检索结果-内蒙古大学图书馆

中国真菌学杂志 2010年第2期5卷 92-96页

作者：冯丽娟万喆王晓红李若瑜刘伟北京大学第一医院皮肤性病科北京大学真菌与真菌病研究中心北京100034

目的克隆、测序近平滑念珠菌ERG11基因的编码区序列并进行生物信息学分析。方法运用生物信息学的方法 ,通过与白念珠菌ERG11基因碱基序列同源性比对,在近平滑念珠菌基因组(***/sequencing/Candida/pa-rapsilosis/)中寻找可能的ERG11基... 详细信息

目的克隆、测序近平滑念珠菌ERG11基因的编码区序列并进行生物信息学分析。方法运用生物信息学的方法 ,通过与白念珠菌ERG11基因碱基序列同源性比对,在近平滑念珠菌基因组(***/sequencing/Candida/pa-rapsilosis/)中寻找可能的ERG11基因序列(CpERG11),并据此序列设计引物,经PCR扩增近平滑念珠菌标准株(ATCC22019)的ERG11基因片段,产物经电泳、纯化、克隆到质粒prG-AMAI-NotI中,转染DH10B大肠杆菌细胞,并酶切鉴定筛选阳性克隆测序分析。结果近平滑念珠菌ERG11编码区由1569个碱基组成,编码一段含522个氨基酸的多肽。近平滑念珠菌ERG11的编码区序列与白念珠菌、热带念珠菌、光滑念珠菌、酿酒酵母菌ERG11基因的同源性分别为74%、75%、65%、64%。该近平滑念珠菌ERG11的编码区为唑类药物作用靶酶基因。结论成功克隆、测序、并生物信息学分析近平滑念珠菌ERG11基因的编码区序列,为进一步的功能研究奠定基础。

关键词：近平滑念珠菌 ERG11基因克隆测序

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抗真菌药物耐药研究现状及进展

抗真菌药物耐药研究现状及进展

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首届全国细菌耐药监测与临床专题学术会议

作者：陈剑李若瑜 100034 北京大学第一医院皮肤科北京大学真菌与真菌病研究中心

近年来,深部真菌感染已日益成为医院内的主要感染之一,深部真菌感染中以念珠菌感染最为常见,其次为曲霉.在美国,念珠菌己成为第4位从血中分离出的病原菌.在我国,深部真菌感染的发生率也呈逐渐增高的趋势.由于深部真菌感染大多发生于免... 详细信息

近年来,深部真菌感染已日益成为医院内的主要感染之一,深部真菌感染中以念珠菌感染最为常见,其次为曲霉.在美国,念珠菌己成为第4位从血中分离出的病原菌.在我国,深部真菌感染的发生率也呈逐渐增高的趋势.由于深部真菌感染大多发生于免疫抑制患者或有严重基础疾病的患者,进展迅速病死率高,如念珠菌血症若不治疗死亡率高达50-60﹪.临床需要及时选择敏感的抗真菌药物进行治疗.本文主要介绍抗真菌药物耐药研究现状及进展。

关键词：抗真菌药物细菌耐药监测医院感染病原真菌念珠菌

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简并PCR结合RACE技术克隆申克孢子丝菌未知过氧化氢酶基因

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中国真菌学杂志 2011年第5期6卷 271-275页

作者：王晓慧刘伟李若瑜厦门大学附属中山医院皮肤科厦门361004 北京大学真菌和真菌病研究中心北京大学第一医院皮肤科真菌室北京100034

目的克隆孢子丝菌未知过氧化氢酶基因,命名为Sscat基因。方法根据生物信息库中7种已知真菌过氧化氢酶氨基酸序列的高度保守区域设计简并引物,PCR扩增获得部分Sscat基因cDNA片段,随后应用RACE技术分别扩增其3'端和5'端未知序列... 详细信息

目的克隆孢子丝菌未知过氧化氢酶基因,命名为Sscat基因。方法根据生物信息库中7种已知真菌过氧化氢酶氨基酸序列的高度保守区域设计简并引物,PCR扩增获得部分Sscat基因cDNA片段,随后应用RACE技术分别扩增其3'端和5'端未知序列。结果 Sscat基因cDNA序列全长1 746 bp,其中包括5'端121 bp的非编码区、1 500 bp的编码区和109 bp的3'端非编码区。该基因编码499个氨基酸,分子量为56.07 kDa,其氨基酸序列与其他真菌过氧化氢酶氨基酸高度同源,其中与米曲霉、黑曲霉同源性分别为66.3%和56.6%,Sscat基因为申克孢子丝菌过氧化氢酶cDNA。结论简并PCR结合RACE技术成功克隆了孢子丝菌未知过氧化氢酶基因。

