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病原真菌real-time PCR检测对非中性粒细胞缺乏的老年患者肺部真菌病的诊断价值

中国真菌学杂志 2022年第6期17卷 454-460页

作者：蒙星烨刘晓万喆陈伟阙呈立林连君余进宋营改李若瑜北京大学第一医院皮肤性病科北京大学真菌和真菌病研究中心国家皮肤与免疫疾病临床医学研究中心皮肤病分子诊断北京市重点实验室北京100034 北京大学第一医院呼吸内科北京100034 北京大学第一医院老年病内科北京100034

目的评估本实验室设计的肺部常见病原真菌real-time PCR检测支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)标本对非中性粒细胞缺乏的老年人群肺部真菌病的诊断价值。方法回顾性纳入2020年至2021年间于北京大学第一医院就诊的... 详细信息

目的评估本实验室设计的肺部常见病原真菌real-time PCR检测支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)标本对非中性粒细胞缺乏的老年人群肺部真菌病的诊断价值。方法回顾性纳入2020年至2021年间于北京大学第一医院就诊的怀疑肺部感染的294名非中性粒细胞缺乏老年患者,采用real-time PCR检测其BALF标本中的病原真菌;根据宿主因素、临床表现和真菌学检查进行诊断分类,27名患者符合确诊或临床诊断的肺部侵袭真菌病,其中7例(25.6%)为多种真菌合并感染,6名患者诊断慢性肺曲霉病。结果曲霉PCR Ct值受试者工作特征曲线下面积为0.936(95%置信区间0.865~1.000),最佳cut-off值为34.8,对肺曲霉病的诊断灵敏度和特异度分别为95.7%和92.1%。耶氏肺孢子菌PCR以Ct值37.1为cut-off值,诊断耶氏肺孢子菌肺炎灵敏度和特异度分别为94.7%和99.7%。隐球菌和毛霉PCR以Ct值35.0为cut-off值,在肺隐球菌病和肺毛霉病中阳性率分别为50%(2/4)和100%(1/1)。病原真菌real-time PCR确定cut-off值后,以PCR检出的真菌与肺部真菌病的致病真菌一致作为阳性,灵敏度、特异度、阳性预测值和阴性预测值分别为86.5%(32/37)、91.0%(253/278)、56.1%(32/57)和98.1%(253/258),总符合率为90.5%(285/315)。结论本研究团队开发的病原真菌real-time PCR体系覆盖常见肺部致病真菌,初步探索了其在BALF标本中的cut-off值,证实该方法在非中性粒细胞缺乏老年患者的肺部真菌病中具有良好的诊断价值。

关键词：肺部真菌病 real-time PCR 支气管肺泡灌洗液分子诊断

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趾甲银屑病与指甲银屑病的皮肤镜特征比较

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中华皮肤科杂志 2024年第2期57卷 161-165页

作者：王诗琪王爱平李航李若瑜北京大学第一医院皮肤性病科、国家皮肤与免疫疾病临床医学研究中心、北京大学真菌和真菌病研究中心、皮肤病分子诊断北京市重点实验室、国家药品监督管理局化妆品质量控制与评价重点实验室北京100034 首都医科大学附属北京朝阳医院皮肤科北京100029

目的分析并比较趾甲银屑病和指甲银屑病的皮肤镜特征。方法收集2020年6月至2022年1月于北京大学第一医院皮肤科确诊为趾甲银屑病(61例)和指甲银屑病(80例)的患者,对受累的139处趾甲和158处指甲行皮肤镜检查。采用卡方检验比较两组间皮... 详细信息

