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北京大学学报（医学版） 2009年第2期41卷 162-167页

作者：马彦乔建军刘伟李若瑜北京大学第一医院皮肤科北京大学真菌和真菌病研究中心北京100034 山西医科大学第二医院皮肤性病科

目的:克隆烟曲霉sho1基因,并构建烟曲霉sho1基因突变株,了解该基因在烟曲霉应对环境变化中的作用。方法:通过基因同源性比对,在烟曲霉基因组中找出与酿酒酵母sho1基因同源的基因,PCR扩增烟曲霉sho1基因及其上、下游各约1.0kb的DNA片段,... 详细信息

目的:克隆烟曲霉sho1基因,并构建烟曲霉sho1基因突变株,了解该基因在烟曲霉应对环境变化中的作用。方法:通过基因同源性比对,在烟曲霉基因组中找出与酿酒酵母sho1基因同源的基因,PCR扩增烟曲霉sho1基因及其上、下游各约1.0kb的DNA片段,并将其重组到质粒pDHt/SK2中,再利用pyrG作为筛选标记构建重组质粒。将重组质粒转化烟曲霉AF293.1得到烟曲霉△sho1。观察烟曲霉△sho1和烟曲霉AF293(野生株,wt)在MM、CM、BHI这3种培养基上的生长速度,测定烟曲霉△sho1在含有氯化钠、丙三醇这两种渗透压物质培养基上的生长情况,并比较烟曲霉△sho1和wt对常用抗真菌药物的敏感性。结果:烟曲霉△sho1在CM、MM、BHI这3种培养基上的生长速度均慢于wt;△sho1在含渗透压物质小于1mol/L的培养基上菌落直径没有明显变化,在含渗透压物质大于1mol/L的培养基上菌落直径明显变小;烟曲霉△sho1和wt对抗真菌药物的敏感性没有差异。结论:sho1基因影响烟曲霉的生长速度,与培养基类型没有明显关系。烟曲霉sho1基因介导渗透压传导。sho1基因对烟曲霉的抗真菌药物敏感性没有影响。

关键词：曲霉菌,烟渗透压抗真菌药敏感性与特异性基因

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比较国产与进口伏立康唑注射剂的体外抗真菌活性

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中国临床药理学杂志 2008年第6期24卷 526-528页

作者：刘伟乔建军万喆陈伟王端礼李若瑜北京大学第一医院皮肤性病科北京大学真菌和真菌病研究中心

目的观察血清和溶媒对伏立康唑(抗真菌药)注射制剂体外抑菌活性的影响。方法国产与进口伏立康唑注射液分别用专用溶媒和蒸馏水溶解,参照美国临床和实验室标准化研究所(CLSI)的微量液基稀释法,测定并比较2种制剂的体外抗真菌活性。在培... 详细信息

目的观察血清和溶媒对伏立康唑(抗真菌药)注射制剂体外抑菌活性的影响。方法国产与进口伏立康唑注射液分别用专用溶媒和蒸馏水溶解,参照美国临床和实验室标准化研究所(CLSI)的微量液基稀释法,测定并比较2种制剂的体外抗真菌活性。在培养基中加入人血清(10%),比较2者抗真菌活性的差异。受试菌株包括114株念珠菌,20株新生隐球菌,10株阿萨希毛孢子菌,62株曲霉,10镰刀菌以及10株尖端赛多孢子菌。结果在体外,2种制剂的溶媒对常见致病真菌的抗真菌活性无明显差异;在有血清存在的条件下,2种制剂的抗真菌活性一致。结论国产与进口伏立康唑的体外抗真菌活性无明显差异。

关键词：抗真菌药物敏感性试验伏立康唑病原真菌

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对唑类药物交叉耐药的烟曲霉临床分离株耐药机制的初步探讨

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中华皮肤科杂志 2011年第4期44卷 244-248页

作者：孙毅刘伟陈伟万喆李若瑜北京大学第一医院皮肤性病科北京大学真菌和真菌病研究中心100034

目的研究对唑类药物交叉耐药的烟曲霉临床分离株的耐药机制.方法自1例侵袭性曲霉病患者体内分离得到1株烟曲霉,分别利用美国临床实验室标准化研究所（CLSI）M38-A2中的微量液基稀释法和E-test法测定伊曲康唑、伏立康唑、两性霉素B、... 详细信息

