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中国药物评价 2012年第1期29卷 10-13页

作者：王爱平李若瑜北京大学第一医院皮肤性病科北京大学真菌和真菌病研究中心北京100034

抗真菌药物的抗菌范围、作用机制各有特点，根据其化学结构分为多烯类（polyenes）、唑类（azoles）、内烯胺类（allylamines）、棘白菌素类（echinocandins）、硫代氨基甲酸酯类（thiocarbamates）、吗啉类（morpholines）等。下面仅... 详细信息

抗真菌药物的抗菌范围、作用机制各有特点，根据其化学结构分为多烯类（polyenes）、唑类（azoles）、内烯胺类（allylamines）、棘白菌素类（echinocandins）、硫代氨基甲酸酯类（thiocarbamates）、吗啉类（morpholines）等。下面仅就目前临床上可应用的系统抗真菌药物进行简单介绍。

关键词：抗真菌药分类作用机制概述

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联苯苄唑醋酸曲安奈德对皮肤癣菌的体外抗真菌活性评价

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中国药物评价 2012年第1期29卷 25-26,34页

作者：万喆王爱平李若瑜陈伟北京大学第一医院皮肤性病科北京大学真菌和真菌病研究中心北京100034

目的:评价联苯苄唑醋酸曲安奈德联合体外抗真菌活性。方法:采用CLSI推荐的M-38A方案对分离自体股癣的皮肤癣菌进行联苯苄唑醋酸曲安奈德按照10:1比例混合后药物敏感性测定。结果:联苯苄唑醋酸曲安奈德对皮肤癣菌的MIC范围为≤0.03～4mg/... 详细信息

目的:评价联苯苄唑醋酸曲安奈德联合体外抗真菌活性。方法:采用CLSI推荐的M-38A方案对分离自体股癣的皮肤癣菌进行联苯苄唑醋酸曲安奈德按照10:1比例混合后药物敏感性测定。结果:联苯苄唑醋酸曲安奈德对皮肤癣菌的MIC范围为≤0.03～4mg/L,MIC_50为0.5mg/L,MIC_90为1mg/L。结论:联苯苄唑醋酸曲安奈德按照10:1比例混合后并没有降低联苯苄唑的体外抗真菌活性。

关键词：联苯苄唑醋酸曲安奈德皮肤癣菌体外抗真菌活性

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特比萘芬与其他抗真菌药物对外阴阴道念珠菌病病原菌的体外相互作用研究

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中国真菌学杂志 2012年第2期7卷 73-76,81页

作者：季雅娟王爱平刘伟万喆李若瑜北京大学第一医院皮肤性病科北京大学真菌和真菌病研究中心北京100034

目的了解特比萘芬(TEB)分别与氟康唑(FLU)、伊曲康唑(ITR)、咪康唑(MCZ)、克霉唑(CMZ)及制霉菌素(NYS)联合对外阴阴道念珠菌病患者分离的念珠菌体外相互作用。方法受试念珠菌株46株,包括白念珠菌(20株)、热带念珠菌(15株)、光滑念珠菌(4... 详细信息

目的了解特比萘芬(TEB)分别与氟康唑(FLU)、伊曲康唑(ITR)、咪康唑(MCZ)、克霉唑(CMZ)及制霉菌素(NYS)联合对外阴阴道念珠菌病患者分离的念珠菌体外相互作用。方法受试念珠菌株46株,包括白念珠菌(20株)、热带念珠菌(15株)、光滑念珠菌(4株)、克柔念珠菌(3株)、近平滑念珠菌(3株)和季也蒙念珠菌(1株)。方法参考CLSIM27-A3方案中的微量液基稀释法,观察各药单独和联合后的MIC,并计算FICI。结果 TEB、FLU、ITR、MCZ、CMZ和NYS的单药MIC范围分别为0.5～256μg/mL、0.5～128μg/mL、0.5～32.0μg/mL,0.125～16μg/mL、0.03～4.0μg/mL和2～8μg/mL。当TEB与FLU、ITR、MCZ和CMZ联合时,对白念株菌表现为协同作用的分别为100%(20/20),80%(16/20),55%(11/20)和90%(18/20);对1株季也蒙念珠菌均显示为协同作用;对热带念珠菌,TEB分别与上述4种唑类药物联合时,显示有协同作用的分别为67%(10/15),60%(9/15),20%(3/15)和20%(3/15);TEB与唑类药物联合对光滑念珠菌、克柔念珠菌和近平滑念珠菌均无协同作用;TEB与NYS联合时对所有菌株均无协同作用。结论 TEB与唑类药物联合对不同种的念珠菌显示有不同的效应,但对外阴阴道念珠菌病主要的致病菌白念珠菌显示有良好的协同作用。TEB与NYS联合对念株菌均无协同作用。

