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作者：刘伟孙毅陈伟万喆李若瑜北京大学第一医院皮肤性病科北京大学真菌和真菌病研究中心

目的研究对唑类药物交叉耐药的烟曲霉临床分离株及其相关的耐药机制。方法自一例侵袭性曲霉病患者体内分离得到的一株烟曲霉,分别利用美国临床实验室标准化研究所(CLSI)M38-A2中的微量液基稀释法和E-test法测定伊曲康唑(ITC)、伏立康唑(... 详细信息

目的研究对唑类药物交叉耐药的烟曲霉临床分离株及其相关的耐药机制。方法自一例侵袭性曲霉病患者体内分离得到的一株烟曲霉,分别利用美国临床实验室标准化研究所(CLSI)M38-A2中的微量液基稀释法和E-test法测定伊曲康唑(ITC)、伏立康唑(VRC)、两性霉素B(AMB)、泊沙康唑(POS)和卡泊芬净(CAS)对该烟曲霉菌株的最低抑菌浓度(MIC)/最低有效浓度(MEC);并对该菌株中唑类药物靶酶基因cyp5 1A进行克隆和序列测定分析。结果微量液基稀释法显示,对于该菌株,ITC、VRC、AMB的MIC分别为≥16μg/ml、8μg/ml、1μg/ml,CAS的MEC为0.5μg/ml;E-test法显示,ITC、VRC、AMB、和POS的MIC分别为:≥32μg/ml、≥32μg/ml、12μg/ml和≥32μg/ml,CAS的MIC为0.047μg/ml;在对cyp51A基因克隆后、测定其序列并分析后发现:1、该菌株的cyp51A序列中存在启动子区-288到-322位间34bp的串联序列的插入,以及该基因编码区364位碱基的点突变(T364A),导致了编码区98位亮氨酸的置换(L98H);2、该菌株的cyp51A基因编码区还存在137位碱基(A137T)、585位碱基(G585A)、814位碱基(C814A)、836位碱基(G836C)、991位碱基(T991C)、1350位碱基(A1350G)的突变,并分别导致编码区46位酪氨酸(Y46F)、72位缬氨酸(V172M)、248位苏氨酸(T248N)、255位谷氨酸(E255D)、307位亮氨酸(L307P)和427位赖氨酸(K427E)的置换。结论分离到对唑类药物交叉耐药的烟曲霉临床株;该菌株的cyp5 1A基因存在启动子区34bp的串联序列插入和编码区98位亮氨酸的突变(L98H),这种变化可以导致烟曲霉对ITC和VRC耐药;该菌株cyp5 1A基因编码区还存在一些其它的点突变,并可以导致相应部位的氨基酸置换。

关键词：唑类药物交叉耐药烟曲霉 cyp51A

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地塞米松通过抑制Afyap1表达来增加过氧化氢对烟曲霉的体外杀伤

地塞米松通过抑制Afyap1表达来增加过氧化氢对烟曲霉的体外杀伤

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中国菌物学会2009学术年会

作者：许辉陈伟李丽娟万哲王晓红李若瑜王端礼刘伟北京大学第一医院皮肤性病科北京大学真菌和真菌病研究中心

目的:研究地塞米松对过氧化氢(HO)体外杀伤烟曲霉(Aspergillus fumigatus,***)的影响。方法:用不同浓度的地塞米松(0mg/mL,0.02mg/mL,0.2mg/mL)处理烟曲霉孢子,按照处理时间不同分为A(0.5h),B(2h),C(7h),D(16h)4组。用测定HO杀伤真菌的标准方法——斑点法分别测定各组烟曲霉孢子对HO的氧化杀伤敏感性。用Real-Time PCR方法分析各组孢子Afyap1(yeast activating protein-1 homologue of ***)表达的差异。利用美国临床实验室标准化研究所(CLSI)的微量液基稀释法M38-A2方案测定地塞米松处理前后烟曲霉孢子对两性霉素B和伊曲康唑的敏感性。结果:在HO浓度为1.5mmol/L下,未用地塞米松处理的孢子(阴性对照)氧化杀伤敏感性为5×10(生长良好)。A(0.5h)组:地塞米松0.02mg/mL处理后孢子的氧化杀伤敏感性为5×10;地塞米松0.2mg/mL处理后孢子的氧化杀伤敏感性为5×10。B(2h)组:地塞米松0.02mg/mL和0.2mg/mL处理后孢子的氧化杀伤敏感性均为5×10。C(7h)和D(16h)组:不同浓度地塞米松处理后氧化杀伤敏感性与阴性对照没有差别(均为5×10)。地塞米松处理后,A、B两组Afyap1表达水平下降;C、D两组处理前后Afyap1表达水平没有显著差别。地塞米松处理前后,烟曲霉孢子对对两性霉素B和伊曲康唑药物敏感性没有明显区别:两性霉素B的最低抑菌浓度(MIC)为0.5-1μg/mL,对伊曲康唑的MIC为0.25-1μg/mL。结论:地塞米松可以通过抑制烟曲霉Afyap1的表达而增强其对HO体外杀伤的敏感性,这一现象在地塞米松处理后0.5h表现明显。但是不影响烟曲霉对两性霉素B和伊曲康唑的敏感性。

