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国际中医中药杂志 2015年第6期37卷 517-523页

作者：余丞浩于友华孙明杰石晓路中国中医科学院医学实验中心北京市中医药防治重大疾病基础研究重点实验室100700

目的：探讨乌头碱、新乌头碱、次乌头碱对心肌细胞钙释放的影响。方法分离的成年Sprague-Dawley大鼠左心室心肌细胞分别使用0.3、1、3μmol/L乌头碱、新乌头碱、次乌头碱溶液灌流12 min，灌流后4、8、12 min时检测自发性钙释放（SCR）... 详细信息

目的：探讨乌头碱、新乌头碱、次乌头碱对心肌细胞钙释放的影响。方法分离的成年Sprague-Dawley大鼠左心室心肌细胞分别使用0.3、1、3μmol/L乌头碱、新乌头碱、次乌头碱溶液灌流12 min，灌流后4、8、12 min时检测自发性钙释放（SCR）诱发率以及舒张末期钙浓度（F0）、钙瞬变幅度（ΔF）的变化。检测灌流0.3μmol/L乌头碱、新乌头碱、次乌头碱溶液后12 min，心肌细胞发挥正性肌力作用时钙瞬变和收缩功能动力学指标的变化。结果乌头碱、新乌头碱、次乌头碱均可诱发SCR，0.3μmol/L时新乌头碱SCR诱发率最高，3μmol/L时乌头碱SCR诱发率最高。与对照组比较，给药后12 min，3μmol/L乌头碱、新乌头碱、次乌头碱均可增加 F0[（1.459±0.379）、（1.585±0.493）、（1.213±0.254）比（1.079±0.108）]、ΔF[（1.615±0.455）、（2.210±0.756）、（1.528±0.422）比（1.036±0.125）]，差异有统计学意义（P均＜0.05）；且新乌头碱ΔF高于乌头碱和次乌头碱（P均＜0.05）。与对照组比较，0.3μmol/L乌头碱、新乌头碱、次乌头碱均可增加ΔF[（0.409±0.127）、（0.423±0.107）、（0.414±0.118）比（0.260±0.065）；P＜0.05或P＜0.01]、收缩幅度[（5.464±2.239）%、（7.449±2.548）%、（5.524±1.645）%比（3.428±0.911）%；P＜0.05或 P＜0.01]，延长钙瞬变达峰时间[（0.041±0.016）s、（0.039±0.009）s、（0.038±0.011）s 比（0.032±0.007）s；P＜0.05或P＜0.01]；与乌头碱组比较，新乌头碱和次乌头碱可降低钙瞬变消除时间常数[（0.301±0.054）s、（0.324±0.064）s 比（0.361±0.076）s；P＜0.05或P＜0.01]，缩短舒张期收缩恢复至50%时的时间[（0.124±0.035）s、（0.126±0.040）s 比（0.157±0.056）s；P＜0.05或 P＜0.01]。结论乌头碱、新乌头碱、次乌头碱的正性肌力作用与毒性效应同时存在，表明心肌细胞内钙浓度升高是产生正性肌力作用的有利因素，也是诱发SCR的危险因素。

关键词：肌细胞,心脏钙中草药乌头碱大鼠新乌头碱次乌头碱

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中枢内神经化学物质在癌症侵袭镜像痛中的作用及加巴喷丁对其的影响

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中国生化药物杂志 2015年第3期35卷 13-17页

作者：孙丹丹王志国李涛赵小亮焦玥刘洋李玉娟欧阳竞锋牛晓红王丹巧中国中医科学院医学实验中心北京市中医药防治重大疾病基础研究重点实验室北京100700

目的研究脊髓组织神经化学物质谷氨酸(glutamate,Glu)、γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)及大脑皮质内P物质(substance P,SP)和强啡肽A1-13(dynorphin A1-13,Dyn A1-13)在癌症侵袭镜像痛中的作用及加巴喷丁对其影响。方法雄性BALB/c小鼠随机分为正常组、操作对照组(注射0.2 m L灭活的S180肉瘤细胞液)、模型组(于右腿股骨大转子处注射0.2 m L S180肉瘤细胞液)和加巴喷丁组(0.2 m L S180肉瘤细胞液+120 mg/kg加巴喷丁,ip),造模前及术后分别用Von Frey纤维丝测定术侧及对侧后足的机械痛阈值;采用高效液相-荧光法检测脊髓L3-L5节段内Glu、GABA浓度;放射免疫法检测大脑皮质内SP、Dyn A1-13的含量。结果伴随术侧癌症侵袭痛的产生,模型组小鼠术侧的镜像部位出现了与术侧发展趋势相同、程度近似的机械痛阈下降。模型组小鼠脊髓内Glu及大脑皮质内SP水平均显著升高(P<0.05,P<0.01),而脊髓内GABA及大脑皮质内Dyn A1-13的含量均显著降低(P<0.05);加巴喷丁给药后小鼠双侧的机械痛阈值均显著升高,可持续240 min(P<0.05,P<0.01),并逆转了癌症侵袭镜像痛小鼠中枢神经系统内上述神经化学物质的改变(P<0.01或P<0.05)。结论 S180肉瘤细胞所致癌症侵袭痛模型小鼠存在镜像痛现象,脊髓内Glu、GABA及大脑皮质中SP、Dyn A1-13可能参与癌症侵袭镜像痛的发生和维持机制,加巴喷丁通过这一机制对癌症侵袭镜像痛模型小鼠发挥镇痛作用。