目的研究对唑类药物交叉耐药的烟曲霉临床分离株的耐药机制.方法自1例侵袭性曲霉病患者体内分离得到1株烟曲霉,分别利用美国临床实验室标准化研究所（CLSI）M38-A2中的微量液基稀释法和E-test法测定伊曲康唑、伏立康唑、两性霉素B、泊沙康唑和卡泊芬净对该烟曲霉的最低抑菌浓度（MIC）/最低有效浓度（MEC）;并对该菌株中唑类药物靶酶基因cyp51A进行克隆和序列测定分析.结果微量液基稀释法显示,该菌株伊曲康唑、伏立康唑、两性霉素B的MIC分别为≥16、8、1mg/L,卡泊芬净的MEC为0.5 mg/L.E-test法显示,伊曲康唑、伏立康唑、两性霉素B和泊沙康唑的MIC分别为≥32、≥32、12和≥32 mg/L,卡泊芬净的MIC为0.047 mg/L.对cyp51A基因进行测序并分析后发现,该菌株的cyp51A序列中存在启动子区-288到-322位间34 bp的串联序列的插入,以及该基因编码区364位碱基的点突变（T364A）,导致了编码区98位亮氨酸的置换（L98H）;该菌株的cyp51A基因编码区还存在137位碱基（A137T）、585位碱基（G585A）、814位碱基（C814A）、836位碱基（G836C）、991位碱基（T991C）、1350位碱基（A1350G）的突变,并分别导致编码区相应氨基酸的置换.结论分离到对唑类药物交叉耐药的烟曲霉临床株,该菌株的cyp51A基因存在启动子区34 bp的串联序列插入和编码区364位的突变（T364A）,这种变化参与了其对伊曲康唑、伏立康唑和泊沙康唑交叉耐药;该菌株cyp51A基因编码区还存在一些其他的点突变,并可导致相应部位的氨基酸置换.

关键词：曲霉菌烟氮杂茂类抗药性多种真菌 cyp51A

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实时PCR在侵袭性曲霉病中的诊断价值

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中华检验医学杂志 2013年第2期36卷 173-177页

作者：高露娟鲁巧云孙毅余进万喆王晓红李若瑜北京大学第一医院皮肤性病科北京大学真菌和真菌病研究中心 100034

目的探讨实时（Real-time）PCR在侵袭性曲霉病（IA）高危患者中的诊断价值，与血清半乳甘露聚糖（GM）试验比较诊断性能。方法回顾性调查分析2008年5月至2010年12月临床疑患IA住院患者110例次，根据诊断标准将确诊IA和临床诊断IA归为感... 详细信息

目的探讨实时（Real-time）PCR在侵袭性曲霉病（IA）高危患者中的诊断价值，与血清半乳甘露聚糖（GM）试验比较诊断性能。方法回顾性调查分析2008年5月至2010年12月临床疑患IA住院患者110例次，根据诊断标准将确诊IA和临床诊断IA归为感染组，共23例次，拟诊IA和非IA归为非感染组，共87例次。对其住院期间的257份血清进行Real-timePCR和GM检测，绘制Real-timePCR的受试者操作曲线（ROC），计算ROC曲线下面积，制定最佳临界值；计算单次PCR阳性在不同分级诊断中的阳性率；计算不同PCR和（或）GM诊断条件下的灵敏度（Se）、特异度（Sp）、阳性预测值（PPV）和阴性预测值（NPV）等。采用McNemar配对X^2检验对不同方法进行比较。结果ROC曲线下面积为0．91（95％CI：0．825-0．995），最佳临界循环值为39．45。单次PCR阳性对确诊和临床诊断的诊断率分别为100％和84．2％。以单次PCR阳性、两次PCR阳性、单次GM阳性和两次GM阳性为诊断标准的Se和sp分别为87．0％、79．3％，58．3％、97．8％，78．3％、63．2％和58．3％、82．6％。以单次、两次PCR阳性为诊断标准的sp分别较单次、两次GM阳性显著升高（P〈0．05），而se无统计学差异；两次PCR阳性与单次PCR阳性相比Sp显著升高（P〈0．05）。1次GM阳性且1次PCR阳性的Se、Sp为65．2％、89．7％；1次GM阳性或1次PCR阳性Se达100％，Sp为52．3％。结论Real-timePCR对侵袭性曲霉病具有较高的诊断价值，其灵敏度和特异度均优于GM试验；两次PCR阳诊断侵袭性曲霉病能够提高诊断的特异度和阳性预测值。