关键词：烟曲霉地塞米松 Afyapl 氧化杀伤

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常用抗真菌药物对皮炎外瓶霉体外抗菌活性及其联合作用

常用抗真菌药物对皮炎外瓶霉体外抗菌活性及其联合作用

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中国菌物学会2009学术年会

作者：孙毅万哲王晓红李若瑜王端礼刘伟北京大学第一医院皮肤性病科北京大学真菌和真菌病研究中心

目的观察临床常用抗真菌药物对皮炎外瓶霉的体外抗真菌活性,以及这些药物的联合抗皮炎外瓶霉作用。方法利用美国临床实验室标准化研究所（CLSI）微量液基稀释法M27-A2方案,测定6种抗真菌药物,包括特比萘芬（Terbinafine,TNF）,伊曲康唑... 详细信息

目的观察临床常用抗真菌药物对皮炎外瓶霉的体外抗真菌活性,以及这些药物的联合抗皮炎外瓶霉作用。方法利用美国临床实验室标准化研究所（CLSI）微量液基稀释法M27-A2方案,测定6种抗真菌药物,包括特比萘芬（Terbinafine,TNF）,伊曲康唑（Itraconazole,ITR）,两性霉素B（Amphotericin B,AMB）,氟康唑（Fluconazole,FLU）,伏立康唑（Voriconazole,VOR）和卡伯芬净（Caspofungin,CAS）,对分离自病人和自然环境的16株皮炎外瓶霉的抗菌活性。并采用棋盘法测定了TNF与ITR或VOR,AMB与FLU,以及CAS与AMB、FLU、ITR或VOR的体外联合效应。利用部分抑菌指数（fractional inhibitory concentration index,FICI）来评价联合作用:当FICI≤0.5时为协同作用,0.5＜FICI≤4时为无相关作用,当FICI＞4时为拮抗作用。结果TNF,ITR,AMB,FLU,VOR和CAS对皮炎外瓶霉的最低抑菌浓度（MIC）范围分别为0.125-0.25mg/L,2.0-2.0mg/L,2.0-2.0mg/L,16-32mg/L,0.25-0.5mg/L和16-64mg/L。最低杀菌浓度（MFC）与MIC的差异都在两个稀释度以内。CAS与ITR或VOR的联合用药对15/16株（93.75%）有协同作用,FICI≤0.5。而TNF与ITR或VOR,AMB与FLU,CAS与AMB或FLU的联合组无相关作用,0.5＜FICI≤4。结论在体外,TNF,ITR,AMB和VOR具有良好的抗菌作用。CAS与ITR或VOR有协同抗皮炎外瓶霉作用。

关键词：皮炎外瓶霉药敏试验体外联合

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真菌感染与宿主免疫

真菌感染与宿主免疫

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第八届中国临床微生物学大会暨微生物学与免疫学论坛

作者：余进北京大学第一医院皮肤性病科北京大学真菌和真菌病研究中心

真菌感染的发生取决于病原真菌与宿主之间的相互作用，宿主的免疫防御机能对抵御真菌入侵至关重要。天然免疫缺陷或者获得性免疫抑制都是真菌易感的重要原因。其中某些重要基因的突变导致免疫受损进而使得宿主对某些真菌易感，对于这些...

