检索结果-内蒙古大学图书馆

环境科学 2020年第1期41卷 385-393页

作者：张汝凤宋渊高浩泽程首涛孙艳梅王旭明中国农业大学生物学院北京100193 北京市农林科学院北京农业生物技术研究中心北京100097

为揭示北京地区蔬菜土壤中抗生素抗性基因与可移动元件的分布特征应用高通量荧光定量PCR方法(HT-qPCR),选取北京3个区5个蔬菜基地进行调查研究.在蔬菜基地土壤中共检测到92~121种抗生素抗性基因,4~6种可移动元件,抗生素抗性基因及可移... 详细信息

为揭示北京地区蔬菜土壤中抗生素抗性基因与可移动元件的分布特征应用高通量荧光定量PCR方法(HT-qPCR),选取北京3个区5个蔬菜基地进行调查研究.在蔬菜基地土壤中共检测到92~121种抗生素抗性基因,4~6种可移动元件,抗生素抗性基因及可移动元件按区分开.各蔬菜基地中共有且丰度较高的抗生素抗性基因型为:多重耐药类oprD、acrA-04和acrA-05,大环内酯类-林肯酰胺类-链阳性菌素B类抗生素抗性基因(MLSB)酰胺酶类fox5,万古霉素类vanC-03;共有可移动元件为intI1.蔬菜基地土壤中共检测到7种抗生素,含量较高的抗生素种类为恩诺沙星(ENR)、诺氟沙星(NOR)、土霉素(OTC)、磺胺甲噁唑(SMX).顺义区S1与S2蔬菜基地土壤中抗生素的种类与丰度均最高,依次是通州区T蔬菜基地、昌平区C2与C1蔬菜基地.相关性分析表明,蔬菜基地土壤中抗生素抗性基因丰度与抗生素丰度存在显著正相关(P <0.05).研究结果可为后续控制抗生素抗性基因的传播提供基础理论数据.

关键词：蔬菜土壤抗生素抗生素抗性基因(ARGs) 可移动性元件(MGEs) 高通量定量PCR

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西伯利亚鲟(Acipenser baerii)致病性维氏气单胞菌的分离鉴定

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微生物学报 2009年第10期49卷 1289-1294页

作者：马志宏杨慧李铁梁罗琳高俊莲北京市农林科学院北京市水产科学研究所北京100068 北京市农林科学院北京农业生物技术研究中心北京100097

【目的】本研究旨在寻找引起养殖西伯利亚鲟鱼(Acipenser baerii)病害的致病因子。【方法】从北京地区自然患病的西伯利亚鲟鱼体内分离到致病菌株X-1-06909,采用生理生化鉴定结合16SrRNA基因序列的系统发育学分析确定该菌株的系统发育... 详细信息

【目的】本研究旨在寻找引起养殖西伯利亚鲟鱼(Acipenser baerii)病害的致病因子。【方法】从北京地区自然患病的西伯利亚鲟鱼体内分离到致病菌株X-1-06909,采用生理生化鉴定结合16SrRNA基因序列的系统发育学分析确定该菌株的系统发育地位。同时采用琼脂扩散法对抗菌类药物的敏感性进行测定。【结果】菌株X-1-06909与Aeromonas veroniiATCC35624T的16SrRNA基因序列相似性达99.6%;结合形态特征与生理生化测定结果,革兰氏阴性杆菌,具极生单鞭毛。发酵葡萄糖产酸,甲基红试验和乙酰甲基甲醇试验阳性,精氨酸双水解阴性,3%氯化钠生长,明胶水解阳性、七叶灵水解阳性等。在21种抗菌类药物对该菌的抑菌试验中,其中,头孢羟氨苄、新霉素等11种药物的抑菌效果较好。【结论】确定该菌株在分类上属于维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)。为进一步防治鲟鱼养殖病害提供依据。

关键词：鲟鱼维氏气单胞菌生理生化分离鉴定 16S rRNA基因序列分析药敏试验

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白菜伤害反应中内源信号分子及其基因表达变化

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农业生物技术学报 2016年第6期24卷 847-858页