关键词：镜像痛癌症侵袭痛加巴喷丁神经化学物质

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乌头碱致急性自发性钙释放的机制研究

乌头碱致急性自发性钙释放的机制研究

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中国毒理学会第七次全国毒理学大会暨第八届湖北科技论坛

作者：石晓路余丞浩于友华孙明杰北京市中医药防治重大疾病基础研究重点实验室中国中医科学院医学实验中心

【目的】研究乌头碱致心肌细胞急性白发性钙释放的作用及其基于钙信号的机制研究。【材料和方法】急性分离大鼠左心室心肌细胞,灌流含不同浓度的乌头碱溶液,使用多细胞钙瞬变检测系统检测心肌细胞的舒张末期钙浓度（F0）、钙瞬变幅度（... 详细信息

【目的】研究乌头碱致心肌细胞急性白发性钙释放的作用及其基于钙信号的机制研究。【材料和方法】急性分离大鼠左心室心肌细胞,灌流含不同浓度的乌头碱溶液,使用多细胞钙瞬变检测系统检测心肌细胞的舒张末期钙浓度（F0）、钙瞬变幅度（ΔF）变化和自发性钙释放（SCR）发生率。分析钠通道、钙通道、钠钙交换体、钙调蛋白激酶、肾上腺素能受体阻断下乌头碱诱导心肌细胞SCR发生率、F0、ΔF的变化。使用单细胞收缩与离子检测系统检测乌头碱对持续搏动状态下心肌细胞内钙,钙瞬变,SERCA和NCX功能、肌浆网钙容量及钙泄漏影响。化学发光法检测乌头碱作用下细胞胞浆cAMP含量,westenblot检测p-Ser16-PLB,PLB,SERCA-2a。【结果】0.3,1,3μmol·L乌头碱能浓度依赖性诱发心肌细胞出现自发性钙释放,发生率分别为9.2±8.2%,69.0±8.1%,80.1±5.6%;同时能够提高舒张末期钙浓度、钙瞬变幅度。利多卡因、KB-R7943及其联合应用下,利多卡因能够明显降低钙瞬变幅度但仍高于正常细胞,单独或联合使用KB-R7943能够使舒张期钙和钙瞬变恢复至正常水平,乌头碱诱导的心肌细胞SCR发生率均发生下降且三者之间无显著性差异。证明乌头碱主要通过钠通道-反向钠钙交换（NaC-rNCX）途径增加钙离子浓度并诱发自发性钙释放。硝苯地平能够降低SCR发生率同时大幅降低钙瞬变幅度,但其与利多卡因联用并未协同降低SCR发生率。说明L-型钙通道贡献的钙参与了钙不节律释放过程,但并非主导因素。阻断钙调蛋白激酶（CaMKⅡ）不能有效消除乌头碱致心肌细胞SCR发生率,而阻断肾上腺素能受体（AR）能够有效消除SCR发生率。联合应用AR阻断剂和钠通道阻滞剂能够达到消除SCR最佳效果,使乌头碱在1μmol·L的SCR发生率降低至9.0±1.4%。0.3μmol·L乌头碱能增加心肌收缩力及钙瞬变幅度和速率;加快舒张期的钙消除速率;增强SERCA蛋白活性并增加肌浆网内的钙容量,造成肌浆网钙泄漏水平增加;显著增加钙瞬变过程中钙从肌浆网释放占肌浆网内钙容量的比例。乌头碱能够导致细胞胞浆内cAMP含量升高,分子生物学结果显示乌头碱能够使Ser16-PLB磷酸化水平增加,调节SERCA2a使其活性增强,使肌浆网摄取钙增多,造成肌浆网内钙超载,使RyR受体对钙敏感性增加,钙泄漏增多。【结论】乌头碱致心肌细胞急性自发性钙释放不仅由于调控NaC-rNCX导致胞浆内钙升高,肾上腺素能受体介导的cAMP通路激活造成的肌浆网内钙超载和钙泄漏参与了乌头碱的毒性机制。

关键词：乌头碱肌浆网内钙钙泄漏肌浆网钙泵环磷酸腺苷

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首乌方对6-OHDA引起的不同疾病状态大鼠模型脑内GABA水平变化的调节作用

首乌方对6-OHDA引起的不同疾病状态大鼠模型脑内GABA水平变化的调...