关键词：孢子丝菌过氧化氢酶简并PCR 快速cDNA末端扩增

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烟曲霉再鉴定、标准化CSP分型及体外药物敏感性

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中国真菌学杂志 2011年第6期6卷 328-331,336页

作者：高露娟余进李若瑜北京大学第一医院皮肤性病科真菌和真菌病研究中心北京100034

目的了解烟曲霉复合体临床株菌种分布,经典烟曲霉临床株CSP基因型及对常见抗真菌药物敏感性状况。方法菌株来源:北京大学真菌和真菌病研究中心保存分离自125名患者的162株烟曲霉复合体菌株。通过形态学,最高生长温度及分子生物学测序分... 详细信息

目的了解烟曲霉复合体临床株菌种分布,经典烟曲霉临床株CSP基因型及对常见抗真菌药物敏感性状况。方法菌株来源:北京大学真菌和真菌病研究中心保存分离自125名患者的162株烟曲霉复合体菌株。通过形态学,最高生长温度及分子生物学测序分步鉴定;对CSP基因进行扩增、测序,采用国际化命名体系进行CSP分型;采用微量液基稀释法测定经典烟曲霉对伊曲康唑(ITC)、两性霉素B(AMB)、伏立康唑(VRC)及卡泊芬净(CAS)的敏感性。结果所有烟曲霉复合体菌株均为经典烟曲霉;共分为16个CSP基因型,最常见为t04A、t03和t01;分离自4名患者的13株菌对ITC的MICs≥4μg/mL,其中2株菌AMB和VRC的MICs分别为4μg/mL和16μg/mL。CAS的MECs最高为4μg/mL,仅1株。结论未检出烟曲霉相关新种;经典烟曲霉临床株共16个CSP基因型,分布与国际研究结果基本一致,其中5个为新型。我国经典烟曲霉临床株ITC耐药率为3.2%,个别菌株AMB,VRC和CAS耐药。

关键词：烟曲霉复合体经典烟曲霉鉴定 CSP分型体外药敏试验

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FTA-DNA直接提取法在病原真菌分子鉴定中的应用

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中国真菌学杂志 2010年第3期5卷 137-140页

作者：鲁巧云余进刘伟杨建勋马蕾李若瑜北京大学第一医院皮肤性病科北京大学真菌和真菌病研究中心北京100034 中日友好医院皮肤科北京100029

目的建立并评价FTA-DNA直接提取法在病原真菌分子鉴定中的应用。方法采用whatman FTA-DNA直接提取法从25个不同种属的45株培养的菌株和6例临床标本中提取病原真菌DNA,用于病原真菌的测序鉴定。配制不同浓度的孢子悬液探索该方法的检测... 详细信息

目的建立并评价FTA-DNA直接提取法在病原真菌分子鉴定中的应用。方法采用whatman FTA-DNA直接提取法从25个不同种属的45株培养的菌株和6例临床标本中提取病原真菌DNA,用于病原真菌的测序鉴定。配制不同浓度的孢子悬液探索该方法的检测限和安全性。结果 45株菌株扩增后均能得到1条清晰的DNA扩增片段,并成功测序。应用该方法亦成功从腹水、胸水、口腔拭子、宫颈拭子来源的临床标本中直接提取DNA并成功鉴定病原真菌。该DNA提取方法联合降落PCR能检测到1.0×103个cell/mL的孢子悬液,1.0×104个cell/mL及以下浓度的孢子悬液可以被FTA卡完全灭活。结论 FTA-DNA直接提取法可快速有效地从培养的菌株及部分临床标本中提取并保存病原真菌DNA,用于病原真菌的测序鉴定。

关键词：真菌分子鉴定 FTA卡 DNA提取方法

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CFW荧光染色法在甲真菌病诊断中的应用研究

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中国真菌学杂志 2018年第1期13卷 8-10,45页

作者：岳学苹石秀艳陈伟万喆李若瑜王爱平李清首都医科大学附属北京天坛医院皮肤性病科北京100050 北京大学第一医院皮肤性病科北京大学真菌和真菌病研究中心北京100034 山东省聊城市人民医院皮肤科聊城252000

目的评估CFW(Calcofluor white)荧光染色法诊断甲真菌病的阳性率、准确性和效率。方法临床怀疑甲真菌病患者的病甲,同时进行10%KOH溶液湿片法镜检、真菌培养和CFW荧光染色法镜检,计算各自真菌检出阳性率,并统计CFW法与KOH镜检法或真菌... 详细信息