作者：何付新远方田宇马荣才谢华北京市农林科学院北京农业生物技术研究中心

白菜(Brassica rapa ***)在种植加工和运输过程中,易遭受各种机械伤害。本研究对白菜叶片进行伤害处理,利用气相色谱-质谱(gas chromatography-mass spectrometry,GC-MS)联用、GC和高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)分别测定内源信号分子茉莉酸(jasmonic acid,JA)、水杨酸(salicylic acid,SA)和乙烯(ethylene,ET)的含量或释放量变化,并利用c DNA芯片杂交分析伤害处理后基因表达总体变化,结合半定量RT-PCR分析JA、ET和SA信号途径中标志基因表达量变化。结果显示,大量基因在白菜伤害后上调表达,包括转录因子、小G蛋白、受体蛋白激酶、蛋白激酶、防御相关基因、JA/ET合成途径基因、吲哚芥子油苷降解途径基因、细胞壁修饰相关基因、色氨酸生物合成途径基因、苯丙烷和生物碱代谢途径相关基因、分子伴侣等。对伤害处理后JA含量及其信号途径标志基因表达分析发现,在伤害处理后6、12、24和48 h,叶片JA含量显著高于未进行伤害处理的空白对照叶片中JA含量(P<0.05);JA合成途径关键酶基因丙二烯氧合酶(allene oxide synthase,AOS)、丙二烯环氧化酶(allene oxide cyclase,AOC)和脂氧合酶(lipoxygenase,LOX)、JA合成途径上游的磷脂酶D(phospholipase D,PLD)和JA途径的应答标志基因黑芥子酶作用蛋白(myrosinase-associated protein,MYAP)诱导上调表达,表明JA介导的信号途径在白菜伤害应答反应中起了重要作用。对伤害处理后ET释放速度及其信号途径基因表达分析发现,ET在伤害处理后2和6 h大量合成,ET合成途径基因1-氨基环丙烷-1-羧酸合成酶6(1-aminocyclopropane-1-carboxylicacid(ACC)synthase 6,ACS6)和ACC氧化酶(ACC oxidase,ACO)在伤害早期诱导上调表达,乙烯响应转录因子4(ethylene-responsive transcription factor 4,ERF4)在伤害后0.17、0.5、2、6、12和24 h均上调表达,表明ET途径参与了早期的伤害反应。JA和ET共同调控途径的标志基因β-1,3葡聚糖酶(β-1,3 glucanase,BGL)在伤害各时间点均上调表达,表明JA和ET协同调控白菜伤害反应。对伤害处理后SA含量及其信号途径基因表达分析发现,游离态SA和总SA的含量明显下降,SA途径的标志基因病程相关蛋白(pathogenesis-related protein 1a,PR1a)和PR5在伤害后期有一定程度的诱导表达,而在伤害早期其表达受到抑制或未发生变化,表明SA信号途径在伤害早期受到抑制,在伤害后期活化,可能参与了伤害后期的防卫反应。本研究阐明了白菜在伤害处理后,基因表达总体水平产生变化,JA、ET和SA合成及其介导的信号途径标志基因表达产生变化,有助于揭示白菜伤害反应分子机制。

关键词：白菜伤害反应茉莉酸(JA) 乙烯(ET) 水杨酸(SA) 基因表达

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利用花青素基因标记研究正反交对玉米杂交种主要性状的影响

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玉米科学 2018年第2期26卷 16-22页

作者：冯汉宇江颖张立全张晓东北京市农林科学院/北京农业生物技术研究中心

以转花青素合成转录因子Bi和Cl基因玉米的稳定表达株系与自交系B73-329（CK）进行杂交,研究花青素基因在玉米杂种F1植株组织、器官中表达情况。结果表明,用转基因株系作为母本的杂交种F1植株部分存在表型分离,用自交系B73-329作为母本... 详细信息