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第五届中国药理学会补益药药理专业委员会学术研讨会

作者：王丹巧焦玥刘洋吴兆恩中国中医科学院医学实验中心北京市中医药防治重大疾病基础研究重点实验室北京100700

目的：观察抑制性氨基酸类神经递质γ-氨基丁酸(GABA)水平在6-OHDA引起的不同疾病状态大鼠模型脑内的变化以及首乌方对其的影响。方法：SD大鼠,用微透析探针在纹状体内灌流6-OHDA制作急性脑损伤模型;6-OHDA纹状体内注射制作PD模型;PD模... 详细信息

目的：观察抑制性氨基酸类神经递质γ-氨基丁酸(GABA)水平在6-OHDA引起的不同疾病状态大鼠模型脑内的变化以及首乌方对其的影响。方法：SD大鼠,用微透析探针在纹状体内灌流6-OHDA制作急性脑损伤模型;6-OHDA纹状体内注射制作PD模型;PD模型基础上美多芭诱发成为LID的模型。对3种模型大鼠采用微透析技术,在清醒自由活动状态下进行纹状体细胞外液动态采样,高效液相-荧光法检测透析液中GABA的浓度。结果：6-OHDA灌流造成的急性脑损伤大鼠模型,GABA浓度随6-OHDA灌流而显著升高,停灌后快速下降,可恢复至接近正常水平;美多芭抑制了GABA浓度的快速升高,并使其下降缓慢;首乌方与美多芭联用可进一步降低GABA的快速升高。

关键词： GABA 脑内微透析首乌方

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首乌方对左旋多巴诱导异动症大鼠的干预作用及其机制

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中国生化药物杂志 2015年第2期35卷 1-4,9页

作者：焦玥刘洋孙丹丹王丹巧梁嵘中国中医科学院医学实验中心北京市中医药防治重大疾病基础研究重点实验室北京100700 北京中医药大学基础医学院北京100029

目的探讨首乌方对左旋多巴诱导的异动症(levodopa induced dyskinesia,LID)大鼠的干预作用及其机制。方法 32只雄性SPF级SD大鼠,随机分为4组:假手术组(sham operation,SO组)、异动症模型组(levodopa induced dyskinesia,LID组)、首乌方高剂量组(shouwufang-high dose,SWF-H组)、首乌方低剂量组(shouwufang-low dose,SWF-L组),每组8只。单侧双位点注射6-羟基多巴胺造成PD模型后,灌胃给予多巴丝肼(30 mg/kg)22 d诱发LID,首乌方剂量组同时灌胃(SWF-H含生药27 g/kg,SWF-L含生药18g/kg)。观察各组LID发病率并进行动物AIM评分;清醒自由活动状态下脑内纹状体微透析、水杨酸捕获羟自由基方法采样,高效液相-电化学检测动态观察病变靶器官细胞外液中羟自由基指标(2,3-DHBA、2,5-DHBA)的浓度变化;检测大鼠体内超氧化物歧化酶(SOD)及丙二醛(MDA)水平的变化。结果首乌方可明显降低大鼠LID的发病率及AIM评分,降低纹状体细胞外液2,3-DHBA及2,5-DHBA的浓度、并显著降低血清内MDA的水平。结论首乌方可以改善大鼠LID的行为学指标,有预防及干预LID的作用,其机制可能与减轻整体特别是病变靶器官的氧化应激损伤有关。

关键词：左旋多巴诱导异动症氧化应激首乌方微透析

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首乌方对LID大鼠纹状体细胞外液DOPAC、HVA、5-HIAA的影响

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中医药学报 2015年第3期43卷 31-35页

目的:通过观察左旋多巴诱发的异动症(LID)大鼠脑纹状体细胞外液单胺类神经递质的代谢产物二羟基苯乙酸(DOPAC)\高香草酸(HVA)和5-羟吲哚乙酸(5-HIAA)水平,探讨首乌方(SWF)对大鼠LID的干预作用及其机制。方法:对SD大鼠进行单侧双位点注... 详细信息

