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多彩菌物美丽中国——中国菌物学会2019年学术年会

作者：马玉帛李若瑜北京大学第一医院皮肤性病科北京大学真菌与真菌病研究中心皮肤病分子诊断北京市重点实验室

真菌是一类广泛存在于自然界的真核生物,目前已知真菌种属超过数百万种,只有数百种具有致病性,多数真菌仅在机体免疫改变或缺陷或正常菌群微生态失衡时才引起疾病。随着抗真菌药物的不断使用以及新型抗真菌药物和疫苗的缺乏,真菌感染特... 详细信息

真菌是一类广泛存在于自然界的真核生物,目前已知真菌种属超过数百万种,只有数百种具有致病性,多数真菌仅在机体免疫改变或缺陷或正常菌群微生态失衡时才引起疾病。随着抗真菌药物的不断使用以及新型抗真菌药物和疫苗的缺乏,真菌感染特别是机会感染呈明显上升趋势。侵袭性真菌感染是造成免疫受损患者发病率和死亡率的重要原因,特别是在人类免疫缺陷病毒患者中,侵袭性真菌感染风险更高[1]。宿主抗真菌的防御机制主要可分为天然免疫和适应性免疫。作为机体抵抗真菌感染的第一道防线,天然免疫系统的抗真菌机制主要由免疫细胞、细胞表面受体以及细胞因子组成。NK细胞不仅能够通过细胞毒性分子直接抗真菌,NK细胞还可释放出许多细胞因子,这些细胞因子通过调节天然免疫和适应性免疫反应,发挥间接的抗真菌活性。NK细胞是淋巴细胞的一个亚群,约占外周血淋巴细胞的15%,在宿主抵抗病原体(包括病毒、细菌与真菌)入侵中,也发挥着非常重要的作用。最近的研究表明CD56是病原体识别受体,通过CD56可反映NK细胞和烟曲霉的直接相互作用,CD56相应增多,而阻断CD56表面受体则会减少真菌介导的NK细胞活化以及细胞因子的分泌。一些研究报道了NK细胞释放的裂解颗粒在真菌病原体种的重要性。例如,抑制颗粒分泌的莫能菌素可以部分地消除NK细胞对新生隐球菌的生长抑制作用[9],穿孔素和颗粒溶可以调节NK细胞对真菌病原体的直接细胞毒作用。在白色念珠菌酵母中发现吞噬作用可能是NK细胞直接杀伤的另一种机制[2]。IFN-γ是抗真菌宿主反应中的关键分子之一,由NK细胞产生,IFN-γ能够引起迁移、粘附、吞噬作用以及嗜中性粒细胞和巨噬细胞的氧化杀伤作用。NK细胞不仅能够通过细胞毒性分子直接抗真菌,还可释放出许多细胞因子,这些细胞因子通过调节天然免疫和适应性免疫反应,发挥间接的抗真菌活性,因此,NK细胞受体和真菌配体的相互作用有望成为研究热点。

关键词： NK细胞真菌感染天然免疫

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我国黑曲霉复合体的分子鉴定及抗真菌药物体外敏感性测定

我国黑曲霉复合体的分子鉴定及抗真菌药物体外敏感性测定

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全国首届真菌感染与宿主免疫学术研讨会

作者：李亚丽万喆李若瑜北京大学第一医院皮肤性病科北京大学真菌与真菌病研究中心皮肤病分子诊断北京市重点实验室

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两性霉素B成功治疗不规则毛霉引起的皮肤慢性毛霉病1例

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中国真菌学杂志 2023年第4期18卷 347-349,353页

作者：王诗琪宋营改莫然万喆徐永豪李若瑜北京大学第一医院皮肤性病科真菌室国家皮肤与免疫疾病临床医学研究中心北京大学真菌和真菌病研究中心皮肤病分子诊断北京市重点实验室国家药品监督管理局化妆品质量控制与评价重点实验室北京100034 山东大学齐鲁医院皮肤科济南250063