目的分析并比较趾甲银屑病和指甲银屑病的皮肤镜特征。方法收集2020年6月至2022年1月于北京大学第一医院皮肤科确诊为趾甲银屑病(61例)和指甲银屑病(80例)的患者,对受累的139处趾甲和158处指甲行皮肤镜检查。采用卡方检验比较两组间皮肤镜特征差异。结果甲银屑病中最常见的皮肤镜特征为点状凹陷(223/297,75.08%),其次为裂片状出血(164/297,55.22%)、甲下角化过度(133/297,44.78%)、油滴征(126/297,42.42%)、甲完全分离(121/297,40.74%)、甲分离近端的线状边缘(107/297,36.03%)和甲分离边缘的线状红斑(77/297,25.93%)。两组间相比,趾甲银屑病中甲下角化过度[81处(58.27%)比52处(32.91%),P<0.001]、点状或块状出血[22处(15.83%)比11处(6.96%),P<0.05]、纵向条纹[34处(24.46%)比10处(6.33%),P<0.001]、甲纵裂[24处(17.27%)比9处(5.70%),P<0.01]、褐色改变[14处(10.07%)比2处(1.27%),P<0.01]、甲横沟[17处(12.23%)比1处(0.63%),P<0.001]和白甲[10处(7.19%)比1处(0.63%),P<0.01]的出现频率显著较高;指甲银屑病中裂片状出血[100处(63.29%)比64处(46.04%),P<0.01]、油滴征[81处(51.27%)比45处(32.37%),P<0.01]、甲分离边缘的线状红斑[55处(34.81%)比22处(15.83%),P<0.001]、甲部分分离[50处(31.65%)比19处(13.67%),P<0.001]和甲半月红点[36处(22.78%)比12处(8.63%),P<0.01]的出现频率显著较高。结论趾甲银屑病与指甲银屑病的皮肤镜特征显著不同,甲下角化过度、纵向条纹、褐色改变等特征在趾甲银屑病中显著增多。

关键词：银屑病指(趾)甲甲银屑病皮肤镜特征诊断

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病原性曲霉三唑类药物耐药机制的研究进展

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菌物研究 2019年第4期17卷 199-206页

作者：周亚彬王千李若瑜刘伟北京大学第一医院皮肤性病科北京大学真菌与真菌病研究中心皮肤病分子诊断北京市重点实验室

近年来随着免疫抑制人群的不断增加,侵袭性曲霉病的发病率不断增高。然而随着三唑类药物在临床上的广泛使用,病原性曲霉对三唑类药物的耐药率逐渐增加,是临床治疗重大挑战。文中综述了病原性曲霉对三唑类药物耐药机制的研究进展。曲霉... 详细信息

近年来随着免疫抑制人群的不断增加,侵袭性曲霉病的发病率不断增高。然而随着三唑类药物在临床上的广泛使用,病原性曲霉对三唑类药物的耐药率逐渐增加,是临床治疗重大挑战。文中综述了病原性曲霉对三唑类药物耐药机制的研究进展。曲霉对三唑类药物的耐药机制主要包括cyp51的突变与过表达、药物外排泵的过表达、应激适应通路的激活、生物膜的形成,以及脂质合成相关基因参与而导致的耐药。

关键词：曲霉三唑类药物耐药机制羊毛甾醇14α-去甲基化酶外排泵

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临床分离的携带TR34/L98H型的耐唑类药物烟曲霉的耐药机制分析

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检验医学 2016年第9期31卷 755-760页

作者：王千陈伟万喆李若瑜刘伟北京大学第一医院皮肤性病科北京大学真菌和真菌病研究中心皮肤病分子诊断北京市重点实验室北京100034

目的对临床分离的耐唑类药物烟曲霉菌株进行耐药机制等相关研究。方法自1例侵袭性曲霉病(IA)患者的肺泡灌洗液(BALF)中分离得到1株烟曲霉,采用美国临床实验室标准化协会(CLSI)M38-A2微量液基稀释法测定伊曲康唑、伏立康唑、泊沙康唑、... 详细信息