目的:通过观察左旋多巴诱发的异动症(LID)大鼠脑纹状体细胞外液单胺类神经递质的代谢产物二羟基苯乙酸(DOPAC)\高香草酸(HVA)和5-羟吲哚乙酸(5-HIAA)水平,探讨首乌方(SWF)对大鼠LID的干预作用及其机制。方法:对SD大鼠进行单侧双位点注射6-羟基多巴胺造成PD模型后,灌胃投与多巴丝肼(30mg/kg/d)诱发LID,及同时灌胃中药SWF(高剂量组36g/kg/d、低剂量组27g/kg/d)。假手术组灌胃等量纯净水。给药21天中进行异常不自主运动(AIM)评分4次。之后,再次投药并在大鼠清醒自由活动状态下通过微透析技术进行纹状体细胞外液的动态采样,每30min一管,共收集240min。高效液相-电化学方法检测最终投药后各时间点样品中多巴胺及5-羟色胺的代谢产物DOPAC、HVA、5-HIAA的浓度。结果:SWF降低了LID大鼠的AIM评分,可明显减少DOPAC、HVA的波动性变化,降低5-HIAA浓度的升高。结论:SWF有预防及干预LID的作用,其机制可能与缓解DA受体波动性刺激及影响5-HT的浓度变化有关。

关键词：左旋多巴诱导的异动症单胺类神经递质代谢产物首乌方微透析

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滑膜炎颗粒对Ⅱ型胶原诱导的关节炎模型改善作用的机制研究

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中国中医基础医学杂志 2015年第10期21卷 1241-1244页

作者：孙丽华李志刚周艳华崔海峰朱宏伟于友华张志伟王正品孙明杰北京市中医药防治重大疾病基础研究重点实验室中国中医科学院医学实验中心北京100700 中药注射剂新药开发技术国家地方联合工程实验室河北三河065201 神威药业集团有限公司石家庄051430 中国中医科学院望京医院北京100102 河北省中药注射液工程技术研究中心河北三河065201

目的：探讨滑膜炎颗粒对Ⅱ型胶原诱导的关节炎（CIA）模型改善作用机制。方法：牛Ⅱ型胶原乳剂大鼠尾根部皮下注射制备CIA模型,造模成功后按随机数字表法分为对照组（Ⅰ）、模型组（Ⅱ）、不完全弗氏佐剂组（Ⅲ）、雷公藤多苷片组（Ⅳ... 详细信息

目的：探讨滑膜炎颗粒对Ⅱ型胶原诱导的关节炎（CIA）模型改善作用机制。方法：牛Ⅱ型胶原乳剂大鼠尾根部皮下注射制备CIA模型,造模成功后按随机数字表法分为对照组（Ⅰ）、模型组（Ⅱ）、不完全弗氏佐剂组（Ⅲ）、雷公藤多苷片组（Ⅳ）、醋酸泼尼松龙组（Ⅴ）、滑膜炎颗粒大剂量组（Ⅵ）、中剂量组（Ⅶ）、小剂量组（Ⅷ）,每组各10~11只大鼠。免疫组化方法观察大鼠左膝关节滑膜组织IL-1、TNF-α、Erk、Jnk、Ras、Raf的表达,图像分析软件计算阳性面积比。结果：各造模组大鼠膝关节滑膜组织IL-1、Erk、Jnk、Ras、Raf表达量均较对照组增高;各给药组Erk表达量均较模型组降低,其中Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ组Erk表达量与模型组比较差异有统计学意义。结论：IL-1、Erk、Jnk、Ras表达升高,参与CIA模型大鼠滑膜组织病理损伤过程;滑膜炎颗粒改善关节损伤症状可能与降低Erk的表达相关,而与IL-1、TNF、Jnk、Ras、Raf不相关。

关键词：滑膜炎颗粒胶原诱导关节炎模型细胞因子细胞外调节蛋白激酶

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沉脉主病及标准化探讨

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中国中医基础医学杂志 2014年第6期20卷 716-718,730页

作者：刘佳汪南玥于友华北京市中医药防治重大疾病基础研究重点实验室、中国中医科学院医学实验中心北京100700

针对沉脉的脉象特征、主病特点、变化预后及取脉方法进行论述,就现有研究所存在问题对沉脉的现代病理基础及临床研究标准化诊断、现代采集方法进行探讨,为中医脉诊采集规范化提供理论依据及实验方向。沉脉在现代研究中需要临床、基础研... 详细信息