患者,女,44岁,面部红斑、丘疹16年,溃疡、结痂8年。皮肤科检查:面部弥漫肿胀性红斑、大片状境界清晰的溃疡和坏死性焦痂。双眼睑外翻,右眼失明。真菌直接镜检、培养及分子生物学菌种鉴定,确诊为不规则毛霉所导致的皮肤慢性毛霉病,予两... 详细信息

患者,女,44岁,面部红斑、丘疹16年,溃疡、结痂8年。皮肤科检查:面部弥漫肿胀性红斑、大片状境界清晰的溃疡和坏死性焦痂。双眼睑外翻,右眼失明。真菌直接镜检、培养及分子生物学菌种鉴定,确诊为不规则毛霉所导致的皮肤慢性毛霉病,予两性霉素B静脉滴注治疗,皮损明显改善,遗留萎缩性瘢痕。

关键词：两性霉素B 不规则毛霉皮肤毛霉病

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对1株临床分离的耐唑类药物的烟曲霉TR34/L98H型菌株的初步研究

对1株临床分离的耐唑类药物的烟曲霉TR34/L98H型菌株的初步研究

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中国菌物学会2015年学术年会

作者：王千陈伟万喆李若瑜刘伟北京大学第一医院皮肤性病科北京大学真菌和真菌病研究中心皮肤病分子诊断北京市重点实验室

目的对1株耐唑类药物的烟曲霉临床分离株进行相关的初步研究。方法自一例侵袭性曲霉病患者的肺泡灌洗液（BALF）中分离得到的一株烟曲霉,利用美国临床实验室标准化研究所（CLSI）M38-A2微量液基稀释法测定伊曲康唑（ITC）、伏立康唑（VR... 详细信息

目的对1株耐唑类药物的烟曲霉临床分离株进行相关的初步研究。方法自一例侵袭性曲霉病患者的肺泡灌洗液（BALF）中分离得到的一株烟曲霉,利用美国临床实验室标准化研究所（CLSI）M38-A2微量液基稀释法测定伊曲康唑（ITC）、伏立康唑（VRC）、泊沙康唑（POS）、两性霉素B（AMB）和卡泊芬净（CAS）对该烟曲霉菌株的最低抑菌浓度（MIC）/最低有效浓度（MEC）;并对该菌株中唑类药物靶酶基因cyp51A进行克隆和序列测定分析;扩增并检测该菌株的九个微卫星标记位点,将其与具有相同耐药基因型的菌株进行UPGMA聚类分析。结果微量液基稀释法显示,对于该菌株,ITC、VRC、POS、AMB的MIC分别为≥16μg/ml、2μg/ml、0.5μg/ml、2μg/ml,CAS的MEC为0.25μg/ml;该菌株的cyp51A序列中存在启动子区-288到-322位间34bp的串联序列的插入,以及该基因编码区364、960及1544位碱基的点突变,分别导致基因编码区98位、297位及495位氨酸的置换（TR34/L98H/S297T/F495I）;微卫星分析显示该菌株的微卫星分型与先前国际上欧洲、亚洲等其它各国分离的TR34/L98H/S297T/F495I菌株不同。结论我们从侵袭性曲霉病患者BALF中分离到一株由cyp51A基因启动子区34bp的串联序列插入结合基因编码区突变所致98位、297位及495位氨酸置换（TR34/L98H/S297T/F495I）所介导的对唑类药物耐药的烟曲霉临床菌株,该菌株是不同于国际上已描述的、中国所特有的对唑类药物耐药的致病性烟曲霉。

关键词：唑类药物耐药烟曲霉 cyp51A

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利用半乳糖诱导的酵母过表达系统揭示过度表达的ERG11基因可引起酿酒酵母对氟康唑产生耐药

利用半乳糖诱导的酵母过表达系统揭示过度表达的ERG11基因可引起...