关键词：特比萘芬药物联合念珠菌外阴阴道念珠菌病

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自身免疫性大疱病合并侵袭性肺曲霉病:3例报告

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中国真菌学杂志 2012年第4期7卷 214-218页

作者：余进牟向东万喆阙呈立李若瑜北京大学第一医院皮肤性病科北京大学真菌和真菌病研究中心北京大学第一医院呼吸内科北京100034

目的通过典型病例回顾探讨自身免疫性大疱病糖皮质激素治疗过程中合并肺曲霉病的诊断和治疗情况。方法报告3例自身免疫性大疱病合并侵袭性肺曲霉病病例。3例病例均行痰镜检、培养、抗原检测、胸部CT或者坏死组织病理检查。分离病原菌经... 详细信息

目的通过典型病例回顾探讨自身免疫性大疱病糖皮质激素治疗过程中合并肺曲霉病的诊断和治疗情况。方法报告3例自身免疫性大疱病合并侵袭性肺曲霉病病例。3例病例均行痰镜检、培养、抗原检测、胸部CT或者坏死组织病理检查。分离病原菌经形态学和分子生物学鉴定为烟曲霉、黄曲霉和刺孢裸胞壳。结果 3例病例证实为侵袭性肺曲霉病。进行以伏立康唑为主的综合治疗后均治愈。结论自身免疫性大疱病糖皮质激素治疗过程中应警惕肺曲霉病的发生。多种实验室检查可以帮助早期诊断,提高疗效。

关键词：自身免疫性大疱病糖皮质激素肺曲霉病

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支气管肺泡灌洗液半乳甘露聚糖抗原检测诊断侵袭性肺曲霉病

支气管肺泡灌洗液半乳甘露聚糖抗原检测诊断侵袭性肺曲霉病

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第三届中国临床微生物学大会暨微生物学与免疫学论坛

作者：张淑贞万喆王思卜李若瑜余进北京大学第一医院皮肤性病科北京大学真菌和真菌病研究中心

目的:比较血清和支气管肺泡灌洗液(Bronchoalveolar lavage fluid,BALF)半乳甘露聚糖(galactomannan,GM)检测在临床上诊断侵袭性肺曲霉病的价值。方法:回顾性研究2010年8月至2012年7月北京大学第一医院102例进行血清与BALF GM检测的住... 详细信息

目的:比较血清和支气管肺泡灌洗液(Bronchoalveolar lavage fluid,BALF)半乳甘露聚糖(galactomannan,GM)检测在临床上诊断侵袭性肺曲霉病的价值。方法:回顾性研究2010年8月至2012年7月北京大学第一医院102例进行血清与BALF GM检测的住院患者的检测结果及临床资料,通过比较灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值和约登指数来评价血清及BALF GM的诊断效率。结果:不同的诊断界值,血清GM和BALF GM诊断效率不同。在以0.5为界值时,血清GM的灵敏度为76.2%,特异度为90.9%%,阳性预测值为69.6%,阴性预测值为93.3%,约登指数为0.67。BALF相较之下具有更高的灵敏度,为88.2%,但特异度仅为52.5%,其阳性预测值、阴性预测值、约登指数依次为为28.3%、95.5%、0.41。界值为1时,BALF GM表现出较好的灵敏度和特异度70.6‰75%。两试验进行联合诊断时,在0.5为界值时,血清GM或者BALF GM一项阳性为诊断标准的灵敏度达100%,但特异度仅为50.6%。当界值为1时,灵敏度为90.5%,特异度提升至74.1%,阴性预测值为96.8%,约登指数为0.65。结论:BALF GM比血清GM具有更高的灵敏度。多次进行血清GM和支气管肺泡灌洗液GM检测能够多角度综合诊断,提高诊断效率。