关键词：曲霉菌病实时聚合酶链反应甘露聚糖类

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石膏样小孢子菌引起体癣二例及病原学研究

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中华皮肤科杂志 2011年第2期44卷 137-138页

作者：刘伟陈伟王爱平万喆李若瑜北京大学真菌和真菌病研究中心北京大学第一医院皮肤性病科100034

2例患儿以皮疹伴瘙痒就诊,均有宠物接触史,自行外用糖皮质激素类药物等均无效.真菌直接镜检可以见到皮屑中有链状孢子或菌丝,皮屑培养为石膏样小孢子菌,2菌株对酮康唑、咪康唑、联苯苄唑、特比萘芬、伏立康唑敏感.经口服特比萘芬和外用... 详细信息

2例患儿以皮疹伴瘙痒就诊,均有宠物接触史,自行外用糖皮质激素类药物等均无效.真菌直接镜检可以见到皮屑中有链状孢子或菌丝,皮屑培养为石膏样小孢子菌,2菌株对酮康唑、咪康唑、联苯苄唑、特比萘芬、伏立康唑敏感.经口服特比萘芬和外用环吡酮胺进行治疗痊愈.

关键词：石膏样小孢子菌病原学糖皮质激素类药物体癣特比萘芬直接镜检联苯苄唑环吡酮胺

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耐伊曲康唑烟曲霉临床分离株对四种抗真菌药物的敏感性测定

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中华皮肤科杂志 2007年第12期40卷 722-724页

作者：刘伟乔建军万结陈伟王端礼李若瑜北京大学第一医院皮肤性病科北京大学真菌和真菌病研究中心100034

目的测定耐伊曲康唑炯曲霉临床株对4种抗真菌药物的敏感性。方法自一例对伊曲康唑无效的肺曲霉球患者体内系列分离6株烟曲霉。利用美国临床实验室标准化研究所(CLSI)的微量液基稀释法M38-A方案和E-test法测定6株烟曲霉临床分离株对两性... 详细信息

目的测定耐伊曲康唑炯曲霉临床株对4种抗真菌药物的敏感性。方法自一例对伊曲康唑无效的肺曲霉球患者体内系列分离6株烟曲霉。利用美国临床实验室标准化研究所(CLSI)的微量液基稀释法M38-A方案和E-test法测定6株烟曲霉临床分离株对两性霉素B、卡泊芬净、米卡芬净、伏立康唑和伊曲康唑的敏感性。结果6株烟曲霉中,2株对伊曲康唑的最低抑菌浓度(MIC)为0.5μg/mL,其他4株的MIC均>16μg/mL;两性霉素B和伏立康唑对6株烟曲霉的MIC分别为1μg/mL和0.25～1μg/mL,卡泊芬净和米卡芬净对6株烟曲霉的最低有效浓度均≤0.03μg/mL。E-test法测定结果也显示,卡泊芬净和伏立康唑对6株烟曲霉有良好的抑制活性。结论耐伊曲康唑烟曲霉临床株对两性霉素B、卡泊芬净、米卡芬净和伏立康唑敏感。

关键词：曲霉菌,烟伊曲康唑抗药性,真菌

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复发性念珠菌性阴道炎患者阴道分离白念珠菌对唑类药物的敏感性试验

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临床皮肤科杂志 2004年第10期33卷 604-606页