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中国菌物学会2015年学术年会

作者：王千张浩李若瑜刘伟北京大学第一医院皮肤性病科北京大学真菌和真菌病研究中心皮肤病分子诊断北京市重点实验室

目的:通过构建可诱导过表达ERG11基因的酿酒酵母菌株,来探讨酿酒酵母中唑类药物靶酶ERG11基因过度表达对氟康唑敏感性的影响。方法:用PCR法扩增酿酒酵母ERG11基因(NCBI accession number NM01179137.1)的开放读框(open reading frame,OR... 详细信息

目的:通过构建可诱导过表达ERG11基因的酿酒酵母菌株,来探讨酿酒酵母中唑类药物靶酶ERG11基因过度表达对氟康唑敏感性的影响。方法:用PCR法扩增酿酒酵母ERG11基因(NCBI accession number NM01179137.1)的开放读框(open reading frame,ORF),利用DNA重组的方法将其克隆到酿酒酵母表达载体p YES2;将重组后的质粒转化到尿嘧啶缺陷型酿酒酵母INVSc1中,在选择培养基SC-U中筛选得到酿酒酵母转化菌株Ip YES-ERG11,同时将转化了空载体p YES2的Ip YES酵母菌株作为对照;然后,在半乳糖诱导的条件下,通过菌落计数法、E-test法、纸片扩散法及微量液基稀释法测定Ip YES-ERG11及Ip YES对氟康唑的敏感性。结果:四种药敏试验方法均显示半乳糖诱导后Ip YES-ERG11对氟康唑的敏感性降低。结论:ERG11基因过度表达可导致酿酒酵母对氟康唑产生耐药性;半乳糖诱导的酵母过表达系统可用于基因表达量与效应关系的研究。

关键词： ERG11基因氟康唑酿酒酵母抗真菌药物敏感性

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希木龙念珠菌对氟康唑耐药的机制研究

希木龙念珠菌对氟康唑耐药的机制研究

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中国菌物学会2015年学术年会

作者：张浩王千万喆李若瑜刘伟北京大学第一医院皮肤性病科北京大学真菌和真菌病研究中心皮肤病分子诊断北京市重点实验室

近年来,由希木龙念珠菌感染导致的真菌性疾病的发病率逐渐增高。希木龙念珠菌作为机会性致病菌主要引起免疫低下或受损患者发生感染。由其感染引起的疾病包括甲癣,导管相关的真菌血症等。由于希木龙念珠菌对多种抗菌药物耐药,临床上治... 详细信息

近年来,由希木龙念珠菌感染导致的真菌性疾病的发病率逐渐增高。希木龙念珠菌作为机会性致病菌主要引起免疫低下或受损患者发生感染。由其感染引起的疾病包括甲癣,导管相关的真菌血症等。由于希木龙念珠菌对多种抗菌药物耐药,临床上治疗其引起的侵入性念珠菌病的效果较差。因此,研究希木龙念珠菌的耐药机制具有重要的临床意义。首先,对来自于三名念珠菌病患者血液中分离的4株菌进行鉴定,测定其ITS1/2和D1/D2区域的序列发现,3株菌为Candida haemulonii,分别命名为BMU05228,BMU05529和BMU05535,1株菌为Candida duobushaemulonii,命名为BMU05314。使用微量液基稀释法检测发现,BMU05228对氟康唑（FLC）敏感,其余耐药。接着对这4株菌的ERG11,CDR1,CDR2和UPC2基因进行测序,结果发现这些基因并未发生突变。随后使用q-PCR的方法检测ERG11,CDR1和CDR2的表达量发现,耐药菌的的ERG11的表达水平比敏感菌明显增高,并且BMU05314的CDR1/2的表达水平也明显增高。在酿酒酵母中过表达ERG11发现,转化ERG11表达质粒的酿酒酵母对FLC发生耐药。联合使用Cdr1的抑制剂FK520和FLC后发现,BMU05228,BMU05529和BMU05535的生长受到明显抑制,但是BMU05314的生长抑制不明显。综上,ERG11的过表达可能是导致希木龙念珠菌对FLC耐药的主要机制,CDR1和CDR2的过表达也发挥了一定作用。但是是否还有其它机制导致其对FLC耐药,还需进一步进行研究。