关键词：支气管肺泡灌洗液侵袭性肺曲霉病半乳甘露聚糖抗原检测

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33株孢子丝菌菌株的表型和基因型鉴定

33株孢子丝菌菌株的表型和基因型鉴定

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2012年中国菌物学会学术年会

作者：谭静文刘伟万喆李若瑜北京大学第一医院皮肤性病科北京大学真菌和真菌病研究中心皮肤病分子诊断北京市重点实验室

孢子丝菌病是一种临床常见的真菌感染,近期有研究认为其致病菌是由多个同形种构成的复合体。主要包括:申克孢子丝菌(Sporothrix schenckii)、球形孢子丝菌(Sporothrix globosa)、巴西孢子丝菌(Sporothrixbrasiliensis)、墨西哥孢子丝菌(... 详细信息

孢子丝菌病是一种临床常见的真菌感染,近期有研究认为其致病菌是由多个同形种构成的复合体。主要包括:申克孢子丝菌(Sporothrix schenckii)、球形孢子丝菌(Sporothrix globosa)、巴西孢子丝菌(Sporothrixbrasiliensis)、墨西哥孢子丝菌(Sporothrix mexicana)、白孢子丝菌(Sporothrix albicans)及申克孢子丝菌卢艾里变种(Sorothrix schenckii ***)。为明确我国孢子丝菌病致病菌的生理学以及分子生物学方面的特点,本文对33株分离自我国北京市及天津、河北、吉林、山西、内蒙古等地的固定型及淋巴管型孢子丝菌病患者组织的病原菌,首先检测其在37℃是否生长以及PDA培养基上生长21d的菌落直径,其次检测其糖同化特点,最后对其钙调蛋白(Calmodulin,CAL)的基因进行PCR扩增、序列测定以及系统进化分析。结果显示,这些菌株全部为球形孢子丝菌,提示我国孢子丝菌病病原菌可能以球形孢子丝菌为主。

关键词：孢子丝菌生理学分子生物学

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对唑类药物交叉耐药的烟曲霉临床分离株耐药机制的初步探讨

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中华皮肤科杂志 2011年第4期44卷 244-248页

作者：孙毅刘伟陈伟万喆李若瑜北京大学第一医院皮肤性病科北京大学真菌和真菌病研究中心100034

目的研究对唑类药物交叉耐药的烟曲霉临床分离株的耐药机制.方法自1例侵袭性曲霉病患者体内分离得到1株烟曲霉,分别利用美国临床实验室标准化研究所（CLSI）M38-A2中的微量液基稀释法和E-test法测定伊曲康唑、伏立康唑、两性霉素B、... 详细信息