以转花青素合成转录因子Bi和Cl基因玉米的稳定表达株系与自交系B73-329（CK）进行杂交,研究花青素基因在玉米杂种F1植株组织、器官中表达情况。结果表明,用转基因株系作为母本的杂交种F1植株部分存在表型分离,用自交系B73-329作为母本的杂交种F1植株不存在表型分离。转基因杂交种F1植株,颖紫色,苞叶、茎鞘紫色,气生根紫色,与CK差异显著;转基因杂交种F1植株叶片为绿色,转基因株系自交分离群体株系的叶片为紫色;转基因杂交种F1植株绝大部分花丝为黄色,个别花丝红色,子粒绝大部分为黄色。抽丝、散粉期,转基因杂交种株高、穗位高等农艺性状与对照差异不显著,但是大部分产量显著低于对照,推测其主要原因在于花青素合成途径的引入导致植株能量代谢损耗所致。研究表明,转基因玉米杂交制种应用应以转基因株系作为父本。

关键词：玉米正反交花青素性状

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杨树转基因研究进展及展望

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林业科学研究 2016年第1期29卷 124-132页

作者：丁莉萍王宏芝魏建华北京市农林科学院北京农业生物技术研究中心农业基因资源与生物技术北京市重点实验室

杨树是重要的栽培树种,也是研究林木基因工程的重要模式植物。杨树转基因研究可以打破种属限制,具有高效性和专一性的特点,是对杨树进行遗传改良的重要手段。为了更好的进行该方面的工作,本文介绍了杨树转基因涉及到的抗虫、抗除草剂、... 详细信息

杨树是重要的栽培树种,也是研究林木基因工程的重要模式植物。杨树转基因研究可以打破种属限制,具有高效性和专一性的特点,是对杨树进行遗传改良的重要手段。为了更好的进行该方面的工作,本文介绍了杨树转基因涉及到的抗虫、抗除草剂、木材材性改良、抗逆、抗病、激素调控、开花调控和植物修复等应用领域的研究进展及现状,分析了影响杨树农杆菌转化效率的主要因素,并探讨了杨树转基因研究存在的问题及发展方向,希望能为后期从事林木基因工程研究的科研工作者提供依据。

关键词：杨树转基因农杆菌

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玉米C_4型pepc基因的分子克隆及其在小麦的转基因研究

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科学通报 2004年第19期49卷 1976-1982页

作者：陈绪清张晓东梁荣奇张立全杨凤萍曹鸣庆北京市农林科学院北京农业生物技术研究中心北京100089

通过LA-PCR方法，从玉米材料中获得了完整的C4型pepc基因．与GenBank中玉米C4型磷酸烯醇式丙酮酸竣化酶(phosphoenolpyruvate carboxylase，PEPC)基因序列进行同源性分析，结果表明，DNA序列的同源性达98．96％，mRNA同源性达99．38％... 详细信息

通过LA-PCR方法，从玉米材料中获得了完整的C4型pepc基因．与GenBank中玉米C4型磷酸烯醇式丙酮酸竣化酶(phosphoenolpyruvate carboxylase，PEPC)基因序列进行同源性分析，结果表明，DNA序列的同源性达98．96％，mRNA同源性达99．38％，蛋白质的氧基酸推测序列同源性为99.38％，在DNA水平，两者之间有49处碱基差异，18处发生在内含子区，18处发生在外显子处．在mRNA水平，两者之间有15处差异，但是这些差异在蛋白质水平上仅导致了4个非连续排列的氨基酸差异，进一步构建了该基因包括5’启动子、3’非编码区以及内含子在内的完整序列(6．7kb)和以CaMV 35S启动子驱动的bar基因为选择标记的表达载体pBAC214(12kb)．通过PDS1000／He基因枪转化法，获得了该基因的转基因小麦植株．对转基因小麦进行Southern鉴定，结果表明来自玉米的pepc基因完全整合到了小麦基因组中．通过对转基因小麦叶片的可溶性蛋白质SDS-PAGE电泳分析，表明该基因在小麦中获得了正确的转录、剪接和翻译．通过对转基因小麦叶片中PEPC酶活性的初步测定，发现部分转基因植株叶片中PEPC酶活性提高了3～5倍，与玉米叶片中的PEPC酶活性相当，对转基因小麦旗叶光合生理指标进行测定，发现部分转基因植株光合速率有所提高，并且气孔的开放程度与叶片中的PEPC活性紧密相关，说明完整的玉米C4型pepc基因在小麦中可以正确表达，并起到一定的生理作用．