关键词：希木龙念珠菌氟康唑耐药

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波氏假阿利什霉复合种对四种抗真菌药物的敏感性研究

波氏假阿利什霉复合种对四种抗真菌药物的敏感性研究

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第六届中国临床微生物学大会暨微生物学与免疫学论坛

作者：王红万喆余进北京大学第一医院皮肤性病科北京大学真菌和真菌病研究中心北京市皮肤病分子诊断重点实验室

目的对23株分子鉴定为赛多孢霉复合种的菌株检测其对伏立康唑、泊沙康唑、伊曲康唑和两性霉素B的敏感性。方法参照美国临床实验室标准化研究所制制定的M38-A2方案,检测临床来源的9株波氏假阿利什霉(***)、6株***、1株***、1株***和6株... 详细信息

目的对23株分子鉴定为赛多孢霉复合种的菌株检测其对伏立康唑、泊沙康唑、伊曲康唑和两性霉素B的敏感性。方法参照美国临床实验室标准化研究所制制定的M38-A2方案,检测临床来源的9株波氏假阿利什霉(***)、6株***、1株***、1株***和6株尖端赛多孢(***)对伏立康唑、泊沙康唑、伊曲康唑和两性霉素B的MIC值。结果伏立康唑对所有受试菌株的MIC值为0.5-1μg/ml,泊沙康唑为2-4μg/ml。伊曲康唑对***、尖端赛多孢的MIC值为2->16μg/ml,,对波氏假阿利什霉、***、***的MIC值为2-4μg/ml。两性霉素B对5种菌的MIC值均为为4->16μg/ml。结论伏立康唑、泊沙康唑,伊曲康唑和两性霉素B对波氏假阿利什复合种中不同种的敏感性未见明显差异。伏立康唑对其最敏感,泊沙康唑其次,伊曲康唑变化较大,两性霉素B的效果最差。

关键词：波氏假阿利什霉复合种伏立康唑泊沙康唑伊曲康唑两性霉素B

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希木龙念珠菌的耐药机制研究及全基因组de novo测序检测

希木龙念珠菌的耐药机制研究及全基因组de novo测序检测

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中国菌物学会第七届全国会员代表大会暨2017年学术年会

作者：张浩王千周亚彬李若瑜刘伟北京大学第一医院皮肤性病科北京大学真菌和真菌病研究中心皮肤病分子诊断北京市重点实验室

近年来,由希木龙念珠菌（Candida haemulonii）感染导致的真菌性疾病的发病率逐渐增高。希木龙念珠菌作为机会性致病菌主要引起免疫低下或受损患者发生感染。由其感染引起的疾病包括甲癣,导管相关的真菌血症等。希木龙念珠菌是一种多重... 详细信息

近年来,由希木龙念珠菌（Candida haemulonii）感染导致的真菌性疾病的发病率逐渐增高。希木龙念珠菌作为机会性致病菌主要引起免疫低下或受损患者发生感染。由其感染引起的疾病包括甲癣,导管相关的真菌血症等。希木龙念珠菌是一种多重耐药菌,其对两性霉素B耐药,且大部分菌株对唑类药物耐药。临床上治疗希木龙念珠菌的感染常常给予氟康唑和两性霉素B联合用药,但联合用药对治疗其引起的深部真菌感染效果较差。因此,研究希木龙念珠菌的耐药机制具有重要的临床意义。本研究对来自于3名念珠菌病患者血液中分离的4株菌进行鉴定,测定其ITS1/2和D1/D2区域的序列发现,3株菌为Candida haemulonii,分别命名为BMU05228,BMU05529和BMU05535,1株菌为Candida duobushaemulonii,命名为BMU05314。使用微量液基稀释法检测发现,BMU05228对氟康唑（FLC）敏感,其余耐药。接着对这4株菌的ERG11、CDR1、CDR2和UPC2基因进行测序,结果发现这些基因并未发生突变。随后使用q-PCR的方法检测ERG11、CDR1和CDR2的表达量发现,耐药菌的ERG11和CDR1的表达水平比敏感菌明显增高。这一结果提示,ERG11和CDR1的过表达可能是导致希木龙念珠菌对FLC耐药的机制。由于希木龙念珠菌的基因组序列未知,因此为了进一步揭示其耐药性产生的机制,本研究对希木龙念珠菌进行了全基因组de novo测序,并对耐药菌进行了重测序以及转录组测序。结果显示,二代联合三代测序的方法能够得到较完整的希木龙念珠菌全基因组序列;重测序结果显示,耐药菌中132个编码基因发生了错义突变,4个编码基因的翻译提前终止,7个编码基因发生了移码突变;转录组结果显示耐药菌中药物外排泵基因的表达水平明显增高。这些结果提示,外排泵基因的高表达有可能是导致其产生耐药性的原因,并且编码基因的突变可能导致了外排泵基因的高表达或者通过其他机制造成耐药性的产生。