目的研究对唑类药物交叉耐药的烟曲霉临床分离株的耐药机制.方法自1例侵袭性曲霉病患者体内分离得到1株烟曲霉,分别利用美国临床实验室标准化研究所（CLSI）M38-A2中的微量液基稀释法和E-test法测定伊曲康唑、伏立康唑、两性霉素B、泊沙康唑和卡泊芬净对该烟曲霉的最低抑菌浓度（MIC）/最低有效浓度（MEC）;并对该菌株中唑类药物靶酶基因cyp51A进行克隆和序列测定分析.结果微量液基稀释法显示,该菌株伊曲康唑、伏立康唑、两性霉素B的MIC分别为≥16、8、1mg/L,卡泊芬净的MEC为0.5 mg/L.E-test法显示,伊曲康唑、伏立康唑、两性霉素B和泊沙康唑的MIC分别为≥32、≥32、12和≥32 mg/L,卡泊芬净的MIC为0.047 mg/L.对cyp51A基因进行测序并分析后发现,该菌株的cyp51A序列中存在启动子区-288到-322位间34 bp的串联序列的插入,以及该基因编码区364位碱基的点突变（T364A）,导致了编码区98位亮氨酸的置换（L98H）;该菌株的cyp51A基因编码区还存在137位碱基（A137T）、585位碱基（G585A）、814位碱基（C814A）、836位碱基（G836C）、991位碱基（T991C）、1350位碱基（A1350G）的突变,并分别导致编码区相应氨基酸的置换.结论分离到对唑类药物交叉耐药的烟曲霉临床株,该菌株的cyp51A基因存在启动子区34 bp的串联序列插入和编码区364位的突变（T364A）,这种变化参与了其对伊曲康唑、伏立康唑和泊沙康唑交叉耐药;该菌株cyp51A基因编码区还存在一些其他的点突变,并可导致相应部位的氨基酸置换.

关键词：曲霉菌烟氮杂茂类抗药性多种真菌 cyp51A

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石膏样小孢子菌引起体癣二例及病原学研究

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中华皮肤科杂志 2011年第2期44卷 137-138页

作者：刘伟陈伟王爱平万喆李若瑜北京大学真菌和真菌病研究中心北京大学第一医院皮肤性病科100034

2例患儿以皮疹伴瘙痒就诊,均有宠物接触史,自行外用糖皮质激素类药物等均无效.真菌直接镜检可以见到皮屑中有链状孢子或菌丝,皮屑培养为石膏样小孢子菌,2菌株对酮康唑、咪康唑、联苯苄唑、特比萘芬、伏立康唑敏感.经口服特比萘芬和外用... 详细信息

2例患儿以皮疹伴瘙痒就诊,均有宠物接触史,自行外用糖皮质激素类药物等均无效.真菌直接镜检可以见到皮屑中有链状孢子或菌丝,皮屑培养为石膏样小孢子菌,2菌株对酮康唑、咪康唑、联苯苄唑、特比萘芬、伏立康唑敏感.经口服特比萘芬和外用环吡酮胺进行治疗痊愈.

关键词：石膏样小孢子菌病原学糖皮质激素类药物体癣特比萘芬直接镜检联苯苄唑环吡酮胺

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曲霉生物膜对常用抗真菌药物的敏感性测定及其耐药的分子机制初探

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中华皮肤科杂志 2011年第6期44卷 382-386页

作者：李丽娟陈伟许辉万喆李若瑜刘伟北京大学第一医院皮肤性病科真菌室北京大学真菌和真菌病研究中心100034

目的探讨曲霉生物膜对常用抗真菌药物的敏感性及其耐药的分子机制。方法利用微量液基稀释法测定22株曲霉游离孢子对两性霉素B、卡泊芬净和伏立康唑的敏感性；同时建立22株曲霉生物膜的体外模型，用抗真菌药物敏感试验联合甲基四氮盐（x... 详细信息

