目的通过体外实验探讨山奈酚对糖皮质激素诱导的股骨头坏死(glucocorticoids-induced osteonecrosis of the femoral head,GIONFH)中骨微血管内皮细胞(bone microvascular endothelial cells,BMECs)的作用。方法从股骨颈骨折患者自愿捐...
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目的通过体外实验探讨山奈酚对糖皮质激素诱导的股骨头坏死(glucocorticoids-induced osteonecrosis of the femoral head,GIONFH)中骨微血管内皮细胞(bone microvascular endothelial cells,BMECs)的作用。方法从股骨颈骨折患者自愿捐赠的股骨头或股骨颈松质骨中分离BMECs,并行CD31、血管性血友病因子免疫荧光染色和体外成管实验鉴定。采用细胞计数试剂盒8(cell counting kit 8,CCK-8)法筛选地塞米松(dexamethasone,Dex)抑制细胞活性的最佳浓度及时间点和改善Dex抑制活性的最佳山奈酚浓度;然后将实验分为4组,分别为单纯细胞组(A组)、加入最佳浓度Dex组(B组)、加入最佳浓度Dex+1μmol/L山奈酚组(C组)和加入最佳浓度Dex+5μmol/L山奈酚组(D组)。采用EdU实验、体外成管实验、TUNEL实验、AnnexinⅤ/碘化丙啶(propidium iodide,PI)实验、Transwell迁移实验、划痕实验和Western blot检测山奈酚对Dex干预后BMECs增殖、成血管、凋亡、迁移和蛋白表达的影响。结果经鉴定所培养细胞为BMECs。CCK-8法检测示Dex抑制BMECs活性的最佳浓度及时间点为300μmol/L作用24 h,改善Dex抑制活性的最佳山奈酚浓度为1μmol/L。EdU和成管实验结果示B~D组细胞增殖率、成管长度和分支点数目显著低于A组,B、D组显著低于C组,差异均有统计学意义(P<0.05)。TUNEL和Annexin V/PI凋亡检测结果显示,B~D组TUNEL阳性细胞率和细胞凋亡率显著高于A组,B、D组显著高于C组,差异均有统计学意义(P<0.05)。划痕实验和Transwell迁移实验结果显示,B~D组划痕愈合率和细胞迁移数显著低于A组,B、D组显著低于C组,差异均有统计学意义(P<0.05)。Western blot检测示,B~D组Cleaved Caspase-3和Bax蛋白相对表达量显著高于A组,B、D组显著高于C组;B~D组基质金属蛋白酶2、Cyclin D1、Cyclin E1、VEGFA和Bcl2蛋白相对表达量显著低于A组,B、D组显著低于C组;差异均有统计学意义(P<0.05)。结论山奈酚可减轻GIONFH中BMECs的损伤和功能障碍。
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