关键词：希木龙念珠菌唑类药物耐药机制全基因组测序

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我国致病性枝顶孢霉药物敏感性研究

我国致病性枝顶孢霉药物敏感性研究

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第六届中国临床微生物学大会暨微生物学与免疫学论坛

作者：姚丽敏万喆李若瑜余进北京大学第一医院皮肤性病科北京大学真菌和真菌病研究中心北京市皮肤病分子诊断重点实验室

目的检测临床分离致病性枝顶孢霉对10种的抗真菌药物的敏感性,为临床治疗提供参考。方法按照美国临床实验室标准化委员会M38-A2方案,用微量稀释法测定29株致病性枝顶孢霉对两性霉素B、酮康唑、氟康唑、伏立康唑、伊曲康唑、泊沙康唑、... 详细信息

目的检测临床分离致病性枝顶孢霉对10种的抗真菌药物的敏感性,为临床治疗提供参考。方法按照美国临床实验室标准化委员会M38-A2方案,用微量稀释法测定29株致病性枝顶孢霉对两性霉素B、酮康唑、氟康唑、伏立康唑、伊曲康唑、泊沙康唑、舍他康唑、阿莫罗芬、环吡酮胺、特比萘芬的最低抑菌浓度(Minimal inhibitory concentration,MIC)。结果特比萘芬、伏立康唑、环吡酮胺、阿莫罗芬、泊沙康唑、两性霉素B、酮康唑、伊曲康唑、舍他康唑和氟康唑对枝顶孢霉MIC范围分别为0.0313-16、0.125-16、1-8、0.0625->16、1->16、4->16、0.5->16、8->16、>16和16->64μg/mL;GM值分别0.19、0.98、2.79、3.63、4.30、11.45、8.80、27.07、>16和110.90μg/mL。结论特比萘芬、伏立康唑、环吡酮胺、阿莫罗芬和泊沙康唑对枝顶孢霉的抗菌性较好,两性霉素B和酮康唑对枝顶孢霉抗菌作用有限,伊曲康唑、舍他康唑及氟康唑对所有受试菌株无抗菌活性。

关键词：枝顶孢霉微量肉汤稀释法敏感性

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9种常见药物对28株临床分离的疣状瓶霉的体外敏感性研究

9种常见药物对28株临床分离的疣状瓶霉的体外敏感性研究

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第四届中国临床微生物学大会暨微生物学与免疫学论坛

作者：李亚丽万喆李若瑜北京大学第一医院皮肤性病科北京大学真菌与真菌病研究中心北京大学第一医院皮肤病分子诊断北京市重点实验室

目的:探讨特比萘芬或卡泊芬净联合两性霉素B,泊沙康唑,伊曲康唑对不规则毛霉的体外抑菌作用。方法:参照M38-A2及棋盘微量液基稀释法对18株不规则毛霉行药敏试验,两种药物的联合作用通过部分抑制浓度指数(FICI)判定,FICI≤0.5为"协... 详细信息

目的:探讨特比萘芬或卡泊芬净联合两性霉素B,泊沙康唑,伊曲康唑对不规则毛霉的体外抑菌作用。方法:参照M38-A2及棋盘微量液基稀释法对18株不规则毛霉行药敏试验,两种药物的联合作用通过部分抑制浓度指数(FICI)判定,FICI≤0.5为"协同",0.5

关键词：毛霉特比萘芬卡泊芬净两性霉素B 泊沙康唑伊曲康唑联合药敏

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