作者：曹先伟万喆李若瑜北京大学第一医院皮肤科真菌和真菌病研究中心

目的:研究复发性念珠菌性阴道炎(RVVC)最主要的病原菌,即白念珠菌对唑类抗真菌药物的敏感性。方法:对从RVVC患者阴道中分离出的102株白念珠菌,采用美国国家临床实验标准委员会(NCCLS)抗真菌药物敏感试验分会公布的《酵母菌的液基稀释法... 详细信息

目的:研究复发性念珠菌性阴道炎(RVVC)最主要的病原菌,即白念珠菌对唑类抗真菌药物的敏感性。方法:对从RVVC患者阴道中分离出的102株白念珠菌,采用美国国家临床实验标准委员会(NCCLS)抗真菌药物敏感试验分会公布的《酵母菌的液基稀释法抗真菌药物敏感试验参考方案》(M-27A方案)进行体外药敏试验。结果:氟康唑(FCZ)对102株白念珠菌的药敏试验示,37株白念珠菌最小抑菌浓度(MIC)≥64.000μg/mL,57株MIC>0.125μg/mL、<64.000μg/mL,8株MIC≤0.125 μg/mL。伊曲康唑(ICZ)对37株耐FCZ的白念珠菌药敏试验示,35株MIC≥16.000μg/mL,仅2株MIC<16.000μg/mL。结论:①NCCLSM-27A方案操作简便,MIC的一致性及重复性好,可作为体外抗真菌药敏感性试验的一种较好方法。②37株耐FCZ的白念珠菌对ICZ体外药敏试验结果表明,FCZ和ICZ可能具有相似的抗真菌作用机制。

关键词：阴道炎念珠菌性复发性白念珠菌药敏试验抗真菌药唑类

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密切结合临床提高真菌学检验水平

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中华检验医学杂志 2003年第9期26卷 521-523页

作者：李若瑜王端礼北京大学第一医院皮肤性病科北京大学真菌和真菌病研究中心 100034

当前，病原微生物感染疾病给人类带来的危害的增无减，其中由真菌引起的感染也因免疫受损宿主的不断增多而日渐突出。国内近年来机会性真菌感染的患病率和病死率呈急剧上升趋势，但临床上真菌感染诊断的现状却远远不能满足需要，特别是... 详细信息

当前，病原微生物感染疾病给人类带来的危害的增无减，其中由真菌引起的感染也因免疫受损宿主的不断增多而日渐突出。国内近年来机会性真菌感染的患病率和病死率呈急剧上升趋势，但临床上真菌感染诊断的现状却远远不能满足需要，特别是早期特异诊断一直存在困难，因而使很多患者病情延误导致治疗失败甚或失去了治疗的机会。因此，如何提高真菌病的诊断水平已成为国内外临床工作者们共同关心的热点问题，临床实验室在真菌病的诊断和治疗中发挥着越来越重要的作用。本期旨在唤起大学对医学真菌临床检验工作的重视，交流国内外在该领域的研究进展，使大学看到方向、增强信心、促进交流、扎实工作，努力提高我国医学真菌临床检验水平。笔者认为，目前临床真菌实验室应密切结合临床，扎扎实实做好真菌的常规检验；二是积极开创真菌检验新方法。

关键词：真菌学检验真菌感染流行病学分子生物学培养检查法

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曲霉生物膜对常用抗真菌药物的敏感性测定及其耐药的分子机制初探

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中华皮肤科杂志 2011年第6期44卷 382-386页

作者：李丽娟陈伟许辉万喆李若瑜刘伟北京大学第一医院皮肤性病科真菌室北京大学真菌和真菌病研究中心100034

目的探讨曲霉生物膜对常用抗真菌药物的敏感性及其耐药的分子机制。方法利用微量液基稀释法测定22株曲霉游离孢子对两性霉素B、卡泊芬净和伏立康唑的敏感性；同时建立22株曲霉生物膜的体外模型，用抗真菌药物敏感试验联合甲基四氮盐（x... 详细信息