目的评估CFW(Calcofluor white)荧光染色法诊断甲真菌病的阳性率、准确性和效率。方法临床怀疑甲真菌病患者的病甲,同时进行10%KOH溶液湿片法镜检、真菌培养和CFW荧光染色法镜检,计算各自真菌检出阳性率,并统计CFW法与KOH镜检法或真菌培养的差异,比较KOH与CFW镜下特点。结果共入组100例拟诊为甲真菌病患者。CFW法镜检阳性率64%,KOH法镜检阳性率63%,真菌培养阳性率31%。CFW法与KOH法镜检阳性率比较差异无统计学意义(P>0.05);CFW法镜检与真菌培养阳性率比较差异有统计学意义(P<0.01)。但CFW制片比KOH更加简单、快速,镜下显示的真菌更清晰易辨。结论 CFW荧光染色法是一种方便、快速、准确性较高的诊断方法,可以提高甲真菌病诊断的准确性和效率。

关键词：甲真菌病 CFW荧光染色 KOH溶液湿片法真菌培养

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自身免疫性大疱病合并侵袭性肺曲霉病:3例报告

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中国真菌学杂志 2012年第4期7卷 214-218页

作者：余进牟向东万喆阙呈立李若瑜北京大学第一医院皮肤性病科北京大学真菌和真菌病研究中心北京大学第一医院呼吸内科北京100034

目的通过典型病例回顾探讨自身免疫性大疱病糖皮质激素治疗过程中合并肺曲霉病的诊断和治疗情况。方法报告3例自身免疫性大疱病合并侵袭性肺曲霉病病例。3例病例均行痰镜检、培养、抗原检测、胸部CT或者坏死组织病理检查。分离病原菌经... 详细信息

目的通过典型病例回顾探讨自身免疫性大疱病糖皮质激素治疗过程中合并肺曲霉病的诊断和治疗情况。方法报告3例自身免疫性大疱病合并侵袭性肺曲霉病病例。3例病例均行痰镜检、培养、抗原检测、胸部CT或者坏死组织病理检查。分离病原菌经形态学和分子生物学鉴定为烟曲霉、黄曲霉和刺孢裸胞壳。结果 3例病例证实为侵袭性肺曲霉病。进行以伏立康唑为主的综合治疗后均治愈。结论自身免疫性大疱病糖皮质激素治疗过程中应警惕肺曲霉病的发生。多种实验室检查可以帮助早期诊断,提高疗效。

关键词：自身免疫性大疱病糖皮质激素肺曲霉病

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评估国产(1,3)-β-D-葡聚糖检测试剂的诊断价值

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中国真菌学杂志 2010年第5期5卷 277-281页

作者：高露娟余进王晓红万喆李若瑜北京大学第一医院皮肤性病科真菌和真菌病研究中心北京100034

目的比较国产与进口(1,3)-β-D-葡聚糖(BG)检测试验并对国产试剂在侵袭性真菌感染中的诊断价值进行评估。方法回顾性调查2008年4月～2009年5月我院203例(342份样本)怀疑侵袭性真菌感染的住院患者,根据诊断标准分为感染组和非感染组,对... 详细信息

目的比较国产与进口(1,3)-β-D-葡聚糖(BG)检测试验并对国产试剂在侵袭性真菌感染中的诊断价值进行评估。方法回顾性调查2008年4月～2009年5月我院203例(342份样本)怀疑侵袭性真菌感染的住院患者,根据诊断标准分为感染组和非感染组,对其中同时进行国产与日本试剂检测的100份样本进行配对t检验比较;在不同的判断标准下计算国产试剂的灵敏度、特异度、阳性预测值和阴性预测值等,采用McNemar配对χ2检验对不同方法进行比较。结果国产和日本试剂在感染组和非感染组配对t检验结果分别为P=0.235,P=0.076;国产试剂以单次≥20pg/mL和≥50pg/mL为界值的灵敏度、特异度分别为78.3%,67.2%和56.5%,85.0%,双次≥20pg/mL和≥50pg/mL为界值的灵敏度、特异度分别为25.0%,64.9%和25.0%,87.7%。结论国产与日本试剂检测值无统计学差异;国产试剂单次≥50pg/mL为界值较20pg/mL可以明显提高特异度,降低假阳性率,而不影响灵敏度。连续双份血清阴性(BG<50pg/mL)具有较高的特异度和阴性预测值。