目的对临床分离的耐唑类药物烟曲霉菌株进行耐药机制等相关研究。方法自1例侵袭性曲霉病(IA)患者的肺泡灌洗液(BALF)中分离得到1株烟曲霉,采用美国临床实验室标准化协会(CLSI)M38-A2微量液基稀释法测定伊曲康唑、伏立康唑、泊沙康唑、两性霉素B和卡泊芬净对该菌株的最低抑菌浓度(MIC)/最低有效浓度(MEC),并对该菌株的唑类药物靶酶基因cyp51A进行克隆和序列测定分析,扩增并检测该菌株的9个微卫星标记位点,将其与国际上已经报告的具有相同耐药基因型的烟曲霉菌株进行非加权配对算术平均法(UPGMA)聚类分析。结果伊曲康唑、伏立康唑、泊沙康唑、两性霉素B对该菌株的MIC分别为>16、2、0.5和2μg/m L,卡泊芬净对该菌株的MEC为0.25μg/m L。该菌株的cyp51A基因序列中存在启动子区-288^-322位间34 bp串联序列的插入,以及编码区T364A、T960A、T1554A的点突变,分别导致所编码蛋白98位、297位及495位氨基酸的置换(TR34/L98H/S297T/F495I)。微卫星分析显示,该菌株的微卫星分型与先前欧洲国家、亚洲其他国家分离的TR34/L98H/S297T/F495I型菌株不同。结论我们从1例IA患者BALF中分离到对唑类药物耐药的烟曲霉临床菌株,其耐药性是由cyp51A基因启动子区34 bp的串联序列插入结合基因编码区突变所致98位、297位及495位氨基酸置换(TR34/L98H/S297T/F495I)所介导,该菌株是中国所特有的、不同于国际上已描述的对唑类药物耐药的病原性烟曲霉。

关键词：唑类药物耐药烟曲霉 cyp51A

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我国重要病原性真菌的耐药性研究现状

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微生物与感染 2017年第1期12卷 2-7页

作者：刘伟北京大学第一医院皮肤性病科北京大学真菌和真菌病研究中心皮肤病分子诊断北京市重点实验室北京100034

近年来,病原性真菌的耐药现象越来越多,呈逐年上升趋势,且所致侵袭性感染已成为目前临床上患者死亡的重要原因之一。本文就我国在耐药性真菌的判断、流行病学、耐药机制及其防治等方面的研究现状进行简单介绍。

关键词：病原性真菌耐药性机制

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致病性曲霉的耐药性研究进展

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微生物与感染 2015年第2期10卷 116-121页

作者：王千李若瑜刘伟北京大学第一医院皮肤性病科北京大学真菌与真菌病研究中心皮肤病分子诊断北京市重点实验室北京100034

随着抗真菌药物在临床上的广泛使用,致病性真菌的耐药率越来越高,耐药曲霉对侵袭性曲霉病的诊治产生了重要影响。目前,致病性曲霉耐药性的确定主要依靠抗真菌药敏试验和分子诊断。在有关曲霉耐药机制的研究中,报道最多的是曲霉对唑类药... 详细信息

随着抗真菌药物在临床上的广泛使用,致病性真菌的耐药率越来越高,耐药曲霉对侵袭性曲霉病的诊治产生了重要影响。目前,致病性曲霉耐药性的确定主要依靠抗真菌药敏试验和分子诊断。在有关曲霉耐药机制的研究中,报道最多的是曲霉对唑类药物的耐药,其机制主要包括外排泵表达增加、靶酶Cyp51突变和表达水平增高、形成生物膜,以及热休克蛋白90(Hsp90)介导的信号通路参与而导致的耐药。本文就上述领域近年来的主要进展进行综述。

关键词：曲霉耐药唑类抗真菌药物

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CARD9突变在真菌感染性疾病中的研究进展

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微生物与感染 2018年第4期13卷 233-244页

作者：张逸王晓雯李若瑜北京大学第一医院皮肤性病科北京大学真菌与真菌病研究中心皮肤病分子诊断北京市重点实验室北京100034

胱天蛋白酶募集域蛋白9(caspase recruitment domain-containg protein 9,CARD9)属于CARD家族中的一员,存在于脾、肝、胎盘、肺、脑等人体多种组织中,是高度表达于中性粒细胞、巨噬细胞及树突细胞等髓系细胞中的一个重要衔接蛋白。CARD... 详细信息

