6/20)为无关;均无拈抗作用。菌丝相和酵母相协同作用率比较差异无统计学意义(P=0.500)。结论初步研究显示伊曲康唑和特比萘芬联合治疗孢子丝菌病有效安全,体外联合药敏试验显示两药具有较高的协同作用,提示对单一抗真菌药物治疗孢子丝菌病效果不佳时可以考虑联合用药治疗。

关键词：特比萘芬联合治疗申克孢子丝菌孢子丝菌病伊曲康唑体外抗菌活性病原真菌

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