关键词：玉米转基因小麦叶片转基因植株酶活性 bar基因光合生理指标 c基因 e基因启动子

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双功能去饱和酶AcD12基因改良玉米不饱和脂肪酸成分

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分子植物育种 2017年第12期15卷 4805-4812页

作者：杨凤萍李向龙张立全张晓东张秀海北京市农林科学院北京农业生物技术研究中心北京100097

玉米油中不饱和脂肪酸含量高达80%,但亚麻酸的含量甚少仅占0.4%~1.2%左右。为增加玉米油中亚麻酸含量,我们选用了在脂肪酸链的Δ12和Δ15位具有催化优势的来自Acanthamoeba castellanii的双功能去饱和酶Ac D12基因。根据玉米密码子的偏... 详细信息

玉米油中不饱和脂肪酸含量高达80%,但亚麻酸的含量甚少仅占0.4%~1.2%左右。为增加玉米油中亚麻酸含量,我们选用了在脂肪酸链的Δ12和Δ15位具有催化优势的来自Acanthamoeba castellanii的双功能去饱和酶Ac D12基因。根据玉米密码子的偏好优化合成该基因序列,并构建了含有抗除草剂EPSP基因和花青素合成调控转录因子基因作为可视化筛选标记的玉米高效表达载体p BAC106,通过农杆菌介导进行玉米幼胚的转化。T0代转基因植株PCR鉴定结果表明含有Ac D12基因和EPSP基因的T-DNA已经整合到玉米的基因组上,经过除草剂以及花青素可视化筛选的T1代转基因植株EPSP基因试纸条蛋白活性检测呈阳性。脂肪酸成分分析结果表明,与非转基因对照自交系京501相比,转基因植株叶片的亚麻酸的含量增加幅度在20%~50%,而相应的油酸、亚油酸均有所减少,减少幅度在10%~20%左右;种子中三种不饱和脂肪酸与对照相比均有大幅度的提高,其中亚油酸含量增加幅度最大,达到50%~200%,油酸其次,增加50%~120%,亚麻酸的增加幅度比油酸略小,在40%~100%之间。由此表明,Ac D12基因在改良玉米脂肪酸成分、增加玉米油中亚麻酸的含量的效果明显。

关键词：双功能去饱和酶 AcD12基因玉米不饱和脂肪酸

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利用病毒载体在烟草中瞬时表达融合HBsAg基因

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西北植物学报 2008年第2期28卷 217-222页

作者：杨凤萍王宏芝陈绪清张立全张晓东北京市农林科学院北京农业生物技术研究中心北京100089

利用马铃薯PVX病毒载体构建了外源人工融合乙肝表面抗原HBsAg基因的表达载体,在烟草中利用农杆菌介导进行瞬时表达,以快速鉴定外源基因瞬时表达的状况以及重组蛋白的免疫活性。利用PCR技术从含有人工融合HBsAg基因的表达载体中分别扩增... 详细信息

利用马铃薯PVX病毒载体构建了外源人工融合乙肝表面抗原HBsAg基因的表达载体,在烟草中利用农杆菌介导进行瞬时表达,以快速鉴定外源基因瞬时表达的状况以及重组蛋白的免疫活性。利用PCR技术从含有人工融合HBsAg基因的表达载体中分别扩增出LP+PreS1+PreS2+S、PreS1+PreS2+S、PreS2+S序列,将其分别与PVX病毒载体pgR106连接,构建成PVX-LP、PVX-S1和PVX-S2等3个转化载体,并将此载体导入农杆菌菌株GV3101中用于侵染烟草植株叶片。感染植株经RT-PCR、RNA Dot blotting和HBsAg蛋白的ELISA检测显示,3个人工融合的HBsAg基因均可在植物体内得到转录,翻译成具有活性的蛋白。结果表明,外源融合HB-sAg基因经过植物病毒载体瞬时表达系统可以在植物系统中正常转录和翻译。