胱天蛋白酶募集域蛋白9(caspase recruitment domain-containg protein 9,CARD9)属于CARD家族中的一员,存在于脾、肝、胎盘、肺、脑等人体多种组织中,是高度表达于中性粒细胞、巨噬细胞及树突细胞等髓系细胞中的一个重要衔接蛋白。CARD9可与Bcl-10、黏膜相关淋巴组织淋巴瘤转运蛋白1(mucosaassociated lymphoid tissue lymphoma translocation protein 1,MALT-1)结合并形成CARD9-Bcl-10-MALT-1(CBM)复合体,作为C型凝集素受体(C-type lectin receptor,CLR)等通路的重要媒介,激活核因子κB(nuclear factorκB,NF-κB)等炎症信号通路,在抗真菌免疫中发挥重要作用。迄今为止,全世界已报道14个国家共56例患者发生18种CARD9突变的报道,真菌类型涉及念珠菌、皮肤癣菌、暗色真菌及曲霉等。本文针对CARD9突变在不同真菌感染性疾病中的研究进展进行综述。

关键词：胱天蛋白酶募集域蛋白9 真菌感染念珠菌皮肤癣菌暗色真菌曲霉

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播散性暗色丝孢霉病患者CARD9突变及相关免疫学研究

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微生物与感染 2017年第1期12卷 14-23页

作者：张瑞珺王晓雯万喆李若瑜北京大学第一医院皮肤性病科北京大学真菌与真菌病研究中心皮肤病分子诊断北京市重点实验室北京100034

暗色丝孢霉病是指由暗色真菌引起的皮肤、皮下组织乃至深部组织脏器的感染。本研究探讨1例由皮肤及皮下组织暗色丝孢霉病逐渐进展为播散性暗色丝孢霉病患者的遗传背景及其抗真菌免疫功能。收集患者10余年病情进展的临床资料及真菌检查结... 详细信息

暗色丝孢霉病是指由暗色真菌引起的皮肤、皮下组织乃至深部组织脏器的感染。本研究探讨1例由皮肤及皮下组织暗色丝孢霉病逐渐进展为播散性暗色丝孢霉病患者的遗传背景及其抗真菌免疫功能。收集患者10余年病情进展的临床资料及真菌检查结果,进行临床资料及真菌学研究;对外周血DNA采用Sanger测序,进行遗传学研究;提取患者及正常人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC),采用蛋白免疫印迹法、流式细胞术、化学发光法、酶联免疫吸附试验等进行免疫学研究。结果显示,患者胱天蛋白酶募集域蛋白9(caspase recruitment domain-containing protein 9,CARD9)基因存在新的复合杂合错义突变(p.R35Q和p.E81K),CARD9蛋白表达正常,外周血淋巴细胞(peripheral blood lymphocyte,PBL)Th1和Th17细胞比例均降低;PBMC抗疣状瓶霉感染存在天然及适应性免疫缺陷。本研究首次报道1例播散性暗色丝孢霉病患者存在CARD9基因新发错义突变,同时发现患者PBMC抗真菌的天然及适应性免疫存在缺陷,提示CARD9蛋白在暗色丝孢霉病发病中可能发挥重要作用。

关键词：播散性暗色丝孢霉病 CARD9 疣状瓶霉外周血单个核细胞免疫缺陷

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老年患者侵袭性念珠菌病特点和治疗研究

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中华老年医学杂志 2022年第1期41卷 44-50页

作者：杨之辉宋营改林连君李若瑜余进北京大学第一医院皮肤性病科北京大学真菌和真菌病研究中心皮肤病分子诊断北京市重点实验室国家皮肤与免疫疾病临床医学研究中心国家药品监督管理局化妆品质量控制与评价重点实验室100034 北京大学第一医院老年病内科 100034