针对沉脉的脉象特征、主病特点、变化预后及取脉方法进行论述,就现有研究所存在问题对沉脉的现代病理基础及临床研究标准化诊断、现代采集方法进行探讨,为中医脉诊采集规范化提供理论依据及实验方向。沉脉在现代研究中需要临床、基础研究进行充实,尤其是标准化研究中需要克服沉脉的生理性因素、季节性因素、脉诊采集仪器的可重复性差及采集标准不同等问题,寻找其脉诊信息特征并制定相关标准。

关键词：沉脉主病取脉方法标准化脉位三点采集

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川芎嗪对脑、脊髓损伤的保护作用及其机制研究进展

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中国生化药物杂志 2014年第4期34卷 179-183页

作者：孙丹丹王丹巧中国中医科学院医学实验中心北京市中医药防治重大疾病基础研究重点实验室北京100700

川芎嗪药理作用广泛,临床上用于治疗心脑血管疾病、呼吸系统疾病、泌尿系统疾病、肝硬化、肿瘤等。近年来,川芎嗪对脊髓损伤的保护作用相关研究也逐年增多。大量临床试验和动物实验显示,川芎嗪对缺血性脑血管病、脑退行性疾病、癫痫及... 详细信息

川芎嗪药理作用广泛,临床上用于治疗心脑血管疾病、呼吸系统疾病、泌尿系统疾病、肝硬化、肿瘤等。近年来,川芎嗪对脊髓损伤的保护作用相关研究也逐年增多。大量临床试验和动物实验显示,川芎嗪对缺血性脑血管病、脑退行性疾病、癫痫及脊髓损伤等有保护作用,其主要机制包括抑制细胞凋亡和炎症反应、提高机体的抗氧化水平、改善血液流变学、增加神经丝蛋白和神经营养因子表达、调节细胞内外离子平衡。本文查阅了2003年至今的相关文献,对近10年来川芎嗪对脑和脊髓损伤的保护作用及其机制研究进行综述。

关键词：川芎嗪脑损伤脊髓损伤作用机制

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补肾活血方对急性心肌梗死大鼠早期心功能及内皮素-1、血管紧张素Ⅱ的影响

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中医杂志 2014年第24期55卷 2139-2142页

作者：杨伟峰陈靓崔海峰李连达郝伟雷洪涛中国中医科学院医学实验中心北京市中医药防治重大疾病基础研究重点实验室湖北中医药大学药学院中国中医科学院西苑医院

目的观察补肾活血方对急性心肌梗死(AMI)大鼠早期心功能的影响并探讨其可能作用机制。方法将60只Wistar大鼠随机分为模型组、假手术组、阳性药组及补肾活血方高、中、低剂量组,每组10只。除假手术组外其余大鼠采用冠状动脉结扎法建立AM... 详细信息

目的观察补肾活血方对急性心肌梗死(AMI)大鼠早期心功能的影响并探讨其可能作用机制。方法将60只Wistar大鼠随机分为模型组、假手术组、阳性药组及补肾活血方高、中、低剂量组,每组10只。除假手术组外其余大鼠采用冠状动脉结扎法建立AMI大鼠模型。阳性药组予依那普利0.2 g/(kg·d)灌胃,补肾活血方高、中、低剂量组分别予补肾活血方生药10、5、2.5 g/(kg·d)灌胃,假手术组与模型组予等量生理盐水灌胃。14天后,采用高分辨率超声影像系统测量大鼠左心室舒张末期前壁厚度(LVAWd)与后壁厚度(LVPWd)、左室舒张末期内径(LVIDd)和收缩末期内径(LVIDs),计算左室舒张末期和收缩末期容积(LVEDV,LVESV)及射血分数(EF)、短轴缩短率(FS)、每搏输出量(SV),评价各组大鼠心脏结构和功能变化。ELISA法检测各组大鼠血清内皮素-1(ET-1)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)水平。结果与模型组比较,补肾活血方各剂量组LVAWd均显著升高(P<0.05或P<0.01),LVIDs、LVIDd、LVEDV呈现减小趋势但差异无统计学意义(P>0.05);补肾活血方高剂量组与阳性药组EF、FS显著升高(P<0.01);补肾活血方各剂量组血清AngⅡ水平明显下降(P<0.01),ET-1水平呈现减小趋势但差异无统计学意义(P>0.05)。结论补肾活血方可在心肌梗死早期调节心室重构、改善心脏功能,其机制与调节Ang II、ET-1水平有关。

关键词：补肾活血方心肌梗死心功能内皮素-1、血管紧张素Ⅱ

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