关键词： (1,3)-β-D-葡聚糖诊断国产试剂日本试剂

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与马内菲青霉菌抗氧化压力相关的SKN7基因的克隆

与马内菲青霉菌抗氧化压力相关的SKN7基因的克隆

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中华医学会第十二次全国皮肤性病学术会议

作者：曹存巍李若瑜刘伟万喆卜定方北京大学第一医院皮肤性病科北京大学真菌及真菌病研究中心北京大学第一医院皮肤性病科北京大学真菌及真菌病研究中心北京大学第一医院皮肤性病科北京大学真菌及真菌病研究中心北京大学第一医院皮肤性病科北京大学真菌及真菌病研究中心北京大学第一医院中心实验室

目的马内菲青霉菌(PM)感染所致的马内菲青霉病(PSM)是一种凶险的系统性播散性真菌病,可累及多个脏器,死亡率很高。PM抵御单核吞噬细胞产生的氧化压力,是其在体内存活并进而引起全身致病的一个十分重要的环节。本研究拟通过克隆PM的转录... 详细信息

目的马内菲青霉菌(PM)感染所致的马内菲青霉病(PSM)是一种凶险的系统性播散性真菌病,可累及多个脏器,死亡率很高。PM抵御单核吞噬细胞产生的氧化压力,是其在体内存活并进而引起全身致病的一个十分重要的环节。本研究拟通过克隆PM的转录调控因子Skn7编码基因,了解PM是否通过SKN7增强抵御氧化压力的能力。方法首先,比对了酵母菌(白念珠菌、新生隐球菌、酿酒酵母)的SKN7基因,以及利用生物信息学方法从构巢曲霉、烟曲霉的基因组中获得的SKN7电子克隆,找到了上下游两段氨基酸保守序列(结

关键词：马内菲青霉菌压力相关抗氧化

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伊曲康唑联合特比萘芬治疗孢子丝菌病疗效及其对病原真菌体外抗菌活性研究

伊曲康唑联合特比萘芬治疗孢子丝菌病疗效及其对病原真菌体外抗菌...

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2011全国中西医结合皮肤性病学术会议

作者：王爱平高那刘伟万喆陈伟涂平李若瑜北京大学第一医院皮肤性病科北京大学真菌和真菌病研究中心

目的初步探讨伊曲康唑和特比萘芬联合治疗孢子丝菌病的疗效,评价两药体外联合对申克孢子丝菌菌丝相和酵母相的抗菌活性。方法口服伊曲康唑200mg/d和特比萘芬250mg/d治疗孢子丝菌病;体外联合药敏试验采用棋盘微量稀释法,计算分数抑菌浓度... 详细信息

目的初步探讨伊曲康唑和特比萘芬联合治疗孢子丝菌病的疗效,评价两药体外联合对申克孢子丝菌菌丝相和酵母相的抗菌活性。方法口服伊曲康唑200mg/d和特比萘芬250mg/d治疗孢子丝菌病;体外联合药敏试验采用棋盘微量稀释法,计算分数抑菌浓度(FIC)指数判定两药相互作用具有协同、拈抗或无关作用(FIC的确定为联合用药时各药的MIC值分别除以单独用药时MIC值的商的和,表示为FIC=MICA联合/MICA单独+MICB联合/MICB单独。相互作用解释为:FIC≤0.5有协同作用;FIC>4有拮抗作用;0.5病患者,经过伊曲康唑和特比萘芬联合治疗12～14周后治愈。伊曲康唑对申克孢子丝菌菌丝相的MIC值范围为4～32μg/mL,GM值为14.93μg/mL;对酵母相分别为1～8μg/mL和1.69μg/mL,菌丝相与酵母相GM值比较差异具有显著统计学意义(Z=3.925,P=0.000)。特比萘芬对申克孢子丝菌菌丝相的MIC值范围为0.06～0.25μg/mL,GM值为0.13μg/mL;对酵母相分别为0.06～0.25μg/mL和0.11μg/mL,菌丝相与酵母相GM值比较差异无统计学意义(Z=1.532,P=0.1 25)。伊曲康唑与特比萘芬联合时对菌丝相75%(15/20)有协同作用,25%(5/20)为无关;对酵母相70%(14/20)有协同作用,30%(6/20)为无关;均无拈抗作用。菌丝相和酵母相协同作用率比较差异无统计学意义(P=0.500)。结论初步研究显示伊曲康唑和特比萘芬联合治疗孢子丝菌病有效安全,体外联合药敏试验显示两药具有较高的协同作用,提示对单一抗真菌药物治疗孢子丝菌病效果不佳时可以考虑联合用药治疗。

关键词：特比萘芬联合治疗申克孢子丝菌孢子丝菌病伊曲康唑体外抗菌活性病原真菌

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