目的探讨老年患者侵袭性念珠菌病(IC)的临床及真菌学特点、治疗现状与预后。方法回顾性收集2010年1月至2019年12月10年间依据真菌培养确诊为IC的老年住院患者(≥65岁)的临床资料,对其感染菌株进行鉴定及耐药性实验,分析老年IC患者的临... 详细信息

目的探讨老年患者侵袭性念珠菌病(IC)的临床及真菌学特点、治疗现状与预后。方法回顾性收集2010年1月至2019年12月10年间依据真菌培养确诊为IC的老年住院患者(≥65岁)的临床资料,对其感染菌株进行鉴定及耐药性实验,分析老年IC患者的临床、真菌学、治疗与预后特点,并与非老年人患者进行比较。结果共纳入99例老年患者,中位年龄78(70~83)岁,男女比为2.1∶1.0,占成年患者62.7%(99/158例)。与非老年人患者相比,老年患者中长期住院、重症监护室(ICU)、合并心力衰竭、呼吸衰竭、肾功能衰竭、伴发细菌感染、多点定植、接受机械通气及有氟康唑暴露史的患者更为多见(均P<0.05)。老年患者中血流相关感染最常见(71/99,71.7%),感染菌种以白念珠菌为主(47/99,47.5%),氟康唑与伏立康唑耐药发生率最高(分别为17/117,14.5%;15/117,12.8%)。老年人感染部位、感染菌种分布、对各抗真菌药物的耐药性均与非老年组差异无统计学意义(P>0.05)。共86例(86.9%)老年患者接受了系统性抗真菌治疗,氟康唑为最常用药(35/86,40.7%)。老年IC患者30 d全因病死率为32.6%(29/89),高于非老年组(P=0.022)。多因素Logistic回归分析结果显示高龄(OR=1.12;95%CI:1.06~1.20;P<0.001)、肾衰(OR=4.81;95%CI:1.65~14.03;P=0.004)、高念珠菌评分(OR=1.81;95%CI:1.06~3.11;P=0.031)可增加死亡风险。结论老年人为IC主要发病人群,且病死率随年龄增加不断升高,对于老年IC患者的治疗应积极且谨慎。

关键词：侵袭性念珠菌病危险因素治疗预后

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烟曲霉在不同温度和营养条件下的生长特性初探

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中国真菌学杂志 2013年第1期8卷 6-9页

作者：张晋卿刘伟谭静文万喆李若瑜北京大学第一医院皮肤性病科北京大学真菌与真菌病研究中心皮肤病分子诊断北京市重点实验室北京100034

目的确定烟曲霉的最适生长温度、最高生长温度及致死温度。方法生长曲线法用来确定培养烟曲霉的最适宜培养基,并测定其最适生长温度和最高生长温度;菌落计数法用来确定其致死温度。结果 1)酵母浸膏培养基(yeast ex-tract medium,YG)是... 详细信息

目的确定烟曲霉的最适生长温度、最高生长温度及致死温度。方法生长曲线法用来确定培养烟曲霉的最适宜培养基,并测定其最适生长温度和最高生长温度;菌落计数法用来确定其致死温度。结果 1)酵母浸膏培养基(yeast ex-tract medium,YG)是测定烟曲霉生长曲线的最适宜培养基;2)在YG培养基中,37℃是烟曲霉的最适宜生长温度,52℃为其最高生长温度。随着温度的升高,菌株的生长速度逐渐减慢;3)65℃处理180 min或70℃处理120 min能使烟曲霉完全失活。结论在YG培养基中,37℃是烟曲霉的最适宜生长温度,52℃为其最高生长温度;烟曲霉的致死条件为65℃处理180min或70℃处理120 min。

关键词：烟曲霉温度生长曲线

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