真菌感染的发生取决于病原真菌与宿主之间的相互作用，宿主的免疫防御机能对抵御真菌入侵至关重要。天然免疫缺陷或者获得性免疫抑制都是真菌易感的重要原因。其中某些重要基因的突变导致免疫受损进而使得宿主对某些真菌易感，对于这些宿主的研究有助于我们深入了解抗真菌免疫的机制。

关键词：

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曲霉生物膜对常用抗真菌药物的敏感性测定及其耐药的分子机制初探

曲霉生物膜对常用抗真菌药物的敏感性测定及其耐药的分子机制初探

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第8届全国抗菌药物临床药理学术会议暨北京大学临床药理研究所成立三十周年

作者：刘伟李丽娟陈伟许辉万喆李若瑜北京大学第一医院皮肤性病科真菌室北京大学真菌和真菌病研究中心

目的探讨曲霉生物膜对常用抗真菌药物的敏感性及其耐药的分子机制。方法利用微量液基稀释法测定22株曲霉游离孢子对两性霉素B、卡泊芬净和伏立康唑的敏感性;同时建立22株曲霉生物膜的体外模型,用抗真菌药物敏感试验联合甲基四氮盐(XTT)... 详细信息

目的探讨曲霉生物膜对常用抗真菌药物的敏感性及其耐药的分子机制。方法利用微量液基稀释法测定22株曲霉游离孢子对两性霉素B、卡泊芬净和伏立康唑的敏感性;同时建立22株曲霉生物膜的体外模型,用抗真菌药物敏感试验联合甲基四氮盐(XTT)减低法来评价曲霉生物膜对两性霉素B、卡泊芬净和伏立康唑的敏感性;并进一步通过Real-Time RT-PCR测定烟曲霉生物膜形成过程中药物外排泵基因及唑类药物靶酶基因的相对表达量。结果对于曲霉的游离孢子,两性霉素B的MIC范围是0.5～2μg/ml,卡泊芬净的MEC范围是O.125～0.25μg/ml,伏立康唑的MIC范围是0.5～1μg/ml;对于曲霉生物膜,两性霉素B的SMIC50和SMIC80范围分别是2～>32μg/ml和8～>32μg/ml,卡泊芬净的SMIC50和SMIC80范围分别是32～>256μg/ml和256～>256μg/ml,伏立康唑的SMIC50和SMIC80范围分别是4～>256μg/ml和32～>256μg/ml。烟曲霉生物膜形成过程中药物外排泵基因及唑类药物靶酶基因相对表达量测定显示,与0h相比,7个待测基因在4h时表达量没有变化;8h时AfuMDR1,CYP51A,CYP51B表达量升高,CYP51A表达量升高的最明显;12h,16h,24h时AfuMDR1,AfuMDR2,AfuMDR4,CYP51A,CYP51B表达量升高,其中CYP51A表达量升高的最明显;AfuMDR3和atrF在生物膜形成过程中表达量没有明显变化。结论与游离的孢子相比,曲霉生物膜对两性霉素B、卡泊芬净和伏立康唑的敏感性明显下降;烟曲霉形成生物膜以后,药物外排泵基因和唑类靶酶基因的表达量升高,可能与烟曲霉生物膜对药物敏感性降低密切相关。

关键词：曲霉生物膜药物敏感试验

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以尿道菌栓为特征的泌尿系统真菌感染病例介绍及特征回顾

以尿道菌栓为特征的泌尿系统真菌感染病例介绍及特征回顾

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中华医学会第二十次全国皮肤性病学术年会、国际特应性皮炎、皮肤病遗传、银屑病国际论坛

作者：余进李若瑜北京大学第一医院皮肤性病科北京大学真菌和真菌病研究中心 100034

目的通过病例介绍和特征回顾,使得对特殊表现的泌尿系统真菌感染认识提高.方法本文介绍三例以尿道菌栓为特征的泌尿系统真菌感染病例,致病真菌分别为黄曲霉、白念珠菌和米根霉.三例患者基础疾病、累及部位、致病菌种类不同导致其治疗...

目的通过病例介绍和特征回顾,使得对特殊表现的泌尿系统真菌感染认识提高.方法本文介绍三例以尿道菌栓为特征的泌尿系统真菌感染病例,致病真菌分别为黄曲霉、白念珠菌和米根霉.三例患者基础疾病、累及部位、致病菌种类不同导致其治疗和预后存在较大差异.本文对相应疾病进行特征回顾.