目的探讨曲霉生物膜对常用抗真菌药物的敏感性及其耐药的分子机制。方法利用微量液基稀释法测定22株曲霉游离孢子对两性霉素B、卡泊芬净和伏立康唑的敏感性；同时建立22株曲霉生物膜的体外模型，用抗真菌药物敏感试验联合甲基四氮盐（x1Tr）减低法来评价曲霉生物膜对两性霉素B、卡泊芬净和伏立康唑的敏感性。通过实时RT—PCR测定烟曲霉生物膜形成过程中药物外排泵基因及唑类药物靶酶基因的相对表达量。结果对于曲霉的游离孢子，两性霉素B的最低抑菌浓度（MIC）范围是0．5～2mg／L，卡泊芬净的最低有效浓度（MEC）范围是0．125—0．25mg／L，伏立康唑的MIC范围是0．5—1mg／L；对于曲霉生物膜，两性霉素B的SMIC。（抑制50％固着性曲霉生物膜生长的最小药物浓度）和SMIC。（抑制80％固着性曲霉生物膜生长的最小药物浓度）范围分别是2～〉32mg／L和8～〉32mg／L，卡泊芬净的SMIC∞和SMIC8D范围分别是32～〉256mg／L和256～〉256mg／L，伏立康唑的SMIC∞和SMIC。范围分别是4～〉256mg／L和32～〉256mg／L。烟曲霉生物膜形成过程中药物外排泵基因及唑类药物靶酶基因相对表达量测定显示，与0h相比，7个待测基因在4h时表达量没有变化；8h时AfuMDR1、CYP51A、CYP51B表达量升高，CYP51A表达量升高最明显；12、16、24h时MuMDR1、AfuMDR2、AfuMDR4、CYP51A、CYP51B表达量升高，其中CYP51A表达量升高的最明显；AfuMDR3和atrF在生物膜形成过程中表达量没有明显变化。结论与游离孢子相比，曲霉生物膜对两性霉素B、卡泊芬净和伏立康唑的敏感性明显下降；烟曲霉形成生物膜以后，药物外排泵基因和唑类靶酶基因的表达量升高。

关键词：曲霉菌属生物膜微生物敏感性试验抗药性真菌

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含有额外拷贝黄曲霉cyp51同源基因的烟曲霉对抗真菌药物的敏感性测定

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中国真菌学杂志 2011年第1期6卷 15-21页

作者：刘伟霞孙毅万喆李若瑜刘伟北京大学第一医院皮肤性病科真菌室北京大学真菌和真菌病研究中心北京100034

目的通过构建黄曲霉cyp51同源基因额外拷贝株,研究这些基因对抗真菌药物敏感性的影响。方法通过序列同源性比对,在黄曲霉基因组中找出其cyp51基因的开放读码框(ORF)及其上下游约1 000 bp的基因序列,PCR扩增后利用DNA重组技术将该片段克... 详细信息

目的通过构建黄曲霉cyp51同源基因额外拷贝株,研究这些基因对抗真菌药物敏感性的影响。方法通过序列同源性比对,在黄曲霉基因组中找出其cyp51基因的开放读码框(ORF)及其上下游约1 000 bp的基因序列,PCR扩增后利用DNA重组技术将该片段克隆到穿梭质粒pRG3-AMA1-NotI;用重组后的质粒和空质粒转化烟曲霉嘧啶营养缺陷株(pyrG-)AF293.1,并利用美国临床实验室标准化研究所(CLSI)M38-A2中的微量液基稀释法和E-test法测定转化株对两性霉素B(AMB)、伊曲康唑(ITC)、伏立康唑(VRC)、泊沙康唑(POS)和卡泊芬净(CAS)敏感性。结果黄曲霉cyp51同源基因有3个:cyp51A、cyp51B和cyp51C,ORF大小约为1 400～2 000 bp;将其克隆到穿梭质粒pRG3-AMA1-NotI产生重组质粒pRG3-AMA1-CYP51A、pRG3-AMA1-CYP51B和pRG3-AMA1-CYP51C;连同空质粒转化AF293.1后得到阳性转化子rC-YP51A、rCYP51B、rCYP51C和rpRG;微量液基稀释法和E-test法显示,rCYP51A和rCYP51B对VRC和ITC交叉耐药,对AMB和CAS敏感;rCYP51C和rpRG对VRC和ITC中度敏感,而对AMB和CAS敏感。结论额外拷贝黄曲霉cyp51A或cyp51B基因影响烟曲霉对唑类药物的敏感性,对AMB和CAS的敏感性没有影响;额外拷贝黄曲霉cyp51C对测试药物的敏感性没有明显影响。

关键词：黄曲霉唑类 cyp51 抗真菌药物敏感性

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