目的探讨曲霉生物膜对常用抗真菌药物的敏感性及其耐药的分子机制。方法利用微量液基稀释法测定22株曲霉游离孢子对两性霉素B、卡泊芬净和伏立康唑的敏感性；同时建立22株曲霉生物膜的体外模型，用抗真菌药物敏感试验联合甲基四氮盐（x1Tr）减低法来评价曲霉生物膜对两性霉素B、卡泊芬净和伏立康唑的敏感性。通过实时RT—PCR测定烟曲霉生物膜形成过程中药物外排泵基因及唑类药物靶酶基因的相对表达量。结果对于曲霉的游离孢子，两性霉素B的最低抑菌浓度（MIC）范围是0．5～2mg／L，卡泊芬净的最低有效浓度（MEC）范围是0．125—0．25mg／L，伏立康唑的MIC范围是0．5—1mg／L；对于曲霉生物膜，两性霉素B的SMIC。（抑制50％固着性曲霉生物膜生长的最小药物浓度）和SMIC。（抑制80％固着性曲霉生物膜生长的最小药物浓度）范围分别是2～〉32mg／L和8～〉32mg／L，卡泊芬净的SMIC∞和SMIC8D范围分别是32～〉256mg／L和256～〉256mg／L，伏立康唑的SMIC∞和SMIC。范围分别是4～〉256mg／L和32～〉256mg／L。烟曲霉生物膜形成过程中药物外排泵基因及唑类药物靶酶基因相对表达量测定显示，与0h相比，7个待测基因在4h时表达量没有变化；8h时AfuMDR1、CYP51A、CYP51B表达量升高，CYP51A表达量升高最明显；12、16、24h时MuMDR1、AfuMDR2、AfuMDR4、CYP51A、CYP51B表达量升高，其中CYP51A表达量升高的最明显；AfuMDR3和atrF在生物膜形成过程中表达量没有明显变化。结论与游离孢子相比，曲霉生物膜对两性霉素B、卡泊芬净和伏立康唑的敏感性明显下降；烟曲霉形成生物膜以后，药物外排泵基因和唑类靶酶基因的表达量升高。

关键词：曲霉菌属生物膜微生物敏感性试验抗药性真菌

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他汀类降血脂药物对曲霉的体外抗真菌作用

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中华皮肤科杂志 2008年第2期41卷 118-120页

作者：乔建军万喆李若瑜刘伟北京大学第一医院皮肤性病科北京大学真菌和真菌病研究中心 100034

目的观察降血脂药物洛伐他汀、辛伐他汀对曲霉体外抗真菌活性，以及它们与唑类抗真菌药、两性霉素B的联合抗曲霉作用。方法分别用纸片扩散法和微量液基稀释法，测定洛伐他汀、辛伐他汀对烟曲霉、黄曲霉、土曲霉和黑曲霉的抗菌活性。用... 详细信息

目的观察降血脂药物洛伐他汀、辛伐他汀对曲霉体外抗真菌活性，以及它们与唑类抗真菌药、两性霉素B的联合抗曲霉作用。方法分别用纸片扩散法和微量液基稀释法，测定洛伐他汀、辛伐他汀对烟曲霉、黄曲霉、土曲霉和黑曲霉的抗菌活性。用纸片扩散法、琼脂扩散联合Etest法测两种药物与伊曲康唑、伏立康唑、两性霉素B的联合抗曲霉作用。结果纸片扩散法显示洛伐他汀、辛伐他汀有体外抗曲霉活性。洛伐他汀、辛伐他汀对烟曲霉的最低抑菌浓度（MIC）范围分别为8．128μg／mL、4～64μg／mL；最低杀菌浓度（MFC）与MIC的差异在2个稀释度内。对于非烟曲霉，48h时，20μg洛伐他汀或辛伐他汀不能产生清晰抑菌圈。洛伐他汀、辛伐他汀对黄曲霉的MIC分别为128μg／mL和64μg／mL；两者对土曲霉和黑曲霉的MIC均〉256μg／mL。洛伐他汀、辛伐他汀与伊曲康唑、伏立康唑、两性霉素B均无协同作用。结论在体外，洛伐他汀、辛伐他汀有抗曲霉活性；但与唑类抗真菌药、两性霉素B无协同作用。

关键词：曲霉菌属微生物敏感性试验洛伐他汀斯伐他汀药物相互作用

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