关键词：

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FTA-DNA直接提取法在病原真菌分子鉴定中的应用

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中国真菌学杂志 2010年第3期5卷 137-140页

作者：鲁巧云余进刘伟杨建勋马蕾李若瑜北京大学第一医院皮肤性病科北京大学真菌和真菌病研究中心北京100034 中日友好医院皮肤科北京100029

目的建立并评价FTA-DNA直接提取法在病原真菌分子鉴定中的应用。方法采用whatman FTA-DNA直接提取法从25个不同种属的45株培养的菌株和6例临床标本中提取病原真菌DNA,用于病原真菌的测序鉴定。配制不同浓度的孢子悬液探索该方法的检测... 详细信息

目的建立并评价FTA-DNA直接提取法在病原真菌分子鉴定中的应用。方法采用whatman FTA-DNA直接提取法从25个不同种属的45株培养的菌株和6例临床标本中提取病原真菌DNA,用于病原真菌的测序鉴定。配制不同浓度的孢子悬液探索该方法的检测限和安全性。结果 45株菌株扩增后均能得到1条清晰的DNA扩增片段,并成功测序。应用该方法亦成功从腹水、胸水、口腔拭子、宫颈拭子来源的临床标本中直接提取DNA并成功鉴定病原真菌。该DNA提取方法联合降落PCR能检测到1.0×103个cell/mL的孢子悬液,1.0×104个cell/mL及以下浓度的孢子悬液可以被FTA卡完全灭活。结论 FTA-DNA直接提取法可快速有效地从培养的菌株及部分临床标本中提取并保存病原真菌DNA,用于病原真菌的测序鉴定。

关键词：真菌分子鉴定 FTA卡 DNA提取方法

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9种常见药物对28株临床分离的疣状瓶霉的体外敏感性研究

9种常见药物对28株临床分离的疣状瓶霉的体外敏感性研究

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中华医学会第十次全国临床微生物学术年会暨第九届全球华人临床微生物与感染症学术论坛暨2013年浙江省医学微生物与免疫学及医学病毒学学术年会

作者：李亚丽万喆李若瑜北京大学第一医院皮肤性病科北京大学真菌与真菌病研究中心

目的:明确常见9种抗真菌药物对临床分离的疣状瓶霉的体外活性。方法:根据CLSI38-A2方案,运用微量液基稀释法对分离至着色真菌病患者并经形态学和分子生物学方法鉴定的28株疣状瓶霉进行氟康唑、氟胞嘧啶、两性霉素B、伊曲康唑、伏立康唑... 详细信息

目的:明确常见9种抗真菌药物对临床分离的疣状瓶霉的体外活性。方法:根据CLSI38-A2方案,运用微量液基稀释法对分离至着色真菌病患者并经形态学和分子生物学方法鉴定的28株疣状瓶霉进行氟康唑、氟胞嘧啶、两性霉素B、伊曲康唑、伏立康唑、泊沙康唑、特比萘芬、米卡芬净和卡泊芬净等9种药物的体外药敏试验。结果:9种药物的MIC90S由低到高排列为伊曲康唑、伏立康唑和泊沙康唑均为0.5μg/ml,特比萘芬2μg/ml,两性霉素B4μg/ml,卡泊芬净和米卡芬净16μg/ml,氟康唑和氟胞嘧啶64μg/ml。结论:疣状瓶霉对三唑类药物敏感性尚可,对AMB和TERB的值偏高,对氟康唑、氟胞嘧啶及棘白菌素类药物MIC值不敏感。产色真菌病包括了着色芽生菌病、暗色丝孢霉病及足分支菌病。疣状瓶霉作为产色真菌病的常见致病菌,其不仅是导致着色芽生菌病的常见菌株,偶尔还能引起暗色丝孢霉病。着色芽生菌病作为一种可由多个属的暗色真菌引起的皮肤、粘膜感染的慢性霉菌病,其病变的显著长期性及单一药物引起的药物依赖导致着色芽生菌病的治疗困难重重。针对深或者大面积的皮损,系统性地选用氟胞嘧啶(5FC)、两性霉素B(AMB)、三唑类及特比萘芬(TERB)单独或者联合地进行抗真菌药物的长期治疗无非是该病最佳的治疗方式,但瓶霉感染的抗真菌治疗往往效果较差。本研究旨在首次针对多株临床分离的疣状瓶霉进行体外药物敏感性测定,以明确临床常见药物对疣状瓶霉单独使用的体外药物敏感性。

关键词：疣状瓶霉米卡芬净卡泊芬净真菌病临床分离敏感性研究常见药物

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格特隐球菌在河北地区引起1例脑膜炎的临床与实验研究

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中国真菌学杂志 2015年第1期10卷 11-15页

作者：窦红涛万喆杨启文王瑶王贺谢秀丽刘娟李若瑜徐英春中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院检验科北京100730 北京大学第一医院皮肤性病科北京大学真菌与真菌病研究中心北京100034