关键词： PVX病毒载体瞬时表达融合HBsAg基因烟草

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甘菊ClHSP70与ClHSP90基因的克隆及表达分析

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西北植物学报 2016年第7期36卷 1321-1330页

作者：罗昌陈东亮程曦黄丛林北京市农林科学院北京农业生物技术研究中心北京100097

该研究以甘菊(Chrysanthemum lavandulifolium)为实验材料,通过RT-PCR方法从甘菊转录组数据中分离出热激蛋白合成相关基因,命名为ClHSP70和ClHSP90。序列分析表明,ClHSP70基因ORF全长为2 559bp,编码852个氨基酸,蛋白功能区预测表明含有... 详细信息

该研究以甘菊(Chrysanthemum lavandulifolium)为实验材料,通过RT-PCR方法从甘菊转录组数据中分离出热激蛋白合成相关基因,命名为ClHSP70和ClHSP90。序列分析表明,ClHSP70基因ORF全长为2 559bp,编码852个氨基酸,蛋白功能区预测表明含有典型的HSP70蛋白NBD和SBD保守结构域;ClHSP90基因ORF全长为2 094bp,编码697个氨基酸,含有HATPase结构域和HSP90保守结构域。生物信息学分析表明,甘菊ClHSP70与大豆(Glycine max)和烟草(Nicotiana tomentosiformis)HSP70蛋白有较高的一致性,ClHSP90基因编码的氨基酸序列与紫茎泽兰(Ageratina adenophora)HSP90高度相似;实时荧光定量表达分析表明,在42℃处理不同时间,甘菊叶片中ClHSP70和ClHSP90基因表达均在0.5h时显著增加,1h达到最大值,2h后缓慢下降;不同组织表达分析表明,甘菊在42℃处理1h后,ClHSP70在成熟叶中的表达量显著高于嫩叶和根等其他组织;ClHSP90在成熟茎中的表达量最高。研究说明,ClHSP70和ClHSP90基因具有热激蛋白特征,参与了甘菊热胁迫应答过程,该研究结果为以后深入研究其基因功能奠定了基础。

关键词：甘菊 ClHSP70 ClHSP90 热胁迫

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毛白杨纤维素合酶基因家族部分成员的克隆及表达

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林业科学 2011年第10期47卷 70-75页

作者：陈亚娟王宏芝李瑞芬张中保崔莉洁魏建华北京市农林科学院北京农业生物技术研究中心北京100097

从毛白杨中分离7个纤维素合酶基因,分别为PtoCesA4,PtoCesA5,PtoCesA7,PtoCesA8,PtoCesA13,PtoCesA17和PtoCesA18,通过与已公布的毛果杨全基因序列及拟南芥和水稻基因组中纤维素合酶基因序列的同源性比对分析,结合目前纤维素合成机制的... 详细信息

从毛白杨中分离7个纤维素合酶基因,分别为PtoCesA4,PtoCesA5,PtoCesA7,PtoCesA8,PtoCesA13,PtoCesA17和PtoCesA18,通过与已公布的毛果杨全基因序列及拟南芥和水稻基因组中纤维素合酶基因序列的同源性比对分析,结合目前纤维素合成机制的研究进展,预测毛白杨中上述不同纤维素合酶的功能。利用GenomeLabTMGeXP遗传分析系统分析毛白杨中纤维素合酶基因在不同组织中的转录表达水平,结果表明PtoCesA4,PtoCesA7,PtoCesA8,PtoCesA17和PtoCesA18在木质部高丰度表达,推测这些基因可能参与毛白杨次生细胞壁的形成,为毛白杨次生细胞壁中纤维素的合成调控提供参考依据。

关键词：毛白杨纤维素合酶 GeXP 基因表达

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