目的报道1例我国河北地区由格特隐球菌引起的脑膜炎,并对该菌进行试验研究。方法将分离自患者脑脊液中的隐球菌分别接种于Chromagar显色培养基和刀豆氨酸-甘氨酸-溴麝香草酚蓝(CGB)培养基35℃培养,使用API 20C AUX、全自动微生物鉴定仪V... 详细信息

目的报道1例我国河北地区由格特隐球菌引起的脑膜炎,并对该菌进行试验研究。方法将分离自患者脑脊液中的隐球菌分别接种于Chromagar显色培养基和刀豆氨酸-甘氨酸-溴麝香草酚蓝(CGB)培养基35℃培养,使用API 20C AUX、全自动微生物鉴定仪Vitek 2 Compact、生物梅里埃基质辅助激光解析电离飞行时间质谱分析(MALDI-TOF MS)、r DNA ITS和IGS序列分析等方法对该菌进行菌种鉴定,并使用ATB FUNGUS 3进行抗真菌药敏试验。结果该菌在显色培养基上35℃培养48 h后为白色略带粉色菌落,在CGB培养基35℃培养5 d后使CGB培养基由黄色变为蓝色。API 20C AUX、Vitek 2 Compact和MALDI-TOF MS的鉴定结果均为新生隐球菌,r DNA ITS和IGS序列分析均提示该菌为格特隐球菌。5-氟胞嘧啶、两性霉素B、氟康唑、伊曲康唑、伏立康唑对该菌的最小抑菌浓度分别是≤4μg/m L、≤0.5μg/m L、≤1μg/m L、≤0.125μg/m L、≤0.06μg/m L。结论 CGB培养基、r DNA ITS和IGS序列分析能够区分新生隐球菌和格特隐球菌,应重视格特隐球菌的分离鉴定。

关键词：格特隐球菌河北地区 CGB培养基鉴定序列测定抗真菌药敏试验

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Real-time PCR在侵袭性曲霉病中的诊断价值

Real-time PCR在侵袭性曲霉病中的诊断价值

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第二届中国临床微生物学大会暨微生物学与免疫学三江论坛

作者：余进高露娟孙毅万喆李若瑜北京大学第一医院皮肤性病科真菌和真菌病研究中心

目的:探讨real-time PCR在侵袭性曲霉病(IA)高危患者中的诊断价值,并与血清半乳甘露聚糖(GM)试验进行比较。方法回顾性调查分析2008年5月至2010年12月临床疑患IA住院患者1 10人次,根据诊断标准将确诊IA和临床诊断IA归为感染组,共22例,拟... 详细信息

目的:探讨real-time PCR在侵袭性曲霉病(IA)高危患者中的诊断价值,并与血清半乳甘露聚糖(GM)试验进行比较。方法回顾性调查分析2008年5月至2010年12月临床疑患IA住院患者1 10人次,根据诊断标准将确诊IA和临床诊断IA归为感染组,共22例,拟诊IA和非IA归为非感染组,共88例。对其住院期间的257份血清进行real-time PCR和GM检测,绘制real-time PCR的受试者操作曲线(ROC),计算ROC曲线下面积,制定最佳临界值;计算单次PCR阳性在不同分级诊断中的阳性率;计算不同PCR和/或GM诊断条件下的灵敏度(Se)、特异度(Sp)、阳性预测值(PPV)和阴性预测值(NPV)等。采用McNemar配对检验对不同方法进行比较。结果ROC曲线下面积为0.91(95%CI:0.825～0.995),最佳临界循环值为39.45。单次PCR阳性对确诊和临床诊断的诊断率分别为100%和84.2%。不同诊断条件下Se、Sp、PPV和NPV存在差异。单次、两次PCR阳性Sp分别较单次、两次GM阳性显著升高(P<0.05),而Se无统计学差异;两次PCR阳性与单次PCR阳性相比Sp显著升高(P<0.05);结论 Real-time PCR对侵袭性曲霉病具有较高的诊断价值,其灵敏度和特异度均优于GM试验;两次PCR阳诊断侵袭性曲霉病能够提高诊断的特异度和阳性预测值。

关键词：侵袭性曲霉病特异度 PPV NPV 阳性预测值 Real-time PCR

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